人巨细胞病毒gp52蛋白基因片段的克隆及表达

目的为获得高表达人巨细胞病毒gp52蛋白基因的工程菌.方法通过计算机分析,筛选出巨细胞病毒蛋白gp52中优势抗原决定簇,用PCR技术扩增克隆了含强抗原决定簇的基因片段.将克隆的基因片段插入表达载体pET28(a)内,转化大肠杆菌BL21,经Sepharery1 S-200分子筛及Ni-NTA Sepharose螯合层析进行纯化.结果获得的工程菌所表达的gp52蛋白片段相对分子质量约为21 000,约占菌体可溶性蛋白的28%.获得的表达蛋白纯度达95%,电泳显示单一条蛋白带,ELISA分析证实有较强的抗原性和较好的特异性.结论本研究对人巨细胞病毒感染,尤其是对孕妇及献血员等感染的检测有重要意义.

肾综合征出血热病毒Z10株在Vero细胞上传代适应和增殖动态

目的为了肾综合征出血热病毒滴度达到规模化生产要求.方法将肾综合征出血热病毒Z10株在Vero细胞上传代适应,不同时间取样,测定病毒滴度.结果从第2代即可稳定达到高滴度.转瓶培养比静止培养的病毒峰值出现的更早,第4d即可达到108/ml以上,且可多次收液.结论初步确立了疫苗生产中病毒制备工艺.

神经节苷脂对脑缺血/再灌注损伤的保护作用

目的探讨神经节苷脂对脑缺血再灌注损伤的保护作用.方法采用Pulsinelli的四血管闭塞法制作大鼠急性脑缺血/再灌注模型,利用高压液相色谱法观察脑缺血/再灌注期间谷氨酸和γ-氨基丁酸含量的变化,通过图象分析仪测定神经元的面数密度及神经节苷脂对以上指标的影响.结果缺血后谷氨酸和γ-氨基丁酸含量明显升高,再灌注后降低,神经节苷脂可降低谷氨酸含量,与盐水对照组相比差异显著(P<0.01),同时增加神经元面数密度.结论神经节苷脂通过抑制谷氨酸释放,可减轻脑缺血再灌注期间脑组织损伤.

国产HIV抗体诊断试剂的质量评价

目的评价国产HIV抗体诊断试剂的质量.方法用4 400 份义务献血员的血样,评价国内9个厂家的HIV抗体诊断试剂的特异性;HIV抗体阳性样品3 368份,评价试剂的灵敏度;测定各试剂结果的真实性及相关质量指标.结果国产HIV抗体诊断试剂的特异性、阳性预示值基本在99%以上,但灵敏度仍存在一定差距.结论通过对国内主要生产厂家生产的试剂质量的评价,了解制品质量,有益于进一步提高国产试剂的质量.

反义c-myc基因质粒对鼠脑胶质瘤细胞C6生长的影响

目的探讨反义c-myc基因质粒对鼠脑胶质瘤细胞C6增殖及凋亡的作用.方法将可在真核细胞表达大鼠反义c-myc基因的质粒pCEP4ASCMR以脂质体FuGENE6为介导,转染到大鼠脑恶性胶质瘤细胞C6株中,经MTF检测,软琼脂集落生长,吖啶橙染色,琼脂糖电泳等方法分析实验结果.结果反义c-myc基因质粒DNA具有抑制瘤细胞增殖的作用,并能引起瘤细胞凋亡;脂质体FuGENE6有助于提高质粒DNA的转染效率.结论反义c-mvc基因质粒可抑制c-myc基因的过度表达,促使肿瘤细胞凋亡,达到治疗脑神经胶质细胞瘤的目的.

