武汉大学学报（医学版）杂志
Medical Journal of Wuhan University 무한대학학보（의학판）
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双荧光标记定量PCR检测乙型肝炎病毒核酸
目的:探索SYBR Green Ⅰ和TaqMan探针双标记荧光定量PCR(dFQ-PCR)检测乙型肝炎病毒核酸(HBV-DNA)的意义.方法:选择浓度为1011.70, 108.70, 106.70和＜1×106.00copies/L的4种血清各1份,进行dFQ-PCR,同时以TaqMan探针和SYBR Green Ⅰ单荧光标记PCR(sFQ-PCR)为对照,设置同一扩增和熔解曲线的循环参数,检测HBV-DNA含量及其熔解温度(Tm),每种方法一次检测每份血清5次.结果:dFQ-PCR检测的HBV-DNA阳性血的平均含量为1011.55±0.32,108.79±0.29,106.81±0.30,与TaqMan探针sFQ-PCR的1011.49±0.31,108.69±0.30,106.72±0.25 copies/L对应浓度值取10对数比较,无统计学意义(t=0.31, 0.54和0.27,均为P＞0.05);与SYBR Green Ⅰ染料sFQ-PCR的1011.41±0.35,108.21±0.34和106.26±0.26 copies/L(不含未检出的两次血清)比较,中低浓度有统计学意义(t=2.90和2.62,P＜0.05).dFQ-PCR和SYBR Green Ⅰ染料sFQ-PCR均出现明显熔解曲线,HBV-DNA含量为1011.70, 108.70和106.70 copies/L的Tm分别为79.8,71.8和72 ℃.结论:dFQ-PCR能同时检测HBV-DNA含量和Tm,为HBV含量及其基因分型的同步检测提供了新思路.
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使用扩张剂后支气管扩张的气道反应性变化
目的:评价支气管扩张剂在支气管扩张治疗中的效果.方法:43例支气管扩张患者,每例患者在测定基础肺功能后,通过带贮雾罐的定量气雾吸入装置吸入400 μg 沙丁胺醇,30 min后测定肺功能.次日通过射流雾化器雾化吸入5 mg 沙丁胺醇,30 min后测定肺功能.之后再分别评价定量气雾吸入溴化异丙托品40 μg及经雾化器雾化吸入500 μg对肺功能的影响.结果:支扩患者在吸入400 μg及5 mg沙丁胺醇后,肺功能各参数均有提高,其中大呼气峰值流速(PEF)分别提高8.4% 和14.2%,第1秒钟用力呼气容积(FEV1)分别提高7.5%、13.0%,用力肺活量(FVC)分别增加8.9%、14.3%.吸入40 μg及500 μg溴化异丙托品后,PEF、FEV1及FVC分别增加7.3%与11.6%、5.5% 与8.2%、6.9%与9.4%.18例患者(41.9%)在使用沙丁胺醇或溴化异丙托品后,肺功能有显著改善(FEV1提高＞15%),其中,6例对沙丁胺醇和溴化异丙托品都有良好反应,9例仅对沙丁胺醇,另3例仅对溴化异丙托品有良好反应.对每例患者使用14种过敏原进行皮肤针刺试验,结果13例(30.2%)阳性.结论:许多支气管扩张患者对支气管扩张剂有良好反应.支气管扩张患者治疗前应当进行支气管舒张试验.
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慢性咳嗽与胃食管反流的关系
目的:探讨慢性咳嗽与胃食管反流(GER)的相关性,以及胃食道反流所致咳嗽的临床特征、诊断和治疗.方法:对43例胸部X线、组胺激发试验、鼻部检查正常的慢性咳嗽患者进行24 h食管pH监测,并利用症状相关性概率(SAP)来分析咳嗽与反流的相关性.当至少符合以下之一时,诊断为GER:① 24 h 食道pH监测远端电极Demeester总积分≥12.70;②远端电极Demeester总积分虽小于12.70,但食道上、下电极至少有1个SAP 大于75%.GER 诊断确立后进行为期12周的抗反流治疗.结果:43例患者中,有26例符合GER并诊断为GER所致咳嗽,对这些患者进行抗反流治疗.疗程结束后,12 例咳嗽完全消失,另14例咳嗽对抗反流治疗反应较差或无效.结论:GER与慢性咳嗽密切相关,是原因不明慢性咳嗽的一个重要原因.24 h食管pH监测结合症状相关性分析是诊断胃食管反流性咳嗽的主要手段,对胃食管反流性咳嗽患者应当进行抗反流治疗.
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4 770名女大学生生殖生理及避孕知识调查
目的:了解女大学生生殖生理及避孕知识的知晓状况.方法:在武汉地区,采用整群抽样方法,对女大学生进行了抽样调查.结果:共调查了4 770名女大学生,85.64%的女大学生对性和生殖生理及避孕知识有一定了解,以艺术类专业(知晓率92.84%)、四年级学生(知晓率92.15%)、有性行为学生(知晓率96.99%)这几个特征的学生群体知晓率为高.在生殖生理知识上,对怀孕早期症状的知晓率高(80.40%),而对每月经周期分期的知晓率低(31.43%).在避孕方法上,对避孕套和紧急避孕药的知晓率高(知道用的人分别为:23.92%和12.31%,知道有这些方法的人分别为:66.40%和50.56%),总体上对避孕方法知道用的人均较少,大多只知道有这些方法.无论是生殖生理知识还是避孕知识,均以性行为较高的艺术类专业、高年级(四年级)学生及有性行为的学生知晓率为高,提示性行为可能是女大学生获取相关知识的一个动因.76.92%的学生认为未婚怀孕会造成心理伤害.女大学生获取性和生殖生理及避孕知识的途径主要是书刊杂志和朋友.88.53%学生希望在学校开展生殖生理及避孕知识的教育.结论:女大学生有一定的生殖生理及避孕知识,性行为可能是女大学生获取相关知识的一个因素.
