慢性脑血流低灌注对大鼠脑内β-淀粉样肽的影响

目的 研究慢性脑血流低灌注对大鼠脑内β-淀粉样肽(Aβ)及淀粉样前体蛋白(APP)表达和分布的影响. 方法双侧颈总动脉结扎大鼠制作慢性脑血流低灌注动物模型,应用免疫组织化学方法检测皮质和海马CA1区APP、Aβ1-40、Aβ1-42的表达与分布;刚果红染色检测血管的淀粉样变;放射免疫分析法检测手术后10d、30d、90d和180d大鼠脑皮质及海马的Aβ含量;免疫印迹法检测大脑皮质和海马的APP含量. 结果 免疫组织化学染色显示低灌注90d模型组海马CA1区APP、Aβ1-40的表达较对照组明显增加(两者均P<0.05),低灌注180d模型组皮质和海马CA1区APP、Aβ1-40和Aβ1-42的表达均增加(除皮质Aβ1-40P<0.01外,其余均P<0.05);Aβ1-40阳性反应产物均匀分布于胞质内,Aβ1-42阳性反应产物在神经元胞质内呈颗粒状聚集.刚果红染色显示,术后180d脑实质内小血管发生淀粉样改变.放射免疫分析法和免疫印迹法结果显示,大鼠术后90d海马Aβ和APP含量开始增高(两者均P<0.05),180d皮质Aβ和APP的含量增高(Aβ P<0.05,APP P<0.01). 结论 慢性脑血流低灌注可引发大鼠脑内Aβ含量的升高,可能在阿尔茨海默病(AD)早期发病过程中有重要意义.

腹腔镜下腹膜后筋膜间隙外科平面的解剖观察

目的 探讨在腹腔镜下升、降结肠或肾切除术相关的腹膜后筋膜和筋膜间隙的解剖学特点及毗邻关系,以便正确地寻找、识别和选择安全的筋膜间隙外科平面. 方法在腹腔镜下对5具成人新鲜腹部标本,30例腹腔镜下升、降结肠切除术和95例肾切除术中的腹膜后筋膜和筋膜间隙的位置、沟通和毗邻关系进行了观察.结果升、降结肠外侧缘的脏腹膜与壁腹膜之间有一条黄白交界线,沿此线切开腹膜、腹膜外组织,即可显露深面的融合筋膜.融合筋膜与肾前筋膜之间的潜在间隙为融合筋膜间隙.切开融合筋膜,沿此间隙向内分离,可将升结肠或降结肠及原始结肠系膜向内翻起,完成结肠游离;或显露后方的肾前筋膜.肾前筋膜、融合筋膜外侧部与侧锥筋膜之间的间隙为肾旁前筋膜间隙;肾后筋膜、侧锥筋膜与腰方肌筋膜之间的间隙为肾旁后筋膜间隙.肾旁前筋膜间隙与融合筋膜间隙和肾旁后筋膜间隙沟通,通过这些间隙分离,可将肾安全游离. 结论 黄白交界线为进入融合筋膜间隙的标志,融合筋膜间隙及肾旁前、后筋膜间隙内无重要血管,易于辨认和分离,为腹腔镜下升、降结肠或肾游离的理想外科平面.

不同基质材料修饰的Sylgard184与C2C12细胞的相容性

目的 筛选能提高硅酮橡胶弹性体(Sylgard184)与C2C12相容性的理想基质材料. 方法Sylgard184双组分以10:1的比例均匀混合,倒入6孔板的其中4孔,室温下静置固化,其余2孔做为空白对照培养组(A组);固化后的Sylgard184表面依次经过以下处理:I型胶原包被(B组)、层黏连蛋白包被(C组)、多聚赖氨酸包被(D组);未经包被(E组),每组共6个样本.在不同基质材料修饰的Sylgard 184表面培养C2C12细胞,利用倒置显微镜观察5组C2C12细胞的增殖、分化状态,流式细胞术(FCM)检测增殖培养48h后C2C12细胞的分裂增殖情况,RT-PCR检测增殖和分化培养48h后C2C12细胞内MyoD、myogenin mRNA的表达.结果 Sylgard184材料存在细胞毒性,E组接种的C2C12细胞在24h内全部漂浮死亡;D组的大多数细胞出现死亡,仅少数贴壁存活;而B、C两组材料包被后明显减少Syhgard 184的毒性,增强其表面与C2C12细胞的相容性,且C组细胞处于合成期的百分比以及增殖期的MyoD和分化期Myogenin基因mRNA的表达水平均显著高于A、B两组(P<0.05). 结论 经层黏连蛋白包被后的Sylgard184表面更有利于C2C12细胞的增殖及分化活性的表达.

人视觉传导路的冠状断层解剖学研究

目的 为视觉传导路病变的影像学诊断提供形态学依据. 方法在26例成人尸体头部的连续冠状断层标本与6例活体成人头部磁共振连续冠状断层扫描图像上,研究视觉传导路的断层解剖. 结果 本研究辨认了视觉传导路5个关键冠状断层上的典型表现:1.视神经眶中段冠状断层呈圆形,位于眼眶中心偏内上方眶脂体内,周围包绕蛛网膜下隙和视神经鞘.2.视交叉冠状断层呈"一"字型横位分隔第三脑室底的视隐窝和漏斗隐窝,其上方是大脑前动脉A1段,下方正中邻垂体柄和灰结节,两侧是颈内动脉C2或C3段.3.视束中部冠状断层呈圆形夹在大脑脚底和杏仁体、尾状核尾之间,下方是脉络丛前动脉,继续向下在钩与大脑脚底之间是大脑后动脉P2段.4.外侧膝状体内侧邻大脑脚底,外侧是尾状核尾,下方是钩和大脑后动脉P2段.5.视辐射冠状断层参与构成侧脑室下角和后角外侧壁,视辐射与侧脑室后角之间隔簿层毯.头部磁共振冠状断层扫描对视觉传导路结构的辨认与连续冠状断层标本具有较好对应性. 结论 在冠状断层上,对视觉传导路结构的辨认,尤其是关键断层特征结构的辨认,为视觉传导路病变的影像学诊断提供形态学基础.

