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腺病毒载体介导的胞嘧啶脱氨酶/单纯疱疹病毒-1-胸苷激酶双自杀基因对血管平滑肌细胞增殖的影响

曹慧青;孟宪敏;赵勇;赵秀文;丁金凤

摘要: 目的观察构建的含胞嘧啶脱氨酶/单纯疱疹病毒-1-胸苷激酶(CD/TK)双自杀基因的重组腺病毒对血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖的影响.方法将含CD/TK单、双自杀基因的重组腺病毒感染培养至3~5代的大鼠VSMCs.荧光显微镜观察报告基因绿色荧光蛋白的数量确定感染效率.用MTT法检测前体药物对各转基因组细胞增殖的抑制作用.结果单、双自杀基因组腺病毒均可100%感染VSMCs.当感染复数(M.O.I)为10时,双自杀基因组靶细胞的存活率仅10%,明显低于腺病毒(Ad)-TK(43%)和Ad-CD(64%)单基因组(P<0.05).当M.O.I≤20时双自杀基因能够对细胞产生大(90%)杀伤而CD、TK单基因组和单基因共转染组则不能,而且双基因组所需前体药物的浓度(无环鸟苷0.1μg/ml,5-氟胞嘧啶 10μg/ml)低于单基因组(无环鸟苷 0.5 μg/ml,5-氟胞嘧啶 50μg /ml).双基因组的TK或CD基因单独作用时对细胞的抑制作用接近或低于相应的单基因组.结论双自杀基因共表达腺病毒载体对VSMCs的抑制作用、安全性及可调控性均优于单基因.

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