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原发性脊髓非霍奇金淋巴瘤1例
病案摘要:患者男,29岁,因间断左腿痛1年余,于2003年1月24日住院.查体:神清,血压100/60 mmHg,全身浅表淋巴结无肿大,心肺无异常,双下肢感觉正常,左下肢肌力3-4级,生理反射对称引出,病理反射未引出.MRI检查:"腰椎2-3水平椎管内占位性病变".
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512例乳腺增生病的病理形态及分类
目的:分析乳腺增生病病理形态学特点,并探讨分类的可行性及其与乳腺癌的关系.方法:复习512例乳腺增生病的病理切片,观察并分析各种病变出现的频率.结果:该病以轻度一般性增生为主,出现率约81.7%;多种病变组合,以2-3种病变者居多占74.3%,多者达到6种,平均2.7种.乳腺增生病发病年龄以纤维腺瘤变病人年轻(20-30岁),一般性增生病变年龄高峰在25-40岁之间,而非典型增生病患者则多在40-60岁之间.结论:将乳腺增生病分为单纯性及非典型增生两大类是可行的,其形态学特征易于掌握,非典型增生与乳腺癌的发生密切相关,值得注意.
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消化道异位胰腺CT表现
目的:分析消化道异位胰腺CT特征.方法:回顾性分析经病理证实25例消化道异位胰腺CT表现,其中14例行CT增强检查.根据病变部位和临床症状,将消化道异位胰腺CT表现分为:黏膜下型、梗阻型、憩室型和溃疡型.结果:① 25例异位胰腺均为单发病灶.胃部12例,十二指肠7例,小肠6例(空肠4例,回肠2例).② 黏膜下型异位胰腺:胃部7例,发生在胃窦部大弯侧;十二指肠2例,位于球部.梗阻型:胃部3例,病变位于幽门管;十二指肠2例,位于壶腹周围区,胆总管梗阻;空肠3例,1例发生肠套叠.溃疡型:胃部2例,见中央脐凹征;十二指肠2例,位于球部.憩室型:十二指肠1例,位于乳突部;空肠1例;回肠2例,近回盲部.③ 病理显示Ⅰ型6例,Ⅱ型14例,Ⅲ型5例.在增强检查14例中11例类似正常胰腺强化,病理为Ⅰ型或Ⅱ型;3例强化不明显,病理为Ⅲ型.结论:消化道不同部位异位胰腺有不同CT特征,CT不同表现与异位胰腺病理组成相关,CT检查有助于对本病的正确诊断.
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2型糖尿病下肢血管病变相关危险因素分析
目的:分析2型糖尿病下肢血管病变相关危险因素,同时评价踝肱比指数(ABI)的意义.方法:对97例住院的2型糖尿病进行回顾性分析.结果:55.6%(54/97)患者双下肢血管彩超示有下肢血管病变,与糖尿病病程、高血压病程、年龄、糖化血红蛋白、低密度脂蛋白、总胆固醇、尿微量蛋白呈正相关.其中,ABI＜0.9的47例中40例下肢血管彩超示有下肢血管病变.结论:糖尿病下肢血管病变是由多种因素综合作用所致.ABI配合下肢血管彩超检查有助于早期发现糖尿病下肢血管病变,良好的血糖、血压、血脂控制可延缓其发展.
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量化切除Ranvier区对骺板横向发育的影响
目的:探讨切除不同长度Ranvier区对骺板发育的影响.方法:选用封闭群系新西兰大耳白兔48只,随机分为2个实验组,每组24只, 采用切除长度分别为4 mm和12 mm长的胫骨近端Ranvier区,于术后1, 4, 8及12周处死实验兔.并从大体、X线摄片和组织学方面观察骺板发育情况.结果:4 mm和12 mm组骺板损伤周长百分率分别为(12.50±0.09)%和(37.50±0.20)%.术后8,12周12 mm组实验侧胫骨较对照侧短缩(0.97±0.49),(2.78±0.46) mm(P＜0.05),而4 mm组未出现骨生长抑制.组织学观察发现术后1周软骨细胞增生带明显增厚,4周骨桥开始形成,8周骨桥成熟,12周成熟的横跨骺板的骨桥明显增厚.结论:Ranvier区切除造成骺板边缘损伤与切除长度有关,超过骺板周长约12.5%就可能导致骨生长抑制,Ranvier区在骺板横向生长中具有抑制作用.