己酮可可碱抑制大鼠非酒精性脂肪性肝炎肝细胞的凋亡

目的 探讨凋亡相关基因在非酒精性脂肪性肝炎(NASH)发生发展中的作用机制,以及己酮可可碱(PTX)对非酒精性脂肪性肝炎(NASH)大鼠的抗凋亡作用. 方法 SD大鼠68只,标准饲料喂养1周后,随机分为8组:8周对照组(6只),8周模型组(10只),12周对照组(6只),12周模型组(10只),12周治疗组(10只),16周对照组(6只),16周模型组(10只),16周治疗组(10只).用高脂饮食法建立大鼠非酒精性脂肪性肝炎模型,腹主动脉取血检测血浆谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氮酶(AST)水平,采用免疫组织化学的方法检测肝Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白的表达情况,应用RT-PCR检测Caspase-3 mRNA的转录情况. 结果 各模型组ALT、AST均高于对照组,且模型组的ALT、AST逐渐增高.免疫组织化学实验结果表明,与同周数的对照组相比,各周模型组Bcl-2、Bax、Caspase-3的表达均有显著性增加(P<0.05),与同周数的模型组相比,12周、16周PTX治疗组Bcl-2、Bax、Caspase-3的蛋白表达有显著的降低(P<0.05). 结论 细胞凋亡是NASH的一个重要发病机制,己酮可可碱对NASH大鼠肝脏细胞凋亡有一定的抑制作用.

溶酶体4次穿膜蛋白β在小鼠卵母细胞及早期胚卵中的表达

目的 观察溶酶体4次穿膜蛋白β(LAPTM4β)在小鼠卵母细胞及早期胚卵中的表达,分析新基因LAPTM4β在植入前胚卵发育中的作用,为研究植入前胚卵发育的基因调控提供实验依据.方法 从50只小鼠的子宫或输卵管中收集小鼠卵母细胞及从原核期到胚泡的早期胚卵共50枚.采用激光扫描共焦显微镜技术与免疫组织化学ABC法,观察小鼠卵母细胞及早期胚卵中LAPTM4β的表达;表达结果用Maticam2206图像分析系统进行半定量分析.结果激光扫描共焦显微镜下显示,小鼠卵母细胞和原核期胚卵细胞质的绿色荧光呈不均匀分布,近细胞膜处荧光信号强;2细胞期、4细胞期、8细胞期和桑椹胚卵裂球胞质中绿色荧光均呈局灶性分布,且靠近细胞膜处胞质中绿色荧光均较强,2细胞期中所见极体内也有绿色荧光信号;小鼠胚泡滋养层细胞及内细胞团中均可见中等强度的绿色荧光.免疫组织化学显示,在小鼠卵母细胞中可见LAPTM4β阳性反应颗粒呈浅棕色;原核期、2细胞期、4细胞期、8细胞期胚及桑椹胚,可见深棕色颗粒,且在卵裂球胞质中呈不均匀分布;胚泡的内细胞团及滋养层细胞中均可见棕色阳性反应颗粒.图像分析结果显示,卵母细胞与原核期胚相比,8细胞期与桑椹胚相比,桑椹胚与胚泡相比,LAPTM4β的表达量有显著差异(P<0.05).结论 LAPTM4β在正常小鼠卵母细胞及植入前各期胚卵中均有表达,且具有规律性;不同阶段早期胚卵中LAPTM4β的表达量均高于卵母细胞,推测IAPTM4β与小鼠早期胚卵的细胞分裂、增殖、分化及胚胎发育相关.

人胎儿胸腺内CD80和癌胚抗原的表达及定位

目的 探讨人胎儿胸腺内CD80和癌胚抗原(CEA)的表达水平及定位与胎儿发育的关系. 方法自附属医院妇产科收集流产死亡的胎儿12例,其中,小于4个月的4例列为早期,5个月的8例列为晚期.早晚期标本各分为两等份,一份制备冷冻切片进行HE染色、α-醋酸萘酯酶(ANAE)组织化学染色、CD80及CEA免疫组织化学染色,另一份以Trizol提取蛋白后进行CD80的免疫印迹和CEA的酶联免疫吸附测定(ELISA)检测. 结果 早期胎儿胸腺髓质发育差,晚期胎儿胸腺CD80阳性网状上皮细胞可分为6型:Ⅰ型扁平细胞分布于被膜内面和小梁表面;Ⅱ型呈小星形分布于皮质内;Ⅲ型及Ⅳ型呈扁平状,位于皮髓质交界处;Ⅴ型呈大星形状,突起多而细长相连成网状;Ⅵ型位于哈氏小体.在胎儿胸腺髓质网孔处可见ANAE点型(CD+CD8-)和散粒型(CD4-CD8+)细胞各呈丛状分布.早期组CEA阳性分布于髓质上皮细胞和哈氏小体,晚期组CEA阳性更集中于哈氏小体.CD80的免疫印迹和CEA的ELISA检测皆显示晚期组表达高于早期组. 结论 研究结果提示,人胎儿胸腺内CD80和CEA的表达及定位与胎儿胸腺细胞的发育及功能密切相关.

