浙江大学学报（医学版）杂志
Journal of Zhejiang University(Medical Sciences) 절강대학학보（의학판）
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美托洛尔对缺血糖尿病大鼠心肌的电生理作用
目的:研究美托洛尔对糖尿病大鼠心肌缺血缺氧的电生理作用及其机制.方法:雄性Sprague-Dawley (SD)大鼠40只,实验分为:糖尿病组、糖尿病+左交感神经切除组、糖尿病+美托洛尔组,空白对照组,每组10只大鼠.通过腹腔注射链脲佐菌素(60 mg/kg)建立糖尿病模型,模型建立后行离体的心脏的电生理研究.分别测定心室舒张期兴奋阈( Diastolic effective threshold,DET),心室有效不应期(Effective refractive period,ERP),心室颤动阈(Ventricular fibrillation threshold,VFT),并测定各组的血清神经生长因子(nerve growth factor,NGF)浓度.结果:美托洛尔可以提高糖尿病大鼠心肌缺血后的DET,交感神经切除组可以明显提高糖尿病大鼠的VFT,具有统计学差异.美托洛尔组的VFT比糖尿病大鼠的VFT明显升高,心肌缺血前,关托洛尔组的VFT和糖尿病组的VFT比较并没有差异.缺血后,美托洛尔组的VFT比糖尿病大鼠的VFT明显升高,糖尿病组及糖尿病+美托洛尔组大鼠其NGF浓度明显高于对照组,具有统计学差异；而糖尿病+交感神经切除组大鼠,其NGF浓度与对照组间差异没有显著性.结论:交感神经的重构对糖尿病大鼠心肌的电生理,特别是对缺血后的电生理的影响发生起到重要的作用,美托洛尔可以提高缺血后糖尿病大鼠的VFT,降低心肌的兴奋阈值,从而可能降低室性心律失常的发生.其机制可能与其抑制交感神经的重构有关.
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一种基于荧光图像的体外抗肿瘤药物快速筛选方法
目的:建立一种基于荧光成像的抗肿瘤药物体外快速筛选系统.方法:①采用二乙酸荧光素(FDA)标记测定活细胞数法,评价26个乌药组分对的体外抗肿瘤活性,并对本方法的线性范围和精密度进行了考察；②在活性筛选结果的指导下,应用LC/MS对样品进行分析,初步推断药效活性物质.结果:①该方法在细胞密度为0～ 10 000/孔的范围内荧光强度与细胞个数线性相关(r2 =0.9858),板内的精密度为9.41％；②在26个乌药组分中,筛选得到两个抗肿瘤活性较强的组分C13和C15,抑制率均达到90％以上.结论:本方法快速、稳定、简便、线性范围宽,可用于从复杂中药组分中快速筛选抗肿瘤活性物质.此外,根据LC/MS分析结果并结合文献报道,推断乌药中具有抗肿瘤活性的化合物为异波尔定碱.
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小鼠NMNAT1基因的过表达和RNAi重组慢病毒的构建包装和检测
目的:针对小鼠烟酰胺单核苷酸腺苷酰转移酶1( NMNAT1)基因构建质粒并进行慢病毒包装,同时检测其表达水平和干扰效率,为进一步探讨该基因的功能提供研究工具和实验基础.方法:根据NMNAT1基因信息,用慢病毒载体pLenti6构建三种重组质粒,分别包含NMNAT1 cDNA全长、一个针对NMNAT1的小干扰序列和一个用于干扰对照的阴性序列.把这些质粒包装进慢病毒载体,并检测病毒滴度,再用慢病毒感染Hela细胞检测NMNAT1表达量和RNA干扰效率.结果:测序结果证明目的序列正确地插入到载体内.通过qPCR方法鉴定慢病毒包装成功,病毒滴度均为2×108 TU/ml以上.表达NMNAT1的重组慢病毒感染Hela细胞,该细胞能够高水平表达NMNAT1蛋白,而携带RNAi序列的慢病毒能够显著抑制其表达,干扰效率在70％以上.结论:针对NMNAT1的过表达和RNAi重组慢病毒制备成功,为进一步研究NMNAT1基因的功能和用慢病毒进行基因治疗提供了良好的研究工具.
