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周期素依赖性蛋白激酶5过度活性与肾小球足细胞凋亡的关系研究

陆晓华;郑亚莉;张霞;李博;保莉;罗红艳;曹丽;鄂静;张彬;毕逢辰

摘要: 目的:通过在肾小球足细胞中转染 p25基因,探讨周期素依赖性蛋白激酶5(Cdk5)的活性对足细胞结构及功能的影响。方法2014年度,于含10%胎牛血清的 RPMI 1640培养液中培养分化成熟的小鼠离体足细胞,将足细胞分为对照组、空转染组和 p25转染组。应用 pAdTrack-CMV 病毒载体克隆 p25基因,并转染足细胞,48 h 收集细胞;采用 Western blotting 法测定 Cdk5、p25、p35及细胞凋亡相关蛋白 Cleaved caspase3的表达水平;应用免疫沉淀和同位素γ-32 P 标记法测定 Cdk5活性;足细胞免疫荧光化学染色,观察 Cdk5、p35在足细胞中的表达,以及足细胞 Actin的排列情况。结果 HEK293细胞 Cdk5表达阳性,p35表达阴性,肾脏皮质、足细胞和肾小球中均有不同程度的 Cdk5和 p35的表达。对照组和空转染组 p25表达阴性,p25转染组 p25表达阳性。各组细胞凋亡相关蛋白 Cleaved caspase3表达水平和 Cdk5活性比较,差异有统计学意义(P <0.05);其中 p25转染组细胞凋亡相关蛋白 Cleaved caspase3表达水平和 Cdk5活性高于对照组和空转染组(P <0.05)。p25转染组足细胞内 Actin 排列紊乱,细胞形态发生异常改变,对照组和空转染组细胞内 Actin 排列正常,细胞形态没有发生改变。结论 p25引起 Cdk5过度活性可致肾小球足细胞形态改变,Actin 排列紊乱,诱发细胞凋亡。因此,Cdk5的活性在维持足细胞正常结构和功能方面发挥重要作用。

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