毛囊神经干细胞促进受损大鼠视神经大胶质细胞去分化

目的 培养毛囊神经干细胞,研究其对受损视神经大胶质细胞去分化的影响. 方法 取约90g雄性SD大鼠触须垫毛囊隆突区贴块,无血清培养或经15%胎牛血清诱导培养毛囊隆突区细胞,用免疫荧光细胞化学和PCR鉴定;以含增强型绿色荧光蛋白的腺相关病毒(rAAV2-EGFP)稳定转染该细胞.成年雄性SD大鼠54只,分为正常对照组、损伤组、移植组,移植组为视神经损伤后移植上述毛囊神经干细胞.转染细胞移植组术后7d、14d、30d,取视神经荧光显微镜下观察;损伤组和未转染细胞移植组术后7d取术侧视神经行Affymetrix基因芯片及实时荧光定量PCR检测,术后7d、14d取术侧视神经行HE、免疫组织化学检测. 结果 成功培养出神经前体细胞标记分子阳性的毛囊神经干细胞,诱导后该细胞可表达成熟神经细胞标记分子.毛囊神经干细胞移植到受损视神经30 d后,仍能存活和迁移.与损伤组相比,移植组差异表达基因有240条,其中一些与去分化相关,如干细胞、凋亡、增殖、信号转导、转录、分化发育、细胞黏附等相关基因,实时荧光定量PCR与基因芯片结果基本相符.移植组视神经远侧段细胞数较损伤组明显增多,巢蛋白、髓鞘碱性蛋白(MBP)、细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)表达增加,胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达减少,且视神经近侧段神经丝(NF)表达增加. 结论 毛囊神经干细胞通过调节受损视神经中的一些基因表达,促进了其大胶质细胞去分化并向有利于神经再生方向变化.

大鼠冻存卵巢组织自体异位移植后长期功能评估

目的 评估成年大鼠冻存卵巢组织自体异位移植后的长期生殖、内分泌功能. 方法 78只Wistar成年大鼠,随机分为假手术组(1组,15只)、新鲜组织移植组(2组,24只)、冻存组织移植组(3组,24只)、去势组(4组,15只).将去势后成年大鼠的新鲜卵巢组织及冻存卵巢组织自体异位移植于肾被膜下,分别于移植后5、8、10个月处死各处理组1/3数量动物,取卵巢及子宫组织作组织学检查.通过阴道脱落细胞学检查、动情期雌、孕激素水平监测评估移植后卵巢组织的生殖内分泌功能. 结果 所有动物模型中,新鲜及冻存卵巢组织移植后都可观察到存活组织块.2、3组动情期雌、孕激素水平与假手术组无显著性差异(P>0.05),且均明显高于去势组(P<0.01).冷冻复苏后组织与新鲜组织各级卵泡构成比无显著性差异(P>0.05),各组不同时间取得的卵巢组织各级卵泡构成比相比较均无显著性差异(P>0.05).移植后5个月,2、3组原始卵泡明显减少,分别为假手术组的59.1%和54.5%. 结论 小块卵巢组织可耐受冻融过程;冻存卵巢组织自体肾被膜下移植后,卵巢组织形态无明显改变,原始卵泡总数虽然明显减少,但有成熟卵泡发育并排卵,并能长期维持生殖内分泌功能.

雷公藤甲素抑制APP/PS1双转基因AD模型小鼠海马内Aβ沉积和老年斑形成

目的 研究雷公藤甲素(T10)对APP/PS1双转基因AD模型小鼠(APP/PS1dtg)β-淀粉样蛋白(Aβ)沉积与老年斑(SP)形成的影响. 方法 取18只4.5月龄健康雄性APP/PS1dtg, 随机分为3组,分别以T10灌胃:5μg/(kg·d) (T10 H组)、1μg/(kg·d) (T10 L组)和等容量的溶媒灌胃(PLC组),共计45d.45d后取材,左侧半大脑切片,6E10免疫组织化学方法染色和刚果红染色结合无偏性体视学定量分析,研究T10对海马Aβ沉积和SP形成的影响;分离右侧半海马,免疫印迹法分析海马Aβ蛋白水平的变化. 结果 与PLC组比较, T10 H组海马6E10阳性的Aβ沉积总面积减少了35%(P<0.001),SP总面积减少了32%(P<0.001); T10 L组海马Aβ斑总面积减少了18%(P<0.05), SP总面积减少了21%(P<0.05); T10呈剂量依赖性抑制Aβ在APP/PS1dtg 海马的沉积和SP的形成,减少海马内Aβ蛋白水平; 免疫印迹分析也显示,T10 H组海马Aβ蛋白水平低,PLC组Aβ蛋白水平高,T10 L组Aβ蛋白水平介于两者之间. 结论 T10 抑制Aβ的产生和SP形成,或可用于AD的治疗.

放射抑制小鼠骨髓间充质干细胞成骨潜能并导致骨损伤

目的 观察放射对小鼠骨髓间充质干细胞(BMMSCs)体外成骨潜能及体内骨组织的影响.方法 分离、培养正常的及接受4Gy放射后28d的小鼠BMMSCs,用碱性磷酸酶(ALP)和Von Kossa染色法鉴定BMMSCs体外成骨分化潜能的改变,并通过骨组织形态学和骨密度(BMD)检测放射后小鼠体内骨组织的相关变化.结果 4Gy照射28d后小鼠BMMSCs的成骨潜能明显降低,同时体内骨组织结构破坏,小鼠骨密度降低.结论 放射损伤后小鼠BMMSCs的成骨潜能显著降低,可能在干细胞水平参与了放射后骨损伤的发生.

