中国肿瘤生物治疗杂志
Chinese Journal of Cancer Biotherapy 중국종류생물치료잡지
- 主管单位： 中国科学技术协会
- 主办单位： 中国免疫学会,中国抗癌协会
- 影响因子： 0.69
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1007-385X
- 国内刊号： 31-1725/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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减毒水泡性口炎病毒诱导宫颈癌HeLa细胞的凋亡及其作用机制
目的:研究减毒水泡性口炎病毒(vesicular stomatitis virus,VSV)对宫颈癌HeLa细胞的凋亡诱导作用,并探讨其可能的机制.方法:将减毒VSV以1.0 MOl的接种密度感染HeLa细胞,在6、12、18、24和30 h后收集细胞,MTT法检测HeLa细胞的增殖;AO/EB染色观察HeLa细胞凋亡形态学变化,Annexin V-FITC/PI双染法检测HeLa细胞早期凋亡率,流式细胞术分析HeLa细胞sub-G1凋亡峰,JC-1染色法测定细胞线粒体跨膜电位水平,caspase试剂盒检测HeLa细胞caspase-3、caspase-8及caspase-9的活性.结果:减毒VSV感染HeLa细胞12和24 h后,HeLa细胞增殖活力分别为(78.4±1.9)%和(63.1±5.6)%(P＜0.01);早期凋亡细胞率分别为(16.88±2.48)%和(31.9±4.24)%(P＜0.01),sub-G1凋亡峰分别为(14.85±1.48)%和(21.05±2.28)%(P＜0.01).随着减毒VSV感染时间的增加,HeLa细胞线粒体跨膜电位逐渐降低(P＜0.05),caspase-9和caspase-3的活性显著升高(均P＜0.05).结论:减毒VSV能够抑制HeLa细胞的增殖,并通过caspase-9和caspase-3依赖的途径诱导HeLa细胞凋亡.
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雷公藤内酯醇下调P53基因甲基化抑制肝癌SMMC-7721细胞的增殖
目的:研究雷公藤内酯醇(triptolide,TP)对人肝癌SMMC-7721细胞增殖的影响以及对P53基因的去甲基化作用.方法:MTT法检测TP对SMMC-7721细胞增殖的影响,甲基特异性PCR检测TP对SMMC-7721细胞P53基因甲基化的影响,RT-PCR检测SMMC-7721细胞甲基转移酶DNMT1、DNMT3a、DNMT3b mRNA的表达,Western blotting检测SMMC-7721细胞中P53蛋白的表达.结果:TP剂量依赖性抑制SMMC-7721细胞的增殖(P＜0.05),40 ng/ml时的抑制率达(73.5±3.02)%,其半数抑制浓度(IC50)约为20 ng/ml.TP显著抑制SMMC-7721细胞中DNMT1、DNMT3a、DNMT3b mRNA的表达(P＜0.05,P＜0.01);TP作用后P53基因的高甲基化被逆转,并呈剂量依赖性;TP可显著增强SMMC-7721细胞中P53蛋白的表达.结论:TP可通过抑制甲基转移酶使P53基因去甲基化,促进P53蛋白的表达,从而抑制SMMC-7721细胞的增殖.
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TRAIL联合吉西他滨对肺癌NCI-H460细胞增殖和凋亡的影响
目的:观察吉西他滨(gemcitabine)联合TNF相关凋亡诱导配体(TNF-related apoptosis inducingligand,TRAIL)对人肺癌细胞NCI-H460增殖和凋亡的影响.方法:MTT法检测NCI-H460细胞的增殖,流式细胞术检测NCI-H460细胞的凋亡.结果:吉西他滨和TRAIL单用或联用均可浓度(0.001～10μg/m1)和时间(24、48、72 h)依赖性抑制NCI-H460细胞的增殖,两药联用比单用时抑制率更高,3组药物作用72 h时对肿瘤的抑制率分别为14.9%～77.5%、23.4%～74.8%、22.3%～80.5%;作用72 h时两药单用和联用对细胞增殖抑制的IC50分别为0.085 3、0.098 2、0.043 5μg/ml.两药联用对NCI-H460细胞增殖的抑制效果还与用药顺序以及两药比例有关,吉西他滨作用24 h后再加TRAIL比TRAIL作用24 h后再加吉西他滨对NCI-H460的抑制效果更好,吉西他滨与TRAIL联用的比例为1:0.3时对NCI-H460细胞增殖的抑制率大.吉西他滨和TRAIL联用时NCI-H460细胞的凋亡率显著高于两药单用的凋亡率(49.04%vs 29.33%、25.69%,P＜0.01).结论:吉西他滨与TRAIL联用可协同抑制肺癌细胞NCI-H460的增殖、促进细胞凋亡.