重组传染性法氏囊病病毒VP2/VP243基因表达及保护性和免疫原性

目的在重组鸡痘病毒中表达传染性法氏囊病毒VP2/VP243基因,并研究表达产物的保护性和免疫原性.方法以FPV282E4株TK基因为侧翼,分别将鸡法氏囊病病毒(Infectious Bursal Disease Virus,IBDV)VP2和VP243目的基因克隆到牛痘病毒A型包涵体(ATI)和痘苗病毒P7.5复合型启动子下游,构建成2个重组表达质粒,命名为pUTALacVP和pUTALacVPO.用这2个质粒转染CEF细胞,用X-gal染色法筛选出2株重组病毒vUTAlacVP2和vUTALacVPO.用这2株病毒免疫1周龄SPF鸡,以常规疫苗为对照.结果 ELISA、SDS-PAGE和Western blot表明表达产物可与IBDV特异性多克隆抗体反应,并诱导鸡保护性抗体.在使用vvIBDV攻击前,对照组抗体水平显著高于实验组.但攻击5d后,实验组抗体水平明显升高.结论 vUTALacVP2和VPO在CEF细胞中实现了高效表达,但重组疫苗的保护率低于常规疫苗.

聚乙二醇6 000对Tween-80含量测定的影响

目的了解聚乙二醇6 000对测定Tween-80含量的影响.方法将被检样品加95%乙醇沉淀蛋白后,上清加二氯甲烷,再加铵钴硫氰酸盐溶液,用紫外分光光度计测A620吸收峰.结果PEG-6 000含量>5μg/ml时,干扰Tween-80含量测定.结论一定浓度的PEG-6 000对测定Tween-80含量有干扰.

应用pQE30系统表达和纯化乙型肝炎病毒核心抗原

目的建立高效、快速、简便的表达和纯化HBcAg系统,为进一步研究HBcAg在乙型肝炎发病机理中的作用及HBV C基因变异产生HBcAg特征.方法应用pQE30系统在原核细胞表达和纯化HBcAg.结果目的蛋白表达量占细菌总蛋白的26.2%;500ml诱导表达的菌液可得平均5mg的HBcAg;纯化的HBcAg纯度可达到91.0%;免疫印迹分析,表达的HBcAg具有多克隆抗-HBc结合活性.结论建立了一套高效、快速表达和纯化HBc Ag系统.

应用ELISA测定重组细胞因子中残余大肠杆菌菌体蛋白含量

目的建立灵敏度高,重复性好的残余宿主菌E.coli菌体蛋白含量的测定方法.方法电泳显示5株大肠杆菌DH52、JM103、JM105、N8430和HB101的蛋白质组分各不相同,但均可被免疫印迹显色,说明免抗E.coli.K12,C600抗体包括了其主要菌体蛋白的抗体,因此,用ELISA检测相应的菌体蛋白含量.结果优化后的ELISA对DHa、JM103、JM105和HB101检测灵敏度均达到10ng/ml.用混合菌体蛋白作为E.coli菌体蛋白通用标准,其灵敏度达到7.8ng/ml,含量在7.8～250ng/ml范围内,一次方程(y＝a+bx)线性良好(r>0.990);在7.8～1 000ng/ml范围内,二次方程(y＝a+bx+c2)线性良好(r>0.990).变异系数小于14%(n=4).应用该法对国内外重组产品进行测定,发现不同厂家不同产品其菌体蛋白含量各不相同.8种细胞因子共57批,菌体蛋白含量大于1%的3批,占5.3%;大于0.1%的9批,占15.8%;大于0.01%的28批占49.1%.说明还有不少厂家其重组产品纯化工艺有待进一步提高.结论本方法灵敏度高,重复性好,可用于重组产品中大肠杆菌残余菌体蛋白的测定.

腮腺炎疫苗与白喉、破伤风类毒素同时或分别接种的免疫应答

目的了解腮腺炎疫苗与吸附精制白喉、破伤风二联类毒素(DT)能否同时接种,为制定免疫方案提供依据.方法用冻干流行性腮腺炎减毒活疫苗和吸附精制白、破二联类毒素同时和分别接种8～14岁的寄宿学生,观察其免疫应答.结果两苗同时接种与分别接种临床反应及免疫应答差异均无显著意义.结论两苗是可以同时接种的.