姜黄素诱导永生化人HaCaT细胞凋亡

目的 探讨姜黄素对人永生化上皮细胞凋亡的诱导作用.方法 应用细胞计数、流式细胞术、琼脂糖凝胶电泳、Hoechst33258染色、苏木素-伊红(HE)染色和透射电镜检测经姜黄素诱导处理后人永生化上皮HaCaT细胞的凋亡.结果经7.5mg/L姜黄素诱导处理后,人永生化上皮HaCaT细胞的增殖活动受到明显的抑制,细胞生长抑制率达83.03%;细胞周期检测出现亚二倍体(亚G1期)细胞峰值,细胞凋亡率达13.1%,并发生G2/M期阻滞;琼脂糖凝胶电泳出现细胞凋亡典型的DNA"梯状"条带;细胞核经Hoechst33258染色出现浓染致密的固缩形态和颗粒状荧光;光镜和电镜观察结果显示,姜黄素处理组细胞体积缩小,细胞核固缩,染色质凝聚,线粒体肿胀,有凋亡小体形成等显著的凋亡特征.结论姜黄素对人永生化上皮HaCaT细胞凋亡有显著的诱导作用,从而为进一步研究表皮细胞衰老、凋亡机理提供了重要基础和研究依据.

血管内皮生长因子C及其受体3在人恶性黑色素瘤组织内的表达及意义

目的 观察人恶性黑色素瘤组织内血管内皮生长因子C(VEGF-C)及其受体3(VEGFR-3)的表达,探讨VEGF-C和VEGFR-3在恶性黑色素瘤淋巴管生成及淋巴道转移中的作用.方法 取人恶性黑色素瘤组织48例(石蜡标本30例,术后新鲜组织18例),应用免疫组织化学和RT-PCR技术,观察VEGF-C和VEGFR-3蛋白及mRNA在恶性黑色素瘤组织内的表达情况.以淋巴管内皮透明质酸受体(LYVE-1)标记淋巴管,计数恶性黑色素瘤组织淋巴管数密度.结果 VEGF-C和VEGFR-3蛋白主要表达于恶性黑色素瘤细胞胞浆内,在肿瘤周围的血管和淋巴管内皮上也可见VEGFR-3蛋白表达,VEGF-C和VEGFR-3蛋白在淋巴结转移组恶性黑色素瘤组织内的表达水平明显高于无淋巴结转移组(P<0.05).在18例新鲜恶性黑色素瘤中,淋巴结转移组VEGF-C和VEGFR-3mRNA的表达明显高于无淋巴结转移组(P<0.01).LYVE-1表达于肿瘤间质内的淋巴管内皮细胞,淋巴结转移组恶性黑色素瘤组织中的淋巴管数密度(LMVD)为9.845±2.454,无淋巴结转移组恶性黑色素瘤组织中的淋巴管数密度为6.534±2.193,淋巴结转移组恶性黑色素瘤组织内的淋巴管数密度明显高于无淋巴结转移组(P<0.01).结论恶性黑色素瘤组织内VEGF-C表达明显增高,并通过上调其受体VEGFR-3的表达促进恶性黑色素瘤组织内淋巴管的生成,从而促进恶性黑色素瘤的淋巴道转移.

培养时间和传代次数对山羊输卵管上皮细胞周期和凋亡的影响

目的 利用山羊输卵管上皮细胞(OECs)探讨体外培养时间和传代次数对细胞生长的影响.方法 建立山羊OECs的体外培养体系,用流式细胞术分别对半数贴壁、刚贴满(贴壁1d)、贴满3d和贴满5d,以及原代、Ⅲ代和Ⅴ代细胞分别进行细胞周期和凋亡检测.结果细胞贴满3d和传至Ⅲ代时,细胞凋亡比率较低,处于静止期(G0/G1)细胞明显降低,极性线粒体受损明显降低;培养时间延长和传代次数增加后,凋亡比率显著升高,处于增殖期(S,G2/M)的比率显著降低,极性线粒体受损明显升高.结论采用OECs培养胚胎时,细胞应控制在Ⅲ代以内,且贴满时间不超过3d.

体神经-内脏神经吻合后异类神经再生过程的蛋白质组学分析

目的 使用蛋白质组研究技术研究大鼠体神经-内脏神经吻合术后异类神经再生过程中不同时段蛋白质表达的变化.方法 建立大鼠体神经-内脏神经吻合动物模型,分别于术后7d、14d、28d取出再生的异类神经与对侧正常的体神经,应用双向电泳技术对提取物进行分析,经图像分析系统识别差异蛋白质,用MALDI-TOF-MS对差异表达的蛋白质进行鉴定分析,获得的肽质指纹图谱进入数据库中检索.结果质谱分析识别了25种具不同功能的蛋白质,其中包括神经髓鞘中的成分、急性期炎性因子、神经细胞骨架蛋白和脂类代谢蛋白等.这些蛋白可能在Wallerian变性、轴突再生和再髓鞘化中起作用.结论获得了再生异类神经时序性双向电泳凝胶图谱,成功鉴定25个与异类神经再生相关的蛋白质,揭示了施万细胞和巨噬细胞在异类神经再生过程中所起的重要作用.

小鼠垂体巢蛋白阳性细胞在体外具有集落生长能力

目的 研究小鼠垂体前叶中巢蛋白(Nestin)阳性细胞在体外培养环境中的自我增殖能力. 方法建立小鼠垂体Nestin阳性细胞克隆生长培养条件,观察次代细胞在其中的生长情况.应用野生型细胞和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)细胞混合培养,以及BrdU渗核实验鉴定次代Nestin阳性细胞培养过程中新生细胞群的来源.结果次代Nestin阳性细胞在克隆生长培养基中能够自我增殖.野生型细胞和EGFP细胞混合培养实验表明,新生细胞群由纯野生型细胞或纯EGFP细胞构成.BrdU渗核实验显示,24h内新生细胞群中有13%的细胞由分裂产生(n=20). 结论 部分小鼠垂体前叶Nestin阳性细胞在体外培养环境中具有克隆生长能力.

