中国生物制品学杂志
Chinese Journal of Biologicals 중국생물제품학잡지
- 主管单位： 中华人民共和国卫生部
- 主办单位： 中华预防医学会,长春生物制品研究所有限责任公司
- 影响因子： 0.41
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1004-5503
- 国内刊号： 22-1197/Q
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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神经细胞黏附分子样蛋白对小鼠NK细胞活性的影响
目的研究神经细胞黏附分子样蛋白对小鼠NK细胞活性的影响.方法将神经细胞粘附分子样蛋白的编码基因连接在补体C3d基因的下游,构建融合基因,再将此融合基因克隆入真核细胞表达质粒.用此重组质粒免疫小鼠,检测小鼠体内的抗体和NK细胞的活性.结果小鼠体内产生了神经细胞粘附分子样蛋白的特异性抗体,而且小鼠脾细胞的NK活性增强.结论神经细胞粘附分子样蛋白可能具有抑制NK细胞的活性,在被特异性抗体识别和结合后,这种抑制作用减弱或消失.
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人乳头瘤病毒16型L1 N-端主要抗原基因的原核表达
目的获得序列正确的人乳头瘤病毒(HPV)16型L1 N-端主要抗原基因,构建其原核表达载体,并进行诱导表达.方法采用PCR法从宫颈癌组织中获得HPV16型L1 N-端主要基因重组表达质粒,转化E.coli DH5α,42℃诱导表达,Western blot分析表达产物.结果获得了序列正确的人乳头瘤病毒HPV16型L1 N-端主要基因,相对分子质量约为51 000.表达蛋白能与乳头瘤病毒抗体及乳头瘤病毒感染患者的血清发生抗原抗体反应.结论已成功构建HPV16型L1 N-端主要基因表达载体,并获得有效表达.
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人纤溶酶原饼环区5蛋白的原核表达体系的建立
目的构建人纤溶酶原饼环区5(hPK-5)蛋白原核表达载体,并进行表达和鉴定,为获取大量高纯度、具有生物活性的hPK-5蛋白奠定基础.方法以纤溶酶原cDNA为模板,PCR扩增hPK-5基因,经酶切后构建表达载体pBV220/hPK-5,转入大肠杆菌JM109进行温控诱导表达,表达产物经纯化、复性后,检测其抑制鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)血管新生的生物学活性.结果带有pBV220/hPK-5的大肠杆菌表达的目的蛋白占菌体总蛋白的34.8%,其表达蛋白具有His-tag抗原活性和野生活性.结论已成功构建了pBV220/hPK-5重组质粒,并在大肠杆菌中获得高效表达.
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重组人肝细胞生长因子α在大肠杆菌中的表达及活性检测
目的建立人肝细胞生长因子α链(rhHGFα)高效原核表达体系.方法以pRC/CMV-hHGF为模板,扩增hHGFα cDNA,继以XhoI酶切为386和954 bp 2个片段,亚克隆入pBSKS,DNA测序后,将上述两个片段与pBV220连接,构建重组质粒.转化E.coli JM109、DH5α和BL21(DE3),筛选高效表达菌株.分离包涵体,8 mol/L尿素溶解,梯度复性后利用反相和凝胶过滤层析纯化重组蛋白,经MTT法检测活性.结果所克隆的hHGFα基因序列正确,筛选出高效表达菌株BY,经SDS-PAGE显示在相对分子质量52 000处出现特异的目的蛋白表达带,表达量约占全菌蛋白的25%.表达产物以不溶性的包涵体(IBs)形式存在,复性后具有刺激原代大鼠肝细胞生长的作用.结论已成功表达了rhHGFα蛋白,为研究rhHGFα结构与功能及中试生产奠定了基础.
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呋喃唑酮抑制Wistar大鼠精子细胞生成的研究
目的探讨呋喃唑酮(NFZ)对成年雄性大鼠生精细胞的抑制作用及其副作用.方法以Wistar大鼠为模型,灌胃法给药,采用组织切片及生物化学方法进行分析.结果一定剂量的NFZ可以特异性抑制成年大鼠的精子细胞生成,而对睾丸的基本结构无损害,对其它脏器无伤害.此种抑制生精作用为可逆性,停药后较短时间即可恢复正常生育,子代发育正常.结论呋喃唑酮有可能作为男性避孕药.