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准分子激光皮下角膜磨镶术后雾状混浊形成的影响因素
目的:通过准分子激光上皮下角膜磨镶术(LASEK)术后角膜上皮下雾状混浊(haze)形成等级的分析,探讨haze形成的主要影响因素.方法:于2005年10月至2006年6月接受LASEK手术的92例(179只眼)连续病例中,选取随访超过3个月的病例83例(162眼,占总眼数的90.50%),其中男性23例(45只眼),女性60例(117只眼);年龄为18-48岁,平均(26.81±7.23)岁;术前屈光度(等效球镜度数)为-15.75--4.00D,平均(-9.24±2.48)D;术前角膜中央厚度为440-533 μm,平均(489.83±18.00)μm.应用SPSS12.0软件中的Spearman等级相关分析方法和逻辑回归分析方法,分析术后角膜上皮下雾状混浊(haze)与手术前后各项检测指标,包括患者年龄、术前屈光度、术前角膜中央厚度、术中角膜切削深度、术中角膜切削率(术中角膜切削深度/术前角膜中央厚度)、术后角膜上皮愈合时间等因素的关系.结果:83例患者术中角膜切削深度为67.90-143.30 μm,平均(117.60±14.55)μm;术中角膜切削率为0.135-0.295,平均(0.240±0.028);角膜上皮愈合时间,3 d为127眼(78.40%),4 d为27眼(16.67%),5 d为6眼(3.70%),6 d为2眼(1.23%);术后后一次复查时的角膜haze,0级为130眼(80.25%),0.5级为13眼(8.02%),1级为11眼(6.79%),2级为5眼(3.09%),3级为3眼(1.85%).等级相关分析显示,haze与年龄呈负相关(r=-0.173,P＜0.05),与术中角膜切削深度呈正相关(r=0.155,P＜0.05),逻辑回归分析显示,年龄与术中角膜切削深度不能预测haze的发生.结论:LASEK术后haze形成等级与术中角膜切削深度呈正相关,与患者年龄呈负相关,但相关性较小,主要的影响因素尚待进一步研究.
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TPL与5-FU联合作用对人结肠癌HT-29细胞增殖与凋亡的影响
目的:研究雷公藤内酯醇(TPL)与5-氟尿嘧啶(5-FU)联合应用对人结肠癌HT-29细胞增殖、凋亡的影响.方法: 常规培养HT-29细胞,MTT比色法检测不同浓度TPL与5-FU单独或联合应用对HT-29细胞的增殖抑制率,透射电镜在亚细胞结构形态上证实凋亡细胞,流式细胞学定量分析凋亡细胞比例,免疫细胞化学分析突变型P53、bcl-2蛋白表达的变化.结果:① TPL与5-FU单独应用均能抑制HT-29细胞的增殖,且在一定范围内存在浓度依赖性.两药联合作用高增殖抑制率高达到(94.92 ± 2.76)%,48 h凋亡率达(41.71 ± 1.38)%.② TPL与5-FU在低剂量联合应用时对HT-29细胞增殖抑制作用有协同效应(CI＜1),其机制可能为促进细胞凋亡.③ 与对照组比较,TPL与5-FU单独应用及联合应用后HT-29细胞突变型P53蛋白表达率均有显著降低,而bcl-2蛋白表达没有明显变化.结论:TPL与5-FU在小剂量联合应用时为协同效应, 可能通过下调突变型P53蛋白诱导凋亡从而抑制细胞生长.本结果对于结肠癌的治疗具有一定的临床意义.
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磷酸化STAT3和磷酸化ERK1/2在皮脂腺癌中的过度表达
目的:了解磷酸化细胞信号传导与转录活化因子3(STAT3)及磷酸化细胞外信号调节激酶(ERK1/2)蛋白在皮脂腺癌中表达的意义.方法:采用免疫组化ABC的方法检测了磷酸化STAT3和磷酸化ERK1/2蛋白在17例皮脂腺癌和20例皮脂腺瘤包埋切片中的表达.结果:在17例皮脂腺癌包埋切片中有14例p-STAT3表达阳性,13例p-ERK1/2表达阳性,而在20例皮脂腺瘤中有2例p-STAT3表达阳性,3例p-ERK1/2表达阳性; p-STAT3和p-ERK1/2在皮脂腺癌中的阳性表达明显高于它们在皮脂腺瘤中的阳性表达(均为P＜0.01).结论:p-STAT3和p-ERK1/2在皮脂腺癌的肿瘤形成机制中起重要作用.
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Peroxiredoxin Ⅱ酵母双杂交诱饵载体的构建及自激活效应检测
目的:应用酵母双杂交体系,构建人peroxiredoxinⅡ(PrxⅡ)蛋白酵母双杂交诱饵载体,并检测该载体的表达产物对酵母细胞有无毒性作用及对报告基因有无激活作用.方法:用PCR扩增PrxⅡ基因cDNA 中编码完整开放阅读框的基因片段;将该基因片段与pGBKT7载体定向重组;用酶切和测序鉴定重组质粒;用醋酸锂法(LiAc)将序列正确的重组质粒pGBKT7-PrxⅡ转化入AH109酵母菌株,在缺陷性培养基上观察pGBKT7-PrxⅡ在AH109中的表达情况,检测诱饵载体有无毒性作用和单倍体及二倍体自激活功能.结果:成功构建pGBKT7-PrxⅡ重组质粒.转化有重组质粒和pGBKT7空载体的酵母菌都能在SD/-Trp/X-α-gal平板上长出粉红色菌落,在SD/-His /-Trp /X-α-gal, SD/-Ade/-Trp/X-α-gal平板上不能生长, 两种酵母菌在SD/-Trp液体培养基中培养16 h后,菌液的OD600均值均为0.9,说明AH109[pGBKT7-PrxⅡ]转化成功,对酵母菌株AH109无毒性且不具自主激活报告基因的功能.结论:成功获得了在酵母细胞中正确表达,并对酵母细胞无毒性且未自主激活报告基因的诱饵表达载体pGBKT7-PrxⅡ,该载体可作为酵母双杂交系统中的"诱饵",该诱饵载体可应用于酵母双杂交系统3筛选PrxⅡ相互作用蛋白.
