RGD特异性结合多肽与重组改构人肿瘤坏死因子融合基因的克隆表达及其抑瘤活性

目的构建RGD多肽与重组改构人肿瘤坏死因子融合基因,进一步提高rmhTNF的临床疗效.方法应用基因重组技术构建了CRGDC与rmhTNF的融合基因,在E.coli DH5α中诱导表达重组蛋白RGD-rmhTNF,采用溶菌酶法裂解菌体,裂解上清经硫酸铵沉淀、阴阳离子交换层析纯化后,用S180荷瘤小鼠模型和L929细胞体外杀伤实验测定纯化的重组蛋白RGD-rmhTNF的体内、外杀伤活性.结果正确构建了编码RGD-rmhTNF融合基因,重组工程菌升温诱导后以部分可溶形式表达RGD-rmhTNF,纯化后纯度为96.88%,体外对L929细胞杀伤作用的比活性为3.6×108IU/mg,与rmhTNF相当(3.0×108IU/mg).在S180荷瘤小鼠模型中,当RGD-rmhTNF剂量为12×115IU/kg时,对肿瘤的生长抑制率为84.9%,显著高于相同剂量的rmhT-NF(肿瘤抑制率为59.09%,P＜0.01)和环磷酰胺组(肿瘤抑制率为71.21%,P＜0.01).结论重组蛋白RGD-rmhTNF可以提高rmhTNF的治疗效果.

SARS病毒刺突蛋白片段在大肠杆菌中的表达和纯化

目的获得SARS病毒表面刺突蛋白片段.方法用PCR方法克隆SARS S2片段基因,并在大肠杆菌中进行表达.表达产物经SDS-PAGE及Western blot鉴定,阴离子交换层析纯化.结果SARS病毒S2片段基因在大肠杆菌中获得了高表达,表达量占总蛋白的50%以上;得到纯度大于90%的SARS蛋白样品.结论获得了能够应用于SARS疫苗研究的SARS蛋白样品.

人乳头瘤病毒(HPV)18型晚期蛋白L1 DNA疫苗的免疫原性及安全性

目的对HPV18型DNA疫苗的免疫原性和安全性进行初步评价.方法将HPV1gL1基因与真核表达载体pcDNA3.1(+)连接,构建DNA疫苗质粒pcDNA-L1.使用脂质体将重组质粒转染COS-7细胞,用Western blot检测体外瞬时表达的抗原.将重组质粒pcDNA-L1肌肉注射BALB/c小鼠(100μg/只),加强免疫3次后分别采集血清,用ELISA法和Westernblot法检测抗体,实时荧光定量PCR法检测质粒的组织分布.采用ELISA法检测DNA疫苗免疫后抗核抗体和抗双链DNA抗体的效价.结果重组质粒可在真核细胞中有效地转录和表达HPV18 L1蛋白.小鼠免疫后可检出较高滴度的抗HPV18 L1抗体和特异条带.免疫后质粒主要分布在注射部位,且随着时间延长被清除;未检测到抗核抗体和抗双链DNA抗体.结论HPV18 L1重组质粒可诱导小鼠产生特异的体液免疫反应,且该DNA疫苗是安全的,为进一步研制开发HPV DNA疫苗打下了基础.

鼠白细胞介素-2(mIL-2)真核表达质粒的构建及蛋白检测

目的构建重组鼠白细胞介素-2的真核表达体系,获得mIL-2基因的表达质粒,用其提高DNA疫苗的免疫原性.方法从经PMA刺激的小鼠脾细胞中提取总RNA,采用RT-PCR技术调取鼠白细胞介素-2基因,并将其克隆至真核表达质粒VR1012中,转染COS-7细胞,将转染细胞裂解,进行Western blot检测.结果获得完整的带有信号肽的mIL-2序列的质粒,经Western blot检测阳性.结论构建了mIL-2真核表达体系,并获得有生物活性的mIL-2蛋白.