枸橼酸铁铵对原代培养的大鼠心肌细胞铜蓝蛋白、膜铁转运辅助蛋白和膜铁转运蛋白表达的影响

目的 观察枸橼酸铁铵(FAC)对原代培养的大鼠心肌细胞铁释放相关蛋白表达的影响,探讨枸橼酸铁铵对心肌细胞铁代谢的影响机制. 方法 以原代培养的乳鼠心肌细胞为材料,分为对照组、20mg/L枸橼酸铁铵组、40mg/L枸橼酸铁铵组和80mg/L枸橼酸铁铵组,每组6个重复.然后检测心肌细胞存活率、搏动频率,免疫组织化学检测铜蓝蛋白(CP)、膜铁转运辅助蛋白(HP)和膜铁转运蛋白(FP1)表达的变化. 结果 各剂量枸橼酸铁铵对大鼠心肌细胞存活率无明显影响;心肌细胞搏动频率减慢,停止跳动的细胞数量明显增加,收缩幅度逐渐降低;随着枸橼酸铁铵浓度的增加,心肌细胞铜蓝蛋白、膜铁转运辅助蛋白和膜铁转运蛋白的表达均增加. 结论 枸橼酸铁铵影响大鼠心肌细胞的生理功能,IRP-IRE可能参与膜铁转运蛋白表达的调控,铜蓝蛋白、膜铁转运辅助蛋白表达的升高可能与铁处理增加细胞的氧化紧张性有关.

重组人内抑素对佐剂性关节炎大鼠滑膜组织p21、cyclin D1及CDK4表达的影响

目的 观察重组人内抑素(rhEndostatin)对佐剂性关节炎(AA)大鼠滑膜组织p21,细胞周期素D1(cyclin D1)及细胞周期素依赖性激酶4(CDK4)基因表达的影响,探讨rhEndostatin抑制AA大鼠成纤维样滑膜细胞(FLS)增殖的分子机制. 方法 雄性SD大鼠36只,随机分为正常组(n=12)、AA模型组(n=12)和rhEndostatin(2.5mg/kg)治疗组(n=12).制备AA大鼠模型,分别采用实时荧光定量PCR和Western blotting方法,定量分析rhEndostatin对AA大鼠滑膜组织p21、cyclin D1、CDK4 mRNA及cyclin D1蛋白表达的影响. 结果 rhEndostatin治疗组大鼠滑膜组织p21、cyclin D1 mRNA和cyclin D1蛋白表达水平降低,CDK4 mRNA表达水平增加,与AA模型组比较,差异均有统计学意义(P< 0.01). 结论 rhEndostatin降低AA大鼠滑膜组织 cyclin D1表达水平可能是其抑制AA FLS增殖的分子机制之一.

5-HT、生长抑素及 P物质在海洛因依赖大鼠直肠的定位和表达

目的 探讨海洛因依赖期间大鼠直肠内5-HT、生长抑素(SS)和P物质(SP)免疫反应(IR)细胞的形态学改变.方法 选取成年SD大鼠,分为海洛因依赖组(30只)、盐水对照组(30只)和正常对照组(6只),皮下注射海洛因建立大鼠海洛因依赖模型.取直肠组织用免疫组织化学SABC法及图像分析法进行研究.结果 与正常组及盐水对照组比较,海洛因依赖组大鼠直肠5-HT、SS及SP免疫反应细胞的细胞数均增多(P<0.05). 5-HT、SS、 SP-IR细胞免疫染色增强,图像分析显示,海洛因依赖期间大鼠直肠内5-HT、SS及SP 免疫反应细胞的平均灰度值均低于正常组及盐水对照组(P<0.05);其中5-HT、SS-IR细胞以31d时间组低(P<0.05),SP-IR细胞以38d时间组低(P<0.01).结论 海洛因依赖期间直肠5-HT、SS和SP-IR细胞的细胞数及平均灰度值均发生变化,提示5-HT、SS和SP合成和分泌增多.

牛磺酸对高温处理后神经上皮细胞存活和分化的影响

目的 探讨牛磺酸对高温处理后神经上皮细胞存活和分化的作用. 方法 取孕12.5d小鼠胚胎神经管上皮细胞进行原代培养,将其分为正常对照组、高温组和牛磺酸保护Ⅰ、Ⅱ组.显微镜下观察细胞的形态学变化,用四甲基偶氮唑盐(MTT)自动比色法测定细胞增殖活性,二脒基苯基吲哚(DAPI)染色法测定细胞凋亡率,免疫荧光法检测细胞中Caspase-3、微管相关蛋白-2(MAP-2)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达. 结果 与正常对照组比较,高温组细胞增殖活性明显降低,细胞凋亡率明显升高,Caspase-3阳性细胞数明显增多,MAP-2阳性细胞数明显减少;与高温组比较,牛磺酸保护Ⅰ、Ⅱ组细胞活性显著升高,凋亡率显著降低,Caspase-3阳性细胞数明显减少,MAP-2表达明显增多;4个组比较,GFAP的表达差异无显著性. 结论 牛磺酸对高温处理后神经管上皮细胞的存活具有保护作用,并可能促进其向神经元方向分化.

红细胞生成素激活的星形胶质细胞条件培养液对神经干细胞促分化作用及对分化后细胞的保护作用

目的 观察红细胞生成素激活的星形胶质细胞条件培养液(EACM)对神经干细胞促分化作用及对分化后细胞的保护作用. 方法 原代培养神经干细胞和1型星形胶质细胞,收集红细胞生成素(EPO)刺激的星形胶质细胞上清液,用于神经干细胞分化实验的研究.对分化后的细胞进行免疫细胞化学染色,计算其分化为神经元的比率;同时利用FeSO4和H2O2制造细胞损伤模型,用EACM继续培养48h,然后检测细胞活性和存活细胞数.结果 EACM组神经干细胞分化明显,神经元比率较星形胶质细胞上清组和对照组均有明显增加.分化后的细胞中加入H2O2后,继续用EACM培养的实验组吸光度(A)值和细胞存活百分比均较对照组高. 结论 红细胞生成素激活的星形胶质细胞条件培养液对神经干细胞有促其向神经元分化的作用,并对分化后的细胞有保护作用.