音猬因子对神经干细胞增殖与分化的影响

目的 探讨音猬因子(SHH)对神经干细胞(NSCs)增殖与分化的影响. 方法从大鼠胚胎端脑皮质及海马分离培养的NSCs分为SHH组、RA组和PBS组.分别用SHH、维甲酸(RA)及PBS条件培养液处理后,通过免疫细胞化学等方法检测NSCs的增殖及分化情况.结果体外培养的NSCs能快速增殖并形成神经球,其中的细胞均表达NSCs特异性标志物nestin.BrdU作用于NSCs 3 h后,SHH组的BrdU阳性率明显高于RA组和PBS组,而RA组和PBS组之间无显著差异.当NSCs在分化条件培养液中培养7d后,SHH组和RA组中的βⅢ-tubulin阳性率及Rip阳性率显著高于PBS组,SHH组又显著高于RA组和PBS组.结论 SHH可以促进NSCs增殖及其向神经元和少突胶质细胞的分化.

小鼠子宫内膜中鸡冠珊瑚树凝集素和双花藕豆凝集素受体在胚泡植入过程中的表达

目的 探讨小鼠子宫内膜鸡冠珊瑚树凝集素(ECL)受体和双花藕豆凝集素(DBA)受体与胚泡植入的关系.方法 以生物素标记的ECL和DBA来检测怀孕侧和输卵管结扎未孕侧小鼠孕早期子宫内膜中两种凝集 素受体的分布状况和变化规律.结果怀孕侧,ECL主要表达于胚胎滋养层细胞及其基膜,蜕膜细胞及其周围的细胞外基质(ECM);未孕侧,主要表达于子宫内膜上皮和腺上皮.在怀孕侧,DBA受体主要表达于胚胎滋养层细胞和子宫内膜血管基膜;在未孕侧,主要表达于子宫内膜血管的基膜.结论 ECL和DBA受体与小鼠胚泡植入过程密切相关.

小脑深部核团薄层横断面解剖与MRI的对照研究

目的 研究薄层断面上小脑深部核团的位置、分布和形态,为小脑功能影像学研究、电刺激核团疗法的功能相关性研究以及核团立体定向手术提供其中解剖学依据.方法 选择3具成年男性尸体标本,以CT与1.5T MRI经前后连合间线扫描,排除器质性病变.选取其中1例成年尸体头部标本,经明胶包埋和深低温冷冻后,采用铣削精度为0.001mm的SKC500型数控铣床,同样经连合间线制成层厚为0.1mm的连续薄层横断面,对获取的图像进行解剖学观察并择取与齿状核相关的典型断面与相应的活体3.0T MRI图像对照. 结果 共获得与小脑相关的薄层断面图像620幅,其中齿状核、顶核、球状核以及栓状核出现的层面数分别为145、12、25、20幅.在连续横断面上观察到齿状核大且先出现,位于外侧,形似一个向内侧开口的折叠口袋状结构;顶核靠内侧,紧邻第四脑室顶的外侧和上蚓前部的内侧面,在中线两侧对称分布;栓状核位于齿状核内侧,不易与其区分,核团部分遮盖齿状核门;球状核由多个散在分布的灰质团块组成,呈前后向伸展,出现于栓状核与顶核之间. 结论 连续薄层横断面上能较好地显示小脑深部核团的位置、形态以及与周围小脑结构的毗邻关系,对小脑深部核团的功能影像学研究和临床治疗有重要的参考价值.

大鼠Hes1基因真核表达载体的构建及瞬时表达在神经前体细胞分化中的作用

目的 探讨Hes1基因高表达对神经前体细胞分化的影响. 方法从大鼠脑组织中提取总BNA,用RT-PCR方法获得Hes1基因的全长cDNA,插入pGEM-T-Easy克隆载体中进行序列测定,测序正确后将其亚克隆至表达载体pCDNA3.1,用脂质体将重组质粒转染原代培养的神经前体细胞,经G418筛选获得抗性细胞克隆,用RT-PCR方法鉴定Hes1基因在神经前体细胞基因组中的存在,实时荧光定量PCR检测Hes1基因在转染细胞中的过表达情况. 结果 经限制性内切酶酶切图谱分析和DNA序列测定,证实目的 基因已插入重组质粒,RT-PCR证明,经G418筛选得到的转基因神经前体细胞克隆的基因组DNA中存在Hes1基因;实时荧光定量PCR进一步证明,转基因神经前体细胞Hes1基因的mRNA高表达. 结论 构建了大鼠Hes1基因的真核表达载体,获得了高表达Hes1基因的神经前体细胞克隆.Hes1基因高表达可抑制神经前体细胞Ngn1的表达,并促进神经前体细胞向神经胶质细胞的分化.

低剂量棉酚与甾体激素联合用药抗男性生育协同作用

目的 探讨低剂量棉酚和甾体激素联合用药发挥抗男性生育的药物协同作用.方法 采用大鼠喂服棉酚与甾体激素联合用药方式[棉酚12.5mg/(kg·d)+去氧孕烯125μg(kg·d)+炔雌醇25μg/(kg·d)+十一酸睾丸酮100mg/(kg·d)],与单独喂服相同剂量的棉酚或激素的大鼠及喂服载体溶剂的大鼠相对照,应用形态学观察、半定量检测和体视学睾丸组织结构定量研究的方法,探讨低剂量棉酚和甾体激素抗生育的药物协同作用. 结果 在睾丸重量、附睾重量、睾丸精子产量和睾丸组织结构定量方面,低剂量棉酚和甾体激素无药物协同作用;在降低附睾精子计数和精子活动度方面,联合用药组的效果强于其他3组,低剂量棉酚和甾体激素具有药物协同作用.结论与单用低剂量棉酚和甾体激素比较,两者联合用药可以更快地减少附睾精子的数量和活动度,从而快速达到避孕效果.