广西流行的猪瘟病毒株E2基因序列测定及分析

目的对广西流行的猪瘟病毒E2基因进行序列测定及分析.方法应用PCR对15株猪瘟病毒E2基因进行扩增、克隆及测序,利用DNAstar分析软件对所测定的15株毒株与兔化弱毒(HCLV)、石门(Shimen)毒株的相应基因片段进行同源性分析.结果得到长度为1092 nt猪瘟病毒E2基因,编码364个氨基酸残基的目的基因片段.广西株与HCLV、Shimen株的核苷酸同源性分别为81.5%～82.8%和82.8%～84.3%,推导的氨基酸同源性分别为87.1%～88.8%和88.5%～89.9%,广西毒株之间核苷酸与推导的氨基酸同源性分别为92.3%～99.9%和94.8%～100%.广西15株猪瘟病毒E2蛋白上的全部半胱氨酸(Cys)位点均未改变,推测其E2蛋白的抗原结构保持很高的稳定性.但广西毒株中与特定单克隆抗体结合的724、725、729、734和738位的氨基酸发生了变异,这些变异可能导致不完全免疫保护.把所测定的广西15株与国内外已发表的19株病毒相应序列进行比较,建立系统发育树,所比较的34株猪瘟病毒被分为两个群,广西毒株皆属于基因群Ⅱ.结论成功进行了广西流行猪瘟病毒E2基因序列分析,为进一步探讨猪瘟病毒E2蛋白的抗原结构提供了依据.

抗氨基末端脂多糖结合蛋白基因工程抗体库的构建及体外表达筛选

目的构建人源化的单链可变区抗体库,运用体外表达技术翻译并筛选特异性的抗NH-LBP抗体.方法分离健康人外周血单核细胞,抽提总RNA设计引物,扩增抗体轻重链的可变区,通过一段柔性片段将其连接成单链抗体库;应用体外表达技术翻译抗体库,并筛选出与NH-LBP高度结合的单链抗体片段.结果扩增的单链抗体可变区片段分别为340 bp和325 bp,经连接后约为750 bp.经过体外表达得到了约27 000的抗体片段,经过5轮筛选进化,得到了可与NH-LBP高度结合的抗体.结论已成功构建了人源化的单链抗体库;通过体外表达技术筛选到可与NH-LBP高度结合的抗体.

人恶性黑色素瘤A375细胞黑素刺激素受体(MC1R)的检测

目的检测人恶性黑色素瘤A375细胞膜上MC1R蛋白及其cDNA,为研究黑色素瘤细胞表面受体及靶向配体奠定基础.方法利用放射配体分析法检测人恶性黑色素瘤A375细胞膜上的MC1R蛋白;用RT-PCR方法扩增人恶性黑色素瘤A375细胞MC1R的cDNA,并克隆至pMD-18T质粒,进行酶切分析鉴定及扩增片段DNA序列测定.结果放射配体分析结果表明,125I-αMSH可与人恶性黑色素瘤A375细胞膜特异结合.RT-PCR结果显示,扩增产物的大小与MC1R的cDNA相符.测序结果证实扩增片段为MC1R基因的特异片段.结论证实人恶性黑色素瘤A375细胞膜上表达MC1R蛋白.MC1R基因的成功克隆为其进一步研究提供了必要条件.

IL-2、15、22基因对CVB3 VP1 DNA疫苗免疫效果的影响

目的观察白细胞介素-2(Interleukin-2,IL-2)、白细胞介素-15(Interleukin-15,IL-15)和白细胞介素-22(Interleukin-22,IL-22)基因对柯萨奇病毒(Coxasckievirus B3,CVB3)VP1 DNA疫苗诱导小鼠免疫应答及保护作用的影响.方法取雄性BALB/c小鼠,随机分为6组,每组20只,分别肌内注射盐水、pcDNA3、pcDNA3-VP1、pcDNA3-IL-2+pcDNA3-VP1、pcDNA3-IL-15+ocDNA3-VP1和pcDNA3-IL-22+pcDNA3-VP1,每周1次,共3次,每次免疫后6 d取血清用微量中和试验检测CVB3中和抗体,3次免疫后用800 TCID50 CVB3感染小鼠,观察小鼠的生存时间和生存率.结果pcDNA3-VP1、pcDNA3-IL-2+pcDNA3-VP1和pcDNA3-IL-15+pcDNA3-VP1组均能诱导小鼠产生中和抗体,抗体滴度随免疫次数增加而提高.病毒攻击后,各组的生存率差异无显著意义,pcDNA3-IL-2+pcDNA3-VP1和pcDNA3-IL-15+pcDNA3-VP1组较其他4组生存时间明显延长.pcDNA3-IL-22+pcDNA3-VP1组虽也能诱导小鼠产生中和抗体,但抗体滴度和生存情况无明显变化.结论IL-2、IL-15基因对CVB3 VP1 DNA疫苗诱导小鼠产生免疫应答和免疫保护有一定的增强作用,而IL-22基因无明显作用.

