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蛋白激酶C结合蛋白1参与心力衰竭小鼠心脏去甲肾上腺素转运蛋白的表达下调

靳文英;乔正国;郑春华;李素芳;陈红

摘要: 目的 观察去甲肾上腺素转运蛋白(NET)和蛋白激酶C结合蛋白1(PICK1)的相互作用,并检测慢性心力衰竭小鼠心脏NET和PICK1 mRNA和蛋白的表达变化.方法 (1)细胞实验:293T细胞分为4组,分别转染质粒NET(NET组)、GFP-PICK1(GFP-PICK1组)、NET+ GFP-PICK1(NET+ GFP-PICK1组)以及NET+ GFP-PICK1 (KD-AA)[NET+ GFP-PICK1 (KD-AA)组],48 h后行免疫荧光化学染色进行亚细胞定位检测.(2)动物实验:雄性C57BL/6J小鼠分为阿霉素组和正常对照组(对照组),每组各20只小鼠,分别于腹腔注射阿霉素(2 mg·kg-1·次-1,累计用量22 mg/kg)和生理盐水.实验第10周末采用实时荧光定量聚合酶链反应和蛋白质免疫印迹法检测心脏NET、PICK1和肾上腺素能受体(β1-AR)的mRNA和蛋白表达水平.结果 (1)PICK1与NET结合并介导NET的亚细胞定位.(2)阿霉素组和对照组小鼠颈交感神经节中NET mRNA的表达量分别为0.59±0.15和0.64±0.18,差异无统计学意义(P>0.05).但阿霉素组PICK1 mRNA表达量明显低于对照组(0.73 ±0.13比1.18 ±0.15,P<0.05),且β1-AR的mRNA表达量亦显著低于对照组(0.62 ±0.12比1.00 ±0.11,P<0.05).(3)阿霉素组小鼠心脏NET蛋白表达量明显低于对照组(0.72±0.04比0.75 ±0.03,P<0.05),而酪氨酸羟化酶蛋白表达量则显著高于对照组(0.95±0.06比0.84 ±0.07,P<0.01).(4)阿霉素组和对照组小鼠的心脏交感神经纤维密度无明显差异.结论 慢性心力衰竭小鼠心脏NET、PICK1的mRNA和蛋白表达均下调,PICK1介导的NET亚细胞定位障碍可能是心力衰竭时NET功能障碍的机制之一.

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