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β-胡萝卜素对去甲肾上腺素致大鼠心肌肥厚的保护作用
目的:研究β-胡萝卜素(BC)对去甲肾上腺素致大鼠心肌肥厚的保护作用.方法:去甲肾上腺素(NE)2 mg/kg腹腔注射,每日2次,去甲肾上腺处理的大鼠给予BC 250 mg/(kg·d)灌胃进行干预,连续给药15 d.测定全心重量指数(HW/BW)、左心室重量指数(LVW/BW,即LVI);采用放免分析法检测左心室心肌组织中血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)含量,用免疫组织化学方法检测左心室心肌组织中血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1R)的表达,采用硫代巴比妥酸法测定丙二醛(MDA)含量,采用黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶(SOD)活性.结果:NE模型组大鼠的HW/BW、LVI明显升高;左心室心肌组织AngⅡ含量、AT1R表达增高,心肌和血清中MDA含量增高, SOD含量降低.β-胡萝卜素能通过抗氧化作用而明显降低心肌组织AngⅡ、MDA含量和AT1R的表达,提高SOD含量,使HW/BW及LVI下降,抑制心肌肥厚.结论:β-胡萝卜素对去甲肾上腺素所致心肌肥厚有保护作用.
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胃肠间质瘤中P16、VEGF的表达及微血管密度检测的临床意义
目的:探讨P16、血管内皮生长因子(VEGF)的表达和微血管密度(MVD)与胃肠间质瘤(GIST)生物学行为的关系.方法:应用免疫组化SP法检测68例GIST组织中 P16、VEGF的表达和MVD.结果:GIST中P16、VEGF阳性表达率分别为52.9%、47.1%,MVD为23.2±9.43;P16、VEGF的阳性表达率与肿瘤的侵袭危险性分级有关(P＜0.05),MVD与肿瘤发生部位及侵袭危险性分级均有关(P＜0.05);P16与VEGF表达、MVD呈负相关(P＜0.05),VEGF表达与MVD呈明显正相关(P＜0.01).结论:P16、VEGF的表达和MVD在GIST的恶性进展中可能起协同作用,三者有可能作为评估GIST生物学行为的有用指标.
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体外共培养诱导骨髓间充质干细胞向雪旺细胞分化
目的:观察体外雪旺细胞环境对大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)的诱导分化作用.方法:分离和体外培养新生大鼠MSCs和雪旺细胞;实验组MSCs经DAPI标记后与雪旺细胞按1∶2比例共培养,观察细胞的形态变化,在第1,3,6天时使用免疫细胞化学染色检测MSCs中Nestin,GFAP及S-100表达.对照组MSCs单独培养,其余处理与实验组相同.结果:共培养1 d后部分MSCs出现雪旺细胞样形态,Nestin表达率为(83.4±3.5)%,随时间增加而降低.GFAP及S-100表达率随时间而增加.对照组细胞形态无变化,不同时间点均有少量MSCs表达Nestin,而GFAP和S-100未见表达.结论:MSCs可通过体外共培养向雪旺细胞分化.
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KAI1、MMP-9蛋白表达及微血管密度与胃癌浸润和转移的相关性
目的:探讨KAI1、MMP-9蛋白表达以及微血管密度(MVD)值与胃癌浸润转移的相关性.方法:在71例胃癌组织及20例正常胃黏膜组织中,应用免疫组织化学SP法检测 KAI1、MMP-9的蛋白表达,用CD34标记新生血管内皮细胞并于显微镜下计数MVD,进而分析它们与胃癌临床病理特征间及彼此之间的关系. 结果:胃癌中KAI1的表达明显降低,MMP-9的表达明显升高,MVD值在胃癌中也较正常胃黏膜中明显增高,两组间差异有显著意义(P＜0.05); KAI1与MMP-9的表达均与浸润深度、淋巴结转移密切相关(P＜0.05),此外,KAI1的表达还与TNM分期有关(P＜0.05);MVD值与分化程度、淋巴结转移及TNM分期有关(P＜0.05).经统计分析KAI1表达阴性组MVD值显著高于阳性组,而MMP-9表达阳性组MVD值显著高于阴性组(P＜0.05).结论:KAI1、MMP-9及MVD值与胃癌的侵袭转移密切相关,可作为评价胃癌的进展与预后的有力指标;KAI1、MMP-9可能通过影响血管生成参与胃癌的进展过程,为临床针对胃癌的抗血管治疗提供新的思路.
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干扰RNA片段对过氧化物酶体增殖物激活受体γ及内皮素-1基因表达的影响
目的:研究干扰RNA片段对过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)基因表达的影响,了解PPARγ基因表达量发生变化的时候,内皮素-1(ET-1)的基因表达量有无变化,以探讨PPARγ及ET-1基因在动脉粥样硬化致病机制中的作用.方法:采用siRNA Expression Cassette方法干预体外培养的人正常脐静脉内皮细胞,通过RT-PCR、适时定量PCR(quantitative real-time PCR)及Western blot法检测PPARγ及ET-1的mRNA、蛋白质表达水平.结果:针对PPARγ基因设计的siRNA Expression Cassette 1(1 326)使PPARγ mRNA及蛋白表达量下调,ET-1 mRNA表达量增多,二者之间表达量的mRNA灰度比值变化有相关性(r=0.995, P=0.042).siRNA Expression Cassette 2,3,4片断未能发挥干扰效应.结论:干扰RNA片段siRNA Expression Cassette 1(1 326)对PPARγ的基因表达有抑制作用,可以在转录水平抑制PPARγ在人脐静脉内皮细胞的基因表达,同时使ET-1基因表达上调.