组蛋白去乙酰化酶1在子宫内膜异位症中的表达及意义

目的 研究组蛋白去乙酰化酶1(HDAC1)在子宫内膜异位症患者在位及异位内膜中的表达,探讨其在子宫内膜异位症发生、发展中的作用. 方法 应用免疫组织化学和免疫印迹法检测20例子宫内膜异位症患者在位内膜和异位内膜组织(研究组)中及20例子宫肌瘤患者的子宫内膜组织(对照组)HDAC1的表达情况. 结果 HDAC1阳性着色主要分布于子宫内膜上皮细胞和间质细胞的细胞核,在位内膜中HDAC1的表达强度明显高于对照组子宫内膜(P<0.01).免疫印迹检测提示,子宫内膜异位症在位内膜和异位内膜组织中HDAC1蛋白的相对表达量分别为2.67±0.69和2.55±1.36,显著高于对照组子宫内膜1.63±0.93(P<0.01,P<0.05);而在位内膜组与异位内膜组之间无统计学差异(P＞0.05). 结论 HDAC1在子宫内膜异位症在位和异位内膜组织中的高表达,可能在子宫内膜异位症的发生、发展中起重要作用.

Caspase-3和核转录因子-κB在APPSWE转基因小鼠海马内的表达

目的 探讨阿尔茨海默病(AD)的发生、发展与神经细胞凋亡之间的规律,以及核转录因子κB(NF-κB)在神经细胞凋亡中的调节作用,为阿尔茨海默病的发病机理和临床治疗提供依据. 方法 分别取P0、P7、P14、P30、P90、P180日龄的APPSWE转基因小鼠为模型组,各日龄同窝生野生型小鼠为对照组,应用Nissl染色观察其海马结构和锥体细胞形态,免疫组织化学方法检测小鼠海马细胞内半胱天冬氨酸蛋白3(Caspase-3)表达及NF-κB激活情况,RT-PCR检测小鼠海马caspase-3 mRNA的表达. 结果 模型组及对照组小鼠海马CA3区锥体细胞中凋亡细胞密度和NF-κB阳性细胞密度均随日龄的增大而逐渐下降,在P30后趋于稳定; 与对照组相比,模型组凋亡细胞密度和NF-κB阳性细胞密度均增高,自P14以后具有统计学意义 (P<0.01或P<0.05); RT-PCR检测小鼠海马caspase-3 mRNA表达结果与Caspase-3免疫组织化学检测结果基本吻合. 结论 凋亡相关基因caspase-3和NF-κB在阿尔茨海默病的发病机理中起重要作用,NF-κB的激活可能促进神经细胞凋亡.

SARS患者脾内IL-6、IFN-β和IP-10的免疫组织化学观察及定量分析

目的 通过对严重急性呼吸综合征(SARS)患者脾内白细胞介素6(IL-6),干扰素β(IFN-β)和干扰素γ诱导蛋白10(IP-10)的免疫组织化学结果分析,深入探讨SARS患者脾组织的病理变化及其发病机制. 方法 通过免疫组织化学技术观察6例SARS死亡患者脾和6例意外死亡者正常脾组织细胞内IL-6、IFN-β和IP-10的表达情况,并进行图像分析.结果 SARS患者脾红髓内含大量IL-6阳性细胞,阳性产物呈团块状分布于细胞质和细胞核.图像分析结果显示,SARS患者脾红髓内IL-6阳性细胞的平均吸光度值(AA)与正常对照组比较,有显著性差异(P<0.05);SARS患者脾红髓内阳性细胞的细胞核、细胞质呈IFN-β阳性,阳性产物呈棕黄色团块状,图像分析结果显示,SARS患者脾组织内IFN-β阳性细胞的AA值与正常对照组比较,有显著性差异(P<0.05);SARS患者脾红髓内含大量IP-10阳性细胞,阳性产物呈棕黄色团块状,分布于细胞核和细胞质.图像分析结果显示,SARS患者脾组织内IP-10阳性细胞的AA值与正常对照组比较,有显著性差异(P<0.05).3种细胞因子在SARS患者残存的脾白髓内均呈阴性. 结论 SARS患者脾内细胞的IL-6、IFN-β和IP-10反应均相对增强,提示SARS患者脾组织的病理性损伤以及免疫功能缺陷可能与上述促炎症因子、免疫抑制因子及趋化因子的相对增多有关.

不同类型的转基因细胞核供体对生产小鼠转基因克隆胚胎的影响

目的 利用体细胞核移植(SCNT)技术生产小鼠转基因克隆胚胎. 方法 利用所构建的含新霉素抗性(Neor)基因和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因的双标记选择载体, 通过电穿孔的方法, 分别转染小鼠胎儿成纤维细胞和小鼠胚胎干细胞,经G418筛选14d后用于核移植.同时以未转基因小鼠卵丘细胞和成纤维细胞为核供体,进行体细胞核移植. 结果 转基因与未转基因胎鼠成纤维细胞的重构胚的囊胚(154/160)发育率为19.23%和22.91%,差异不显著(P＞0.05);转基因胚胎干细胞与胎鼠成纤维细胞的重构胚的囊胚(152/154)发育率为41.54%和19.23%,差异显著(P＜0.05);未转基因卵丘细胞与成纤维细胞的重构胚的囊胚(171/160)发育率为41.17%和22.91%,差异显著(P＜0.05). 结论 利用体细胞核移植技术,小鼠胎儿成纤维细胞和胚胎干细胞可以有效地生产小鼠转基因囊胚.

