幽门螺杆菌UreB基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

目的:为了研制口服幽门螺杆菌疫苗,构建表达幽门螺杆菌的保护性抗原成分UreB蛋白的基因工程菌株.方法:用PCR方法扩增UreB基因片段,将其克隆至pET28a质粒上,转化E.coli BL21(DE3),经IPlG诱导表达,得到rUreB蛋白.结果:经测序,UreB基因片段由1710bp组成,编码569个氨基酸残基.与GenBank报道的脲酶核苷酸序列同源性高为97%,氨基酸同源性为99%.经SDS-PAGE检测表明,rUreB基因表达的蛋白质相对分子质量约为6.4 kDa,含量占细菌总蛋白的29.5%.经Ni2+柱亲和层析、GSH复性后,rUreB表现了脲酶活性,活性为32.5 U/mg.结论:表达产物确为幽门螺杆菌脲酶B亚基,这为研制幽门螺杆菌口服疫苗打下了基础.

HPLC-荧光法测定大鼠血浆中巴罗沙星的含量及其药代动力学研究

目的:建立了大鼠血浆中巴罗沙星浓度的HPLC-荧光测定方法,研究巴罗沙星在大鼠体内药代动力学行为.方法:色谱柱为C18Hypersil(大连依立特),5μm,100mm×4.6mm,I.D,流动相为0.05mol/L的KH2PO4(磷酸调pH=3)-乙腈(80:20,v/v),荧光检测激发波长295nm、发射波长500nm,测定了大鼠静脉注射巴罗沙星20,10,5 mg/kg后血药浓度-时间过程和蛋白结合率.结果:低检测浓度0.078μg/ml,回收率大于80%,日间和日内的变异系数小于5%,线性范围为0.078～20.00μg/ml,符合生物样品分析的要求.大鼠静脉注射巴罗沙星20,10和5mg/kg后,T1/2β分别为8.95、7.78和5.10h.AUCo→1分别为26.02、17.23和6.79μg·h/ml.峰浓度分别为9.59、6.19和2.44μg/ml.巴罗沙星与大鼠蛋白结合率为(35.60±7.90)%.结论:建立的HPLC-荧光法适合于巴罗沙星动物体内药代动力学研究.

聚丙烯酰胺凝胶银染技术在半定量RT-PCR中的应用

目的:探讨聚丙烯酰胺凝胶银染技术在半定量RT-PCR中的应用.方法:提取正常组大鼠和链脲佐菌素致糖尿病模型组大鼠心肌组织总RNA,逆转录得到cDNA第一链,以此为模板进行PCR扩增,利用聚丙烯酰胺凝胶电泳和DNA银染技术分析不同循环数及模板量与PCR产物量间的关系.结果:PCR扩增反应在第20～25个循环,起始模板量为0.8～2.4μg时,PCR产物量与起始模板量呈现较好的线性关系.结论:通过控制起始模板量,减少PCR循环数使目的基因的扩增处于PCR扩增指数期,利用聚丙烯酰胺凝胶电泳和DM银染技术,可以通过比较PCR扩增产物量的变化以分析目的基因表达水平的差异.

HPLC测定四季青中5种酚酸类成分的含量

目的:建立一种同时测定四季青中5种酚酸类成分的含量测定方法.方法:采用5μm的Hypersil BDS-C18(250mm×4mm)色谱柱;流动相为乙腈-水(加入适量85%甲酸);流速1.0ml/min;柱温20℃;采用梯度洗脱方法使5种酚酸类成分达到完全分离;DAD检测器记录260nm和330nm处的色谱峰信号.结果:5种酚酸类成分达到完全分离,该测定方法精密度与重复性较好,样品在48h内有较好的稳定性,加样回收率均在95%～105%之间.结论:首次建立了同时测定四季青中5种酚酸类成分的含量测定方法,可以用于同时测定四季青中的5种酚酸类成分的含量.

端粒酶抑制剂的研究--与G-四链体相互作用的菲啶衍生物的设计、合成与生物活性研究

目的:寻找具有阳离子型菲啶衍生物的强效端粒酶抑制剂.方法:以溴乙啶为先导化合物设计合成了两个系列共10个目标化合物.测试了所合成化合物的抗肿瘤活性.结果:目标化合物结构经红外光谱、核磁共振氢谱和质谱确证.初步药理实验表明,化合物Ib,Ie,Ⅱa,Ⅱe等4个化合物有较强的抗肿瘤活性,其IC50值均在μmol/L浓度水平.