空间辨别性学习记忆活动与大鼠海马结构基质细胞衍生因子-1表达的关系

目的 探讨大鼠空间辨别性学习记忆活动与趋化因子基质细胞衍生因子.1(SDF-1)的关系. 方法用免疫组织化学方法、免疫印迹法和RT-PCR方法对获得空间辨别性学习记忆大鼠海马结构内SDF-1表达进行研究,并与游水组和对照组比较.结果 1.免疫组织化学方法显示,对照组大鼠海马结构内趋化因子SDF-1阳性细胞分布在海马结构各亚区和各层.阳性细胞的形态以圆形为主,少见锥体形和梭形.阳性产物主要分布在细胞膜上;游水组大鼠海马结构内SDF-1阳性细胞的形态和分布与对照组相比未见组间差异;训练组大鼠海马结构内SDF-1免疫阳性细胞的数量比对照组增多(P<0.01).阳性细胞的形态以锥体形和三角形居多,在分布上有向齿状回聚集的趋势.2.免疫印迹方法检测训练组大鼠海马结构内SDF-1蛋白质的表达明显高于对照组(P<0.01).而且在训练组内则随着训练时间的延长表达量随之增加.3.RT-PCR方法检测训练组大鼠海马结构内SDF-1mRNA的量明显高于对照组(P<0.01),且随着训练时间的延长表达增加.在水盆中漫游的游水组大鼠,不论是免疫组织化学方法,还是免疫印迹法以及RT-PCR方法获得的结果与对照组相比均未见组间差异. 结论 经水迷宫训练使大鼠获得空间辨别性学习记忆功能,致使海马结构内细胞导向因子SDF-1表达上调,上调的SDF-1蛋白质可能与所获功能需要的形态基础.神经微环路的形成有关.

高糖对培养大鼠施万细胞生长、凋亡的影响及其机制探讨

目的 研究高糖对大鼠施万细胞(SCs)生长及凋亡的影响,并探讨其可能机制. 方法将培养的SCs分别用含不同浓度葡萄糖的培养液孵育72h,四甲基偶氮唑盐(MTT)检测细胞活力,原位缺口末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡,Western blotting检测Bcl-2及Bax的表达. 结果 高浓度葡萄糖(60mmol/L、90mmol/L)组SCs活力降低,细胞凋亡率增加,抗凋亡蛋白Bcl-2表达下降及凋亡蛋白Bax表达升高. 结论 高糖抑制SCs生长,诱导细胞凋亡,可能与Bcl-2表达下降及Bax表达升高有关.

胃肠道5-HT内分泌细胞和肥大细胞与肝再生的关系

目的 探讨胃肠道及肝中5-HT免疫活性(5-HT-IR)内分泌细胞和肥大细胞(MC)与肝再生的关系.方法 150只SD大鼠随机分为对照组、手术对照(OC)组和实验组.实验组大鼠切除2/3肝(部分肝切除,PH),分别于术后不同时段取胃、小肠、肝组织.用免疫组织化学技术检测组织中5-HT-IR内分泌细胞和5-HT-IR MC,用甲苯胺蓝(TB)染色技术检测组织中MC.OC组除不切除肝叶外,其他同实验组.结果 1.实验组和OC组胃肠中5-HT-IR内分泌细胞数均于PH后2h较对照组下降(胃P<0.05,肠P<0.01),但实验组PH后6～72h极显著多于对照组(P<0.01),肝中未见5-HT-IR内分泌细胞.2.除PH后48～96h肝中MC数显著少于对照组(P<0.05)外,实验组和OC组胃肠及肝中MC数较对照组均无显著差异.3.在胃中5-HT-IR MC数于PH后3～6h和96h显著多于对照组(P<0.05),12～72h极显著多于对照组(P<0.01);在小肠中PH后2h和120h显著多于对照组(P<0.05).3～96h极显著多于对照组(P<0.01);肝中PH后48～72 h显著少于对照组(P<0.05).OC组胃肠和肝中5-HT-IR MC数较对照组均无显著差异;4.MC的5-HT阳性率在胃中于PH后2～96 h,在小肠中于PH后0.5～120 h逐渐增大,在肝中于1.5～24 h有所增加,48～72 h明显下降.OC组胃肠和肝中的阳性率较对照组均无明显变化.结论肝切除后的肝细胞增殖期内胃肠道5-HT-IR内分泌细胞和5-HT-IR MC数显著增多,两种细胞可能提供了在肝再生中起重要作用的5-HT.

成人冠状动脉解剖的三维CT研究

目的 用多层螺旋CT(MSCT)扫描三维重建方法探讨成人冠状动脉的形态、结构、变异及其与临床冠心病(CAD)发生的相关性.方法 用Toshiba Aquilion 16层螺旋CT行冠状动脉造影,通过工作站Vitrea 2软件三维重建,观察、测量成人冠状动脉的分支、位置、形态及其变异,并分析其临床意义.结果成功行MSCT冠状动脉造影的患者1057例,其中以右优势型为主,共793例;左优势型126例;其他(包括均衡型和变异)138例.MSCT能够发现冠状动脉起源和走行的多种变异,但对冠状动脉瘘的特征未能准确表现.左优势型的冠心病发病数似相对较少;但左冠状动脉主干发出角度较大,主干较短.冠状动脉开口于冠状动脉窦之外的变异与冠心病发生有正相关性.结论 MSCT能够大体准确地显示冠状动脉三维形态结构,但尚不能完全取代基础解剖学;冠状动脉的某些形态、结构变异可能造成血液动力学改变,促进临床动脉粥样硬化病变发生.