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弓形虫信号转导蛋白14-3-3的高效表达及免疫学诊断的初探
目的构建弓形虫信号转导蛋白14-3-3基因的重组质粒,并在E.coli中高效表达,用于免疫学诊断.方法以限制性内切酶EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切质粒pGEM-T/Toxo-14-3-3,获得弓形虫信号转导蛋白14-3-3编码基因片段,插入载体pET28a,转化E.coli BL21,IPTG诱导表达,在非变性条件下纯化融合的表达产物,通过Westernblot和ELISA检测其特异的免疫反应性.结果所构建的弓形虫信号转导蛋白14-3-3(rToxo-14-3-3)在原核系统中的重组表达质粒,以6个His融合蛋白的形式得到高效表达,其表达量占细菌裂解液中总蛋白量的49.2%.该重组抗原经纯化能被弓形虫感染的人血清所识别.用rToxo-14-3-3作为抗原,ELISA检测弓形虫病具有高度的敏感性和特异性.结论rToxo-14-3-3在大肠杆菌中已得到高效表达,该重组抗原能有效检测弓形虫的感染,可用于弓形虫病诊断试剂盒的研制.
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HIV-2 Gp105基因重组鸡痘病毒的构建及鉴定
目的研制预防HIV-2的重组鸡痘病毒活载体疫苗.方法将HIV-2Gp105基因插入鸡痘病毒转移载体pUTA2复合启动子的下游,构建鸡痘病毒转移载体pUTA2-Gp105.将该重组质粒与鸡痘病毒(FPV)282E4株共转染鸡胚成纤维细胞(CEF),进行同源重组.通过3次BrdU加压筛选,以PCR、RT-PCR、IFA和Western blot鉴定重组病毒.结果从重组鸡痘病毒的基因组和总RNA中能扩增出大小为653 bp的目的基因;感染重组病毒的CEF细胞与特异性荧光抗体发生阳性反应;表达产物与人HIV-2血清发生阳性反应,目的蛋白相对分子质量约为105 000.结论成功获得1株重组鸡痘病毒,可正确表达HIV-2 Gp105基因.
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噬菌体展示抗乙型肝炎病毒表面抗原Fab抗体分子的筛选和序列分析
目的从自建的免疫噬菌体展示Fab抗体库中获得抗乙型肝炎病毒表面抗原Fab抗体分子,并进行基因序列分析.方法采用纯化的乙型肝炎病毒表面抗原作为包被抗原,对自建的4×105Fab噬菌体抗体库进行富集筛选,从阳性强的次级库中挑选单个克隆菌,分别进行噬菌体ELISA、PCR和限制性内切酶鉴定后,再选取三者均为阳性的克隆菌进行基因序列分析.结果共挑选了60个单克隆菌株,其中噬菌体ELISA阳性有27个,阳性率为45%;PCR鉴定均为相应大小片段;限制性内切酶鉴定表明27个阳性克隆菌中有13个具有约1 500 bp的片段,其余均为约750 bp大小;BstOI酶切鉴定表明各克隆菌的酶切方式不同;选取5个含约1 500 bp片段和2个含约750 bp片段的克隆菌株,经测序均为人免疫球蛋白基因,且重链分别属于VH3、VH4、VH5家族,轻链分别属于L5、L6、L8和012/02家族.结论从自建的免疫噬菌体展示Fab抗体库中成功地获得了抗乙型肝炎病毒表面抗原Fab抗体分子.表明所构建的抗乙型肝炎病毒表面抗原的Fab抗体库的抗体基因具有多样性.
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检测疫苗残余牛血清ELISA试剂的质量控制
目的检测疫苗残余牛血清ELISA试剂的质量控制.方法将用于生产的10批牛血清混合后,免疫家兔制备抗血清,以纯化抗牛血清兔IgG作为包被抗体、HRP-酶标抗体作为指标抗体,采用ELISA双抗体夹心法进行线性范围、精密度、准确度、特异性评价等一系列检测.结果兔抗牛免疫血清双扩效价可达1:16,免疫血清、纯化抗体和酶标抗体均含有抗牛血清白蛋白及牛IgG等多种蛋白成分的抗体;检测疫苗中残余牛血清含量佳线性范围为0.78～25 ng/ml,精密度(回收率为80%～112.5%,CV为2.5%～9.0%)和准确度(回收率为96.7%～112.5%,CV为1.4%～9.4%)良好,检测限度为1.5 ng/ml,检测限量为3 ng/ml;与正常马、兔、豚鼠血清以及不同病毒性疫苗基质液均无交叉反应,可定量检测不同病毒性疫苗中的残余牛血清.结论所制备的ELISA试剂特异性强,灵敏度高,重复性好,适用于常规疫苗中残余牛血清的检测.