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CEA mRNA转染的成熟树突状细胞体外诱导特异性抗肿瘤作用
目的:将体外转录的癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)Mrna转染入成熟树突状细胞(dendritic cell,DCs),观察其体外诱导的特异性抗肿瘤作用.方法:GM-CSF、IL-4、TNF-α体外诱导成熟DCs并用流式鉴定.构建pcDNA3.1-CEA载体,体外转录为CEA Mrna,电穿孔法将CEA Mrna转染入DCs.流式细胞术检测转染后DCs中CEA蛋白的表达;MTI法检测DCs刺激T细胞增殖能力;LDH法检测DCs体外诱导的CTL的特异性抗肿瘤作用;ELISA法检测诱导的CTL上清中IFN-γ的水平.结果:CEA Mrna转染后DCs细胞内CEA蛋白显著高于对照组(83.32%vs 3.34%,P＜0.01).CEA Mrna转染组DCs在效靶比为1:10时,刺激T细胞增殖作用强,明显高于未转染组[(19.11±1.89)% vs (15.59±0.70)%,P＜0.05].CEA Mrna转染组DCs能产生CEA特异性的CTL效应,在效靶比为5:1、10:1、20:1和40:1时杀伤率分别为[(5.42±0.87)%、(14.09±1.13)%、(27.16±0.72)%、(32.49±0.84)%,P＜0.01],而未转染组和对照靶细胞均无杀伤作用.转染组DCs诱导的CTL上清中IFN-γ分泌量显著高于未转染组[(141.73±28.61)vs(9.45±4.63)pg/ml,P＜0.01].结论:CEA Mrna转染的成熟DCs体外能产生特异性抗肿瘤作用,为研制CEA RNA-DCs疫苗提供了实验依据.
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bFGF单抗协同替吉奥抑制肺癌Lewis细胞的增殖及移植瘤血管新生
目的:探讨碱性成纤维生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)单抗与替吉奥(gimeracil and oteracil porassium,又称S-1)联合应用体内外抑制小鼠Lewis肺癌细胞增殖、移植瘤生长及转移、肿瘤血管新生的协同作用.方法:CCK-8法检测bFGF单抗及S-1对Lewis细胞增殖的抑制作用.建立C57BL/6小鼠Lewis肺癌自发转移瘤模型,32只小鼠随机分成生理盐水(NS)组、bFGF单抗组、S-1组和bFGF单抗+S-1组,每组8只;测量瘤体,绘制生长曲线,称瘤质量并计算抑瘤率;计数各组肺表面转移瘤结节;CD31标记血管内皮细胞,计数转移瘤微血管密度(microvessel density,MVD).结果:bFGF单抗、S-1剂量依赖性抑制Lewis细胞增殖(P＜0.05),联合用药组抑制率明显高于单药组(P＜0.05或P＜0.01).bFGF单抗组、S-1组以及bFGF单抗+S-1组对Lewis转移瘤的抑瘤率分别为37.8%、47.7%、65.9%,联合组抑瘤率明显高于单药组(P＜0.05或P＜0.01).联合组肺表面转移结节、微血管密度明显低于单药组(2.71±0.76 vs 6.57±0.98、4.71±0.76;21.6±2.9 vs 33.4±4.9、41.9±6.3;P＜0.05或P＜0.01).结论:bFGF单抗联合S-1对Lewis肺癌移植瘤具有协同抑制作用,其机制与抑制细胞增殖及血管新生有关.
