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过氧化物酶体增殖物激活受体α抗炎作用的细胞与分子机制研究

焦明静；周莉；任锋；王亚东；申川；段钟平；赵彩彦

关键词：过氧化物酶体增殖物激活受体自噬炎症

摘要： 目的研究过氧化物酶体增殖物激活受体α (PPARα)抗炎作用的细胞与分子机制.方法第一部分将小鼠骨髓来源的原代巨噬细胞(BMDMs)按随机数字表法随机分为对照组、脂多糖(LPS)组、PPARα的选择性激动剂WY14643 10 μ mol/L组、WY14643 25 μmol/L组、WY14643 50 μmol/L组;第二部分将BMDMs按随机数字表法随机分为LPS组、WY14643+ LPS组、3-甲基腺嘌呤(3-MA)+WY14643+ LPS组.通过LPS (20 ng/ml)刺激BMDMs构建细胞炎症模型,WY14643作为PPAR α的选择性激动剂于造模前2h分别按10μmol/L、25 μ mol/L、50μmol/L给药(第二部分研究以50 μ mol/L给药),3-MA作为自噬抑制剂于造模前2h以10 mmol/L给药,对照组给予等量的二甲基亚砜,绿色荧光蛋白-微管相关蛋白轻链3质粒于造模前24h转染细胞,于LPS刺激后6h收取细胞行相关的检测.荧光显微镜下通过检测绿色荧光蛋白的多少来评价自噬活性的高低;实时定量PCR检测促炎性细胞因子肿瘤坏死因子(TNF)α、白细胞介素(IL)-1 β、IL-6以及趋化因子(CXCL)-1、CXCL-10的mRNA表达;蛋白质印迹法检测PPAR α,自噬相关蛋白微管相关蛋白轻链3 (LC3)、自噬相关基因(ATG)-5、ATG-7、溶酶体相关膜蛋白-1的表达.组间差异采用单因素方差分析,各组之间差异的两两比较用LSD-t检验. 结果在体外,PPARα活化抑制了LPS诱导的原代巨噬细胞炎症反应,且呈剂量依赖性:在对照组、LPS组、WY1464310 μ mol/L组、WY14643 25 μmol/L组、WY14643 50μmol/L组基因表达结果显示,TNF α的相对表达量分别为0.085±0.009、4.065±0.544、3.281±0.368、1.780±0.293、0.781±0.303,F=45.595,P＜0.01;IL-1 β的相对表达量分别为0.081±0.017、0.776±0.303、0.225±0.154、0.161±0.068、0.101±0.025,F=6.897,P＜0.05;IL-6的相对表达量分别为0.041 ±0.011、0.189±0.014、0.144±0.033、0.126±0.013、0.048士0.015,F=23.371,P＜0.01;CXCL-1的相对表达量分别为0.051±0.011、0.515±0.145、0.356±0.078、0.257±0.068、0.069±0.030,F=11.742,P＜0.01;CXCL-10的相对表达量分别为0.126±0.068、0.831±0.093、0.508±0.245、0.474±0.047、0.204±0.021,F=10.266,P＜0.05.在体外,PPAR α活化促进了细胞自噬,且呈剂量依赖性:在对照组、LPS组、WY14643 10μmol/L组、WY14643 25μmol/L组、WY1464350μmol/L组蛋白质印迹及荧光显微镜观察结果显示,随着WY14643干预浓度的增加,自噬相关蛋白的表达及自噬小体的形成逐渐增多.在体外,抑制细胞自噬后加剧了原代巨噬细胞的炎症反应,逆转了PPARα的原有抗炎作用:在LPS组、WY14643+LPS组、3-MA+WY 14643+LPS组基因表达结果显示,TNFα的相对表达量分别为4.327±0.478、1.218±0.424、3.901±0.447,F=28.064,P＜0.05;IL-1 β的相对表达量分别为4.277±0.407、1.418±0.424、3.029±0.192,F=32.279,P＜0.01;IL-6的相对表达量分别为4.175±0.549、1.373±0.499、4.031 ±0.475,F=19.213,P＜0.05;CXCL-1的相对表达量分别为8.199±1.149、2.024±0.547、5.973±0.843,F=25.178,P＜0.05;CXCL-10的相对表达量分别为1.208±0.148、0.206±0.069、0.798±0.170,F=27.514,P＜ 0.05.结论 PPAR α可通过促进细胞自噬抑制炎症反应,PPARα可能成为临床上防治炎症性疾病的一个新的靶点.