金丝桃素对脑嗅球损伤大鼠行为学及室管膜和室管膜下细胞增殖的影响

目的:研究金丝桃素治疗抑郁症的机理.方法:采用损毁大鼠脑嗅球作为抑郁症动物模型,采用行为学和免疫组织化学方法,研究金丝桃素的作用机理.结果:敞箱实验中,金丝桃素可显著降低嗅球损毁大鼠走格数和站立数,跳台实验中,金丝桃素可显著延长训练的潜伏期和缩短测试期的停留时间,免疫组织化学研究发现金丝桃素各剂量组大鼠侧脑室外侧和背外侧角的室管膜及室管膜下细胞明显增生,细胞由单层变成了多层,向胼胝体迁移,并强表达增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA).结论:金丝桃素通过促进室管膜及室管膜下细胞增殖,迁移至嗅球,分化为新的神经元,从而改善嗅球损毁大鼠的抑郁症状.

清开灵制剂的X射线衍射Fourier指纹图谱分析

目的:建立中成药清开灵制剂鉴定分析的指纹图谱分析.方法:利用粉末X射线衍射Fourier图谱分析法,对不同厂家不同剂型的中成药进行分析.结果:获得不同厂家不同剂型的清开灵X射线衍射Fourier指纹图谱,包括衍射图谱几何拓扑和衍射特征标记峰.结论:本方法可用于清开灵制剂的鉴定.

131碘肿瘤细胞核人鼠嵌合单抗药代动力学研究

目的:研究131碘肿瘤细胞核人鼠嵌合单抗(131I-chTNT)的药代动力学.方法:9例肿瘤患者,体重50±6kg,单次静脉推注131I-chTNT29.6±3.7 MBq/kg后测量各时间点血、尿样本中药物的放射性.应用高效液相色谱法检测131I-chTNT在体内的稳定性和代谢情况.采用连续显像法估算各时间点全身及各器官的放射性,并将原始数据转换为注入剂量的百分率(ID,%).结果:72 h内血清原形131I-chTNT超过95%、168 h为(86±6)%.血清药-时曲线符合静脉给药二室模型,t1/2a4.93±9.36h,t1/2β 61.7±21.2 h,AUC 29.1±11.6 MBq·h·ml-1,CL 53.9±24.6ml/h.131碘是131I-chTNT的代谢产物,1周累积经尿液排出注射剂量的(33±9)%.注射131I-chTNT后放射性主要集中在肺、肝、肿瘤组织,脑组织少,甲状腺放射性多逐渐浓聚.肿瘤组织放射性24h达到大值,T/L(瘤/非瘤)值呈逐渐增大的趋势多在3～7 d达到大值(1.25～3.73).肿瘤组织24,72,168 h的ID值分别为(2.8±2.0)%、(1.9±1.3)%和(0.9±0.6)%.结论:131I-chTNT药代动力学符合二室模型.

儿茶素和漆黄素对铁超载模型大鼠血脂的影响

目的:分别从中药苞蔷薇根、叶醇提物中分离得到(+)-儿茶素[(+)-Catechin,CAT]、漆黄素(Fisetin,FIS),通过铁超载模型来观察CAT和FIS对铁中毒大鼠血脂的影响.方法:定期饲养大鼠含羰基铁的饲料造成大鼠体内铁超载,给药组在造模的同时给予CAT、FIS或去铁胺(desferrioxamine methane sulphonate,DFO).给药3个月后,检测血清中的低密度脂蛋白胆固醇(LDL-CHO)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-CHO)、总胆固醇(T-CHO)、甘油三脂(TG)的含量以及血清铁水平.结果:CAT、FIS能非常显著地抑制铁超载大鼠的体重下降,降低血清中铁的含量,抑制血脂中LDL、T-CHO水平的升高,CAT还可以抑制TG水平的升高.结论:CAT和FIS对铁超载引起的血脂异常有保护作用.