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siRNA沉默RhoC表达诱导人肝癌BEL7402细胞凋亡
目的:研究siRNA沉默RhoC基因表达对人肝癌细胞BEL7402凋亡的影响及其机制,为肝癌的基因治疗提供实验依据.方法:构建RhoC-siRNA真核表达载体pU6mRFP RhoC-siRNA,转染BEL7402细胞,激光共聚焦显微镜检测转染效率,RT-PCR和Western blotting鉴定RhoC基因沉默效果;流式细胞术、琼脂糖凝胶电泳和瑞氏染色检测BEL7402细胞凋亡,RT-PCR检测细胞凋亡相关基因Bcl-2和Bax的表达.结果:成功构建pU6mRFP RhoC-siRNA重组载体,转染BEL7402细胞的效率为70%,RT-PCR和Western blotting检测RhoC基因沉默效率分别为85%和82%.pU6mRFP RhoC-siRNA转染组BEL7402细胞凋亡显著高于未转染BEL7402细胞和pU6mRFP Scramble-siRNA转染组BEL7402细胞[(21.00±2.23)%vs(6.47±1.64)%、(4.63±0.47)%,P＜0.01)],pU6mRFP RhoC-siRNA转染组BEL7402细胞DNA呈典型的"梯状"条带,瑞氏染色见转染组BEL7402细胞中有大量凋亡细胞.pU6mRFP RhoC-siRNA转染组BEL7402细胞Bcl-2基因水平显著低于、而Bax基因水平显著高于未转染BEL7402细胞和pU6mRFP Scramble-siRNA转染组BEL7402细胞(0.28±0.15 vs 0.96±0.21,1.03±0.24,P＜0.05:1.09±0.21 vs 0.26±0.10,0.25±0.07,P＜0.01).结论:siRNA沉默RhoC基因可诱导人肝癌BEL7402细胞凋亡,其机制与下调Bcl-2基因、上调Bax基因表达有关.
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反义端粒酶RNA对肝癌细胞黏附和侵袭的影响
目的:探讨人反义端粒酶RNA(human telomerase RNA,hTR)对肝癌细胞系BEL-7402黏附和侵袭的影响及其机制.方法:利用前期实验成功转染端粒酶正、反义RNA基因的肝癌细胞,分为正义转染组(BEL-7402-hTR-EcoR Ⅰ细胞)、反义转染组(BEL-7402-hTR-BamH Ⅰ细胞),空白对照组(BEL-7402细胞).黏附实验和侵袭实验检测反义hTR转染后BEL-7402细胞的黏附和侵袭能力,免疫细胞化学检测整合素β1(integrin β1,INTβ1)、上皮钙黏蛋白(epithelial cadherin,E-cad)的表达水平,明胶酶谱法检测基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)-2、-9的活性变化.结果:与空白对照组和正义hTR转染组相比,反义hTR转染组BEL-7402-hTR-BamH Ⅰ细胞的黏附、侵袭能力明显减低(0.204±0.029 vs 0.505±0.037、0.465±0.029,34.80±3.19 vs 71.47±5.15、69.87±3.11,均P＜0.05),INTβ1表达降低(0.153±0.016 vs 0.385±0.008、0.375±0.014,P＜0.05),E-cad表达增强(0.209±0.020 vs 0.124±0.018、0.134±0.016,P＜0.05),MMP-2和MMP-9的活性受到明显抑制(2 054.22±138.52 vs 3 105.56±329.60、2 923.22±269.08,846.33±104.66 vs 1 538.89±122.85、1 453.33±126.35,均P＜0.05).结论:人反义端粒酶RNA能明显减低肝癌BEL-7402细胞的黏附、侵袭能力,其机制可能与上调E-cad的表达、下调INTβ1的表达,并抑制MMP-2和MMP-9的活性有关.