应用比色法测定静脉注射用人血球蛋白中麦芽糖含量

目的建立一种操作简便、快速的检测静脉注射用人血球蛋白中麦芽糖含量的方法.方法应用比色法,用不同含量的麦芽糖与费林试剂混合建立标准曲线,以标准曲线计算样品中麦芽糖的含量.结果该方法优于常规色谱法,既可省去较昂贵的设备,且提高了准确性和精密性,回收率在99.70%～100.00%之间.结论可作为血液制品的常规检测方法.

肾综合征出血热灭活疫苗的纯化

目的为提高肾综合征出血热(HFPS)疫苗的免疫效果和减少副反应.方法用ELISA检测HFBS病毒抗原的方法,比较疫苗原液通过不同孔径滤膜的浓缩效果;比较离子交换和凝胶过滤的纯化效果.结果用孔径30万相对分子质量滤膜浓缩时,过滤液中仍有部分病毒抗原检出,经10万相对分子质量滤膜过滤后,过滤液中检测不到病毒抗原;用Sepharose 4FF凝胶柱层析浓缩时,经波长280nm检测到3个吸收峰,其中仅在第1峰中检测到病毒抗原,收集第1峰,几乎回收全部病毒抗原,去除杂蛋白约90%左右.结论本纯化方法适合于HFBS疫苗的规模化生产.

应用异型双功能试剂连接制备乳胶妊娠诊断制剂

目的研制稳定性特异性更好的妊娠诊断制剂.方法应用抗HCG-β亚基C末端多肽抗体,以双功能试剂连接到羧化苯乙烯乳胶上.结果制成的妊娠诊断试剂较目前通用的HCG乳胶试剂灵敏度高,为1.5IU/ml.稳定性好,在室温放置3个月,其灵敏度未下降.用本试剂检测160份妊娠尿和150份正常尿,结果准确率为95%.结论本试剂所用方法优于通常应用的妊娠诊断方法.

甲型肝炎灭活疫苗接种普通狨猴的安全性和免疫原性

目的观察本实验室研制的甲型肝炎灭活疫苗的安全性和免疫原性.方法甲型肝炎病毒吕-8株在人胚肺二倍体细胞(KMB17)中增殖,收获的病毒液用福尔马林灭活制成实验性疫苗,接种普通狨猴.结果有特异性抗HAV产生,无血清酶活性升高和肝组织病理学改变.接种疫苗的狨猴均能抵抗甲肝病毒强毒株的攻击,而对照组均出现酶活性升高和肝组织病理学改变.结论该疫苗具有良好的免疫原性和可靠的安全性.

抗真菌蛋白质的分离纯化

目的试图从霉菌培养液中分离纯化抗真菌活性蛋白质.方法用离子交换层析法分离,用反向高效液相色谱法进一步纯化,经N-三(羟甲基)甲基甘氨酸凝胶电泳分析确定其相对分子质量.结果从黑曲霉菌培养上清液中分离出一种具有抗真菌活性的蛋白质(AFP).纯化后得到高活性的精制AFP.相对分子质量约为9 000,经MTT法检测5种真菌具有明显抗真菌活性.结论本研究为抗菌药物及防腐剂的开发提供了依据.

b型流感嗜血杆菌结合疫苗的制备及免疫学特性

目的制备b型流感嗜血杆菌结合疫苗,观察免疫学特性.方法通过已二酸二肼(ADH),将纯化的荚膜多糖抗原与破伤风类毒素(TT)蛋白共价结合,制备b型流感嗜血杆菌结合物.以2.5μg多糖或含2.5μg多糖结合物经皮下免疫NIH雌性小鼠,用ELISA法检测小鼠血清PRP抗体及T抗体水平.结果用本实验方法提取的多糖、合成的多糖衍生物、多糖-蛋白结合物都具有b型流感嗜血杆菌的抗原特异性,其化学组成及结构特性与国外文献报道结果基本一致.单独用多糖免疫小鼠未能诱导高水平的血清PRP抗体,而用结合物免疫小鼠却诱导出高水平的血清PRP抗体及TT抗体,并存在免疫记忆性.结论本实验为进一步临床评价结合物的体内保护性效果提供了实验基础.

