牛血清白蛋白左旋聚乳酸纤维的制备及体外评价

目的:以牛血清白蛋白(BSA)为生物模型药物,研究生物可降解左旋聚乳酸(PLLA)载药纤维的特性.方法:采用乳液湿纺工艺制备上载BSA的PLLA纤维,通过正交实验设计考察影响纤维载药率的因素,并对其体外释放特性进行研究.结果:载药纤维的成型性良好;载药率主要受到乳剂水相性质、固化液以及纺丝速度的影响;载药纤维可在体外较长时间零级可调控释放,并且温敏性聚(N-异丙基丙烯酰胺)(PNIPA)水凝胶的加入可有效控制药物释放.结论:采用乳液湿纺工艺制备的左旋聚乳酸生物可降解纤维有望成为新型蛋白类药物局部给药的长效植入缓释载体.

奈达铂与顺铂联合应用对人食管癌Eca-109细胞增殖与凋亡的影响

目的:研究奈达铂(NDP)联合顺铂(DDP)对人食管癌细胞株Eca-109的增殖及凋亡的影响,并探讨其机制.方法:采用MTT法对Eca-109细胞的增殖抑制率进行检测,中效原理法对联合用药的相互作用进行分析判断;采用流式细胞术分析早期凋亡细胞比例;采用RT-PCR和免疫细胞化学分析Ki-67及Bax、Bcl-2表达的变化.结果:NDP、DDP均明显抑制Eca-109细胞的生长,且呈剂量依赖性;两者联合使用时,低浓度时呈拮抗效应,高浓度时呈协同效应; IC50浓度的NDP、DDP和1/2 IC50(NDP)+1/2 IC50(DDP)对Eca-109细胞的抑制率分别为(41.85±4.1)%,(47.38±2.9)%和(52.45±0.9)%;流式细胞术结果表明正常对照组、NDP组、DDP组、联合用药组细胞早期凋亡率依次增加,单独用药组与联合用药组相比有差异;与单独用药组比较,联合用药组Ki-67、Bcl-2表达率显著降低,而Bax表达显著增高.结论:与两药高浓度单独应用相比,低浓度NDP和DDP联合应用对Eca-109细胞增殖的抑制作用和诱导凋亡能力均有明显增强.

硫普罗宁在大鼠体内的手性药动学

目的:研究左旋、右旋硫普罗宁在大鼠体内的立体选择性药动学过程.方法:大鼠静脉注射左旋、右旋及消旋硫普罗宁后,用柱前衍生化与LC-MS联用方法测定血浆中药物的浓度.色谱柱为Shimadzu VP-ODS C18(150 mm×2.0 mm,5.0 μm),流动相为甲醇-水(含5.3 mmol/L甲酸,0.1 mmol/L氯化钠),以0.2 mL/min流速进行梯度洗脱.扫描方式为选择性离子检测(SIM),采用正离子方法检测.结果:给予硫普罗宁消旋体后,左旋体和右旋体的t1/2分别为(1.49±0.57) h和(0.58±0.24) h,AUC0-∞分别为(15.17±5.95) μg/mL·h和(10.52±3.72) μg/mL·h,CL分别为(1.31±0.70) L/h和(1.79±0.81) L/h;分别静脉注射给予硫普罗宁对映体后,左旋、右旋硫普罗宁的t1/2分别为(1.52±0.28) h和(0.78±0.33) h,AUC0-∞分别为(11.93±5.02) μg/mL·h和(6.26±1.83) μg/mL·h,CL分别为(0.79±0.24) L/h和(2.83±0.84) L/h.结论:左旋、右旋硫普罗宁在大鼠体内的药动学行为存在一定的差异,左旋、右旋硫普罗宁在体内没有发生对映体间的相互转化,且两个对映体之间没有明显的相互作用.