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PEG10基因在肝细胞肝癌中表达及其与凋亡的关系
目的:研究PEG10基因在肝细胞肝癌(HCC)中的表达及其与凋亡的相互关系,探讨其在HCC发生发展中的作用及意义.方法:应用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法定性测定43例HCC及对应癌旁组织中PEG10 mRNA的表达情况,TUNEL法原位检测HCC组织中的凋亡癌细胞并计算凋亡指数(AI).结果:HCC细胞中PEG10 mRNA的阳性表达率明显高于对应的癌旁组织(P＜0.01);PEG10 mRNA的表达水平与患者的年龄、性别、肿瘤大小无关(均为P＞0.05);但与肿瘤的分期分级、分化程度、浸润转移、门静脉有无癌栓、血清中甲胎蛋白水平、是否合并HBV感染有关(均为P＜0.05);AI在PEG10表达阳性与阴性组间差异有显著性(P＜0.01).结论:PEG10在HCC中过度表达,抑制肝癌细胞凋亡,可能在HCC的发生发展中起着重要作用.
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腺苷诱导HepG2细胞凋亡过程中caspase-3,-8,-9的活性变化
目的:探讨腺苷诱导HepG2肝癌细胞凋亡过程中caspase-3,-8,-9活性变化,确定caspase-3,-8,-9在腺苷诱导的肝癌细胞凋亡中的作用.方法:用3 mmol/L腺苷处理HepG2细胞,作用48 h后,用DNA末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)和流式细胞仪定量检测凋亡细胞细胞比例;分别作用0,12,24,36,48 h,用荧光比色法检测HepG2细胞凋亡过程中caspase-3,-8,-9的活性变化,Western-blotting法检测 caspase-3的活性片段;并检测加入caspase-3抑制剂后经3 mmol/L腺苷作用48 h后细胞凋亡变化情况.结果:3 mmol/L腺苷处理肝癌细胞48 h,检测到(27.5±2.1)%的细胞出现凋亡,而对照组仅有(1.1±0.1)%的细胞出现凋亡(P＜0.01).3 mmol/L腺苷处理肝癌细胞12 h后caspase-3活性开始升高,于36 h达到高峰,与对照组比较差异有显著性(P＜0.05),而caspase-8,-9活性无明显变化.3 mmol/L腺苷处理肝癌细胞36 h后Western-blotting分析发现caspase-3被蛋白酶水解切断后形成的17 kU活性片段.使用caspase-3抑制剂30 min后,再经3 mmol/L腺苷作用48 h,肝癌细胞凋亡比例明显下降,抑制剂组与腺苷组比较,差异有显著性(P＜0.05). 结论:在腺苷诱导肝癌细胞凋亡过程中caspase-3被活化,caspase-8和-9没有被活化,caspase-3可能参与了腺苷诱导的HepG2肝癌细胞凋亡.
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血浆稳态氧化氮产物和S-100β蛋白与老年前列腺电切术后认知功能障碍的关系
目的:观察全身麻醉经尿道前列腺电切术后老年患者认知功能障碍(POCD)的发病率,研究血浆S-100β蛋白和稳态氧化氮产物浓度与POCD的关系.方法:选择40例ASAⅠ-Ⅱ级年龄68-82岁患者,择期进行经尿道前列腺电切术.在术前1 d,术后4 d和6周进行神经心理学测试,一个或多个认知功能缺陷被确定为认知功能障碍.并在术前和术后不同的时间点测定血浆S-100β蛋白和稳态氧化氮产物浓度.结果:术后4 d,有16例患者发生POCD(40%),术后6周有20例患者发生POCD(50%).与没有认知功能障碍的患者比较,术后4 d发生POCD患者围术期各时间点血浆稳态氧化氮产物浓度明显增强(P＜0.05),而血清S-100β蛋白浓度没有差异.结论:经尿道前列腺电切术老年患者术后POCD发生率为40%-50%,POCD的发生与血浆稳态氧化氮产物浓度相关,与血浆S-100β蛋白浓度无关.
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丁酸钠对结肠上皮细胞凋亡的影响
目的:研究丁酸钠对正常和炎症结肠上皮细胞凋亡的影响及作用机制.方法:离体大鼠结肠黏膜固定于Ussing槽中孵育,黏膜面给予4%乙酸,并与正常结肠黏膜对照;在体实验,大鼠用醋酸诱导大鼠结肠炎.3 d后随机分为两组,每天分别给予丁酸钠、生理盐水灌肠1次.于第11天处死,取结肠组织进行TUNEL检测及免疫组化分析结肠上皮细胞凋亡情况.结果:① 乙酸孵育无丁酸钠组离体结肠上皮细胞凋亡指数为25.37±2.38,乙酸孵育加丁酸钠组凋亡指数为10.58±1.77,P＜0.05.正常黏膜无丁酸钠组结肠上皮凋亡指数为10.35±1.07,正常黏膜组加丁酸钠组结肠上皮凋亡指数为3.78±0.70,P＜0.05.② 丁酸钠灌肠治疗组平均凋亡指数2.35±0.41,凋亡指数和Bax表达水平明显低于对照组18.9±1.72, P＜0.01.结论:似于体内肠腔正常浓度的丁酸钠(10 mmol/L)在体外体内对正常和炎症结肠上皮细胞有抑制其凋亡的作用.