酸性成纤维细胞生长因子在培养的乳鼠心肌细胞中分泌表达及其意义

目的:研究非促分裂型haFGF(non-mitogenic human acidic fibroblast growth factor,nm-haFGF)真核表达载体(pSecTag/nm-haFGF)在原代培养的新生SD乳鼠心肌细胞中的分泌表达及其对心肌细胞生理特性的影响.方法:采用脂质体转染的方法将真核表达载体pSecTag/nm-haFGF转染原代培养的心肌细胞,转染48h后用免疫印迹法(western blotting)检测nm-haFGF的表达状况,同时用H2O2造成心肌细胞损伤,观察nn-haFGF对心肌细胞的保护作用,并观察心肌细胞生理特性的变化.结果:转染后48h,心肌细胞在转染nm-haFGF基因后能够表达目标蛋白,而空载体实验组和未转染组均为阴性;MTF法检测结果表明,nn-haFGF基因的表达产物具有生物活性,对H2O2造成的心肌细胞损伤有一定的保护作用;pSecTag/nm-haFGF组的细胞搏动率明显高于阴性对照组,nn-haFGF基因的表达产物对维持心肌细胞的生理特性具有积极的作用.结论:转染nh-haFGF cDNA能够在原代培养的SD乳鼠心肌细胞中分泌表达,并具有其相应的生理活性,对H2O2损伤的心肌细胞具有保护作用.

HPLC测定更昔洛韦中有关物质的含量

目的:应用HPLC法测定更昔洛韦中的鸟嘌呤、阿昔洛韦及其他有关物质.方法:用Phenomenex Luna C18色谱柱,以0.02 mol/L醋酸铵缓冲液(pH 4.5)-甲醇(95:5)为流动相,流速为1ml/min,检测波长为254nm.结果:低检出限阿昔洛韦为12.5ng、鸟嘌呤为20ng、其他有关物质以更昔洛韦计为20ng.更昔洛韦与鸟嘌呤、阿昔洛韦及其降解产物的分离度均能达到要求.结论:该法专属性强,结果准确,重现性好,灵敏度高,可用已知杂质法测定更昔洛韦中的鸟嘌呤、阿昔洛韦,用自身对照法测定其他有关物质.

利用杆状病毒载体高效表达人胰岛素样生长因子-1及其纯化的研究

目的:利用杆状病毒载体在家蚕幼虫中研制有生物学活性的重组人胰岛素样生长因子-1(rhIGF-1).方法:将15kDhIGF-1前体cDNA基因插入家蚕核型多角体病毒(BmNPV)转移载体pBakPAK8中,构建重组病毒BmNPV/IGF-l.用BmNPV/IGF-1感染家蚕幼虫,提取家蚕血淋巴液,采用亲和层析法纯化rhlGF-1,ELISA法测定rhIGF-1含量,用SDS-PAGE和Western-blot分析鉴定rhIGF-1纯度及免疫学活性,MTF法观察其对MCF-7细胞增殖的影响.结果:ELISA测定显示,BmNPV/IGF-1感染家蚕幼虫120h rhIGF-1含量达高值(23.36μg/ml).rhIGF-1纯度为40%,Westem-blot分析发现主要纯化产物为7.5 kD成熟hIGF-1.细胞活性刺激实验显示,纯化后rhIGF-11对MCF-7细胞促增殖能力明显优于来源于大肠杆菌的rhIGF-1产品.结论:实现了具有免疫学活性及生物学活性rhlGF-1在杆状病毒表达系统的高效表达,并使rhIGF-1得到初步纯化.

组蛋白去乙酰化酶抑制剂的QSAR研究

目的:研究吲哚酰胺异羟肟酸类组蛋白去乙酰化酶(HI)ACs)抑制剂的抗肿瘤定量构效关系.方法:采用经典Hansch分析方法.结果:获得相关性较好的定量构效关系方程,表明此类HDACs抑制剂的抗肿瘤活性与氮上电荷、范德华面积、EHOMO-ELUMO、Logp和Kappa 3相关,并能很好解释HDLP与TSA复合物的作用机理.

中心多点等距设计法优化雌二醇聚乳酸羟基乙酸微球的制备工艺

目的:中心多点等距设计法优化雌二醇聚乳酸羟基乙酸微球制备工艺,提高该制剂质量并对其特性进行预测.方法:微球用油/水乳剂溶剂挥发法制备,自变量为外水相聚乙烯醇浓度、有机相聚乳酸羟基乙酸浓度和理论载药量,以微球包封率、产率、平均粒径和跨距为因变量对各自变量的各水平进行多元线性回归和二项式拟合,根据因变量面法选择较佳工艺条件并对优化区间进行预测分析.结果:包封率、产率、平均粒径和跨距用二项式模型拟合较好,复相关系数r分别为0.9796,0.9097,0.9138,0.8455,包封率、平均粒径和跨距的预测值与实测值的偏差分别为-3.72%,6.47%和10.06%.结论:中心多点等距设计法优化处方和制备工艺,对试验结果可较好的进行预测,是处方和制备工艺优化筛选的较佳方法.