人类免疫缺陷病毒1型C亚型核心蛋白(Gag)在大肠杆菌中的表达

目的表达人免疫缺陷病毒1型C亚型核心蛋白Gag,为HIV感染的诊断和疫苗的研制奠定基础.方法通过PCR扩增获得HIV-1 gag基因片段,并将其克隆到原核表达载体pGEX-5X-1的tac启动子下游,构建重组表达质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,以SDS-PAGE和Western blot分析验证其表达产物.结果表达产物是相对分子质量为82 000的GST融合蛋白,且能与抗p24单克隆抗体发生特异性反应.结论重组Gag蛋白在大肠杆菌中得到了有效表达,且具有良好的抗原性,可进一步用于HIV感染及动物免疫等方面的研究.

重组人BAFF134～285的克隆及在大肠杆菌中的高效表达

目的克隆人TNF家族的B细胞激活因子(B cell activatingfactor to the TNF family,BAFF)胞外区cDNA,并进行高效表达和纯化.方法提取人新鲜扁桃体组织总RNA,经RT-PCR扩增编码人BAFF胞外区134～285氨基酸残基cDNA,经序列测定后,克隆至pQE-80L载体中,并转化大肠杆菌DH5α,经IPTG诱导表达及Ni2+-NTA柱层析纯化目的蛋白,后经SDS-PAGE和Western blot检测.结果RT-PCR扩增得到了459bp的cDNA片段,序列分析与GenBank中报道的编码人BAFF134-285的cDNA序列一致,SDS-PAGE及Western blot证实表达蛋白确实为6 × His-BAFF134-285融合蛋白,并存在于包涵体中.结论利用大肠杆菌可高效表达rhBAFF134-285,为进一步研究其生物学活性奠定了基础.

人层粘连蛋白α4链LG1组件融合蛋白的表达

目的表达重组人层粘连蛋白α4链LG1组件(Human Laminin Alpha4 LG1 Module,hLNα4LG1)蛋白并检测其抗原性.方法采用RT-PCR方法从人胎盘组织扩增hLNα4LG1的cDNA片段,用T/A克隆法将其插入pMD-18T载体进行测序.用DNA重组技术构建原核表达载体pET-28a-LG1,用BL21(DE3)/pET系统表达hLNα4LG1融合蛋白,SDS-PAGE鉴定表达产物,用Ni-NTA亲和柱对表达蛋白进行纯化,并进行Western blot分析.结果已成功获得hLNα4LG1 cDNA序列,与GenBank中序列同源性为100%.12%SDS-PAGE显示,经IPTG诱导后BL21(DE3)/pET28a-LG1总蛋白中出现一条相对分子质量为26 000的新蛋白带,纯化后目的蛋白纯度达90%以上,且Western blot可特异地检测到目的蛋白所对应转移带.结论成功表达和纯化hLNα4LG1蛋白,且具有良好的抗原性,为研究LG组件在疾病发生过程中的作用及其功能位点打下了基础.

狂犬病毒aG株糖蛋白在CHO细胞中的表达

目的克隆狂犬病毒aG株糖蛋白(Glycoprotein)基因,构建重组真核表达载体,在CHO细胞中表达aG株糖蛋白.方法采用RT-PCR,从狂犬病毒aG株基因组RNA中扩增GP基因,并将该基因克隆至真核表达载体pCI-dhfr上,以脂质体介导法转染CHO-dhfr-细胞.用MTX筛选的抗性克隆经ELISA、免疫荧光及Western blot检测GP蛋白的表达.结果克隆到狂犬病毒aG株糖蛋白全长基因,并在CHO细胞中进行表达.结论成功地在CHO细胞中表达了狂犬病毒aG株的糖蛋白,为进一步开发狂犬病毒基因工程疫苗打下基础.