神经黏附分子NB-3在转基因小鼠脑的发育表达

目的 检测NB-3在小鼠大脑组织中不同时期的表达情况. 方法采用带Lac Z基因的NB-3基因敲除的杂合子小鼠,分别取E12、E14、E16、E18、P0、P7、P14及成年小鼠的脑组织固定,采用X=gal染色方法检测Lac Z基因产物β-半乳糖苷酶的表达以显示NB-3的表达及定位.结果 1.NB-3在胚胎发育期间从E14开始有微弱的表达,后逐渐在侧脑室周围、皮层、丘脑、下丘脑及海马等部位表达.其中在皮层中的表达主要集中在Ⅱ,Ⅲ、Ⅴ层.2.NB-3在出生后小鼠大脑中的表达明显升高,在P7时表达高,此后稍有下降直至成年.3.NB-3在成年小鼠大脑组织中的表达分布广泛.表达强的部位分别是大脑皮层的Ⅱ/Ⅲ、Ⅴ层、梨状皮层、杏仁核周皮质、丘脑、下丘脑以及海马的CA1区等.结论 NB-3在发育和成体小鼠中枢神经系统中均有表达,且不同时期的表达量有所不同.提示NB-3在神经系统的发育过程中可能具有重要的作用.

海洛因对仔鼠和母鼠肺中SOD、CAT活力和MDA含量及组织结构的影响

目的 探讨海洛因对发育中仔鼠及母鼠肺组织中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物氢(CAT)活力和丙二醛(MDA)含量及组织结构的影响.方法 对48例受孕小鼠(第8天开始)每天早晚分别注射0.2ml浓度为1.0g/L、1.5g/L和2.0g/L的海洛因溶液和等量的生理盐水,直到小鼠分娩,采用比色法检测胚胎15d、生后1d、7d、15d的仔鼠和母鼠肺中SOD、CAT活力及MDA含量的变化,应用生物显微技术观察各发育期仔鼠和母鼠肺组织结构的变化. 结果 海洛因对各发育期仔鼠和母鼠肺中SOD、CAT活力有显著的抑制作用(P<0.05),且抑制作用随海洛因浓度的增大而加大,但MDA含量则显著增加(P<0.05),海洛因浓度越大仔鼠和母鼠肺中MDA的含量就越高;1.5g/L和2.0g/L海洛因组各发育期仔鼠和母鼠肺泡直径和肺泡隔厚度与对照组相比显著增加(P<0.05).结论海洛因对各发育期仔鼠和母鼠肺有不同程度的损伤作用,这可能与海洛因引起肺组织中SOD、CAT活力下降和MDA含量升高有关.

视交叉侧动脉显微解剖特点与垂体瘤患者视功能障碍的关系

目的 通过对视交叉侧动脉特点的显微解剖学研究,探讨其在垂体瘤致视功能障碍中的意义.方法 10例福尔马林固定的国人成人头颅标本,经双侧颈内动脉和椎动脉灌注红色乳胶后取脑,手术显微镜下剥离鞍区蛛网膜,暴露颈内动脉颅内段、Willis环及其穿动脉,以及垂体柄、视交叉、大脑脚、乳头体等鞍区重要结构.观察视交叉侧动脉的起始、走行、分支和分布,测量其起始部的直径并显微摄影. 结果 视交叉侧动脉自颈内动脉C<,2>段内侧壁发出,在蛛网膜下腔迂曲走行,起始部位靠上,几乎与视交叉处于同一水平,直径(0.18±0.06)mm,在到达视交叉之前发出2-3条亚支,呈"分水岭"样分布于视交叉侧缘、视交叉侧部的上面和下面(以下面为主)靠外侧的部分以及视神经近视交叉处外侧半.视交叉侧动脉具有较长的脑外游离段,各穿动脉主干之间不吻合,而在软膜上与邻近穿动脉之间存在广泛的终末吻合. 结论 垂体瘤不易累及视交叉侧动脉可能是垂体瘤患者鼻上象限视野往往可以长时间保留的原因.

新生昆明小鼠睾丸支持细胞和精原细胞的共培养及支持细胞的作用

目的 分离、纯化、培养小鼠睾丸支持细胞,通过与精原细胞共培养,研究体外培养的支持细胞对精原细胞的影响.方法 用复合酶消化、密度梯度离心和差异贴壁法分离、纯化、培养新生小鼠睾丸支持细胞,以苏丹Ⅳ染色鉴定支持细胞;用丝裂霉素-C处理支持细胞后作为饲养层,与精原细胞共培养;以直接分离培养的精原细胞作对照.倒置相差显微镜观察,细胞培养第3天,四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定精原细胞的增殖率;膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素/磷脂酰肌醇(ANNEXIN-V-FITC/PI)染色;激光扫描共焦显微镜观察记录精原细胞的凋亡率,比较精原细胞克隆大小、存活时间、增殖率和凋亡率的不同. 结果 分离、纯化后经苏丹Ⅳ染色鉴定的小鼠支持细胞纯度可达95%以上,与支持细胞共培养的精原细胞的克隆大小、存活时间和细胞增殖率明显高于对照组,而凋亡鲻率则明显低于对照组.结论支持细胞可以促进精原细胞的增殖,抑制其凋亡.

盖膜与内毛细胞静纤毛相互作用的生物力学分析

目的 探讨在Corti器振动过程中盖膜与内毛细胞静纤毛的相互作用关系;进一步阐明感音传导过程中,内耳Corti器微观结构可能的存在状态.方法 以豚鼠耳蜗底回Corti器的电镜图像为原型,建立盖膜与内毛细胞长静纤毛接触和不接触的两种二维计算模型各一个,并作力学分析比较.结果模拟Corti器振动过程.在相同剪切流的压力作用下,静纤毛在不接触盖膜时表现偏移度较大;两种模型均表现在静纤毛顶连接及小根基部应力较高、固有频率近似.结论静纤毛在不与盖膜直接接触时更容易受兴奋性刺激.

