Inhibition of hepatitis C virus core and NS3protein expression by siRNA
摘要： Objective To construct two kinds of plasmids with one for gene expression and the other for RNA expression. Methods Hepatitis C virus(HCV)core and NS3 genes were firstly inserted into the upstream of the reporter genes marked with Rellina(hRluc)luciferase and Firefly luciferase(hluc+).And then the established Plasmids were cotransfected into HEK293 cells. Six short hairpin RNAs targeted HCV core and NS3 genes were designed. and expressed by siRNA expression vector. Inhibition effects with the luminescent intensity were observed. Results Light density in the cells cotransfected with core gene and anti-Core siRNA was obviously weaker, meanwhile. those with NS3 gene and anti-NS3 siRNA had no difference in contrast with the control group. Transfected the anti-NS3 siRNA into the stable expression cells and detected them by real-time PCR and western-blot. The four siRNAs have efficiently suppressed the expression of NS3 at some level. Conclusion The results demonstrated that siRNA Was effective in inhibiting HCV protein expression,and may have therapeutic potential to limit HCV replication in chronically infected patients.
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PPARGC1启动子甲基化与Ⅱ型糖尿病发病相关性分析
目的 探讨过氧化物酶体增殖活化受体γ辅激活因子1 (peroxisome proliferators activated receptor gamma coactivator-1,PPARGC1)基因启动子甲基化状况在Ⅱ型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)发生中的作用. 方法 选取2015年1月至2017年12月我院T2DM患者57例,对照组(健康人)152例,采集空腹静脉血检测血糖、胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白和脂蛋白a;测量身高、体重、腰围和血压并进行问卷调查.提取研究对象的全血基因组DNA并检测PPARGC1基因启动子甲基化程度,分析其与T2DM发生的相关性. 结果 糖尿病组研究对象的腰围、体重和身体质量指数均大于对照组;糖尿病组具有糖尿病家族史的明显高于非糖尿病组;PPARGC1启动子甲基化程度与T2DM发病呈低度正相关,差异具有统计学意义(P＜0.05). 结论 糖尿病发病受多种因素影响,阐明PPARGC1启动子甲基化与糖尿病发病的相关性,对预测糖尿病发病具有重要意义.
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ASAP1和GSTM3基因多态性与肺结核易感性的相关性研究
目的 探讨ASAP1及GSTM3基因多态性与肺结核易感性的相关性. 方法 选择自2017年2月至2018年4月在重庆市长寿区公共卫生服务中心接受治疗的196例肺结核患者为病例组,并以160例体检健康人群作为对照组,静脉取血后提取DNA,采用限制性片段长度多态性方法(polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphisms,PCR-RFLP)法分析ASAP1及GSTM3基因多态性;采用多因素Logistic回归分析讨论肺结核易感性的危险因素.结果 病例组的总胆红素为(1.36±0.24) mg/dL,C反应蛋白(C-reactive protein,CRP)为(7.84±1.34) mg/L,白细胞为(9.26±1.38)×109/L,均明显高于对照组(P＜0.05).病例组ASAP1基因T2475G位点基因型TT、GT及GG分别为59例、32例及105例,与对照组基因型分布差异有统计学意义(P＜0.05).病例组T2475G位点G等位基因比例为68.6％,显著高于对照(P＜0.05).病例组GSTM3基因A3207C位点基因型AA、AC及CC分别为46例、67例及83例,与对照组基因型分布差异有统计学意义(P＜0.05).病例组A3207C位点C等位基因比例为59.4％,显著高于对照(P＜0.05).多因素Logistic回归分析,发现ASAP1、GSTM3基因多态性是肺结核易感性的危险因素(P＜0.05).结论 ASAP1、GSTM3基因多态性与肺结核易感性的相关性,为肺结核的高危人群筛选及临床治疗提供参考.
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2型糖尿病患者血清抵抗素、VEGF、糖化白蛋白联合检测在糖尿病肾病早期诊断中的价值分析
目的 探讨血清抵抗素、血管内皮细胞因子(VEGF)、糖化白蛋白(GA)联合诊断早期糖尿病肾病(DN)的应用价值.方法 选取2014年1月至2017年1月就诊的T2DM患者152例作为研究对象,参照尿蛋白/尿肌酐比值(UACR)分为正常白蛋白尿组(NA组)68例、微量白蛋白尿组(MA组)45例、大量白蛋白尿组(LA组)39例,比较3组患者血清抵抗素、VEGF、GA变化及与UACR的关系,ROC曲线分析抵抗素、VEGF、GA及三者联合诊断早期DN的效能. 结果 NA组抵抗素、VEGF、GA及UACR值低于MA组、LA组,MA组上述指标低于LA组,三者比较差异均有统计学意义(F=12.907、24.082、10.905、136.311,P＜0.05);血清抵抗素、VEGF、GA与UACR均呈正相关分析(r=0.646、0.678、0.583,P＜0.01);ROC分析显示血清抵抗素、VEGF、GA诊断早期DN的佳节点值分别为50.53 ng/mL、95.12 pg/mL、20.08％,三者联合曲线下面积为0.874高于血清抵抗素(0.775)、VEGF (0.788)、GA(0.733)单独检测(Z=2.189、3.031、2.441,P=0.029、0.002、0.015). 结论 血清抵抗素、VEGF、GA与UACR呈正相关关系,三者联合检测可提高早期诊断效能.