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Wnt/β-catenin信号通路对问充质干细胞衰老的影响及其作用机制
目的:研究不同年龄血清对Wnt/β-catenin信号通路激活水平的影响,探讨Wnt/β-catenin信号通路对间充质干细胞(MSCs)衰老、增殖、存活能力的作用及其机制.方法:提取年轻(8 ～12周)及老年(64—72周)SD大鼠血清,实验分为4组,分别为年轻血清(Young rat serum,YRS)组,YRS+ Wnt 3a组、老年血清(Old rat serum,ORS)组和ORS+ DKK1组.免疫细胞化学染色和Western blotting检测胞浆、胞核β-catenin的表达.SA-β-半乳糖苷酶染色检测各组细胞衰老,MTT法检测细胞增殖,AO/EB染色法检测MSCs存活和凋亡.为研究Wnt/β-catenin信号通路导致MSCs衰老的作用机制,免疫细胞化学染色和Western blotting检测γ-H2A.X和p53蛋白表达,RT-PCR法检测p53、p21 mRNA表达.结果:ORS组β-catenin表达较YRS组明显增强,尤其是胞核,出现β -catenin聚集现象,而ORS+ DKK1组β-catenin表达减弱.与YRS组相比,YRS+ Wnt 3a组细胞SA-β-半乳糖苷酶染色阳性细胞数显著增多(P＜0.01),细胞增殖和存活能力减弱.而ORS+ DKK1组与ORS组相比,SA-β-半乳糖苷酶染色阳性细胞数显著减少(P＜0.01),细胞增殖和存活能力增强.免疫细胞化学染色、Western blotting和RT-PCR检测结果显示,ORS组内γ-H2A.X、p53、p21表达较YRS组明显增强,而在ORS内加入DKK1后,γ-H12A.X、p53、p21表达较ORS组明显减弱.结论:ORS培养可以激活MSCs内Wnt/β-catenin信号通路.Wnt/β-catenin信号通路对MSCs衰老发挥重要调控作用.DNA损伤反应和p53/p21途径是Wnt/β-catenin信号通路导致MSCs衰老的重要介导因素.
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首发偏执型精神分裂症事件相关电位P300与记忆功能和精神病理症状关系的研究
目的:探讨首发偏执型精神分裂症事件相关电位P300指标的变异情况以及与记忆功能和精神病理症状的关系.方法:对30例首发偏执型精神分裂症患者(患者组)和20例健康对照者(对照组),进行Cz(中央点)、Pz(顶叶点)电极位置的P300检测和韦氏记忆量表(WMS)测定,并应用阳性和阴性症状量表(PANSS)评定患者组的精神病理症状.结果:①患者组Cz、Pz点的P300潜伏期分别为( 390.6±47.6) ms和(393.3±50.1)ms,均较对照组延长(P＜0.01),波幅分别为(7.7±3.4)μV和(8.5±3.9) μV,均较对照组降低(P＜0.05—0.01)；②患者组记忆商数(88.1±10.0)分及短时记忆、瞬时记忆受损明显(P＜0.05～0.01)；③患者组Cz、Pz点的P300潜伏期与PANSS总分和各因子分呈一定程度的正相关,与WMS的记忆商数和再认、再生、触摸、背数因子分呈一定程度的负相关(P＜0.05～0.01).结论:首发偏执型精神分裂症存在记忆功能障碍,P300与WMS结合能够比较客观综合地评估疾病的认知功能.P300潜伏期的延长可能与首发偏执型精神分裂症精神病理损害和记忆功能缺损的严重程度相关.
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酵母多糖致全身炎症反应综合征大鼠模型的制备
目的:建立全身炎症反应综合征(systemic inflammatory response syndrome,SIRS)大鼠模型,为进一步探讨SIRS的机理及其治疗做充足的准备.方法:采用腹腔注射酵母多糖-石蜡混悬液制备模型,按照不同注射剂量分为4组,观察各组大鼠的一般情况、体温、白细胞计数、外周血中肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)和白细胞介素10( interleukin- 10,IL-10)水平,以及主要脏器的病理切片改变.结果:注射剂量750 mg/kg和1 000mg/kg酵母多糖混悬液组大鼠符合SIRS动物模型的标准,其中,1 000 mg/kg组的大鼠病死率较高,48 h可达66.7％,而750 mg/kg组生存周期较长.结论:成功建立了稳定的SIRS大鼠模型,750mg/kg组SIRS存活时间较长,适宜于SIRS的发生机制和疗效研究,1 000 mg/kg组病死率高,存活时间短,适宜于病死率干预实验.