携带人血管抑制因子K1-5基因的腺相关病毒载体的构建及其对血管内皮细胞的抑制作用

目的构建含人血管抑制因子K1-5基因的重组腺相关病毒载体rAAV-K5,研究其在体外表达及对血管内皮细胞的抑制作用.方法将K1-5基因插入通用型AAV载体质粒pSNAV中,构建重组质粒pSNAV-K5.用pSNAV-K5转染BHK-21细胞,经G418选择培养基培养载体细胞株BHK/K5.用辅助病毒感染BHK/K5细胞包装出重组病毒rAAV-K5.研究rAAV-K5感染BHK细胞获得的培养上清对血管内皮细胞的抑制作用.结果已获得了重组病毒rAAV-K5,滴度达0.5×1012v.g./ml.免疫斑点印迹实验表明,rAAV-K5可介导人血管抑制因子K1-5的体外表达,表达产物对血管内皮细胞增殖具有抑制作用.结论重组病毒rAAV-K5在体外对血管内皮细胞的增殖具有抑制作用.为进一步用rAAV病毒载体进行抗血管生成基因治疗的动物实验及临床应用打下了基础.

百日咳实验室诊断的研究进展

百日咳是一种严重的急性呼吸道传染病,每年全世界百日咳感染人数达3 500万之多,并且感染者当中症状表现不典型和成人化的人数逐渐增多,因此建立准确、快速的实验室诊断方法显得尤为重要.本文就目前国内外百日咳实验室诊断的研究进展做一综述.

人用疫苗佐剂的发展和应用

本文对人用疫苗佐剂的类型、作用原理及近年来疫苗佐剂的研究和应用加以综述,重点介绍几类正在临床上应用的疫苗佐剂.

转基因植物口服乙肝疫苗研究进展

与传统的注射用乙肝疫苗相比,口服疫苗具有安全、有效,使用方便,生产成本低廉等多项优势.本文综述了转基因植物口服乙肝疫苗的研究成果,指出了今后研究开发需解决的问题.

MCDB153无血清培养基的优化

目的对角质细胞无血清培养基MCDB153进行优化.方法提高培养基中相应氨基酸的浓度,并用角质细胞生长因子(KGF)代替传统的表皮生长因子(EGF).结果角质细胞在优化的MCDB153培养基中培养,能获得8.1×104cells/cm2的浓度.结论优化后的MCDB153培养基可提高角质细胞密度.

重组人EC-SOD包涵体的稀释复性及重折叠后蛋白的纯化

目的确定重组人EC-SOD包涵体体外稀释复性和复性后蛋白纯化的适宜方法.方法通过对pH、温度、包涵体蛋白浓度、尿素和精氨酸浓度及氧化还原对比率的定性定量分析,研究重组人EC-SOD包涵体体外稀释复性的基本条件.采用金属离子亲和柱(IMAC)和肝素亲和柱(Heparin-sepharose)对复性蛋白进行纯化,比较纯化效率的差异.结果佳复性条件为pH8.5,尿素浓度为1.5 mol/L,精氨酸浓度大于0.3 mol/L,GSH:GSSG=4:1;复性温度及包涵体蛋白终浓度越高,复性效率越低.IMAC和Heparin-sepharose亲和柱均可用来纯化复性蛋白溶液,但Heparin-sepharose纯化效率较高.结论确定了重组人EC-SOD包涵体体外稀释复性的佳条件及复性后蛋白纯化的方法.

大肠杆菌表达的vMIP-Ⅱ包涵体的纯化与复性研究

目的纯化、复性大肠杆菌表达的vMIP-Ⅱ包涵体蛋白.方法用8 mol/L尿素缓冲液变性溶解vMIP-Ⅱ包涵体,然后加入十二烷基磺酸钠(SDS)进一步促溶,利用金属亲和层析和分子筛层析纯化,再利用柱层析去除SDS,纯化后透析复性;通过荧光和单核淋巴细胞趋化抑制实验检测复性蛋白的结构和抑制单核淋巴细胞趋化的活性.结果重组vMIP-Ⅱ纯化和复性后,仍具有完整的高级结构和抑制单核细胞趋化的活性.结论已获得了重组vMIP-Ⅱ活性蛋白,为进一步研究应用奠定基础.