乙醛脱氢酶2抑制剂大豆甙对缺氧心肌细胞的MAPK信号转导作用

目的 检测乙醛脱氢酶2(ALDH2)对大鼠心肌细胞在缺氧状态下氧自由基(ROS)产生、凋亡发生和信号转导的影响.方法 通过缺氧模型比较大鼠心肌细胞缺氧和经大豆甙(daidzin)24h预处理后缺氧的活性变化,用C400测定ROS,用TUNEL试剂盒检测凋亡,丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路酶磷酸化的改变用Westernblotting的方法检测.每组实验(n)均重复3次以上. 结果 当心肌细胞ALDH2被特异大豆甙抑制后,更易在缺氧环境下诱导产生ROS和凋亡,且与MAPK有关的磷酸化酶活性均表达增强. 结论 当ALDH2被抑制后,心肌细胞对缺氧的耐受性下降,这与ROS的产生、凋亡和MAPK信号通路的激活有关,ALDH2对缺氧引起的细胞改变具有保护作用.

单克隆人胰腺干细胞的形态和蛋白表达特征

目的 研究1例单克隆人胰腺干细胞系的细胞形态和表达特性.方法 10例4～5月龄流产胎儿胰腺组织,胶原酶消化.原代细胞DMEM培养,胰蛋白酶消化传代.在传代中逐渐纯化胰腺干细胞.克隆环筛选单克隆人胰腺干细胞,扩增培养.活力较好的细胞液氮冷冻保存.采用HE和Giemsa染色,观察单克隆人胰腺干细胞的形态特征;通过透射电镜分析其超微结构.用免疫组织化学反应和RT-PCR方法,检测其蛋白水平和mRNA水平的表达特征.结果 1例来源于4月龄男性胎儿的单克隆人胰腺干细胞建系,传50代.液氮保存细胞1×109个以上.单克隆人胰腺干细胞完全贴璧时呈多角形上皮样,单核,圆形或椭圆形,单、双或多核仁.细胞核质比大.线粒体、内质网等细胞器均不发达,胞质内无分泌颗粒,属于发育早期的胰腺上皮样细胞.共表达胰肠同源域因子1(pdx1)、胰高血糖素、巢蛋白及角蛋白19(CK19),不表达胰岛素、周期蛋白34(CD34)、CD44及CD45.转录表达pdx1、胰高血糖素及巢蛋白的mRNA,不转录表达胰岛素.结论首次证实1例共表达pdx1、胰高血糖素、巢蛋白及CK19蛋白的单克隆人胰腺干细胞系.

人参皂甙Rh2对小鼠移植瘤血管内皮生长因子C及淋巴管生成的影响

目的 观察人参皂甙Rh2对小鼠移植瘤生长,肿瘤细胞血管内皮生长因子c(VEGF-C)表达和淋巴管密度的影响,探讨其作用机制.方法 用S180瘤株构建55只小鼠移植瘤模型,成瘤后灌服人参皂甙Rh2,观察用药组与对照组移植瘤的生长情况,免疫组织化学染色,比较用药2周、3周后癌细胞VEGF-C的表达及LYVE-1标记的淋巴管密度与对照组的差异.结果接种约第3周开始,对照组移植瘤生长速度明显快于用药组.用药第2周癌细胞VEGF-C表达及淋巴管密度与对照组无差异;第3周VEGF-C表达较对照组弱,淋巴管密度也较对照组低,有差异(P<0.05). 结论 人参皂甙Rh2能抑制肿瘤生长,降低淋巴管密度,其机制可能是通过降低VEGF-C在癌细胞的表达,干扰淋巴管的生成.

骨形态蛋白2体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为心肌样细胞

目的 应用骨形态蛋白2(BMP-2)体外诱导骨髓间充质干细胞(MSCs)向心肌样细胞分化,探索MSCs向心肌细胞分化的诱导方法.方法 取SD大鼠四肢骨骨髓,分离培养MSCs,应用BMP-2定向诱导,相差显微镜观察细胞形态学变化,应用免疫细胞化学、激光扫描共焦显微镜技术检测结蛋白(desmin)、α-横纹肌肌动蛋白(α-sareomeric actin)、心肌特异性肌钙蛋白(C-TnT)的表达,透射电镜鉴定.在诱导后7d、21d和28d 3个时间点以半定量RT-PCR方法检测细胞心肌早期转录因子(GATA4)和心肌特异性α-肌凝蛋白重链(α-MHC)的表达.结果 BMP-2诱导后的MSCs细胞伸出伪足,排列方向渐趋一致.MSCs体外经BMP-2诱导后分化的细胞结蛋白、α-横纹肌肌动蛋白、C-TnT均表达阳性,结蛋白、α-横级肌肌动蛋白阳性率较高,分别为37.28%和63.94%,而C-TnT阳性率较低为34.66%.透射电镜下可见到平行排列的肌丝,大量的粗面内质网和线粒体,富含糖原和核糖体.RT-PCR结果显示,GATA4于诱导后7d弱表达,21d表达增强,28d表达减弱.α-MHC在诱导后7d不表达,21d弱表达,28d表达明显.结论骨髓间充质干细胞在BMP-2诱导下可定向分化为心肌样细胞,是自体心肌细胞的一种良好供体来源.

血管紧张素Ⅱ对发育期小鼠肾小体细胞增殖的影响

目的 观察血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对体外培养孕12d小鼠肾组织中各期肾小体细胞增殖的影响.方法 孕12d母鼠随机分为体外培养对照组和施加不同浓度AngⅡ(10-9mol/L～10-5mol/L)组.应用体外培养、免疫组织化学及免疫荧光技术,观察各组肾组织培养2、4、6d后各期肾小体增殖细胞核抗原(PCNA)的表达. 结果 AngⅡ能促进小鼠肾小体细胞的增殖,在一定范围内,AngⅡ浓度越大肾小体细胞增殖越明显,且与作用时间呈正相关;培养4d的肾组织比培养2d的肾组织增殖明显. 结论 AngⅡ对发育期小鼠肾小体细胞有促增殖作用,且此作用有浓度时间依赖性.