热休克蛋白70在缺糖损伤的HeLa细胞中对Bax和Bcl-2以及Bax构象改变的影响

目的 观察热休克蛋白70(Hsp70)对缺糖引起的HeLa细胞凋亡的影响,探讨其与凋亡相关的Bcl-2家族成员的相互作用关系. 方法 用人正义Hsp70重组质粒稳定转染HeLa细胞获得Hsp70过表达细胞.采用Hsp70过表达和正常HeLa细胞无糖培养建立两组细胞损伤模型,并均取3个平行样本.四甲基偶氮唑盐(MTT)法测细胞活率;Hoechst染色法和Giemsa染色法检测细胞凋亡率;RT-PCR法检测Bax和Bcl-2的表达变化,并计算其灰度比值;细胞免疫化学和荧光免疫法检测Bax构象改变情况. 结果 缺糖48h内,Hsp70明显抑制了HeLa细胞凋亡并增强其活力,同时也抑制了凋亡细胞中 Bax/Bcl-2的增高以及Bax的构象改变. 结论 缺糖诱导下,热休克蛋白70在HeLa细胞中能够通过与Bcl-2家族成员作用而抑制凋亡的发生.

皮质酮对大鼠早期再生肝抗酶mRNA及蛋白表达的影响

目的 研究外源皮质酮对部分肝切除(PH)诱导的大鼠早期再生肝抗酶mRNA及蛋白水平的影响.方法 PH前3d对成年雄性SD大鼠进行双侧肾上腺切除术,皮质酮悬浮于芝麻油中皮下注射去肾上腺鼠,抗酶mRNA及其蛋白水平的测定采用RT-PCR和Western blotting法. 结果 与对照组(n=6,以下相同)相比,去肾上腺组及10mg/kg、20mg/kg体重皮质酮处理组抗酶mRNA水平变化不明显,而40mg/kg体重皮质酮处理能显著刺激其转录.在PH后5、7、9h,去肾上腺术鼠抗酶蛋白水平显著低于相应时间点的对照组;皮质酮处理后,蛋白水平在所观察的整个实验过程中均显著上升,且剂量越高,蛋白含量越多,尤其在PH后5h,10、20和40mg/kg体重皮质酮处理组分别比同时间点对照组高43%、79%和93%. 结论 皮质酮对大鼠早期再生肝抗酶蛋白的合成具有剂量依赖性促进作用.

贵州彝族白族16种遗传性状的基因频率

目的 了解贵州彝族、白族群体部分遗传性状的基因频率及其分布特点. 方法 采用群体遗传学研究方法,调查了879人(彝族472人、白族407人)16种遗传性状.计算了各遗传特征的基因频率.采用U检验进行了民族群体间差异显著性比较. 结果 贵州彝族翻舌、卷舌、唇厚、下颏类型、发质、发旋、眼睑、前额发际、睫毛、耵聍、达尔文结节、利手、拇指类型、中指毛、环食指长(男)、环食指长(女)和小指弯曲基因频率分别为0.0424、0.3427、0.5539、0.3527、0.1894、0.3860、0.4960、0.1089、0.5132、0.1363、0.3652、0.6285、0.2190、0.3397、0.0673、0.0797和0.3144;白族分别为0.0450、0.3868、0.4940、0.2993、0.2210、0.3188、0.4075、0.0901、0.6285、0.0808、0.4238、0.7034、0.2550、0.3707、0.0678、0.0950和0.2901.贵州两民族人群发旋和利手显性基因频率具有显著性差异(P<0.05),眼睑、睫毛和耵聍显性基因频率差异极显著(P<0.01). 结论 贵州彝族、白族翻舌、中指毛、发旋、拇指类型和小指弯曲5种遗传性状的显性基因频率处于较低水平,下颏类型和睫毛两种遗传性状的显性基因频率处于较高水平,其余9种遗传性状的基因频率处于中等水平.

低剂量棉酚与甾体激素联合应用对生精细胞凋亡和iNOS蛋白表达的影响

目的 研究低剂量棉酚与甾体激素联合应用(棉甾联合用药)对大鼠睾丸生精细胞凋亡和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)蛋白表达的影响. 方法 本实验采用大鼠喂服棉酚12.5mg/(kg.d)+激素[去氧孕烯125μg/(kg.d)+炔雌醇25μg/(kg.d)+十一酸睾丸酮100mg/(kg.d)]联合用药的方式,与单独喂服相同剂量的棉酚或激素的大鼠及喂服甲基纤维素溶剂的大鼠相对照,通过原位缺口末端标记(TUNEL)染色,观察生精细胞凋亡的情况;通过免疫组织化学染色和免疫印迹法,观察诱导型一氧化氮合酶(iNOS)蛋白表达的变化. 结果 TUNEL染色显示,在正常对照组,阳性着色主要分布在Ⅶ、Ⅷ、Ⅸ期生精小管的残余体中,偶见于粗线期精母细胞中.棉甾联合用药组和激素组,阳性着色主要分布在粗线期精母细胞中,随用药时间的延长,阳性着色的细胞数量增多(P＜0.01).iNOS免疫组织化学显示,在正常对照组,在残余体、精原细胞和粗线期精母细胞中的表达具有期依赖性.在Ⅶ、Ⅷ、Ⅸ期生精小管,iNOS主要在残余体中表达;在IX-XII期生精小管,精原细胞和粗线期精母细胞的核中可见少量表达.在棉甾联合用药组,iNOS在残余体中的表达,随用药时间的延长表达量降低(P＜0.05);iNOS在粗线期精母细胞、精原细胞胞核中的表达,随用药时间的延长表达量增高(P＜0.05).iNOS在正常对照组的间质细胞中持续表达,棉甾联合用药组4周降至低,3时间点表达量无统计学差别. 结论 iNOS蛋白在低剂量棉酚加甾体激素联合应用大鼠睾丸中各部位的表达变化趋势不一致,分别产生不同的功能;生精细胞凋亡数增加,可能与iNOS的表达增多有关.

