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大鼠Kupffer细胞分离方法的优化

张冉冉;刘杨;关伟;陈浩;徐慧超;李若瑜;苗宇船

摘要: 目的:对大鼠Kupffer细胞分离方法进行优化.方法:采用D-Hanks液和Ⅳ型胶原酶液两步原位灌注法结合离体消化,差速离心法和Percoll分离液密度梯度离心法分离并选择性贴壁纯化Kupffer细胞.采用328 nm波长自发荧光法、CD68和CD163免疫荧光染色法及吞噬实验鉴定Kupffer细胞.结果:Kupffer细胞获得量为9.8×106个/鼠肝,其中活细胞率占93%以上,证实细胞为Kupffer细胞且吞噬功能正常.结论:该方法花费时间短,相对简便、经济,且细胞数量、功能活性和纯度等均达到实验要求.

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