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siRNA抑制感染细胞模型中HCV复制的研究
目的:探讨siRNA能否有效抑制丙型肝炎病毒(HCV)感染细胞中HCV的复制.方法:用HCV JC1质粒体外制备HCV RNA转录体,转染Huh-7.5.1细胞,收集细胞上清,再次孵育Huh-7.5.1细胞以建立HCV感染细胞模型,并用间接免疫荧光检测细胞内HCV核心蛋白的表达.将针对HCV NS5B基因的siRNA转染HCV感染细胞(浓度为4、40和200 nmol/L,时间为24 h、48 h和72 h),将4、40和200 nmol/L siRNA转染正常Huh-7.5.1细胞,并设空白对照、脂质体对照、无关siRNA对照以及IFNα-2b(1 000 IU/ml)组,用荧光定量PCR检测细胞内HCV RNA和PKRmRNA水平.结果:HCV感染的Huh-7.5.1细胞中检测出HCV核心蛋白表达.40 nmol和200nmol/L siRNA 24 h组及4、40、200 nmol/L siRNA 48 h和72 h组,HCV RNA水平分别降至58％、54％、29％、17％、17％、33％、22％、19％,明显低于对照组(P＜0.05或P＜0.01).1 000 IU/mlIFN的各时间组HCV RNA水平均明显低于对照组(P＜0.05或P＜0.01).各浓度siRNA组的PKR mRNA的表达与对照组无明显差异(P＞0.05).结论:针对HCV NS5B区的siRNA能够明显抑制HCV感染细胞中HCV的复制,而不引起双链RNA依赖的蛋白激酶(PKR)基因表达的激活.
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Huh7.5.1细胞感染HCV观察干扰素治疗后miRNA表达谱变化
目的:探寻可能对丙型肝炎病毒(HCV)有作用的mi-RNA.方法:用体外转录得到的HCV感染正常的Huh-7.5.1细胞,然后加入干扰素作用,采用mi-RNA表达谱芯片技术,分别测定Huh-7.5.1细胞正常组和HCV感染组及干扰素作用组的mi-RNA的表达,采用2(- △△CT)法分析组间microRNA的表达情况.结果:以正常Huh-7.5.1细胞中表达的mi-RNA为基准,经过筛选发现13种mi-RNA在HCV感染后表达上调,而在干扰素治疗后则出现下调；另外还有7种mi-RNA则在HCV感染后出现表达下调,而在干扰素治疗后则发生上调.结论:mi-RNA10a、mi-RNA21、mi-RNA149和mi-RNA152及mi-RNA210可能与HCV的复制转录有关.
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基于RNA干扰技术和microRNA调控的丙型肝炎治疗研究进展
丙型肝炎病毒(HCV)感染是一个全球性的健康问题,全球约有1.7亿人感染了HCV,慢性丙型肝炎常导致肝硬化、肝癌等严重的肝脏疾病,但至今尚无针对HCV感染的有效疫苗或抗体.RNA干扰(RNAi)是一种抵御病毒感染的具前景的治疗策略,近年来基因治疗领域的发展进一步提升了其临床应用的可行性.RNAi技术加速了对HCV生物学基础的认知,并揭示了许多可作为治疗新靶点的病毒和宿主细胞分子.同时,基因运载体系的发展以及microRNA (miRNA)在HCV感染中关键作用的发现,使得基于RNAi和miRNA的抗病毒治疗策略具有巨大前景.文中就丙型肝炎治疗的RNAi靶点,肝脏靶向基因运载体系,microRNAs抗HCV感染潜能等研究领域中的新进展作一综述.
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miR-122对乙型肝炎病毒抗原表达的影响
目的:探讨miR-122对乙型肝炎病毒HBsAg、HBeAg表达的影响.方法:设计合成2务miR-122的反义寡核苷酸(anti-miR-122,LNA-antimiR-122)、hsa-miR-122以及阴性对照anti-GFP,脂质体介导转染HepG2.2.15细胞.取细胞转染24h、48 h后的培养液,时间分辨荧光免疫法检测anti-miR-122组、LNA-antimiR-122组、hsa-miR-122组以及anti-GFP组HBsAg和HBeAg的表达,定量PCR检测各组HBV DNA的表达.转染48 h后,提取细胞内总RNA,Taqman技术实时荧光定量PCR检测各组miR-122的表达.结果:①转染48 h后anti-miR-122组、LNA-antimiR-122组miR-122表达明显受抑制,低于阴性对照组(P ＜0.001).hsa-miR-122组miR-122水平较阴性对照组升高(P＜0.001).②hsa-miR-122组HBsAg、HBeAg表达均低于阴性对照组(P ＜0.001)；anti-miR-122组、LNA-antimiR-122组HBsAg、HBeAg表达均高于阴性对照组(P ＜0.001).③转染24 h与48 h后各组HBV DNA表达与阴性对照组比较无统计学意义(P＞0.05).结论:miR-122可调节乙型肝炎病毒抗原表达.