β淀粉样蛋白25～35急性给药和慢性孵育对神经元Ca2+非依赖性的K+电流作用的比较

目的 探讨β-淀粉样蛋白25～35(Aβ25-35)急性给药和慢性孵育对神经元Ca2+非依赖性的K+电流作用的区别. 方法 急性分离大鼠海马及培养皮层神经元; Aβ25-35急性给药(3min)或慢性孵育(24h);利用全细胞膜片钳技术记录Ca2+非依赖性的K+电流以及Calcein-AM法检测神经元活力. 结果 Aβ25-35急性给药使急性分离的海马神经元Ca2+非依赖性的K+电流幅度明显降低(n=11),而慢性孵育则使培养的皮层神经元该电流幅度明显升高(n=11).前者是Aβ25-35通过对K+通道直接的效应发挥其抑制作用,而后者可能主要是通过Aβ25-35上调通道蛋白,改变通道数量而发挥作用. 结论 不同的给药方式通过不同的机制对海马和皮层神经元的Ca2+非依赖性的K+电流产生不同的作用.

反义细胞周期蛋白B1重组AAV抑制骨肉瘤U2OS细胞增殖和诱导凋亡

目的 研究携带反义细胞周期蛋白B1(CCNB1)的腺相关病毒载体(rAAV-AS-CCNB1/Neo)对骨肉瘤细胞U2OS的细胞增殖抑制和诱导凋亡的影响. 方法 将构建的重组AAV载体pd16-95-AS-CCNB1/neo和AAV/腺病毒辅助质粒pSH3共转染HEK293细胞,得到表达AS-CCNB1的重组AAV,纯化并浓缩病毒,测定病毒滴度.用重组AAV感染人骨肉瘤U2OS细胞(感染复数为105～106 v.g./细胞),采用Western blotting、RT-PCR、四甲基偶氮唑盐(MTT)法、流式细胞术等检测或观察重组AAV对细胞周期蛋白B1表达,瘤细胞体外增殖、凋亡和细胞周期的影响.结果 成功构建rAAV-AS-CCNB1,病毒滴度为1.0×1011 v.g./ml,体外感染U2OS细胞后可明显降低其增殖活性,Western blotting和RT-PCR提示,rAAV-AS-CCNB1可抑制细胞周期蛋白B1表达,流式细胞术提示,细胞出现明显凋亡和G1期阻滞. 结论 反义CCNB1重组AAV具有明显的抗骨肉瘤U2OS细胞体外增殖作用,其作用可能与其诱导细胞凋亡和周期阻滞有关.

辛伐他汀对颈椎异体骨移植融合过程的影响

目的 研究辛伐他汀对颈椎异体骨皮质移植融合过程的影响. 方法 健康成年雄性Wistar大鼠44只,随机分为对照组、辛伐他汀组、重组人骨形态发生蛋白-2(rhBMP-2)组及空白对照组,前3组行颈椎前路间盘切除异体骨皮质椎间移植融合术.分别在手术后2、4、8和12周将动物处死,取出颈椎后拍摄X线片,观察融合情况,双能量骨密度仪测量颈椎椎体骨密度;颈椎标本组织化学染色观察椎体骨小梁同植骨块表面融合,及植骨内部的血管新生和骨形成的情况. 结果 颈椎骨密度对照组较空白对照组明显降低(P<0.01),而辛伐他汀组和rhBMP-2组颈椎椎体骨密度同空白对照组无明显差别.病理显示,对照组炎性纤维组织长期存在,术后3月植骨界面有少量的软骨内成骨;而辛伐他汀组术后炎性纤维组织形成少,存在时间短;在术后第8周辛伐他汀组及rh BMP-2组异体骨表面均可与椎体骨小梁发生骨性融合;植骨12周,rhBMP-2组植骨内部的血管侵入和骨质形成较少,而辛伐他汀组植骨内部可见较多的新生血管形成,新生血管周围可形成环形骨质沉积. 结论 辛伐他汀可促进异体骨皮质移植后同颈椎椎体的融合.

不同浓度内皮素对体外人心包间皮细胞内钙离子浓度的影响

目的 探讨不同浓度内皮素(ET)对培养人心包间皮细胞内钙离子浓度的影响. 方法 体外培养人心包间皮细胞,以Fluo-3/AM负载细胞,利用激光扫描共焦显微镜测定10-7mol/L、10-8mol/L、10-9mol/L内皮素分别作用于23组间皮细胞后细胞内钙离子浓度的变化. 结果 心包间皮细胞内钙离子浓度随时间、ET浓度变化出现明显改变(P<0.001);不同浓度ET与不同时间测定的钙离子浓度之间存在交互作用(P<0.001). 结论 不同浓度内皮素作用于人心包间皮细胞后可引起细胞内钙离子浓度的改变;内皮素可能通过自分泌或旁分泌的方式作用于心包;人心包间皮细胞可能具有重要的生物活性.