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关键词：肾小球滤过率肝硬化慢性肾脏病
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基于失效模式与效应分析理论的肝活检组织标本制片质量提升与流程优化模型研究

作者：汤鸿；陆忠华；张熔熔；徐蓉蓉；方凯期刊：中华肝脏病杂志2019年03期

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关键词：组织病理学肝失效模式与效应分析肝活检标本质量控制流程优化
青藤碱对体外人肝星状细胞增殖与凋亡的影响

作者：解建中；赵睿；王亮；孔银；丁洁；李娟；李永芳；李光明；王娟霞；张岭漪期刊：中华肝脏病杂志2019年02期

为了探讨青藤碱(SM)对体外人肝星状细胞(LX-2)增殖和凋亡的影响.使用不同浓度(0.4、0.8、1.6、3.2、6.4 mmol/L) SM溶液体外作用LX-2细胞12、24h,同时设正常对照组(C组).用四甲基偶氮唑盐比色法检测SM对LX-2细胞增殖的影响;用流式细胞术检测SM对LX-2细胞凋亡的影响;免疫印迹法检测相关凋亡蛋白Bcl-2和Bax在LX-2细胞的表达变化.两组间数据比较采用t检验.四甲基偶氮唑盐检测结果显示:(1)SM能抑制LX-2细胞的增殖并呈剂量依赖效应;与C组比较,12h SM浓度组为3.2 mmol/L和6.4 mmol/L时差异有统计学意义(P＜ 0.05);12h和24 h各组比较未呈时间依赖性;(2)流式细胞术结果显示经SM作用12 h后LX-2细胞凋亡增加,SM浓度组为3.2 mmol/L时与C组比较,差异有统计学意义(P＜0.05);(3)免疫印迹结果显示Bax表达上调、Bcl-2表达下调,Bcl-2/Bax比值随SM浓度增加而下降,与C组相比,差异有统计学意义(P＜ 0.05).提示SM具有抑制体外LX-2细胞的增殖及诱导其凋亡的作用.

关键词：肝星状细胞细胞增殖细胞凋亡青藤碱
药物性肝损伤时肾生物化学指标的改变及其临床意义

作者：李银玲；翁丽媚；吴思思；佟静；王炳元期刊：中华肝脏病杂志2019年02期

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双环醇治疗酒精性肝病Meta分析

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关键词：肝疾病酒精性肝炎脂肪肝
超声引导下经皮肝脏穿刺活组织检查对甲胎蛋白阴性肝占位性病变诊断的价值

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对115例甲胎蛋白(AFP)阴性且有肝实质性占位病变患者,在超声引导下行经皮肝脏穿刺活组织检查,经病理学证实原发性肝细胞型肝癌(HCC) 59例、胆管细胞型肝癌(CC) 30例、混合型肝癌11例、鼻咽癌肝转移8例、胃癌肝转移7例,肝癌阳性检出率为100％.病理学检查结果与超声诊断相对比,其灵敏度和准确度均为100％,超声诊断灵敏度和准确度均为77.4％.全组无一例出现肝内血管及胆管损伤等严重并发症,随访3个月亦未发现针道肿瘤种植转移.结果显示超声引导下经皮肝脏穿刺活组织检查对AFP阴性肝占位性病变具有重要的诊断价值,安全性高、操作简便、阳性检出率高、微创、并发症少等优点,适宜临床应用.

关键词：癌肝细胞病理学活组织检查超声检查甲胎蛋白
低剂量托伐普坦管理肝硬化低钠血症的近期疗效随访观察

作者：王长武；张淑凤；房新辉期刊：中华肝脏病杂志2019年01期

多周期间断性低剂量托伐普坦应用于肝硬化失代偿期并低钠血症的血钠管理,具备一定的疗效性和安全性.本研究拟对部分住院失代偿期肝硬化并稀释性低钠血症患者采用多周期间断性低剂量托伐普坦管理方案,旨在探讨针对该并发症的托伐普坦合理应用方案.

关键词：肝硬化低钠血症托伐普坦中远期
HBeAg阳性慢性乙型肝炎患儿干扰素α治疗效果预测因素分析

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慢性乙型肝炎患儿在使用干扰素α治疗初始阶段,可以通过患儿基线HBsAg水平、基线HBV DNA载量来预测治疗效果,基线HBsAg水平低、基线HBV DNA载量低的患儿发生应答的概率更高,为指导临床用药提供实验依据,保证患儿得到合理有效的治疗,节约治疗费用.

关键词：肝炎乙型慢性干扰素类预测
肝硬化继发急性肾损伤患者血清胱抑素C和中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白的水平及其诊断价值

作者：庞国菊；武玉晶；刘爽；刘怀平；刘树业期刊：中华肝脏病杂志2019年01期

回顾性比较分析183例肝硬化患者中急性肾损伤(AKI)(136例)和非AKI患者(47例)血清胱抑素C (Cys-C)、中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)及尿NGAL表达水平,探讨AKI肝硬化患者血清中Cys-C、NGAL及尿NGAL对AKI的诊断价值,发现Cys-C和NGAL能反映肝硬化患者继发AKI时肾功能损害的严重程度,可作为肝硬化肾损伤早期诊断有效指标,且二者联合可提高肝硬化肾损伤的诊断效能.

关键词：肝硬化急性肾损伤胱抑素C 中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白