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人外周血γδT细胞CD107a的表达变化与细胞毒活性的关系
目的:探讨人外周血γδT细胞体外诱导过程中CDl07a的表达变化及其与γδT细胞细胞毒活性的关系.方法:分离健康人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs),加入含有IL-2和异戊烯焦磷酸(isopentenyl pyrophosphate,IPP)的培养基,体外诱导γδT细胞.分别在第7、10、14天以流式细胞仪对培养的γδT细胞进行鉴定,并同时检测其CD107a、穿孔素和颗粒酶B的表达.CCK-8试剂盒检测γδT细胞对胰腺癌细胞SW-1990的杀伤效应.采用SPSS13.0软件进行spearman相关分析.结果:在培养的第7、10、14天,γδTCR阳性细胞分别为(60.31±3.84)%、(66.45±4.25)%、(70.99±4.66)%.CD107a、穿孔素和颗粒酶B的表达在γδT细胞培养第7～10天达到峰值后呈下降趋势,第7天与第0天相比差异有统计学意义[(80.66±4.42)%、(70.11±3.34)%、(94.26±4.25)% vs (69.02±5.04)%、(62.31±4.66)%、(53.62±3.69)%,P＜0.05].培养第7天、第10天的γδT细胞对SW-1990细胞杀伤率显著高于第14天的γδT细胞[(58.86±5.12)%、(61.53±4.69)% vs (40.31±4.83)%,P＜0.05].γδT细胞CD107a表达与穿孔素、颗粒酶B、其对SW1990细胞杀伤效应显著相关(r=0.853,r=0.785,r=0.839,均P＜0.01).结论:人外周血γδT细胞CD107a的表达与其抗肿瘤能力正相关,可能是γδT细胞细胞毒活性的一个标志.
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肿瘤细胞对不同分化阶段树突状细胞脂含量和蛋白质二级结构的影响
目的:利用傅里叶变换红外光谱(Fourier transformed infrared spectrum,FT-IR)技术探讨肿瘤细胞共培养对不同分化阶段树突状细胞(dendritic cells,DCs)的脂含量和蛋白质二级结构的影响,为深入理解肿瘤的免疫逃逸机制寻找线索.方法:免疫磁珠法分离人CD14+单核细胞,以经典方法将其诱导为未成熟DCs(immature DCs,imDCs)和成熟DCs(mature DCs,mDCs),分别将imDCs和mDCs与肝癌细胞株BEL7402、红白血病细胞株K562以及人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)共培养48 h,正常培养的DCs作为对照.采用FT-IR技术研究不同肿瘤细胞对不同分化阶段DCs的脂含量和蛋白质二级结构的影响.结果:与正常培养的DCs相比,与肿瘤细胞BEL7402和K562共培养后imDCs和mDCs的膜磷脂成分减少(2.718±0.296,3.124±0.361 vs 4.855±0.324,P＜0.05;2.964±0.136,3.522±0.173 vs 4.217±0.206,P＜0.05),而总的脂含量增加(3.768±0.185,3.591±0.197 vs 2.487±0.212,P＜0.05;4.288±0.156,4.155±0.167 vs 3.233±0.206,P＜0.05);蛋白质α-螺旋含量减少(1.863±0.192,1.754±0.169 vs 2.364±0.188,P＜0.05;1.124±0.133,1.016±0.107 vs 1.392±0.113,P＜0.05),β-折叠(3.397±0.225,3.433±0.236 vs 2.486±0.198,P＜0.05;2.646±0.209,2.591±0.216 vs 1.558±0.159,P＜0.05)阳转角含量(4.366±0.284,4.322±0.266 vs 3.127±0.272,P＜0.05;2.675±0.221,2.627±0.235 vs 1.773±0.181,P＜0.05)增加;并且mDCs比imDCs更容易受到肿瘤来源因素的影响.结论:与肿瘤细胞共培养能够导致mDCs和imDCs的脂含量和蛋白质二级结构发生改变,可能是肿瘤导致DCs功能损伤的结构基础.