肝素对RhoA/Rho激酶信号通路激活致心肌肥厚的影响

目的 探讨激活心肌细胞三磷酸肌醇受体(IP3R)是否能触发RhoA/Rho激酶介导的心肌肥厚信号通路及肝素的干预作用,阐明除经典信号传导通路之外的作用途径及干预方式. 方法 培养Wistar乳鼠心肌细胞,RT-PCR法检测应用三磷酸肌醇(IP3)刺激后RhoA、Rho激酶基因表达,Western blotting法检测IP3刺激后胚胎基因α-肌动蛋白(α-actin)、β主要组织相容性复合体(β-MHC)及即早基因(c-fos、c-myc)蛋白表达及肝素的干预作用. 结果 给予IP3(10-7mmol/L)刺激心肌细胞IP3R,能明显激活心肌细胞RhoA/Rho激酶信号通路,促使心肌细胞的即早基因和胚胎基因表达(P＜0.05),且随时间延长而作用明显,肝素可抑制上述作用(P＜0.05). 结论 激活IP3R介导的RhoA/Rho激酶信号通路能显著地促使心肌细胞肥大,此信号通路不同于已知的G蛋白耦联受体介导的心肌肥厚信号转导途径,且肝素有望成为抑制心肌细胞生长的药物之一.

nNOS、VEGF和Bcl-2蛋白在人胚胎发育中脊髓前角的表达及意义

目的 探讨神经元型一氧化氮合酶(nNOS)、血管内皮生长因子(VEGF)和B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)蛋白在人胚胎发育早期脊髓前角中的分布规律及其表达意义. 方法 应用免疫组织化学法检测第2、3、4月龄段,人胚胎脊髓前角中nNOS、VEGF和Bcl-2蛋白的表达. 结果 在第2～4个月龄段,nNOS和Bcl-2蛋白在人胚胎脊髓前角组织细胞中由弱阳性表达逐渐变为阳性表达.在第2个月龄段,VEGF蛋白在人胚胎脊髓前角组织中均呈阴性表达;第3～4个月龄段,VEGF蛋白在人胚胎脊髓前角组织细胞中由弱阳性表达逐渐变为阳性表达. 结论 nNOS、Bcl-2和VEGF蛋白与人胚胎脊髓前角神经元的生长发育关系密切.

神经病理性痛大鼠脊髓背角缝隙连接蛋白表达变化及鞘内注射甘珀酸的镇痛作用

目的 研究慢性神经病理性痛大鼠脊髓背角内缝隙连接蛋白家族(Cx)中Cx43和Cx32的表达变化,以及鞘内注射缝隙连接阻断剂甘珀酸(CBX)的镇痛作用.方法 成年SD大鼠50只,分为正常对照组、假手术组和坐骨神经分支选择性损伤组(SNI).手术前1d、术后3d、5d、10d、20d和30d,观察大鼠行为并检测机械刺激缩足反射阈值(PWMT).15只大鼠于术后10d、20d、30d取脊髓腰段进行免疫印迹检测,另15只大鼠于术后10d、20d、30d取脊髓腰段进行免疫荧光染色,检测腰段脊髓背角内Cx43和Cx32表达的变化.有10只大鼠先进行鞘内插管,后行SNI手术,术后20d向鞘内注射生理盐水或CBX,观察大鼠PWMT的变化. 结果 SNI大鼠手术侧PWMT阈值较非手术侧或假手术组明显降低,术后20d达低值.SNI大鼠手术侧脊髓背角内Cx43、32表达增多,明显高于非手术侧和假手术组背角.鞘内注射CBX 3h后,PWMT平均阈值由(2.5±1.0)g上升到(20.0±3.2)g,有抑制效应, 而生理盐水组则无抑制效应.结论 脊髓背角内的缝隙连接在因外周神经损伤引起的神经病理性痛中起重要作用.

三种含硒化合物对K562细胞的抑制作用

目的 研究比较3种新的含硒化合物在体内、外的抗癌作用和作用机制. 方法 通过四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法和移植瘤生长抑制实验及形态学观察、流式细胞术以及激光扫描共焦显微镜,检测分析含硒化合物对K562细胞的抑制作用. 结果 3种含硒化合物能明显抑制K562细胞增殖(P<0.05)和S180、H22移植瘤(n=10)的生长(P<0.01);使K562细胞出现体积缩小,细胞膜完整,染色质高度凝集,边集,核浓染、碎裂,伴有出泡现象和凋亡小体出现等典型的凋亡特征;对K562细胞的周期分布有明显影响,且在大剂量时出现了明显的亚二倍体峰;能够明显增加K562细胞内Ca2+、Mg2+和细胞内活性氧(ROS)的荧光强度(P<0.01),但pH值和线粒体膜电位显著降低(P<0.01). 结论 3种含硒化合物均有体内、体外抗肿瘤作用,其作用机制可能与Ca2+、Mg2+、(活性氧ROS)、pH值和线粒体膜电位(MMP)诱导的细胞凋亡有关.

α-平滑肌肌动蛋白在人胚心流出道早期发育中的表达

目的 探讨人胚早期心流出道心肌和流出道心内膜垫内α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达规律及其意义. 方法 32例C10～C16期[Carnegie分期法,受精后(22±1～37)d]人胚心连续切片,经抗α-SMA、抗α-横纹肌肌动蛋白(α-SCA)、抗肌球蛋白重链(MHC)抗体免疫组织化学染色,观察流出道重塑过程中α-SMA在心肌与心内膜垫内的表达规律. 结果 人胚发育C10～C15期,心包腔背侧脏壁上皮不断分化为心肌细胞添加至流出道远端,这些心肌细胞α-SMA的表达早于α-SCA和MHC.C16期,流出道嵴近心肌处出现α-SMA强阳性细胞,相邻的心肌细胞伸出突起与其相连.C12～C15期,α-SMA阳性细胞逐渐迁入流出道心内膜垫内,同时可见流出道内皮转为α-SMA阳性,向间充质细胞分化.不同来源的间充质细胞共同参与形成螺旋状流出道嵴. 结论 α-SMA可作为心肌细胞早期分化的标志;流出道嵴内α-SMA阳性细胞可能部分来自神经嵴,部分为正在向间充质细胞分化的内皮细胞.