RP-HPLC测定中药材中甲霜灵的残留量

目的:建立中药材中甲霜灵农药残留量的RP-HPLC测定方法.方法:用丙酮超声波提取,二氯甲烷液-液分配萃取,中性Al2O3色谱柱净化,采用YWG-C18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm),以乙腈-水(40:60)为流动相,检测波长为220nm;进样量为20μl.结果:甲霜灵添加回收率为91.6%～97.9%,RSD为1.2%～5.0%;小检测量(S/N=3)为:3.6×10-10g.结论:本方法分离净化效果好,选择性强,灵敏度高,操作简便等.

黑面神化学成分的研究

目的:研究中草药黑面神的化学成分.方法:黑面神嫩枝和叶子用95%乙醇回流提取,提取物分别用氯仿、正丁醇萃取,将氯仿部位和正丁醇部位分别进行硅胶柱层析,其中正丁醇部位的化合物采用重结晶、Sephadex LH-20柱层析方法进行纯化;通过IR、UV、MS、1HNMR和13CNMR等波谱解析方法以及和化合物标准品对比的方法进行结构鉴定.结果:从黑面神氯仿部位分离得到了8个化合物,分别鉴定为正丁基-β-D-吡喃果糖苷(n-butyl-β-D-fructopyranoside,Ⅰ)、乙基-β-D-吡喃果糖苷(ethyl-β-D-fructopyranoside,Ⅱ)、阿魏酸二十四烷醇酯(tetracosylferulate,Ⅲ)、β-谷甾醇(β-sitosterol,Ⅳ)、正三十二烷醇(n-dotriacontanol,V)、胡萝卜苷(daucosterol,Ⅵ)、熊果苷(arbutin,Ⅶ)和(-)-表儿茶素((-)-epicatechin,Ⅷ).结论:8个化合物均为首次从该植物中分离得到.

犬血浆中盐酸雷诺嗪LC-MS测定及药物动力学研究

目的:建立LC-MS法测定犬血浆中盐酸雷诺嗪浓度,研究犬ig和iv盐酸雷诺嗪后的药物动力学.方法:取血浆20μ1,加乙腈300μ1沉淀蛋白,离心后10μ1直接进样.色谱柱为Shim-pack ODS 5μm,150mm×2.0mm,I.D.;流动相为0.05%甲酸-乙腈(40:60,v/v).检测仪器为岛津LC-MS-2010四极杆质谱检测器,离子源为APCI源.检测离子m/z:雷诺嗪428.00,盐酸非洛普(DDPH)344.00.犬ig和iv雷诺嗪剂量为25mg/kg,不同时间取血,离心取血浆20μ1进行分析,估算药物动力学参数.结果:盐酸雷诺嗪的线性范围为0.039～10.00μg/ml,方法的回收率为79%～90%,日内和日间的精密度均小于10%.犬ig和iv雷诺嗪25mg/kg,估算的末端相半衰期分别为7.31±3.08和5.67±2.43h,犬ig后,测得的血药浓度峰时间和峰浓度分别为1.0±0.6 h和4.32±1.25μg/ml.测得绝对生物利用度约为(72.6±15.6)%.结论:建立的犬血浆中盐酸雷诺嗪LC-MS测定法适合药物动力学研究.雷诺嗪口服吸收快,吸收良好.

黄花倒水莲化学成分研究Ⅱ.

目的:对黄花倒水莲(Polygala fallax HemsL)的化学成分进行研究,为研究其药理活性提供物质基础.方法:采用柱层析方法进行化合物分离,通过波谱方法鉴定化合物结构.结果:从黄花倒水莲根甲醇提取物中分离得到6个化合物,分别鉴定为豆甾-7,22-二烯-3-O-β-吡喃葡萄糖苷(stigmasta-7,22-dien3-O-β-D-glucopyranoside)(I),远志皂苷(tenuifohn)(Ⅱ),reiniosideC(Ⅲ),reinoside A(Ⅳ),豆甾-7,22-二烯-3-醇(stgmasta-7,22-dien-3-ol)(V)和aralia cerebroside(Ⅵ).结论:除化合物Ⅲ外,其余化合物均为首次从该植物中分得,药理实验表明:化合物Ⅰ和化合物Ⅲ具有降低高胆固醇摄入模型小鼠血清胆固醇的作用.

