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结核分枝杆菌H37Rv株重组蛋白CFP-10的表达及纯化研究

宋广忠;石君帆;杨明瑾;漏磊君;沈丽英;John T. Belisle

摘要: 目的 表达、纯化结核分枝杆菌H37Rv株重组蛋白CFP-10(rCFP-10),为结核病血清学诊断价值的研究及亚单位疫苗的研制提供物质基础.方法 重组质粒pET23b-CFP-10转化E.coli表达菌株BL21(DE3)pLysE,IPTG诱导rCFP-10表达.经SDS-PAGE电泳和Western印迹法鉴定后,优化表达条件用镍离子螯合亲和层析柱HisTrapTMHP纯化重组蛋白,后用斑点金免疫渗滤法初步评价纯化蛋白的免疫反应性.结果 成功构建了重组质粒pET23b-CFP-10,并且rCFP-10以可溶性形式高效表达,表达量约占菌体总蛋白的10%.经亲和层析后得到高纯度有免疫反应性的重组蛋白(纯度约为98.5%).结论 高纯度有免疫反应性的rCFP-10为新型亚单位疫苗的研发及其结核病血清学诊断价值的研究奠定了基础.

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