阿尔茨海默病患者外周血Aβ抗体和细胞因子的变化

目的 探讨阿尔茨海默病(AD)患者外周免疫功能的变化. 方法 以2006-06～2007-04广州市老人院29例AD患者作为观察对象,其中轻中度AD患者19例,重度10例;对照组19例为同期健康老人.用夹心酶联免疫吸附法(ELISA)测定外周血Aβ抗体以及抗原特异性细胞因子的水平;流式细胞术(FACS)检测外周血淋巴细胞亚群变化;酶联免疫吸附斑点试验(ELISPOT)检测抗原特异性细胞因子的分泌细胞频数. 结果 轻中度和重度AD组患者外周血Aβ42抗体水平较对照组有不同程度的下降(分别为P<0.05,P<0.01).AD组CD8较对照组显著升高(P<0.05); CD4较对照组显著降低(P<0.05); 轻中度和重度AD组之间CD8、CD4及CD4/ CD8差异均无统计学意义(P>0.05).AD组外周血单核细胞(PBMC)培养上清IFN-γ的含量较对照组降低(P<0.05),以重度AD组更明显.ELISPOT检测结果,AD组每4×105个PBMC中分泌IFN-γ的细胞频数较对照组显著减少(P<0.01),以重度AD患者更为明显. 结论 AD患者外周血Aβ抗体水平下降;淋巴细胞亚群失调,特异性细胞免疫功能受损.

糖皮质激素对大鼠下丘脑亨廷顿蛋白相关蛋白1表达的影响

目的 探讨外源性糖皮质激素对大鼠下丘脑亨廷顿蛋白相关蛋白1(HAP1)表达的影响. 方法 成年雄性Wistar大鼠80只,随机分为实验对照组(注射生理盐水)、皮质酮注射组、皮质酮+皮质酮受体拮抗剂(RU38486)注射组、饮用氢化可的松组.皮质酮注射[(5mg/(kg.12h)]组又分为注射持续1d、3d、5d、7d组;皮质酮+皮质酮受体拮抗剂(RU38486)注射[(10mg/(kg.12h)]组注射持续3d;饮用氢化可的松组大鼠饮用水中加氢化可的松(0.01g/L),连续1个月.应用RT-PCR、免疫印迹法观察大鼠下丘脑HAP1表达的变化. 结果 注射皮质酮1d和3d后,下丘脑HAP1表达明显减少,其mRNA的表达明显下调,5d后HAP1开始回升,7d 后恢复到正常水平,HAP1 mRNA表达5d后明显增加,并高于正常水平;长期(一个月)饮用氢化可的松的大鼠,其下丘脑中HAP1的表达明显减少;在皮质酮注射的同时注射RU38486,可以对抗由皮质酮注射所引起的下丘脑HAP1的变化. 结论 外源性过量糖皮质激素能影响下丘脑HAP1的表达,下丘脑中的HAP1可能参与下丘脑神经元或神经内分泌细胞的功能活动.

Ezrin、MMP-2及TIMP-2在子宫颈癌中的表达与侵袭转移的关系

目的 通过观察埃兹蛋白(Ezrin)、金属蛋白酶-2(MMP-2)及金属蛋白细胞组织抑制因子-2(TIMP-2)蛋白水平在子宫颈癌组织中的表达情况,探讨它们与子宫颈癌侵袭转移的关系. 方法 采用免疫组织化学方法对40例子宫颈鳞癌,20例腺癌,29例子宫颈上皮内瘤样病变和16例正常子宫颈组织进行标记及分析. 结果 Ezrin、MMP-2及TIMP-2蛋白主要表达在子宫颈鳞癌、腺癌、上皮内瘤变的异型细胞质内,各实验组中的表达量与正常组比,差异均有统计学意义(P<0.01).Ezrin和MMP-2蛋白在有淋巴结转移组中的表达量较无淋巴结转移组明显高(P<0.01), 而TIMP-2蛋白水平的表达结果却相反.同时发现Ezrin、MMP-2及TIMP-2蛋白水平在宫颈病变组织表达有正相关性. 结论 Ezrin、MMP-2及TIMP-2 蛋白在子宫颈鳞癌、腺癌的表达量较对照组高. Ezrin和MMP-2在有淋巴结转移的子宫颈癌中高表达,而TIMP-2为低表达,提示它们在子宫颈癌的侵袭转移中起重要的作用.Ezrin、MMP-2及TIMP-2蛋白水平在宫颈病变组织表达有正相关性,这三者在子宫颈癌的侵袭转移中可能起协同作用.

乙醇对大鼠脑内5-HT能神经体系的影响

目的 观察乙醇处理大鼠脑内色氨酸羟化酶(TPH)、5-羟色胺(5-HT)和5-羟色胺转运体(SERT)的表达改变,判断乙醇对脑内5-HT能神经体系的影响.方法 以20%乙醇代替饮水饲养30只Wistar大鼠6个月;利用免疫组织化学、免疫印迹及流式细胞术等方法,分析乙醇处理大鼠有关脑区5-HT能神经体系相关指标的改变.结果 1.免疫组织化学法可见,乙醇处理组大鼠脑内中缝背核TPH、5-HT免疫反应阳性神经元数量少于对照组(P＜0.01);TPH免疫阳性神经元直径小于对照组(P＜0.01);相关脑区TPH、5-HT和SERT免疫反应灰度值比对照组增高(P<0.05).2.流式细胞术检测可见,乙醇处理组大鼠TPH、5-HT和SERT的表达量低于对照组(P<0.05).3.免疫印迹法检测可见,乙醇处理组大鼠SERT和TPH与β-actin相对吸光度比值均小于相应对照组(P<0.05).结论 乙醇降低脑内TPH、5-HT和SERT的表达,可能改变脑内5-HT能神经体系的功能活动.