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携带溶瘤病毒细胞载体的研究进展
溶瘤病毒是一类具有复制能力的肿瘤杀伤性病毒,可通过多种机制发挥抗肿瘤作用.然而,机体的免疫监视作用使溶瘤病毒不能高效到达肿瘤部位而不足以治疗肿瘤.细胞载体作为溶瘤病毒的"特洛伊木马"可使溶瘤病毒逃避免疫监视,且两者联合具有更好的抗肿瘤疗效.根据细胞载体对肿瘤靶向程度的差异,细胞载体可分三大类:靶向肿瘤细胞的细胞载体,包括抗原特异性T细胞和细胞因子诱导的杀伤细胞;靶向肿瘤基质的细胞载体,包括间充质干细胞、内皮系细胞和肿瘤相关巨噬细胞;靶向组织或器官的细胞载体,包括外周血淋巴细胞、树突状细胞和肿瘤细胞等.本文主要介绍该三类细胞载体的研究及应用进展,讨论其存在的问题与应对对策,并展望未来发展方向.
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Cbl-b在T细胞免疫耐受和肿瘤免疫治疗中的作用
Cbl-b(casitas B-cell lineage lymphoma-b)为一种高度保守的RING家族E3泛素连接酶,是调节T细胞信号的关键因子,对维持外周T细胞免疫耐受至关重要.Cbl-b表达受转录因子、共刺激分子CD28、CTLA4及自身泛素化的调控.Cbl-b通过泛素化激活的受体、受体相关酪氨酸激酶和下游信号分子而参与淋巴细胞信号的负性调控,进而精密调节抗原受体信号和免疫反应.另外,Cbl-b在调控T细胞TGF-β信号转导通路中起着重要作用.Cbl-b的缺失能增强抗肿瘤免疫反应,打破自身免疫耐受.因此,深入研究Cbl-b在T细胞免疫耐受和肿瘤免疫治疗中的作用可为肿瘤免疫治疗提供新的靶点.
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间充质干细胞对移植物抗宿主病的免疫调节作用
间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)是骨髓中具有自我更新和多向分化潜能的一种非造血干细胞,其免疫原性很低,在体外能抑制丝裂原或同种异基因抗原刺激的T细胞增殖.移植物抗宿主病(graft versus host disease,GVHD)是异基因造血干细胞移植(allogeneic hematopoietic stem cell transplantation,alloHSCT)后主要的并发症,主要由供者T细胞所介导,是多种机制共同参与的复杂过程.在动物实验和临床试验中,MSCs具有较强的免疫调节作用,能显著抑制GVHD的发生,缓解其症状,提高受者的存活率;其机制为MSCs通过抑制T细胞的增殖,阻断DCs的分化和成熟,并通过增加CD4+CD25+调节性T细胞的比例来提高干细胞移植的成功率,使GVHD造成的病理损伤明显减轻,从而达到预防和治疗GVHD的目的.相关研究为MSCs有效应用于GVHD等临床免疫性疾病治疗提供了理论指导,并展现出极大的应用前景.
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胃癌患者外周血和肿瘤组织中高表达CD14+DRlow/-髓源抑制性细胞
目的:探讨胃癌患者外周血和肿瘤组织中CD14+DRlow/-髓源抑制性细胞(myeloid-derived suppressor cells,MDSCs)的表达及其与肿瘤病理特征的关系.方法:选取2009年3月至2010年10月安徽医科大学第三附属医院胃癌患者43例(Ⅰ期9例、Ⅱ期13例、Ⅲ期14例、Ⅳ期7例),另采集26例正常健康者作为对照组.流式细胞术检测外周血、瘤组织中CD14+DRlow/-MDSCs的表达水平,分析MDSCs表达水平与肿瘤病理特征的相关性.结果:胃癌患者肿瘤组织中CD14+DRlow/-MDSCs的表达显著高于自身外周和健康对照者外周血的表达水平[2.87±1.93)%vs(2.37±1.7)%,(0.89±0.47)%,P＜0.05和P＜0.01],后两者间差异也有统计学意义(P＜0.01).CD14+DR low/-MDSCs的表达与胃癌的恶性程度呈正相关,晚期胃癌组织内CD14+DRlow/-MDSCs表达明显增加(Ⅰ:Ⅱ:Ⅲ:Ⅳ=(1.15±0.78)%:(1.71±0.92)%:(2.25±1.24)%:(4.85±2.37)%,P＜0.05).同时,肿瘤浸润组织与非浸润组织的CD14+DRlow/-MDSCs表达也有明显差异[3.90±1.67)%vs (2.62±1.53)%,P＜0.05].结论:CD14+DRlow/-MDSCs在胃癌患者外周血和肿瘤组织中均高表达,与胃癌的发生、发展密切相关.