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携带血红素加氧酶1基因的重组腺相关病毒的制备
目的:制备携带大鼠血红素加氧酶1(rHO-1)基因的重组腺相关病毒(AAV).方法:通过RT-PCR的方法,从大鼠脾脏组织中扩增rHO-1基因,克隆入通用型AAV载体质粒pSNAV中构建重组质粒pSNAV-rHO-1,通过酶切和测序鉴定.利用Lipofectamine将pSNAV-rHO-1转染BHK-21细胞,G418筛选得到表达外源基因的细胞系BHK/rHO-1.用具有能表达Rap和Cap及包装重组AAV功能的一种重组单纯疱疹病毒HSV1-rc/△UL2分别感染这株细胞系后收获并纯化病毒,DNA斑点杂交检测重组病毒滴度.结果:扩增了rHO-1基因,测序证实与GenBank中的一致,病毒滴度为1.5×1015 v.g/L.结论:成功获得了高滴度、高纯度的重组AAV-rHO-1,这为以后心血管系统疾病的基因治疗研究奠定了基础.
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单侧迷路破坏术后GABAA受体β2亚型在前庭内侧核中的变化
目的:观察单侧迷路破坏术后前庭内侧核(MVN)内γ-氨基丁酸A受体(GABAA receptor)β2亚型的表达变化. 方法:利用免疫组织化学、蛋白免疫印记法(Western blot),切除大鼠一侧迷路,观察前庭内侧核区GABAA受体β2亚型表达的变化,及其在前庭代偿中可能的作用. 结果: 手术两侧比较及术后1 d、3 d、7 d组与假手术组比较差异均无显著性意义(P＞0.05). 结论: 在前庭代偿的早期,GABAA受体β2亚型表达的变化极可能没有涉及前庭代偿.
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Celebrex对VEGF诱导的内皮细胞迁移的影响及其机制
目的:观察选择性环氧化酶-2(COX-2)抑制剂celebrex对血管内皮生长因子(VEGF)诱导的内皮细胞细胞迁移能力的影响及其与细胞内MMP-9表达的关系.方法:体外培养内皮细胞系ECV304,将细胞分为4组:① 空白对照组(ECV304);② VEGF组(ECV304 + VEGF);③ celebrex + VEGF组(ECV304+VEGF+celebrex);④ celebrex组(ECV304 + celebrex).观察:① 用损伤修复实验观察不同浓度celebrex对ECV304细胞迁移能力影响及对VEGF诱导下ECV304细胞迁移速度影响;② 用半定量RT-PCR法检测VEGF及celebrex对ECV304细胞MMP-9 mRNA表达的影响.结果:ECV304细胞的迁移速度随VEGF浓度(0.02,0.2,2 μmol/L)的增加呈降低趋势;celebrex + VEGF组(2 μmol/L celebrex + 5 μg/L VEGF)迁移速度为(3.55±0.02)μm/h与VEGF 组(5 μg/L VEGF)迁移速度(7.66±0.02)μm/h比较,两者有显著差异(P＜0.01);celebrex+VEGF组(2 μmol/L celebrex +5 μg/L VEGF ) 的MMP-9表达量明显低于VEGF组(5 μg/L VEGF).结论:celebrex能抑制VEGF诱导的ECV304细胞迁移,并使COX-2下游的MMP-9表达量显著下调,这是可能的机制之一.
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PEP-1肽介导人Cu,Zn-SOD转导入大鼠离体缺血再灌注损伤心脏
目的:构建原核表达载体pET15b-PEP-1-SOD1,观察PEP-1-SOD1融合蛋白在大鼠离体缺血再灌注损伤心肌组织内的转导能力和转导的目的蛋白是否具有酶活性.方法:构建原核表达载体pET15 b-SOD1和pET15b-PEP-1-SOD1,分别转化大肠杆菌,表达和纯化SOD1和PEP-1-SOD1融合蛋白.采用Langendorff灌流系统,大鼠离体心脏停灌30 min后复灌60 min建立缺血再灌注损伤模型.实验分为对照组,SOD1组,25,50,100 μmol/L PEP-1-SOD1组.免疫荧光检测PEP-1-SOD1的转导效果, SOD试剂盒检测酶活性.结果:在荧光显微镜下,PEP-1-SOD1融合蛋白预处理组心肌组织中可见特异性的绿色荧光位于心肌细胞胞质内,25 ,50,100 μmol/L组阳性率分别为32.6%,42.5%,60.9%.SOD1蛋白预处理组和对照组未见到绿色荧光.与对照组相比,PEP-1-SOD1各组SOD酶活性均显著增加(P＜0.01),且SOD酶活性与PEP-1-SOD1浓度呈正相关, SOD1组与对照组之间无显著性差异(P＞0.05).结论:PEP-1-SOD1融合蛋白以天然有活性的形式穿透进入大鼠离体缺血再灌注损伤的心肌细胞,且具有剂量依赖性.转导入细胞内的PEP-1-SOD1蛋白具有酶活性.本研究为SOD1治疗由氧化应激所导致的各种疾病提供了一种有效的递送途径.
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结肠黏膜MICA表达在溃疡性结肠炎发病机制中的作用
目的:探讨MICA基因不同水平的表达在溃疡性结肠炎发病机制中的作用及其与不同临床病期和炎症程度的相关性.方法:32例肠易激综合征患者为对照组,36例溃疡性结肠炎中,26例(活动期18例,缓解期8例)RT-PCR半定量测定MICA mRNA的表达量,15例完成Western-blot测定MICA蛋白表达量(6例为炎症病理分级Ⅲ、Ⅳ级,9例炎症病理分级Ⅰ ,Ⅱ级).结果:MICA基因在对照组有表达(0.21±0.09),缓解期和炎症病理分级Ⅰ,Ⅱ级有高表达(0.58±0.14),而在活动期和炎症病理分级Ⅲ、Ⅳ级明显高表达(0.78±0.18).结论:MICA基因在溃疡性结肠炎结肠黏膜中呈阳性高表达,而且表达水平与病情轻重和炎症严重程度呈正相关,MICA基因不同水平的表达可能在溃疡性结肠炎黏膜炎症反复发生和发展中起重要作用.
