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牙周膜干细胞向成骨细胞方向分化实验

贺慧霞;刘洪臣;郭宏;杨洋;刘一涵;王东胜;鄂玲玲

摘要: 目的:探讨人牙周膜干细胞(Periodontal ligament stem cell,PDLSCs)向成骨细胞定向分化潜能,从细胞、分子和基因水平分析矿化诱导过程中细胞形态、功能变化.方法:将免疫磁珠分离的人PDLSCs矿化诱导,通过倒置显微镜观察诱导细胞形态变化,ELISA法检测诱导细胞碱性磷酸酶活性(ALPase)、RT-PCR、Western blot及免疫化学染色分析其成骨相关基因、蛋白表达变化,茜素红染色法检测其矿化结节形成情况来诱导细胞做对照.结果:矿化诱导14d,细胞形态呈成骨样短突起、多角形改变,诱导7d、14d ALPase活性显著增强.21d,诱导细胞高丰度表达骨桥素(OPN)、骨钙素(OCN)、牙骨质附着蛋白(CAP)及Ⅰ型胶原(COL Ⅰ)mRNA,而对照组只有COL Ⅰ mRNA弱表达.同时,Western blot及免疫化学染色均显示诱导细胞分泌骨涎蛋白(BSP).21d,仅诱导组形成大量矿化结节.结论:人PDLSCs在矿化液诱导下可向成骨细胞分化,具有成骨细胞的形态、表型和功能特点,有望成为牙周及种植体周围骨缺损修复再生的理想的种子细胞.

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