B→O血型转换批量制备通用型红细胞的研究

目的建立B→O血型转换红细胞(通用型红细胞)批量制备工艺,为临床提供通用型红细胞制品.方法用不同pH值的缓冲液对1个使用单位(200 ml)的B型红细胞进行预处理.在专门设计的转型密闭处理系统中,用α-半乳糖苷酶对B型红细胞表面B抗原进行酶解,并检测酶解后红细胞ABO血型抗原及结构、功能.结果酶解前用pH 4.2缓冲液预处理组上清游离Hb含量显著低于pH 2.8缓冲液处理组;经α-半乳糖苷酶(100U/ml红细胞)在pH5.6,26℃条件下酶解60min,红细胞B型抗原被完全清除,转换为O型;红细胞形态、变形性、ATP、2,3-DPG、胆固醇含量、乙酰胆酐酯酶活性、渗透脆性、pH、上清游离Hb、K+、Na+含量与对照组(正常红细胞)比较差异无显著意义,均在正常范围.结论建立了B→O血型转换通用型红细胞的批量制备工艺.通用型红细胞结构、功能、形态均正常,细菌、热原实验合格.

CpG-ODN对乙肝核酸疫苗及重组疫苗免疫效果的影响

目的研究CpG-寡聚脱氧核苷酸(CpG-ODN)对乙肝核酸疫苗及重组(CHO细胞)疫苗免疫效果的影响.方法核酸疫苗实验组用CpG-ODN与乙肝核酸疫苗联合免疫BALB/c小鼠,阳性对照组注射核酸疫苗,阴性对照组注射质粒pVAX1;重组疫苗分4个实验组,用CpG-ODN与不同剂量的重组疫苗配伍后分别免疫BALB/c小鼠,阳性对照组注射重组疫苗,阴性对照组注射生理盐水.应用ELISA检测小鼠血清中的抗-HBs水平.结果CpG与乙肝核酸疫苗组抗体阳转率比阳性对照组提高3倍,抗体水平提高2倍.CpG与重组疫苗组的阳转率和阳转时间均高于或早于CpG与核酸疫苗实验组.加入CpG-ODN后,即使重组疫苗用量减少3倍,诱导抗体水平和阳转率均无明显改变.结论CpG-ODN可提高乙肝核酸疫苗和重组疫苗的免疫效果,并使抗体产生的时间提前.

SARS病毒NS-1株三级毒种库的建立

目的建立SARS病毒NS-1株三级毒种库.方法SARS病毒NS-1株在Vero细胞上传代扩增,并经各项检定合格后,建立SARS病毒NS-1株三级毒种库.结果工作种子批病毒滴度均在8.2 LgCCID50/ml以上;无菌试验、支原体检查均合格;鉴别试验中,经与SARS病人恢复期高效价血清中和,中和指数均在955以上;外源因子检查中,小鼠和乳鼠存活率均在86%以上;血吸附和非血吸附检查均为阴性;免疫原性检查中,病毒原液和1:5倍稀释病毒液免疫小鼠,其血清中和效价分别达1:54和1:15.结论SARS病毒NS-1株各项指标均符合和<中国生物制品规程>2000年版要求,可作为SARS灭活疫苗生产用毒种.

甲型肝炎减毒活疫苗(H2株)和灭活疫苗(L8株)诱导小鼠体液及细胞免疫应答

目的评估甲型肝炎减毒活疫苗和灭活疫苗的免疫学效果.方法用甲型肝炎减毒活疫苗(H2株)和灭活疫苗(L8株)分别经腹腔免疫BALB/c小鼠后,用ELISA法检测血清中抗-HAV IgG、TNF-α、IFN-γ和IL-2;用流式细胞仪对全血中T细胞亚群分类;3H-TdR掺入法检测T淋巴细胞增殖.结果减毒活疫苗组在初免后诱导的体液和细胞免疫水平均低于灭活疫苗组,加强免疫后,与灭活疫苗相当.灭活疫苗组IFN-γ的峰值出现时间较减毒活疫苗组晚,但水平较高.结论两种疫苗均可诱导体液和细胞免疫应答,减毒活疫苗进行加强免疫后可诱导更好的系统免疫应答.

