替考拉宁(teicoplanin)是继万古霉素后开发的一种新的糖肽类抗菌药物 。替考拉宁的抗菌谱与万古霉素基本一致，治疗大多数革兰阳性菌引起的感染有效，尤其对耐甲氧西林金葡菌(MRSA)等耐药菌引起的感染有很好控制作用。在常见病原菌的体外药敏试验中，替考拉宁对受试菌的MIG。为0．25～8 mg／L，均呈现出强抗菌活性，强于万古霉素的MIG。值(1～128 mg／L)L2。由于有血眼屏障等组织结构，眼内环境为免疫逃逸状态。外伤性眼内炎、眼内注射等可以打破免疫逃逸状态，影响局部免疫功能。本研究通过动物实验，观察正常兔眼玻璃体腔注射替考拉宁对房水内细胞因子含量的影响。
材料与方法
一、材料
(一)实验动物24只健康日本大耳白兔，体质量2．5-3．0 kg，雌雄各半，由河南康达实验动物有限公司提供。动物合格证号：SCxK(豫)2011-0001。
(二)主要实验药品和试剂 注射用替考拉宁(加立信)：浙江医药股份有限公司新昌制药厂，批号：100720。ELISA试剂盒，美国RD公司，批号：201 10802B。
二、方法
(一)实验方法24只实验动物随机分为2组，每组12只；其中6只检测IL一6和IL一8，另6只检测TGFB 和IFN-7。实验组注射1 g／lOO mL替考拉宁0．1 mL／只(合替考拉宁1．0 mg)，对照组注射灭菌生理盐水0．1 mE／只，均以右眼为实验眼。用5g／lO0 mL戊巴比妥钠按0．4～0．5 mL／kg耳缘静脉麻醉，复方托呲卡胺滴眼液散瞳，无菌生理盐水冲洗结膜囊，盐酸奥布卡因滴眼液表面麻醉后，裂隙灯和检眼镜检查兔眼前、后段均正常，常规眼科消毒，分别暴露各组兔眼颞上方巩膜，以1 mL注射器于角巩膜缘后3mm 经睫状体平坦部入针，注药前先抽取玻璃体液0．1 mL以保持眼压平衡。注药时在直接检眼镜的观察下，进针约8 mm将替考拉宁或灭菌生理盐水缓慢推注至玻璃体腔中央部，针头斜面向前，勿损伤晶体及视网膜。于术前(0 d)、术后1、2、3、7、14和28 d用盐酸奥布卡因将兔眼表面麻醉，经角巩膜缘处以5号针头行前房穿刺，分别抽取房水0．1～0．2 mL，于一20°保存。
(二)观察指标 采用双抗体一步夹心ELISA法检测房水中TGFB 、IFN一7、IL一6、IL一8的含量。每只兔取眼房水标本(0．1～0．2 mL)检测上述两种细胞因子。
(三)统计学处理实验数据用均数±标准差(±s)表示，应用SPSS 17．0统计学软件采用两样本均数比较t检验，P％0．05为差异有统计学意义。
结 果一、直接检眼镜检查各组术前及术后立即观察眼结膜、角膜、前房、虹膜、晶状体均未见异常改变。术后1、2 d各组兔眼均可见药物注射局部的玻璃体轻度混浊，之后玻璃体混浊逐渐吸收。二、房水TGF一8 测定术前实验组和对照组房水中TGF-~：含量分别为(403．86±2．93)pg／mL和(403．83±2．30)pg／mL，术后两组TGF-N 含量均下降，第3天分别下降至(336．51±2．49)pg／mL和(338．50±1．25)pg／mL。术后与术前比较差异均有统计学意义(P<0．05)。
三、房水IFN一7、IL一6、IL一8测定术前房水中IFN-7、ID6、ID8含量实验组分别为(340．41±17．36)pg／mL、(46．40±1．87)pg／mL和(44．73±1．37)pg／mL，对照组分别为(340．10±13．78)pg／mL、(46．56±1．86)pg／mL和(44．59±0．52)pg／mL。术后两组IFN一7、IL一6、IL一8含量均上升，第28天IFN一7、IL一6的含量基本回至术前水平，但IL一8的含量仍高于术前。见表2～4。讨 论TGFJ3可表达于前房、玻璃体、中枢神经系统等部位，属于一种多功能多肽家族，其功能包括胚胎发育、伤口愈合、趋化作用和细胞周期调控等。目前共发现TGF～5种亚型，即TGF ～s。存在于哺乳动物组织中主要为TGF一8 、TGFp。、TGF一 ，在房水中大量分布以维持眼免疫抑制状态的主要是TGFG：。在正常情况下，绝大部分的TGFp：是以一种无生物活性的前体复合物形式存在，当受到加酸、加碱、加热以及蛋白酶等刺激时，无活性TGFG：才能结合靶细胞膜表面的丝氨酸、苏氨酸激酶跨膜受体发挥生物学效应。TGFJ3：能调节免疫细胞和某些细胞因子的活性，可以抑制IL一1诱导的单核细胞和成纤维细胞产生IL一616- ，当其水平降低时，相关细胞因子增高或出现，如IFN一 、IL一6、IL-8。