关键词： 糖尿病肾病 血清抵抗素 血管内皮细胞生长因子 糖化白蛋白 -
泸州地区冠心病PCI治疗患者CYP2C19基因多态性分布的研究
目的 探讨泸州地区冠心病PCI治疗患者CYP2C19基因多态性分布情况.方法 选取泸州地区冠心病PCI治疗患者120例作为试验组,选取本地区健康汉族人群108例作为对照组,抽取2组对象的外周血5mL,提取基因组DNA,并采用实时荧光定量PCR方法检测CYP2C19的基因型,分析2组对象的CYP2C19基因多态性分布.结果 试验组患者检测出CYP2C19的6种基因型,*1/*1型(CC,CC),*1/*2型(CC,TC),*1/*3型(TC,CC),*2/*2型(CC,TT),*3/*3型(TT,CC),*2/*3型(T℃,TC)明显高于对照组(P＜0.05);检测出CYP2C19的3种代谢型,快代谢型,中间代谢型,慢代谢型明显高于对照组(P＜0.05). 结论 对泸州地区冠心病PCI治疗患者CYP2C19基因多态性分布情况进行检测可以分析冠心病的发病情况,并为补充本地区冠心病PCI治疗患者CYP2C19基因多态性分布提供一定参考.
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HBV DNA高敏检测试剂盒的性能验证和临床应用评价
目的 对基于Pre-NAT全自动核酸提取系统的乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)DNA高敏检测试剂盒(以下简称高敏试剂)进行性能验证和临床应用评价.方法 根据美国临床实验室标准化协会(Clinical and Laboratory Standards Institute,CLSI)制定的试剂盒性能评价标准,采用高敏试剂分别对HBV标准品、临床HBV DNA高、中、低值样本及阴性样本进行定量检测,评价高敏试剂的精密度、正确度、分析测量范围、临床可报告范围和低检测限等指标.同时采用高敏试剂和COBASAmpliPrep/COBAS TaqMan 48高敏病毒载量系统检测44份乙型肝炎患者血清,进行方法学比较并分析高敏试剂与COBAS高敏检测系统的相关性.结果 高敏试剂检测高、中、低值标本的批内不精密度sr分别为0.069、0.085、0.059,室内不精密度S1分别为0.083、30.138、0.117.偏倚标准差为0.25,小于厂家声明的偏倚标准差0.45.分析测量范围广,在25～(1.0×109) IU/mL范围内成线性.样本的大稀释度为1∶80,功能灵敏度为10 IU/mL,临床可报告范围为10～(8.0×1010) IU/mL.低检测限为10 IU/mL,低于厂家声明的检测下限20 IU/mL.高敏试剂与COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan 48病毒载量系统的相关性好(y=0.987 6 x+0.189 4,r=0.975 4,P＜0.05).结论 所评价的高敏试剂的精密度和正确度高,分析测量范围和临床可报告范围宽,低检测限低,与COBAS高敏检测系统的相关性好,具有良好的临床应用价值.
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代谢综合征对行根治术前列腺癌患者预后的影响
目的 探究代谢综合征(MS)对行根治术前列腺癌患者预后的影响.方法 选择2013年1月至2016年12月西昌市人民医院收治的92例行根治性切除术的前列腺癌患者纳入研究,按照是否合并MS将患者分为前列腺癌合并MS组及单纯前列腺癌组.收集患者临床资料,随访并记录生化复发情况.结果 前列腺癌合并MS组及单纯前列腺癌患者体质量指数(BMI)、空腹血糖、高密度脂蛋白(HDL-C)、前列腺特异性抗原(PSA)、Gleason评分、病理分期、切缘阳性率等方面差异显著(P＜0.05);Logistic回归分析显示合并MS的患者肿瘤前列腺外浸润的风险为非MS患者的2.314倍,Gleason评分≥8分的风险是非MS患者的1.849倍;前列腺癌合并MS组无生化复发生存时间显著短于单纯前列腺组(P＜0.05);合并MS、Gleason评分＞8分、病理分期高及切缘阳性为前列腺癌患者生化复发的相关因素(P＜0.05). 结论 合并MS是影响根治性切除前列腺癌患者预后的危险因素.