W135和Y群脑膜炎球菌培养和多糖纯化

目的培养W135和Y群脑膜炎球菌及荚膜多糖的纯化.方法采用综合培养基代替半综合培养基在75 L生物反应器中对两群脑膜炎球菌进行培养,研究培养基处方、发酵、多糖提取及纯化工艺.结果综合培养基可代替半综合培养基对两群脑膜炎球菌进行培养.在培养过程中补加葡萄糖溶液、优化搅拌速度及通气量均有利于两菌群生长;在多糖纯化过程中,通过对比试验选择25%乙醇沉淀核酸,2～8℃的酚溶液,萃取蛋白的次数控制在3～4次为好.结论所研制的综合培养基及多糖纯化的工艺具有较好的可行性,为四价脑膜炎球菌多糖疫苗的研制提供了试验基础.

人SARS特异性免疫球蛋白生物学活性的研究

目的研究人SARS特异性免疫球蛋白的生物学活性.方法采用病毒终点法中和试验、酶联免疫及Western blot等方法对人SARS特异性免疫球蛋白体外中和NS-1 SARS病毒株的中和指数、中和效价、抗体滴度以及与NS-1 SARS病毒株灭活疫苗的反应性进行研究.结果8份用于生产人SARS特异性免疫球蛋白的恢复期病人血清的中和指数均在186～112 200之间;8份混合原料浆和SARS特异性免疫球蛋白的中和效价分别为1:200和1:1 000;ELISA效价分别为1:8和1:64;与NS-1 SARS灭活疫苗的Western blot在相对分子质量约210 000、120 000和47 000处有明显的条带.结论人SARS特异性免疫球蛋白能有效中和SARS病毒,且与灭活SARS疫苗具有强反应性.

重组人白细胞介素-18的纯化、复性及其活性检测

目的纯化和复性rhIL-18,并测定其生物学活性.方法采用提取包涵体、分子筛层析及离子交换层析的方法纯化rhIL-18,经稀释法复性,用IL-18诱导PBMC产生IFN-γ,ELISA法检测上清中IFN-γ的水平.结果rhIL-18纯度大于95%,复性回收率达30%以上,获得的产品可诱导PBMC产生大量的IFN-γ,且呈剂量依赖关系.结论该纯化、复性方法为大量生产rhIL-18打下了基础.

重组人干扰素α2b喷雾剂的研制

目的重组人干扰素α2b(以下简称为rIFNα2b)喷雾剂的试制及临床前实验.方法将重组人干扰素α2b原液进行稀释,调整pH和渗透压,加入适宜稳定剂,除菌过滤后分装于带有定量喷雾装置的棕色玻璃瓶.对配制好的制品分别进行理化和生物学试验、稳定性试验、鼻腔局部刺激性试验、急性毒性试验、长期毒性试验和动物体内抗病毒试验等.结果连续3批制品经检定各项指标均合格,2～8℃保存24个月后生物学活性无明显下降,使用安全,无不良反应.其他各项检定指标均符合现行<中国药典>的要求.结论研制的rIFNα2b喷雾剂安全、稳定,具有一定的抗病毒作用和潜在的临床应用价值.

冻干水痘减毒活疫苗接种反应及免疫效果观察

目的了解冻干水痘毒活疫苗接种后的反应和免疫效果,为进行大规模水痘疫苗接种提供依据.方法在辖区内随机选择125名1周岁以上的儿童,接种冻干水痘减毒活疫苗.结果125名儿童均未发现不良反应;血清抗体阳转率为92.86%,GMT为12.93.免疫前后抗体水平差异有非常显著意义(t=5.87,P＞0.001).结论冻干水痘减毒活疫苗接种后临床反应轻微,免疫效果理想.

从猪血中提取纯化凝血酶方法的改进

凝血酶(Thrombin)是在血液凝固系统中起重要作用的丝氨酸蛋白水解酶,具有较高的专一性,是近几年来国内开发的一种新型速效局部止血药.国内外对牛和人的凝血酶制备作了大量研究,但对猪凝血酶的研究报道较少,而且其制备工艺复杂,技术要求高,不利于工业化生产.我国生猪产量位居世界第一,年产猪血约10万吨.这些猪血除少量以简单的血粉形式被利用外,绝大部分以污水的形式被排放掉,造成了极大的资源浪费和环境污染.从猪血中提取凝血酶既可以充分利用猪血资源,又可以减少因排放而造成的环境污染.因而具有重大的社会意义.

《免疫接种的反应和处理》征订启事

第十五届欧洲临床微生物学和传染性疾病大会在丹麦哥本哈根举行