本研究结果表明，与对照组相比，实验组房水中TGFB：的含量无变化；但同组术后TGF一的含量较术前降低，术后3 d下降达高峰。注射操作与TGFp的含量降低相关。Mita等 认为TGFp 在保持角膜的通透性、维持角膜生理平衡方面发挥重要作用，并参与角膜损伤修复及病理过程。TGFB降低可能与前房多次穿刺时对角膜的损伤，继而修复有关。
IL一6是一种典型的具有多种生物学功能的细胞因子，主要由单核一吞噬细胞、血管内皮细胞、成纤维细胞产生，是急性期炎性反应的重要介质，诱导活化B淋巴细胞产生抗体，诱发T淋巴细胞增殖。
IL一6可以作为细胞因子级联反应及获得一个标志，反映宿主炎性反应与疾病严重程度的相关度，其大量释放对宿主是个危险信号。本研究结果表明，实验组和对照组房水中IL-6含量分别在0、1、2、3、7、14和28 d进行两两比较均无显着性差异；但同组术后与术前比较，两组房水中IL一6的含量均上升，注射术后1 d达高峰，表明此时眼内免疫微环境可能出现紊乱，引起炎性反应，此可能与玻璃体腔注药及反复前房穿刺操作引起机械性损伤有关。IL一6的含量在术后28 d基本回至正常水平，可能就是通过相关的细胞因子网络相互作用实现的。
IFN一主要由活化T细胞(包括Th0、Thl细胞和几乎所有的CD8 T细胞)产生。其受体分布广泛，是为重要的免疫调节因子之一。IFN一丫在免疫调节上具有：① 拮抗Th2分泌细胞因子；② 抑制Th0细胞向Th2细胞的分化，影响Thl与Th2的比率；③ 减少抗原所致嗜酸粒细胞增多在气道周围的炎性浸润；④对IgE介导免疫反应有抑制作用，可抑制IL一4的mRNA转录水平，抑制IL一4诱导的B细胞表达低亲和IgE受体，从而拮抗IL一4依赖型IgE免疫球蛋白的产生。
两组房水中IFN一7的含量相比，差异无统计学意义。此剂量的替考拉宁对IFN一了的表达无影响，但两组术后房水内IFN一7的含量有升高趋势，术后1 d上升至高峰，28 d基本回至正常水平，同组术后与术前相比差异有统计学意义(P<O．05)。这可能与减轻角膜损伤有关 。体内各种细胞因子之间并不是孤立存在的，有着复杂的相互作用网络，两组房水内IFN一7的含量变化可能是TGFJ3：或其他关联细胞因子对其产生的调节作用。Lightman等
研究表明，急性前葡萄膜炎的炎性反应病理过程与中国感染与化疗杂志2013年3月2O日第13卷第2期Chin Infect Chemother，Mar．2013，Vol 13，No．2 131IL一1、TNFa、IFN一7等炎性细胞因子密切相关。
IL一8是重要的白细胞趋化因子，分子质量为8．3 ku，IL一8是由多种血细胞及组织细胞分泌，并能选择性激活多形核白细胞与T细胞，是嗜中性粒细胞的重要趋化剂和活化剂，可以引发中性粒细胞浸润，巨噬细胞、淋巴细胞释放细胞因子，如IL一1、TNF，这些细胞因子又能进一步增高IL一8的水平，使白细胞增多，炎性反应加重 。IL-8可作为感染性疾病的诊断指标 。
正常玻璃体内一般不存在IL一8，但在增殖性玻璃体视网膜病变的玻璃体中可以检测到IL一8的存在。对增殖性玻璃体视网膜病变或糖尿病性视网膜病变的玻璃体样本进行分析，可以发现诸如IL一6、IL一8等炎性细胞因子参与这些疾病的发病过程，其作用是有助于白细胞的浸润。手术、外伤等刺激机体免疫系统，巨噬细胞作为抗原提呈细胞被激活，功能活跃，可以分泌IL一8。IL一8再趋化中性粒细胞游走至炎性部位，诱导细胞变形并释放特异性颗粒和溶酶体，通过Ca。 大量流入细胞内，引发眼内炎性反应 。
本研究两组兔眼房水内IL一8含量具有相似的升高趋势，两组相比差异无统计学意义(P>0．05)，但同组术后与术前相比差异有统计学意义(P<0．05)，表明此剂量的替考拉宁不影响房水中IL一8表达水平，而术后IL一8升高可能是由于角膜损伤和修复过程导致前房自身免疫反应启动，或是细胞因子网络级联反应发挥作用的结果。
在临床选择抗菌药物治疗感染性疾病时，不仅要考虑患者原有的基础免疫状态，也应考虑药物和给药途径对机体免疫系统的损害。尤其在对眼睛这个结构精细，且免疫状态又相对独立的器官进行抗菌治疗时要考虑综合结果。有关替考拉宁在眼内的抗感染研究有待于深入，如病原菌感染眼内炎时，诸多细胞因子的表达、抗菌和(或)抗炎治疗的选择、替考拉宁安全治疗剂量等。