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胃癌组织中miR-29的表达及其临床意义
目的:研究胃癌组织中miR-29的表达情况及其与临床病理特征和预后的关系.方法:收集2005年至2010年中国人民解放军第324医院收治的进展期胃癌113例患者的手术标本,定量PCR检测胃癌组织及癌旁组织内miR-29的表达,并分析其与胃癌患者临床病理特征的关系.结果:胃癌组织内miR-29的表达显著低于对应的癌旁组织(2.62±1.17 vs 3.14±1.70,P=0.006),伴淋巴结转移的胃癌患者低表达miR-29百分率显著高于无淋巴结转移组(58.9% vs 32.5%,P=0.007),miR-29低表达胃癌患者中位生存率显著低于miR-29高表达者(33.0 vs 44.0个月,P=0.013).结论:胃癌组织低表达miR-29,miR-29有可能成为胃癌的预后判断指标及治疗靶标.
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大规模平行测序技术筛选人肾细胞癌组织中差异表达microRNAs及其验证
目的:以大规模平行测序技术(massively parallel signature sequencing,MPSS)筛选人肾细胞癌(renal cell carcinoma,RCC)和癌旁组织中差异表达的microRNAs(miRNAs),并验证差异表达miRNAs之一的miR-660在人RCC中的表达.方法:MPSS检测10例RCC组织及相应癌旁组织中miRNAs的表达,筛选RCC组织中差异表达miRNAs.RT-PCR检测5例RCC与癌旁组织中miR-660的表达,qPCR检测40例RCC与癌旁组织中miR-660的表达.结果:MPSS结果显示,RCC组织中283个miRNAs表达下调,187个表达上调,其中miR-660在RCC组织中表达量是癌旁组织的17.5%.RT-PCR初步验证了此结果;qPCR验证结果显示,40例RCC组织中33例miR-660表达显著低于癌旁组织,RCC组织中miR-660平均表达量是癌旁的19.5%.结论:人RCC组织中283个miRNAs表达下调、187个上调.miR-660在RCC组织中低表达,有可能成为RCC诊断及治疗的新靶点.
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喉鳞癌患者外周血CD45low CD34+KDR+内皮祖细胞的检测及其临床意义
目的:研究喉鳞癌患者外周血中循环CD45lowCD34+KDR+内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)的水平及其与喉鳞癌发生、发展的相关性.方法:收集2010年2月至2011年2月20例喉鳞癌患者外周血标本,10例健康志愿者外周血作为对照.流式细胞术检测CD45lowCD34+KDR+EPCs占外周血CD34+造血干细胞或外周血淋巴细胞的比例,实时定量PCR检测PBMC中KDR mRNA和CDl33 mRNA的表达水平,ELISA与Griess法分别检测血清中VEGF和NO的水平.结果:临床Ⅱ期～Ⅳ期的喉鳞癌患者外周血CD45lowCD34+KDR+EPCs占CD34+造血干细胞的比例和占淋巴细胞的比例均较健康对照组明显升高[(55.4±11.4)% vs (21.0±5.8)%,P＜0.05;(1.27±0.25)(‰) vs (0.25±0.09)(‰),P＜0.05].临床Ⅱ期～Ⅳ期喉鳞癌患者PBMC中KDR mRNA和CDl33 mRNA的表达水平及血清中VEGF水平均明显高于健康对照组(P＜0.05),NO水平没有明显差异;而临床Ⅰ期的喉鳞癌患者CD45lowCD34+KDR+EPCs比例、KDR mRNA和CDl33 mRNA表达以及VEGF水平与健康对照组相比无差异.结论:晚期喉鳞癌患者外周血循环CD45lowCD34+KDR+EPC和血清中VEGF水平均明显升高,可能与肿瘤的发生有关.