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SDZ PSC833和维拉帕米逆转宫颈癌耐药的对照研究
目的:对照研究耐药逆转剂SDZ PSC833和维拉帕米(Verapamil, VER) 体内逆转宫颈癌细胞对丝裂霉素(mitomycin,MMC)耐药的效果.方法:利用人宫颈癌耐药细胞亚系HeLa/MMC裸鼠移植瘤模型,观察裸鼠体内MMC联合应用SDZ PSC833和VER后荷瘤裸鼠肿瘤体积、瘤重、生长曲线及其瘤组织形态学变化,评价SDZ PSC833和VER逆转宫颈癌细胞对MMC耐药的效果.结果:裸鼠体内单用MMC抑瘤率为35.79%,联合应用SDZ PSC833和VER后,抑瘤率分别为83.18%和73.24%,分别提高了1.32倍和1.0倍,统计学分析有高度显著差异(P＜0.01).结论:无毒剂量的SDZ PSC833和VER裸鼠体内能基本逆转HeLa/MMC细胞对MMC的耐药性,且SDZ PSC833逆转耐药作用强于VER.
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CYP17基因多态性和雌激素暴露因素交互作用与乳腺癌易感的关系
目的:探讨CYP17基因多态性和雌激素暴露因素交互作用与乳腺癌易感的关系.方法:应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术检测武汉市430例正常女性和210例女性乳腺癌患者雌激素代谢酶CYP17基因多态性;采用非条件logistic回归模型对CYP17基因多态性、雌激素暴露因素进行单因素和多因素分析.结果:乳腺癌患者雌激素代谢酶CYP17 A2/A2基因型频率为6.7%, 显著高于对照组的2.4% (P＜0.05), CYP17变异等位基因A2病例组的频率为16.2%, 亦明显高于对照组10.6% (P＜0.05);logistic回归分析显示:CYP17 A2/A2基因型与乳腺癌的发生具有统计学关联(P=0.013),CYP17基因多态性和雌激素暴露因素交互作用对乳腺癌的发病具有统计学意义的关联.结论:雌激素代谢酶CYP17基因多态性、雌激素暴露有关因素及其交互作用与乳腺癌易感有相关性.
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牙釉质发育不全患者的家系调查与临床检查
目的:为了对发现的牙釉质发育不全患者的疾病做出诊断,对该家系成员的婚育提出科学的意见和建议.方法:采用临床检查与家系调查相结合的方法对该家系进行系统分析.结果:发现该家系中连续5代都出现该病患者,且患者子女中发病率近1/2,亦无性别差异.对患者的临床表现,牙齿X光片、听力检测结果分析,与已报道的牙釉质发育不全家系的表现并不完全一致.结论:该病应属于常染色体显性遗传性牙釉质发育不全疾病.
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不同表面处理的纯钛对血小板黏附特性的影响
目的:观察钛-血小板相互作用时不同表面处理的纯钛对血小板黏附特性的影响.方法:将商业纯钛片制备成4种不同表面形貌的样本,即抛光表面、酸蚀表面、大颗粒喷砂加酸蚀表面、碱热处理表面,样本经扫描电镜观察及静态接触角分析后,在其表面滴加新鲜制备的富血小板血浆,30 min后进行扫描电镜观察.结果:大颗粒喷砂加酸蚀表面黏附的血小板多,且形变明显;酸蚀表面血小板的黏附量也较多,但形变较少,以球形居多;抛光表面和碱热处理表面黏附的血小板很少,局部甚至缺无.结论:纯钛表面复杂的微形貌有利于血小板的黏附,钛表面的润湿性对血小板的黏附特性也有影响,亲水性表面不利于血小板的黏附.
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转化生长因子β3 mRNA在小鼠磨牙牙胚发育过程中的表达
目的:探讨转化生长因子β3(TGFβ3)mRNA在小鼠磨牙牙胚发育过程中的表达及其意义.方法:制备小鼠磨牙各发育阶段标本,用原位杂交分析TGFβ3 mRNA 在牙胚中的表达与分布.结果:TGFβ3 mRNA在小鼠磨牙牙胚不同发育阶段呈时间-空间特异性模式表达.TGFβ3 mRNA 在蕾状期和帽状期的上皮强表达,在牙胚发育晚期的成牙本质细胞和成釉细胞的表达随细胞分化程度而增强.结论:TGFβ3 mRNA在牙形态发生过程中可能通过自分泌和旁分泌机制协同调控上皮-间充质相互作用及成牙本质细胞和成釉细胞的分化.