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FQ-PCR试剂质量评估方法的建立及评价
本文介绍一种简捷、实用的荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)试剂质检评估方法,具体方法是随机选择不同品牌HBV DNA的FQ-PCR试剂,分别将其编为a、b和c.
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应用反相HPLC法测定生物制品中苯酚含量
目的采用反相高效液相色谱法测定3种生物制品中苯酚含量.方法以C18化学键合硅胶为固定相,以乙腈/水(70:30,V/V)为流动相,UV检测波长278 nm进行测定.结果平均回收率为98.5%(n=6),3种生物制品6次独立测定的相对标准偏差分别为伤寒Vi RSD=0.77%,PPD RSD=1.61%,气管炎疫苗RSD=1.44%,苯酚在0.05～0.5 mg/ml范围内,浓度与吸收面积呈良好的线性关系.结论本法操作简单,结果准确,重复性好,可用于实际检测分析.
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聚乙二醇化重组人干扰素α2b的质量检测
目的建立聚乙二醇化重组人干扰索α2b(PEG-rhIFNα2b)的质量检测方法.方法采用Wish细胞-VSV病毒系统,以CPE法测定干扰素的生物学活性,基质辅助激光解吸附飞行时间质谱法测定相对分子质量,反向高效液相法(RP-HPLC)测定纯度,溴化氰裂解-SDS-PAGE法测定肽图,等电聚焦电泳法测定等电点,紫外分光光度法测定紫外吸收光谱.结果聚乙二醇化重组人干扰素α2b的比活为6.0×106～10.0×106 IU/mg蛋白,相对分子质量约为62 600,等电点在5.20～6.55之间,紫外大吸收峰约在278 nm波长处.结论所建立的检测方法可控制聚乙二醇化重组人干扰素α2b质量.
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生物制品中支原体检定方法的验证及统计学评价
目的确定稳定、准确而可靠的支原体检测方法.方法采用培养法与DNA荧光染色法分别检测已知阴阳性样品,对各组检测结果进行比较,验证其试验内及试验间重复性;检测待检样品,分别验证它们的可靠性.并用统计学方法评价它们的准确性及诊断价值.结果培养法试验内、间重复性均在95%以上,可靠性Kappa值为0.857,试验稳定性优于荧光法.而荧光法灵敏度较高.两种方法同时检测相同待检样品时,检测结果符合率为93.1%,两种方法联合检测的试验内及试验间重复性均在90%以上,可靠性Kappa值为0.88,并且其诊断指标(尤登指数、阳性似然比、验后概率及灵敏度、特异度)均较高,尤其是阳性似然比为293,而其验后概率为99.2%.用此联合系列检测方法共检测了61批次生物样品,有10批次检出有支原体污染.结论两种方法联合检测支原体重复性、可靠性及准确性指标均较高,是稳定、准确并可靠的检定方法.
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重组(酵母)恶性疟疾疫苗抗原PfCP-2及其制剂质量分析
目的对第二军医大学(二军大)和上海万兴生物制药有限公司(万兴公司)研制的重组(酵母)恶性疟疾疫苗抗原PfCP-2及其制剂进行分析.方法按我所和申报公司共同拟定的<重组(酵母)恶性疟疾疫苗制造与检定规程>要求进行质量检定.结果PfCP-2浓度为2.1 mg/ml,纯度达99%以上,连续生产的3批抗原质量稳定;所制备的疫苗经检定各项指标全部合格.结论PfCP-2抗原性强,其疫苗安全免疫效果好.
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一种神经毒素多肽的分离纯化
目的分离纯化一种神经毒素生物大分子,制备单体以供研究.方法对已经过初步提纯的神经毒素采用RP-HPLC等色谱方法进一步纯化.结果用二极管阵列检测及质谱检测表明,终所得的多肽组分为单体.结论本法对制备少量神经毒素多肽单体具有参考价值.