重组人干扰素α2a栓剂对慢性盆腔结缔组织炎的疗效

目的应用重组人干扰素α2a栓剂对慢性盆腔结缔组织炎患者进行疗效观察.方法用5×105IUα2a干扰素栓剂,经宫颈局部用药,治疗合并慢性宫颈炎的慢性盆腔结缔组织炎83例,并对部分病例进行了治疗前后宫颈分泌物的HPV-DNA,HCMV-EA检测.结果慢性盆腔结缔组织炎痊愈率、显效率、总显效率、有效率、总有效率依次为59.7%、25.4%、85.1%、9.0%和94.1%,显著优于洗必泰栓的疗效;慢性盆腔结缔组织炎疗效与慢性宫颈炎疗效密切相关,与HPV-DNA、HCMV-DNA阴转密切相关.结论重组人干扰素α2a栓剂经宫颈局部用药,对慢性盆腔结缔组织炎的疗效随着宫颈局部HCMV、HPV感染的有效控制而获得较满意的结果.

从包涵体中高效纯化HBx-蛋白

重组天门冬酰胺酶Ⅱ纯化过程的毛细管电泳监测法

目的建立重组天门冬酰胺酶Ⅱ纯化过程质量监控的方法.方法用高效毛细管区带电泳法监测L-天门冬酰胺酶的纯化过程.经优化的电泳条件为:45cm×50μmi.d.石英毛细管(有效长度为37.5cm),检测波长214nm,分离电压12kV,压差进样10s,恒温13℃,分离介质为pH7.0的80mmol/L磷酸钠缓冲液.实测了6批样品的纯度,用于各纯化步骤的质量监控.结果该方法简单、快速,尤其适合于重组蛋白的质量控制.结论毛细管区带电泳法(CZE),可以用于对L-天门冬酰胺酶的纯化过程的质量监控,还可用于半成品和成品的质量控制.

IL-2与绿脓杆菌外毒素A嵌合蛋白的研究

目的获得IL-2绿脓杆菌外毒素A嵌合蛋白,用于相关疾病的治疗.方法用PCR方法扩增分离IL-2和PEA的基因,将IL-2基因的3′端与绿脓杆菌外毒素A基因的5′端连接后克隆至pBV220上,转化大肠杆菌DH5a.挑取菌落培养,快速提取质粒进行酶切,并在温控条件下表达.结果经鉴定,获得重组质粒pBV/IL-2/PEA.温控诱导表达后SDS-PAGE分析表明,在51 000处有蛋白表达带.以鼠抗人IL-2单克隆抗体经免疫印迹验证,该表达蛋白为所设计的嵌合蛋白.结论本研究建立了一种制备IL-2/PEA嵌合蛋白的方法,该方法也可用于表达其他蛋白.

应用紫外分光法测定IgG含量

目的为建立一种更为简便、规范、准确的测定IgG含量的方法.方法采用紫外分光光度仪测定抗原抗体反应的光吸收值(A值),利用直线回归方法,根据样品的A值从标准曲线上计算出样品的IgG含量.结果该法重复性好,准确性高,省时简便.结论此法可作为实验室和临床检验的一种常规方法.

轮状病毒疫苗的研究进展

轮状病毒(Rotavirus,RV)属呼肠病毒科.人类轮状病毒(HRV)是婴幼儿腹泻的主要病原之一.在美国,仅1997年7月至1998年6月的一年内,就有270万5岁以下婴幼儿因RV感染而患胃肠炎.世界各国,每年有约100万儿童死于RV所致腹泻.