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左卡尼汀联合血液透析对尿毒症患者Treg/Th17细胞、血清炎症因子和肾功能指标的影响
目的 探究左卡尼汀联合尿毒症血液透析对尿毒症患者调节性T细胞(Treg)、辅助性T细胞17(Th17)细胞、血清炎症因子及肾功能指标的影响.方法 将2016年6月至2018年7月河南省南阳市中心医院收治的80例尿毒症患者随机分为观察组和对照组,各40例.对照组给予普通血液透析治疗,观察组给予左卡尼汀联合血液透析治疗,比较2组治疗前后Treg/Th17细胞水平、营养指标、炎症因子[白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-17 (IL-17)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、超敏C-反应蛋白(hs-CPR)]、肾功能指标[肌酐(SCr)、血尿素氮(BUN)、24 h尿蛋白定量]变化,并统计并发症发生情况.结果 治疗后观察组Treg细胞、Th17细胞、Treg/Th17细胞水平显著低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);治疗后观察组营养指标改善情况显著优于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);治疗后观察组IL-6、IL-17、TNF-α、hs-CPR、SCr、BUN、24 h尿蛋白定量水平显著低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);且观察组并发症发生率12.50％ (5/40)显著低于对照组32.50％ (13/40),差异有统计学意义(P＜0.05).结论 外源性补充左卡尼汀可帮助血液透析尿毒症患者维持较好的营养状态,改善机体微环境、免疫功能及炎症反应,减轻肾功能损伤,且安全性良好.
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乳腺癌患者血清性激素、IGF-1、VEGF和组织LOX水平与淋巴结转移的相关性分析
目的 分析乳腺癌患者血清性激素、胰岛素样生长因子1(IGF-1)、血管内皮生长因子(VEGF)和组织赖氨酰化酶(LOX)水平与淋巴结转移的相关性. 方法 回顾性分析2015年2月至2017年12月我院86例行手术治疗的乳腺癌患者临床资料,其中伴淋巴结转移者44例(转移组),无淋巴结转移者42例(无转移组),并将同期入院的40例乳腺良性肿瘤患者纳入良性组.记录3组患者术前血清雌二醇(E2)、睾酮(T)、孕酮(P)、IGF-1、VEGF水平及组织(乳腺癌患者取乳腺癌组织、良性组取良性病变组织)LOX相对表达量差异,并分析乳腺癌患者血清E2、T、P水平、组织LOX相对表达量及IGF-1、VEGF水平与淋巴结转移的相关性. 结果 3组术前血清T水平比较,差异无统计学意义(P＞0.05);而血清E2、P、IGF-1、VEGF水平及组织LOX相对表达量比较,均为转移组高于无转移组及良性组(P＜0.05),且无转移组高于良性组(P＜0.05).术前,无转移组血清IGF-1、VEGF水平低于转移组(P＜0.05);术后4周时,2组血清IGF-1、VEGF水平均较术前降低(P＜0.05),且无转移组仍低于转移组(P＜0.05).经Spearman相关性分析发现,乳腺癌患者血清T及P水平与其淋巴结转移无相关性(r=-0.049、0.162,P＞0.05),而血清E2、IGF-1、VEGF水平、乳腺癌组织LOX相对表达量与其淋巴结转移呈显著正相关(r=0.825、0.865、0.791、0.750,P＜0.05). 结论 乳腺癌患者术前血清E2、IGF-1、VEGF水平及组织LOX相对表达量与淋巴结转移状态呈正相关,临床可将血清E2、IGF-1、VEGF水平结合乳腺癌组织LOX表达情况作为预测乳腺癌患者预后的指标.
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玉溪地区高敏肌钙蛋白T在人群中的分布特点分析
目的 了解玉溪地区高敏肌钙蛋白T(high sensitive cardiac troponin-T,hs-cTnT)在普通人群中的分布特点. 方法 以玉溪市人民医院2017年7月至10月的1 594例18～89岁健康体检者为研究样本,对hs-cTnT在普通健康人群检出率、分布特点及与常规生化指标的相关性进行统计分析.结果 ①hs-cTnT在普通健康人群检出率为57.31％,其中男性的检出率是74.52％,女性的检出率是23.75％;②普通健康人群中男性的hs-cTnT平均水平为(5.59±5.08) ng/L,女性为(3.46±1.45) ng/L,男性与女性hs-cTnT水平有统计学差异(P＜0.05),各年龄段hs-cTnT水平比较男性均高于女性;③hs-cTnT水平随年龄增长而增大,男性和女性66岁以上人群与其它各年龄组人群的hs-cTnT水平比较均有统计学差异(P＜0.05);④hs-cTnT与年龄和肾功能指标尿素(urea nitrogen,Urea)、肌酐(creatinine,Crea)尿酸(uric acid,UA)呈明显正相关. 结论 hs-cTnT存在性别和年龄的分布差异,应建立不同性别、不同年龄的参考区间;56岁以下女性hs-cTnT检出率较低,将其作为心脑血管疾病早期筛查和监测的指标意义有限.
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利用NGS技术同时检测缺失和点突变型地中海贫血
目的 建立一种跨越断裂点PCR(Gap-PCR)结合下一代测序技术的地中海贫血基因检测方法. 方法 对地中海贫血核酸国家参考品进行PCR扩增,PCR产物进行高通量测序. 结果 32例国家参考品涉及的3种α突变型别,16种β突变型别,4种α缺失型别,2种β缺失型别全部检出,均与原型别一致.结论 本研究通过建立基于Gap-PCR结合下一代测序技术检测地贫的方法进一步完善了遗传病基因诊断方法,对遗传病的携带人群筛查,优生优育咨询,防止出生缺陷等方面具有重要意义.