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两种方法检测人血清中抗水痘抗体的比较
水痘-带状疱疹病毒(VZV)抗体检测的方法主要有膜抗原免疫荧光抗体检测试验(FAMA)和ELISA等.FAMA是传统的"金标准",但操作繁琐,时间较长,ELISA简便易行,可自动化操作,时间短,适于大规模筛选样本.目前市售ELISA试剂盒均采用全病毒抗原包被,敏感性较差,只有个别疫苗制造公司开发了糖蛋白ELISA(gpELISA)试剂盒,但尚未商业化.随着水痘疫苗的广泛应用,需要对现有检测方法进行评价.为此,本文借对水痘疫苗进行临床评价之机,对两种方法进行比较.
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重组Neurturin对大鼠面神经损伤模型中面神经元的保护作用
目的建立大鼠面神经损伤实验动物模型,观察重组Neurturin对面神经元的营养与保护作用.方法以切断面神经总干的方法,造成大鼠两侧面神经损伤模型,在右侧面神经损伤处给予重组Neurturin,左侧作为对照侧,给予PBS,分别于手术后7、14、28和42 d,取脑组织行双侧面神经核切片,甲苯胺兰染色,观察面神经元形态,分别计数两侧面神经元数量.结果给予重组Neurturin的一侧大鼠面神经核大部分细胞仍保持正常形态,对照侧面神经核神经细胞多呈空泡样变性、坏死,部分正常形态已消失;手术后7及14 d,给药一侧存活的神经元数量明显比对照侧多,28和42 d差异无显著意义.结论重组Neurturin对损伤的大鼠面神经核神经元细胞具有营养和保护作用.
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双价痢疾结合疫苗的安全性及免疫原性
目的研究双价痢疾结合疫苗的安全性及免疫原性.方法将福氏2a O-SP-rEPA结合疫苗和宋内氏O-SP-rEPA结合疫苗混合制备成双价痢疾结合疫苗,对该双价结合疫苗的安全性及免疫原性与痢疾单价结合疫苗进行比较.结果双价痢疾结合疫苗安全可靠,在4℃放置0月、6月、12月与单价结合疫苗相比,小鼠血清抗体应答水平差异无显著性意义.结论混合后没有改变两个单价结合疫苗的特性,且稳定性良好,可预防福氏2a、宋内氏痢疾菌所引起的感染.
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利用DNA改组筛选高活性抗凝血酶Ⅲ
目的利用DNA改组技术大幅度提高抗凝血酶Ⅲ(AT-Ⅲ)的生物活性.方法采用RQ1 DNase Ⅰ不完全酶解ST-Ⅲ基因,产生长度为50～100 bp的随机片段,用低熔点胶回收.无引物PCR从小片段组装成大片段,通过有引物PCR得到正确大小的片段.线性化的质粒通过电转转入毕赤酵母GS115细胞.结果获得了5株高活性的克隆.结论探索了在毕赤酶母进行DNA改组和筛选的方法和路线,成功进行了AT-Ⅲ的改组,并为其它分子的改组提供借鉴.
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人组织激肽释放酶成熟蛋白的纯化及活性分析
目的制备纯化人组织激肽释放酶,并检测其生物活性,为中试放大及纯化工艺奠定基础.方法使用麦芽糖(MBP)融合分泌载体pMBP-P,构建并筛选出1株工程菌株,在6L培养基中经IPIG诱导表达人组织激肽释放酶融合蛋白.目的蛋白经亲和层析纯化及凝血酶切割后,采用电位滴度法测定其活力.结果筛选出的工程菌株表达相对分子质量约70000的激肽释放酶融合蛋白,大小与预计大小相符.纯化后共获得28 mg蛋白,并具有水解苯甲酰精胺酸乙酯(BAEE)的能力.结论成功进行了人组织激肽释放酶融合成熟蛋白的小量制备,经纯化后的产物具有生物活性,为中试放大、纯化工艺研究奠定了基础.
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卡介菌基因组DNA制备工艺研究
目的摸索制备高纯度卡介菌(Mycobacterium bovis Bacillus Calmette-Guerin,BCG)基因组DNA(BCG-DNA)的制备工艺.方法采用超声破碎结核杆菌,加热使蛋白变性初步去除菌体蛋白,进一步经蛋白酶消化,乙醇沉淀DNA组分,再经离子交换和凝胶过滤层析,去除残余菌体蛋白和多糖,精制DNA,并进行质量检测.结果所制备的BCG-DNA片段大小介于200～250 bp之间,纯度大于95%,蛋白含量占0.1%,多糖残留占3.5%.结论此方法制备的BCG-DNA纯度较高,且无有机溶剂残留,适用于BCG-DNA制备.