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结缔组织生长因子特异性小分子干扰RNA的筛选及其在抗肝纤维化中的作用
目的:设计和合成针对抗肝纤维化关键基因结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)的特异性小干扰RNA( siRNA),并筛选高效的CTGFsiRNA抗肝纤维化序列,探讨其通过尾静脉注射是否具有抗大鼠肝纤维化作用.方法:①筛选高效的CTGF siRNA序列.②干预肝纤维化模型大鼠.选取雄性SD大鼠30只,随机分成5组,分别为空白对照组尾静脉注射生理盐水8周；模型组腹腔注射40％ CCl4(3 ml/kg)及尾静脉注射生理盐水,1次/3d,连续8周；预防组腹腔注射40％ CCl4及尾静脉注射CTGF siRNA(0.1 mg/kg),1次/3d,连续8周；2周治疗组腹腔注射40％ CCl4 2周,后给予CTGF siRNA及CCl4 6周；4周治疗组腹腔注射40％ CCl4 4周,后给予CTGFsiRNA及CCl4 4周.于后一次CC14注射3天后取血及组织标本,检测肝纤维化指标,应用Real-Time PCR及Western印迹法检测CTGF mRNA及蛋白质在大鼠肝组织表达,应用Masson染色检测肝组织纤维化.结果:与模型组(0.544±0.019)相比,预防组(0.105±0.003)及治疗组(0.190±0.006)大鼠肝组织CTGF mRNA和蛋白质表达显著下调(P＜0.05),肝组织炎症和坏死及纤维化明显减轻,肝纤维化指标显著降低(P＜0.05).4周治疗组与模型组相比各指标降低,与预防组及2周治疗组相比各指标相对升高(P＜0.05).结论:成功筛选出高效的CTGF siRNA,且经尾静脉注射CTGF siRNA能显著抑制大鼠体内肝脏CTGF基因表达,并能有效防治大鼠肝纤维化,对于病程较长的肝纤维化也有一定的治疗作用,提示CTGF siRNA在抗肝纤维化治疗中有重要作用.
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miR-122对IFN-α抗HCV效应的影响
目的:探讨miR-122对α-干扰素(IFN -α)抗丙型肝炎病毒(HCV)效应的影响.方法:给感染HCV的Huh7.5.1予miR-122模拟物(20 nmol/L、100 nmol/L、400 nmol/L)和(或)IFN-α(1 000 IU/ml)处理,采用荧光定量PCR检测HCV RNA水平；给Huh7.5.1细胞感染不同数量HCV(107拷贝,106拷贝,105拷贝)和(或)IFN-α处理,荧光定量PCR检测HCV RNA水平.结果:IFN-α以时间依赖方式抑制HCV复制,在48 h时使HCV RNA下降了83％.miR-122模拟物呈剂量依赖性促进HCV RNA复制(P＜0.05).IFN-α的抗病毒效应与miR-122模拟物水平(20 nmol/L、100nmol/L、400 nmol/L)成反比,与对照组比较有显著性差异(73.3％±3.5％,64.67％±5.5％,56.33％±5.1％ vs 84％ +4.5％,后两组P＜0.05).IFN-α的抗病毒效应与HCV载量呈反比(105拷贝组vs107拷贝组,P＜0.05).结论:在细胞感染模型中,miR-122促进HCV的复制,并且,miR-122的表达可部分中和IFN-α的抗HCV效应.
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星形胶质细胞在中枢感觉信息处理中的作用
在哺乳动物的中枢神经系统中,存在两种神经细胞——神经元和胶质细胞.对于神经元的结构及其在信息处理和传递中的功能已经有了广泛而深入的研究,并且对其机制也了解得比较清楚.而相对于神经元来说,胶质细胞是否以及怎样参与神经信息的整合、传输,还没有很系统的研究.因为胶质细胞本身的电惰性,接受电刺激或机械刺激后不能像神经元那样发生动作电位,因此,很长一段时期内人们都认为胶质细胞的主要作用是支持和营养神经元,本身不具备信息传递和处理的功能.近年来大量研究发现,胶质细胞和神经元一起共同参与神经系统中各项功能活动的调控.胶质细胞,特别是星形胶质细胞在各种信息处理中起着重要作用.文中以星形胶质细胞在中枢感觉信息处理中的作用为主题作一综述.
