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miR-142-3p通过靶向CD133抑制鼻咽癌细胞和鼻咽癌干细胞生长的效果研究

汤国辉;张志伟;黄卫国;谢运杰;刑佼涛;贺修胜

摘要: 目的 明确miR-142-3p能否通过靶向CD133的表达进而抑制鼻咽癌细胞增殖和侵袭能力,探讨miR-142-3p在抑制肿瘤生长中的分子机制.方法 于2015年7月-2016年9月,构建CD133 mRNA 3′-UTR荧光素酶报告载体,通过荧光素酶报告系统观察miR-142-3p对CD133 mRNA 3′-UTR荧光素酶活性的影响.将对照control、CD133 siRNA及miR-142-3p模拟物各40 μmol/L分别转染至鼻咽癌CNE2细胞,采用Western blotting法检测其对CD133表达水平的影响;设立阴性对照组〔瞬时转染对照control(40 μmol/L)〕、阳性对照组〔瞬时转染CD133 siRNA(40 μmol/L)〕、miR-142-3p组〔瞬时转染miR-142-3p模拟物(40 μmol/L)〕、联合组〔瞬时共转染miR-142-3p模拟物(40 μmol/L)和pcDNA3.1(+)-CD133 0.8 μg〕,MTS法检测4组对CNE2细胞增殖活性的影响,Transwell法检测4组对CNE2细胞侵袭能力的影响,干细胞成球实验检测阴性对照组和miR-142-3p组对CNE2干细胞成球能力的影响.结果 单光子荧光素酶活性检测结果显示,无miR-142-3p转染的pCD133-Wt型细胞荧光素酶活性为(0.924±0.107),miR-142-3p转染的pCD133-Wt型细胞荧光素酶活性为(0.535±0.035),两者比较,差异有统计学意义(t=7.924,P=0.022).Western blotting法检测结果显示,阴性对照组、阳性对照组、miR-142-3p组CD133表达水平比较,差异有统计学意义(F=12.44,P<0.05);其中阳性对照组和miR-142-3p组CD133表达水平低于阴性对照组(P<0.05).阴性对照组、阳性对照组、miR-142-3p组、联合组CNE2细胞数量比较,差异有统计学意义(F=16.78,P<0.05);其中阳性对照组和miR-142-3p组CNE2细胞数量低于阴性对照组(P<0.05).Transwell侵袭实验检测结果显示,阴性对照组、阳性对照组、miR-142-3p组、联合组穿过基质胶的CNE2细胞数量比较,差异有统计学意义(F=13.19,P<0.05);其中阳性对照组和miR-142-3p组穿过基质胶的CNE2细胞数量低于阴性对照组(P<0.05).阴性对照组和miR-142-3p组干细胞成球数量比较,差异有统计学意义(t=14.92,P<0.05).结论 miR-142-3p通过靶向调控CD133的表达而抑制鼻咽癌细胞增殖、侵袭及干细胞球的形成.

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