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骨骼肌卫星细胞的体外培养
目的:探讨GH,HGF,bFGF,TGF,IGF-Ⅰ等多种生长因子联合使用对体外培养人骨骼肌卫星细胞增殖能力的影响.方法:选取临床手术切取的儿童肌肉活检标本20例,实验分为4组:TGF+IGF-Ⅰ组(5例);bFGF+TGF-β组(5例);GH+HGF组(5例);GH,HGF,bFGF,TGF,IGF-Ⅰ组(5例).进行体外骨骼肌卫星细胞的培养,然后在培养基中分别加GH,HGF,bFGF,TGF,IGF-Ⅰ等生长因子, 采用MTT法测TGF+IGF-Ⅰ、bFGF+TGF-β、GH+HGF及GH,HGF,bFGF,TGF,IGF-Ⅰ对骨骼肌卫星细胞增殖的影响.结果:在体外培养过程中,GH,HGF,bFGF,TGF,IGF-Ⅰ联合使用促进骨骼肌卫星细胞增殖的作用明显高于TGF+IGF-Ⅰ组、bFGF+TGF-β组及GH+HGF组,差异有显著性 (P＜0.01 );而TGF+IGF-Ⅰ组与bFGF+TGF-β组;TGF+IGF-Ⅰ组与GH+HGF;bFGF+TGF-β组与GH+HGF组骨骼肌卫星细胞的增殖能力比较,差异无显著性(P＞0.05).结论:TGF+IGF-Ⅰ组;bFGF+TGF-β组及GH+HGF组作用对体外培养大鼠骨骼肌卫星细胞有增殖作用,但其作用较弱,而GH,HGF,bFGF,TGF,IGF-Ⅰ联合使用对骨骼肌卫星细胞增殖作用明显.本实验为体外对骨骼肌卫星细胞的增殖能力提供了重要的实验依据.
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成年猪胰岛细胞的分离纯化及其微囊包裹
目的:探索成年猪胰岛细胞分离纯化的有效方法,获取具有免疫隔离作用的小微囊化胰岛细胞.方法:①用胶原酶灌注,人工、静态的方法分离成年猪胰腺;用Ficoll400不连续密度梯度离心纯化猪胰岛,从形态和功能学(体外培养)鉴别分离细胞的活力.②用自制的静电微囊发生装置、采用纯化的海藻酸钠和多聚赖氨酸材料制备小微囊化胰岛细胞,并鉴别微囊胰岛的活力和微囊膜的通透性.结果:① 每只猪胰腺可获得(292 647±79 909)个胰岛,纯化前胰岛产量为(5 360±1 779)IEQ/g胰腺组织,纯化后产量(3 239±1 116)IEQ/g胰腺组织,胰岛纯度为90%.胰岛组织学结构完整,体外培养胰岛素分泌良好,葡萄糖刺激释放反应明显,显示了良好的细胞活力.② 微囊化胰岛细胞圆形,直径315-350 μm,表面光滑,大小相对均一,其内可见1-2个胰岛团.微囊胰岛也具良好活力,微囊膜通透性良好.结论:① 本方法分离成年猪胰岛能获得较高数量和具有良好活力的猪胰岛细胞.② 自制的静电微囊发生装置能制成具有生物活性的大小相对均一,圆形,表面光滑的小APA微囊化胰岛细胞(直径315-350 μm),为进行肝内微囊化胰岛移植提供了可能.
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阿霉素心肌病大鼠模型的建立及评价
目的:建立阿霉素心肌病大鼠动物模型,并对其进行评价.方法:35只雄性Wistar大鼠随机分2组:正常对照组(CON组,n=10)和阿霉素心肌病组(ADR-DCM组,n=25).ADR-DCM模型建立方法:阿霉素2.5 mg/kg,尾静脉注射,每周1次,连续10周.CON组注射相同体积的生理盐水注射液.12周时进行超声检测评价其心功能,氯胺T法检测羟脯氨酸及胶原含量,苦味酸天狼星红染色进行左室胶原特异染色及定量分析,计算胶原容积分数(CVF),并作HE染色观察其组织学变化.结果:ADR-DCM组大鼠死亡率为40%(10/25),CON组无死亡.ADR-DCM组大鼠左室舒张末期内径(LVEDD)及收缩末期内径(LVESD)增加,左室短轴缩短率(FS)明显降低(P＜0.01);羟脯氨酸及胶原含量增加(P＜0.01);苦味酸天狼星红染色显示左室胶原明显增加,胶原容积分数(CVF)明显增高;病理学结果证实符合心肌病样改变.结论:ADR常规剂量多次静脉注射,可致大鼠发生心脏间质纤维化及心脏收缩功能降低,成功建立ADR-DCM大鼠动物模型.
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人脐血间充质干细胞的体外培养及生物学特性
目的:建立一种体外纯化增殖人脐血源性间充质干细胞(MSCs)的实验方法,并观察其生物学特性.方法:从正常分娩的足月胎儿脐血中分离出MSCs进行原代培养,培养瓶预先用自体血浆包被处理.72-96 h半量更换培养液,弃去未贴壁细胞,以后每3-5 d半量换液1次.待细胞达到80%-90%融合时,按1∶2的比例进行传代.倒置或相差显微镜下每日观察原代和传代细胞的生长情况及形态学特征.取第3代脐血MSCs用流式细胞仪检测细胞周期和细胞表面抗原CD29、CD34、CD44、CD45的表达.结果:脐血经分离、培养5-7 d后有间充质样细胞贴壁,3-4周后,细胞生长达80%-90%融合,形态学类似骨髓源性MSCs.连续传至5代以后,增殖能力未见明显减弱.脐血MSCs的大部分细胞(＞90%)处于G0/G1期,且均一稳定地表达间充质干细胞表面抗原CD29、CD44,但不表达CD34、CD45.结论:脐带血内含有MSCs,并可在体外纯化增殖,该技术可为实验研究和临床应用提供足够的干细胞来源.
| 年 | 期数 |
| 2019 | 01 02 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2003 | 01 02 03 04 |
| 2002 | 01 02 03 04 |
| 2001 | 01 02 03 04 |
| 2000 | 01 02 03 04 |
| 1999 | 01 02 03 04 |
