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hMSH2基因cDNA保守区域的T载体克隆及序列分析

何云;杨杏芬;陈铁江;陈雯;庄志雄

摘要: 目的 构建含限制性内切酶位点Pst Ⅰ、Kpn Ⅰ的hMSH2基因cDNA保守区域的pGEM-T-S载体,比较分析序列的变化,为以后的毒理学研究提供实验材料。方法 从人胚肺成纤维细胞HLF中抽提总RNA进行RTPCR扩增,直接与T载体连接后转化大肠杆菌DH5α,用蓝/白斑试验筛选阳性克隆,抽提质粒进行酶切鉴定,再行序列分析。结果 经RT-PCR获得631 bp含限制性内切酶位点的阳性产物,T载体克隆、酶切鉴定及序列分析后证实,克隆片段与genbank中该基因的序列同源性为99.5%。结论 本文成功地构建了含hMSH2基因cDNA保守区域的T载体克隆,该克隆可为DNA错配修复缺陷与致癌关系研究提供工具。

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