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高效价特异性HER2ME抗体的制备及鉴定
目的制备高特异性HER2ME(Multi-epitope of human epidermis growth factor receptor 2)抗体.方法将表达HER2ME基因的pcDNA3质粒与CpG混合免疫C57小鼠.结果得到了HER2ME蛋白特异性抗血清.该血清与普通蛋白抗原免疫产生的血清相比,抗体特异性极高.未经纯化进行免疫印迹实验,显示出高度特异性.结论表达质粒与CpG混合免疫可简单快速获得高特异性HER2ME抗体.
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A、B、E、F型肉毒抗毒素的制备与检定
目的制备马抗肉毒(Botulinum)A、B、E、F型抗毒素.方法菌种经过复苏分离与检定后,采用产毒培养、酸沉、盐析及脱毒等步骤,制备肉毒A、B、E、F四型类毒素(Toxoid)和试验毒素(Test toxin),免疫健康马匹.结果各型血浆效价均超过2000年版<中国生物制品规程>中对于抗毒素的要求,B型与F型的效价均超过2倍以上,A型与E型也达到较好的应答水平.结论已成功制备四型肉毒抗毒素.
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国产流行性感冒裂解疫苗临床反应与免疫原性观察
目的评价国产流行性感冒裂解疫苗的临床反应和免疫原性.方法按整群随机抽样原则,以进口同类疫苗作为对照开展现场临床观察;比较两种疫苗免疫后的反应率、抗体阳转率、保护率及几何平均滴度(GMT).结果试验组及对照组1针接种后全身反应率分别为1.79%和3.32%,局部反应率分别为1.54%和2.37%;试验组、对照组中的婴幼儿2针全程免疫后全身反应率分别为5.08%和7.69%,局部反应率分别为5.08%和3.85%.试验组免后H1N1、H3N2、B型抗体阳转率分别为91.36%、86.36%和83.18%,对照组分别为93.13%、84.73%和75.57%,两组比较差异无显著意义.非易感者免后H1N1、H3N2、B型抗体GMT与免前相比,试验组分别为免前的18.28、9.30和8.61倍,对照组分别为免前的18.16、8.45和5.77倍.试验组免后H1 N1、H3N2、B型抗体保护率分别为86.82%、99.09%和96.36%,对照组分别为96.18%、96.18%和92.37%.结论国产流感裂解疫苗具有与进口同类疫苗相似的临床反应及良好的免疫原性.
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森林脑炎纯化疫苗和灭活疫苗的接种反应及免疫效果观察
目的观察森林脑炎纯化疫苗及森林脑炎灭活疫苗的接种反应和免疫效果.方法两种疫苗分别于接种后,观察局部反应和全身反应,免疫血清用酶联免疫吸附法(FLISA)和蚀斑减少试验法检测其中和抗体效价.结果森林脑炎灭活疫苗局部反应和全身反应的发生率分别为23.08%和15.38%,人群抗体2针接种后约1/3检出阳性,3针接种后约1/2检出阳性;森林脑炎纯化疫苗无1例全身反应,局部反应为注射部位一过性轻度疼痛,发生率为1.13%,2针接种后85%人检出阳性,免疫剂量1.0 ml组优于0.5 ml组,差异有显著意义.结论森林脑炎灭活疫苗副反应发生率高,免疫效果差,森林脑炎纯化疫苗副反应轻微,免疫后中和抗体阳转率高.
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静脉注射人免疫球蛋白的质量控制
静脉注射用人免疫球蛋白(IVIG)在抗体置换、免疫调节等方面有着广泛的应用.由于IVIG经静脉注射,且用量较大,其质量控制尤为重要.控制IVIG质量主要包括IgG的完整性、抗补体活性(ACA)、多聚体含量、杂蛋白含量、抗体效价、病毒安全性等方面.
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开发用于筛检试验的体外诊断试剂应注意的问题
按临床使用目的,可以将诊断试剂分为用于"筛检试验(Screening test)"和用于"临床诊断(Diagnostic test)"两类.
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美国FDA关于《由生物工程操作的植物来源的人与动物用药品、生物制品和医疗器械工业生产指南(草案)》(讨论稿)介绍
本文简要介绍美国FDA出台的有关植物来源的生物制品的工业生产指南(草案)的有关情况.
| 年 | 期数 |
| 2019 | 01 02 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 10 11 12 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2001 | 01 02 03 04 |
| 2000 | 01 02 03 04 |