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IL-12家族细胞因子:肿瘤免疫治疗研究的热点分子
利用细胞因子提高宿主免疫能力、破坏肿瘤细胞的免疫逃逸功能是肿瘤生物治疗的重要策略.IL-12细胞因子家族是具有高度同源性的一类异源二聚体细胞因子,包括IL-12、IL-23、IL-27和IL-35,它们均由活化的抗原提呈细胞如巨噬细胞和树突状细胞产生,在辅助性T细胞分化过程中起重要作用.IL-12通过活化ATAT4信号转导途径产生IFN-γ促进细胞免疫反应;IL-27主要活化STAT1途径增强细胞和体液免疫反应;外源性IL-23可以产生抗肿瘤效应,而内源性IL-23通过活化STAT3诱导产生IL-17,从而促进肿瘤的发生和发展;IL-35可能是潜在的免疫抑制性细胞因子.总之,IL-12细胞因子家族成员在肿瘤免疫反应中各自发挥不同的作用,已成为肿瘤免疫治疗和研究的热点分子.
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mda-7/IL-24和IL-24delE5诱导急性髓系白血病细胞向单核细胞分化
目的:研究人黑素瘤分化相关基因-7(melanoma differentiation associated gene-7,mda-7;又称IL-24)及其剪接体IL-24delE5与急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)细胞分化的关系.方法:十四烷酰佛波醇-乙酯(12-O-tetrade-canoylphorbol-13-acetate,TPA)处理人急性髓系白血病细胞系U937、HL-60,real-time PCR及Western blotting检测细胞中mda-7/IL-24和IL-24 delE5的表达,FACS检测细胞表面CD11b、CD14和CD115的表达.siRNA干扰U937、HL-60细胞中mda-7/IL-24和IL-24 delE5的表达后,再以TPA诱导细胞分化,FACS检测CD11b、CD14和CD115的表达.用前期构建的mda-7/IL-24和IL-24 delE5载体转染U937、HL-60及AML-M5患者的原代白血病细胞,观察异位过表达mda-7/IL-24和IL-24 delE5能否诱导白血病细胞向单核细胞分化.结果:TPA在诱导U937、HL-60细胞向单核细胞分化过程中显著促进mda-7/IL-24及其剪接体IL-24 delE5的表达,用siRNA干扰mda-7/IL-24及IL-24 delE5的表达后,TPA诱导U937、HL-60细胞向单核细胞分化的作用也被阻断.异位过表达mda-7/IL-24和IL-24 delE5可诱导U937、HL-60以及原代AML细胞向单核细胞分化:U937、HL-60细胞表面CD11b和CD14表达均显著升高,CD115表达仅在U937细胞有显著升高;3例AML-M5患者的原代AML细胞中CD11b、CD14及CD115表达均有不同程度升高,细胞呈现单核细胞的形态特征.结论:TPA可通过上调mda-7/IL-24及其剪接体IL-24delE5的表达诱导白血病细胞向单核细胞分化.