左-甲状腺素诱导的大鼠肥大心肌中基质金属蛋白酶的变化及新内皮素受体拮抗剂CPU-0213的作用

目的:通过新内皮素受体拮抗剂CPU-0213对左-甲状腺素(L-thy)诱导的大鼠肥大心肌中基质金属蛋白酶(MMPs)的改变,探讨内皮素参与诱导心肌肥大和细胞外基质改变的机制.方法:雄性SD大鼠随机分成3组,除对照组外,大鼠每日给予L-thy(sc,0.4 mg/kg)共10 d,药物干预组在第7天时给新型内皮素受体拮抗剂CPU-0213(po,100mg/kg),连续3 d.动物处死后取大鼠心脏测定心肌组织中总胶原含量、MDA的含量及SOD活性.大鼠左心室的MMPs的活性由明胶酶谱法测定,Ⅰ型胶原基因(proa2(Ⅰ)coⅡagen)的基因表达由半定量RT-PCR方法确定.结果:L-thy心肌病组大鼠心肌中的总胶原含量减少,SOD活性下降,MDA含量增多,MMPs的活性被抑制.RT-PCR结果显示L-thy组的大鼠左心室proa2(Ⅰ)collagen的基因表达下调.给予CPU-0213干预后大鼠心肌总胶原含量及SOD活性上升,MDA含量减少,大鼠左心室中MMPs活性被抑制,左心室中proa2(Ⅰ)collagen的基因表达上调.结论:L-thy诱导的大鼠心肌肥大是一种缺少纤维化的肥大,肥大心肌中自由基增多且脂质膜受损.内皮素-1(ET-1)参与介导心肌MMPs活性的调节,新内皮素受体拮抗剂CPU-0213能明显上调proa2(Ⅰ)collagen的基因表达及改善心肌病理性重构.

雷公藤甲素聚乳酸纳米粒载药体系的研究

目的:研究聚乳酸包裹雷公藤甲素纳米粒的制备,并探讨其载药性质.方法:采用改良的自乳化溶剂蒸发法制备雷公藤甲素(TP)聚乳酸(PLA)纳米粒,考察各工艺因素对纳米粒粒径、包封率及载药量的影响,并通过透射电子显微镜(TEM)、动态激光粒度分析仪、傅立叶红外光谱(FT-IR)及X-射线粉末衍射(X-ray)初步研究了其载药性质.结果:优选出适合处方的包合工艺为:水相与有机相的比例为40:15(v/v),表面活性剂的浓度为1%,药物的浓度为0.3%,TP与PLA的比例为1:15(w/w),包封率为74.27%,载药量的百分率为1.36%,所得纳米粒形态光滑规整,其粒径分布均匀,FT-IR及X-ray表明TP被有效地包裹在纳米粒中.结论:此方法适合制备脂溶性药物聚合物纳米粒,适合大生产.

三种天然抗氧化剂清除自由基作用的研究

目的:比较3种天然抗氧化剂(茶多酚、银杏提取物和竹叶提取物)清除自由基的作用.方法:生物化学发光法(CuSO4-Vc-H2O2-酵母悬浮液体系化学发光检测法和次黄嘌呤-黄嘌呤氧化酶-鲁米诺体系化学发光检测法).结果:茶多酚(TP)、银杏提取物(EGb)、竹叶提取物(EBI)均具有清除OH-、O2-自由基的作用.TP、EGb、EBI清除O2-的IC50分别为3.09,3.425,3.593μg/ml.结论:3种天然抗氧化剂清除自由基能力茶多酚强,银杏提取物次之,竹叶提取物相对弱.

RP-HPLC测定人血浆中非那甾胺的含量及其药代动力学研究

目的:建立反相高效液相色谱法测定人体血浆中非那甾胺的药物浓度,并对供试制剂与参比制剂的生物等效性进行评价.方法:本试验血样处理采用固相萃取法,流动相为15mmol/L KH2PO4-乙腈(用浓磷酸调pH为2.85)(57:43),色谱柱为ODS C18柱,检测波长为215nm.人体药代动力学实验采用双周期交叉设计方案,将20名志愿受试者随机分为2组,分别口服非那甾胺供试片和对照片10mg.结果:线性范围为2～128ng/ml,低检测限为2ng/ml,方法回收率为101.4±2.7%,RSD＜5%,两制剂主要药代动力学参数经统计学分析无显著性差异.结论:方法可用于非那甾胺的含量测定.

我国将重点发展6个生物医药项目

2004年市场热销的3大类药品

"创新药物体内吸收、代谢、分布与排泄新理论与新模型研究"通过鉴定

中国药科大学新设置2个博士、硕士学位授权点

校长吴晓明教授被教育部聘为第五届教育部科学技术委员会学部委员

2003年中国医药科技10大新闻

国家新药高通量筛选体系建成

2003年世界新药