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尼克酰胺磷酸核糖转移酶与衰老及衰老相关疾病研究进展
哺乳动物尼克酰胺磷酸核糖转移酶(nicotinamide phosphoribosyl transferase,NAMPT),参与NAD的合成,也是一种细胞因子,参与调控糖代谢、炎症反应、应激耐受等多种生物学效应.研究表明,NAMPT与衰老及衰老相关疾病(例如糖尿病、肥胖、肿瘤、神经退行性疾病以及心脑血管疾病等)密切相关.这些研究成果将为临床防治衰老相关疾病提供新的思路和方法.
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质子泵抑制剂和氯吡格雷联用与支架内再狭窄关系的回顾性研究
目的:评估接受经皮冠状动脉介入治疗术后患者,氯吡格雷联合质子泵抑制剂治疗是否会增加支架内再狭窄的风险.方法:根据服用氯吡格雷抗血小板治疗的同时是否使用质子泵抑制剂,分为氯吡格雷治疗组(n=250)和氯吡格雷+质子泵抑制剂治疗组(n=189),比较分析两组患者支架内再狭窄发生率.结果:平均随访(13±5.9)月观察发现,经皮冠状动脉介入治疗术后氯吡格雷加用质子泵抑制剂治疗组患者,支架内再狭窄发生率明显高于未使用质子泵抑制剂治疗组患者(19.6％ vs 8.0％),两者比较差异具有统计学意义,P＜0.001.结论:经皮冠状动脉介入治疗术后患者,使用氯吡格雷治疗的同时联用质子泵抑制剂增加了支架内再狭窄的发生率,质子泵抑制剂的使用可能会影响经皮冠状动脉介入治疗术后患者使用氯吡格雷抗血小板治疗的临床获益.
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双源螺旋CT在冠状静脉成像中的应用研究
目的:评价双源螺旋CT对慢性心力衰竭患者显影冠状静脉系统的应用价值.方法:35例患者,年龄(65.4±8.8)岁,60％男性,分为2组:A组先后行双源螺旋CT扫描及冠状静脉逆行造影( retrograde coronary venography,RCV),B组先后行冠状动脉顺向型心脏静脉造影(coronary venography,CVG)及RCV.结果:所有患者冠状静脉窦、心大静脉(GCV)及心中静脉(MCV)的显示率为100％；左室后静脉(LVPV)在A组65％患者显影,而B组66.7％患者显影；MDCT与RCV相关系数为0.944,CVG与RCV的相关系数为0.42.结论:双源螺旋CT可以无创评价冠状静脉系统,提示可能在心脏再同步化治疗(CRT)中具有一定价值.
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复方樟柳碱治疗原发性开角型青光眼疗效的临床研究
目的:评价复方樟柳碱( compound anisodine,CA)对眼压已控制的原发性开角型青光眼患者视神经的作用.方法:根据改良的HPA国际视野分期法,收集中期原发性开角型青光眼患者46例,随机分为CA组23例和对照组23例,分别接受复方樟柳碱颞浅动脉旁注射和维脑路通片口服治疗,比较治疗前后视力、眼压、眼底、视野及视乳头血流情况.结果:CA组视野平均缺损值(mean of defect,MD)明显改善；两组眼动脉收缩期峰值血流速度(pSV)、舒张末期血流速度(EDV),视网膜中央动脉PSV、EDV、阻力指数(RI)较治疗前均有显著改善(P＜0.05),且CA组改善程度优于对照组.结论:复方樟柳碱能有效改善原发性开角型青光眼患者的视功能和视乳头血流,保护视神经.
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要重视微小RNA在HCV感染和防治研究中的作用
丙型肝炎病毒(HCV)感染是引起肝硬化、肝癌的主要原因之一,严重危害人类健康,目前尚无有效的疫苗,并且丙型肝炎疗法也存在一定局限性.微小RNA (miRNAs)具有序列特异性调节基因表达的功能,参与调节生物体的生长、发育、病变等多个环节.近期研究发现,miRNAs可调控HCV复制,并与丙型肝炎进程及干扰素应答相关,因此需重视微小RNA在HCV感染和防治中的作用,开发基于miRNAs靶点的治疗新策略,为丙型肝炎的临床诊治开辟新领域.
| 年 | 期数 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2001 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2000 | 01 02 03 04 05 06 |