成熟生物膜与白假丝酵母菌耐药性相关

目的 观察白假丝酵母菌生物膜形成过程中耐药性产生的变化情况. 方法 利用载玻片法形成白假丝酵母菌生物膜结构,倒置显微镜观察不同阶段的生物膜形态,用美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)微量稀释法检测浮游状态白假丝酵母菌耐药性,用二甲氧唑黄(XTT)减低法获得生物膜耐药性的变化情况. 结果 白假丝酵母菌耐药性随着生物膜的成熟不断增强,比游离态菌高100倍以上. 结论 成熟生物膜与耐药性增强有明显正相关性.

Bcl-2/Bax蛋白在生后大鼠卵巢不同发育时期的表达

目的 探讨Bcl-2/Bax与卵泡发育和凋亡的关系. 方法 用免疫组织化学技术和图像分析系统,对95只大鼠生后不同发育时期卵巢中凋亡相关因子Bcl-2/Bax的表达情况进行研究. 结果 0～360 d卵巢各级卵泡中的卵母细胞均呈Bcl-2/Bax阳性染色.正常卵细胞中Bcl-2反应强于Bax,退化卵细胞中Bax的反应强于Bcl-2.Bcl-2/Bax在卵泡细胞中的表达模式有所不同,21d前 Bcl-2为阳性,21～150d之间为Bcl-2阴性;180d以后正常卵泡为阴性,闭锁卵泡为阳性;Bax的表达,180d前全为阴性,180d后的表达同Bcl-2.膜细胞中Bcl-2/Bax的表达与卵泡细胞存在相似之处.Bcl-2/Bax在黄体中的表达只见于180d后. 结论 Bcl-2/Bax对卵细胞的生长、发育、存活和凋亡可能有重要的调节作用,其对卵泡细胞、膜细胞及黄体细胞的存活和凋亡的调节作用不明显.

花背蟾蜍肾发生中转化生长因子β、水通道蛋白2及Bax的表达

目的 观察转化生长因子β(TGF-β)、水通道蛋白-2 (AQP-2)及Bax蛋白在花背蟾蜍肾(小管)发生过程中的表达,探讨它们的生物活性作用及相互之间的调控意义. 方法 选取18～38期各期蝌蚪、幼蟾和成蟾各5只,应用免疫组织化学染色和体视学半定量方法,对其肾组织发生中TGF-β (β2、β3)、AQP-2及Bax蛋白的表达进行检测,用IPP专业图像分析软件对其表达强度进行定量分析. 结果 第26～32期蝌蚪前肾近端小管和远端小管上皮细胞呈TGF-β2免疫反应阳性,第34～38期蝌蚪及幼蟾和成蟾中肾近端小管上皮细胞呈TGF-β2免疫反应阳性;第26～30期蝌蚪前肾近端小管和远端小管上皮细胞呈TGF-β3免疫反应阳性,第32～38期蝌蚪及幼蟾和成蟾中肾近端小管上皮细胞呈TGF-β3免疫反应阳性;第26～38期蝌蚪及幼蟾和成蟾肾集合小管上皮细胞呈AQP-2免疫反应阳性;第26～34期蝌蚪肾近端小管和远端小管上皮细胞呈Bax蛋白免疫反应阳性,第38期蝌蚪及幼蟾和成蟾中肾近端小管上皮细胞呈Bax蛋白免疫反应阳性.在肾发生过程中,TGF-β (β2、β3)和Bax蛋白的阳性反应呈现先增强后减弱的变化,AQP-2阳性反应呈持续增强的趋势. 结论 前肾肾小管的退化可能与TGF-β和Bax蛋白的大量表达有关,AQP-2可能介导肾发育过程中水平衡的稳定.

小鼠子宫巨噬细胞的分离纯化与鉴定

目的 建立一套简便易行、高效可靠的小鼠子宫巨噬细胞的分离纯化及鉴定方法. 方法 5只雌鼠处死并获取子宫,利用酶消化法和机械法相结合制备小鼠子宫组织单细胞悬液,密度梯度离心法收集子宫巨噬细胞,贴壁培养获得纯化的巨噬细胞.采用锥虫蓝拒染法鉴定巨噬细胞活率,利用鸡红细胞吞噬试验检测巨噬细胞吞噬活性,并通过酸性磷酸酶染色、非特异性酯酶染色和CD14免疫细胞化学染色鉴定巨噬细胞纯度. 结果 采用该法每只小鼠可获得子宫巨噬细胞3×105～5×105个,且活率达到(85.35±0.43)%,酶化学和免疫细胞化学鉴定阳性率分别达到了(86.12±1.19)%、(85.83±0.57)%和(84.02±1.64)%. 结论 成功建立了小鼠子宫巨噬细胞的分离纯化方法,并能获得较高的细胞存活率和纯度.

三种改良的阮森吡啶-硝酸银法显示大鼠脊髓组织的比较

目的 对3种改良的阮森吡啶-硝酸银法(Ranson)在显示大鼠脊髓组织中的应用进行比较. 方法 对照组采用传统的阮森吡啶-硝酸银法,即取大鼠的新鲜脊髓组织,在酒精中加纯氨水固定,经纯吡啶、硝酸银、还原液染色,常规石蜡切片并观察.实验组采用改良的阮森吡啶-硝酸银法,即分别采用NaOH溶液、Na2CO3溶液和95%酒精替换在对照组中使用的纯氨水,其他染色步骤同对照组. 结果 实验组的脊髓组织切片分别经3种改良的阮森吡啶-硝酸银法染色,神经元的胞体和突起均呈黄棕色,神经纤维呈棕褐色,切片染色结果与对照组比较无明显差异,尤以酒精替换组的染色效果为佳. 结论 以改良的阮森吡啶-硝酸银法显示大鼠脊髓组织中神经元及神经纤维染色效果良好,方法更加简便易行,且避免了氨水的刺激气味,有利于改善教学和科研的局部工作环境.

《解剖学报》稿约