孕小鼠注射海洛因对仔鼠大脑颞叶皮层结构及ADA、SDH、NOS、GSH活性的影响

目的 探讨海洛因对发育中仔鼠大脑颢叶皮层结构及腺苷脱氨酶(ADA)、琥珀酸脱氢酶(SDH)、一氧化氮合酶(NOS)及还原型谷胱甘肽(GSH)活性的影响. 方法对48例受孕小鼠(第8天开始)分别连续注射3种不同浓度(1.0 g/L、1.5g/L和2.0g/L)的海洛因溶液和等量的生理盐水至小鼠分娩,称量检测各实验组仔鼠在胚胎15d(E15)及生后1d、7d、15d时大脑重量的变化,用生物显微技术观察仔鼠大脑颞叶皮层结构的变化,用比色法检测仔鼠大脑ADA、SDH、NOS、GSH的活性变化. 结果 海洛因影响仔鼠脑的发育,实验组仔鼠大脑重量明显低于对照组;实验组仔鼠大脑颞叶皮层结构不清,神经元发育不良,皮层厚度减少,除在E15和生后1d大脑颞叶皮层第Ⅵ层神经元细胞数量高于对照组外,其他发育期各层神经元细胞数量均小于对照组;1.0g/L、1.5g/L和2.0g/L 3个剂量组在E15时,胎鼠大脑中ADA、SDH及NOS活性高于对照组,差异显著或极显著(P<0.05或P<0.01),GSH活性低于对照组,差异极显著(P<0.01);仔鼠在生后15d的发育过程中,1.0g/L剂量组仔鼠大脑中ADA、SDH、NOS及GSH的活性逐渐恢复到正常水平;1.5g/L剂量组大脑中NOS和SDH的活性逐渐恢复到正常水平,但ADA的活性仍高于对照组,GSH的活性仍低于对照组;2.0g/L剂量组仔鼠大脑中ADA、SDH、NOS的活性在生后15d时仍保持较高的水平,GSH的活性仍低于对照组.双因素方差分析表明,剂量因素对结果的影响大于时间因素. 结论 海洛因影响发育期仔鼠大脑的重量和组织结构,这可能与脑内ADA、SDH、NOS活性升高和GSH活性下降有一定的相关性.

晚期糖基化终产物受体和低密度脂蛋白受体相关蛋白在慢性脑血流低灌注大鼠皮层和海马的改变

目的 研究慢性脑血流低灌注对脑内受体介导的β-淀粉样肽(Aβ)转运蛋白晚期糖基化终产物受体(RAGE)和低密度脂蛋白受体相关蛋白1(LRP-1))含量及分布的影响. 方法采用双侧颈总动脉永久性结扎大鼠模型,应用免疫组织化学和免疫印迹方法对脑内RAGE和LRP-1进行定位和定量检测. 结果 免疫组织化学结果显示,与对照组相比,RAGE在皮层及海马组织中血管内皮细胞上的表达从低灌注10d起增多,而神经元上表达从低灌注30d起减少,且这种变化一直持续到低灌注180d;LRP-1的分布变化则与之相反.免疫印迹结果显示,皮层和海马中RAGE含量在低灌注术后10d即开始明显增加,且在缺血的不同时间点与相应的对照组比较都明显增多(P<0.05);LRP-1变化较晚,在缺血180d时明显增多(P<0.05). 结论 慢性脑血流低灌注可使RAGE、LRP-1在脑组织中的表达增高,同时在神经元、血管中的分布发生改变,这种变化可导致Aβ在脑内的聚集,可能在阿尔茨海默病(AD)早期发病过程中起重要作用.

兔下颌骨牵张成骨中HIF-1α和c-fos的表达及其相关性

目的 探讨兔下颌骨牵张成骨中HIF-1α和c-fos的表达及其相关性.方法 建立25只成年健康家兔下颌骨牵张成骨模型,采用免疫组织化学方法,分别在牵张中期、牵张末期、固定期第1、3、5周,检测牵张区新骨组织中HIF-1α和c-fos的分布及表达变化. 结果 HIF-1α在牵张末期和固定第1周表达为强阳性,c-fos在牵张中、末期和固定第1周表达为强阳性,两者均明显强于固定第3、5周.且均主要表达于成纤维细胞、成骨细胞和新埋入骨基质中的骨细胞中. 结论 在下颌骨缺损牵张成骨中HIF-1α和c-fos在细胞中的分布及在时间点的表达具有显著的相关性,对骨及血管的生成可能起着重要的生物学作用.

利用亮甲酚蓝染色筛选优质猪卵母细胞

目的 利用亮甲酚蓝(BCB)染色提高猪体外胚胎培养体系的效率.方法 对猪卵丘卵母细胞复合体(COCs)进行BCB染色,观察染色后猪卵母细胞成熟率和早期胚胎发育能力并进行分析. 结果 着色组(BCB+)猪卵母细胞达到减数分裂Ⅱ(MⅡ)期的比率(91.6%)显著高于未着色组(BCB-)(64.0%)和对照组猪卵母细胞(77.5%)(P<0.05);BCB+孤雌猪胚胎的囊胚率(34.9%)显著高于BCB-(9.5%)和对照组(23.1%)(P<0.05);BCB+核移植猪胚胎的囊胚率(23.0%)显著高于BCB-(5.0%)和对照组(14.1%)(P<0.05).结论 BCB染色是一种有效筛选具有较强发育能力猪卵母细胞的方法.

大鼠脑缺血再灌注后降钙素基因相关肽对受损胃黏膜的保护作用

The purpose of the present study is to investigate the protective effect of calcitonin gene-related pepfide (CGRP) on gastric mucosa injury after focal cerebral ischemia reperfusion and gastric ischemia-reperfusion in rats. Wistar male rats (280-320g) were selected for this experiment. Focal cerebral ischemia and reperfusion rat model was established with left middle cerebral artery occlusion by using thread inserting.

《解剖学报》可以直接使用的英文缩略词

《解剖学报》稿约