花生四烯酸的研究概况及应用前景

多不饱和脂肪酸(Polyunsaturated fatty acids,PUFAs)是指含两个以上双键的一类长链脂肪酸.在微生物体内,PUFAs的合成通常是以单不饱和脂肪酸、油酸为底物,合成途径中,有两个主要的反应,即碳链的增长和去饱和作用.

不同氢氧化铝含量的吸附白破二联疫苗的吸附度及免疫效果

按<中国生物制品规程>,应用精白类、精破类和Al(OH)3胶体溶液各3批,分别配制成不同Al(OH)3含量(1、2和3mg/ml)的吸附白破二联各3批{每批分别含精白类40Lf/ml,精破类20Lf/ml),并分别进行吸附度测定和免疫力试验.结果不同Al(OH)3含量的二联吸附度均为100%,免疫效果,白喉的活存率分别为80%、93%和80%(均为3批平均值);破伤风的抗毒素单位分别为2.7、3.1和2.7IU/ml(均为3批平均值).表明吸附精制白破二联疫苗中Al(OH)3含量在一定范围内,免疫动物的效果差异无显著意义.因此,适当减少白破二联疫苗中的Al(OH)3含量是可行的.

保存条件和时间对狂犬病毒毒力的影响

在狂犬病疫苗生产过程中,制备出来的疫苗原液一般不能及时检定或分装,需要保存一定时间.为了解保存时间对原液毒力的影响,我们取沈阳安迪生物高科技公司同期生产的狂犬病疫苗原液6批,分装于无菌的青霉素瓶中,分别放-2℃及4℃冰箱中保存,于不同时间取出,按<中国生物制品规程>方法进行毒力测定,结果疫苗原液在-20℃冰箱中保存1周毒力未见改变,保存3、6、10个月毒力下降0.08、0.5和0.89LogLD50/0.03ml.原液在4℃冰箱保存2天毒力未见下降,保存5天和10天毒力分别下降0.68和0.44LogLD50/O.03ml.原液经冻融2次毒力没有下降.冻融4次和6次毒力分别下降0.08和0.12LogLD50/0.03ml.

应用血型微板自动化鉴定血型的主要技术参数

微板法全自动血型检测系统是近期发展起来的新方法,由于许多技术参数尚无统一标准,使其推广受到一定限制.为探求该法各项技术参数的佳值,以ATplus2自动加样AnthosTs孵育震荡.

应用血细胞分离机采集单个供者双份血小板

CS-3000Plus血细胞分离机由美国百特公司生产.机采血小板所用的耗材都依赖进口,且价格昂贵.单个供者献双份血小板既节约了耗材.又nJ以减少供者,同时也为临床快速提供机采血小板争取了时间,笔者对59例单个供者(手指末梢血手工计数血小板≥200×109/L),进行双份血小板的采集.现将献血员的筛选、血小板采集及单采后献血员血细胞的变化情况报告如下.

迎接新世纪再创新成绩

<中国生物制品学杂志>是我国历史上唯一的生物制品专业正式刊物.自988年创刊以来,在长春生物制品研究所领导的支持和关怀下,通过编委会和编辑部的共同努力,坚持"尽快反映全国生物制品工作中的新成就、新信息,加速信息交流,供生物制品工作者生产科研中参考,以期促进各地的工作不断前进"的办刊方针(见发刊词),加强了对编辑部人员的培训和充实,以及条件的改善,并通过各种形式,使编辑人员与广大生物制品界进行沟通,本刊物在发展中不断改进和提高,取得了显著的成绩,受到广大生物制品工作者的欢迎和重视,以致在生物制品界产生较大的影响,并被评为中华预防医学会优秀刊物.这一成绩的取得,既包括许多生物制品工作者的辛勤耕耘和对本刊的支持,也反映了我国生物制品生产和科研工作在改革开放以来的发展和进步.

生物技术专利知识问答

编者按:为满足广大读者了解有关生物技术专利知识的需要,本刊特邀原国家知识产权局专利局高级审查员马昭若教授以问题解答形式做此专题讲座.欢迎诸位就您所关心的问题继续来电来函咨询.