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hTERT启动子驱动的肿瘤抑素靶向肝癌细胞表达及其抗血管形成的作用
目的:观察人端粒酶逆转录酶基因(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)启动子驱动的肿瘤抑素(tamstatin)基因在肝癌细胞HepG2内特异性表达及其体外抗血管形成的作用.方法:构建phTERT-tumstatin、pCMV-tumstatin(阳性对照)、phTERT-EGFP(阴性对照)质粒,脂质体介导转染HepG2肝癌细胞、L-02正常肝细胞,荧光显微镜检测EGFP的表达.Western blotting检测tumstatin在HepG2细胞内的表达,MTS法检测稳定转染后HepG2细胞的增殖以及含或不含tumstatin蛋白的条件培养基对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vascular endothelial cell,HUVEC)增殖的影响.通过计数管样分支数检测tumstatin蛋白对HUVEC管道结构形成的影响.结果:成功构建phTERT-tumstatin、pCMV-tumstatin和phTERT-EGFP质粒,质粒转染后tumstatin基因在肝癌细胞HepG2中特异地表达,在正常肝细胞L-02中无表达.phTERT-tumstatin和phTERT-EGFP转染均不影响HepG2细胞的增殖.含tumstatin蛋白的条件培养基CM-T抑制HUVEC的增殖[抑制率为(56.49±0.33)%];CM-T与不含tumstatin蛋白的条件培养基CM-N、CM-NT相比显著抑制了HUVEC血管结构的形成[(3.33±1.53)%vs(24.44±3.11)%、(23.94±2.92)%,P＜0.01)].结论:phTERT基因启动子可驱动tumstatin靶向表达于肝癌细胞,并抑制HUVEC血管管道结构形成.
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血浆EGFR基因突变指导进展期肺腺癌的靶向治疗
目的:研究进展期肺腺癌患者血浆中EGFR基因突变与小分子酪氨酸激酶抑制剂(tyrosine kinase inhibitor,TKI)吉非替尼(gefitinib,又称易瑞沙Iressa)治疗进展期肺腺癌患者疗效间的关系.方法:选择上海交通大学医学院附属第三人民医院肿瘤科一线治疗失败后的44例进展期肺腺癌患者(男32例,女12例)和15位健康志愿者(男11例,女4例).采集受试者血浆,利用改良酚-氯仿方法提取血浆DNA,利用突变富集型PCR(mutatant-enriched PCR,ME-PCR)扩增EGFR基因外显子19和21,然后进行基因测序.分析肺腺癌患者EGFR基因突变与与患者年龄、性别、吸烟史、体力状况(performance status,PS)评分、临床分期、是否接受放疗、一线化疗周期数间的关系,Kaplan-Meier法和Log-rank检验分析EGFR基因突变组与EGFR野生型组接受吉非替尼治疗的PFS和疗效差异.结果:44例肺腺癌患者血浆中有13例检出EGFR基因突变,其中外显子19缺失突变8例、外显子21点突变5例;健康对照组中未发现EGFR基因突变.肺腺癌患者EGFR基因突变与患者性别、吸烟史相关,与患者年龄、PS评分、分期、是否接受放疗及化疗周期数无关.EGFR基因突变的肺腺癌患者经吉非替尼治疗后中位无疾病进展时间(PFS)明显长于无EGFR突变患者(8个月vs 3.7个月,P=0.008).结论:进展期肺腺癌患者血浆中EGFR基因突变检测可以作为分子靶向药物治疗的参考.
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槲皮素、姜黄素对人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡作用的比较
目的:探讨槲皮素和姜黄素对人肝癌HepG2细胞株增殖及凋亡的作用.方法:不同质量浓度的槲皮素(0、10、20、50、100μmol/L)和姜黄素(0、2、5、10、20μmol/L)分别作用HepG2细胞24、48、72 h,以As203(0、2、5、10、20μmol/L)为阳性对照,MTT法检测HepG2细胞的增殖,流式细胞术检测HepG2细胞的凋亡.结果:槲皮素、姜黄素及As203作用后,HepG2细胞形态发生变化、生长速率变慢,HepG2增殖率随着时间和药物浓度的增加逐渐减低,72 h时3种药物高浓度组HepG2细胞增殖率分别为(31±5.8)%、(51±4.6)%、(54±5.8)%.槲皮素和姜黄素均有明显的促凋亡作用,并呈时间和浓度依赖性;高浓度(100μmol/L)槲皮素作用强,相同浓度下的姜黄素与As203作用相当.结论:槲皮素和姜黄素能明显抑制HepG2细胞增殖,促进其凋亡,并且这种作用强于As203.
| 年 | 期数 |
| 2019 | 01 02 |
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| 2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
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| 2014 | 01 02 03 04 05 06 |
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