磺酰氨基硫脲及磺酰氨基氰胍类化合物的合成及降血糖活性

目的:研究具有磺酰氨基硫脲和磺酰氨基氰胍结构化合物的合成和降血糖活性.方法:在格列苯脲的结构基础上,合成3位取代的1-[4-(4-甲基苯甲酰氨基)乙基]苯磺酰氨基硫脲类化合物(Ⅰ1-6)和3位取代的1-[4-(4-甲基苯甲酰氨基)乙基]苯磺酰氨基氰胍类化合物(Ⅱ1-5),并对所合成的化合物进行四氧嘧啶诱导的高血糖小鼠降血糖活性实验.结果:合成的化合物结构经IR、1H NMR、MS 和元素分析等确定;降血糖活性实验结果表明,在所有目标化合物中,多数化合物具有不同程度的降血糖活性,其中化合物Ⅰ6和Ⅱ1的降血糖活性较好.结论:结构中的磺酰脲改为磺酰氨基硫脲和磺酰氨基氰胍,部分化合物的降血糖活性保留,而且3位用长的脂肪链取代时显示更好的生物活性.

HPLC法测定人血红细胞巯基嘌呤甲基转移酶的活性

目的:建立测定人血红细胞中巯基嘌呤甲基转移酶(thiopurine methyltransferase,TPMT)活性的HPLC方法.方法:以6-硫鸟嘌呤(6-TG)为底物,S-腺苷-L-甲硫氨酸为甲基供体,TPMT催化6-TG生成甲基化产物6-甲基硫鸟嘌呤,100 ℃加热终止反应并沉淀蛋白后,加60%高氯酸再次沉淀蛋白,离心后进样20 μL检测.色谱柱:Shim-pack CLC-ODS (6 mm×150 mm,5 μm);流动相:甲醇-水-三乙胺(24:76:0.4),磷酸调pH至4.8;流速:1.0 mL/min;检测波长:313 nm.结果:该方法在100～1 700 μg/mL浓度范围内线性良好,r=0.999 7;高、中、低浓度样本的日内、日间RSD为2.28%～6.48%;回收率为100.56%～118.71%(n=5).结论:所建立的方法稳定可靠、精密度好,适合临床大规模推广应用.

聚乙二醇支载熊果酸的合成与表征

目的:寻找水溶性好的熊果酸衍生物.方法:通过高分子缩合的方法,将酰化的聚乙二醇接枝到熊果酸的羟基上,得到目标产物.结果和结论:合成了7个聚乙二醇支载的熊果酸衍生物,结构经IR和1H NMR确证,并进行水溶性、水接触角和溶血性实验.制得的7个衍生物亲水性大大提高,对红细胞无破坏作用,为开发水溶性好的熊果酸静脉注射剂提供了实验依据.

控释制剂释放动力学评价理论研究

目的:建立控释制剂释放动力学的评价新理论和模型.方法:针对控释制剂具有零级释放动力学基本特征,结合控释制剂释放度及其变化速率的曲线特征,阐明控释制剂释放动力学评价的原理.采用新建立的模型,评价市售非洛地平渗透泵片在不同转速下的控释特征.结果:依据控释制剂释放动力学原理,提出控释度(ICR)、早期释放差异指数(IRDi)、末端释放差异指数(IRDt)等指标.非洛地平渗透泵片在75,100,150 r/min时的体外ICR分别为70.8%,74.8%和64.2%;IRDi和IRDt定量反映了测定因素转速对非洛地平渗透泵片的控释特征的影响.结论:本文提出的控释制剂释放动力学评价理论,可以对控释制剂的不同释放阶段及整体的控释动力学进行定量评价,相关参数为剂型定量设计和优化提供了方法学基础.

双嘧达莫缓释滴丸的制备及体内外研究

目的:制备双嘧达莫缓释滴丸,使药物释放不受pH变化影响,提高生物利用度.方法:采用紫外分光光度法,考察不同pH条件下缓释滴丸释放特性.以硬度、释放度为主要考察因素,选取代表处方制备缓释滴丸,在此基础上以正交试验优化处方.采用单次给药双周期交叉方案,以市售双嘧达莫普通片为参照,进行兔体内药动学初步研究.结果:缓释滴丸的体内外药物释放达12 h,且不受pH变化影响,相对生物利用度为(127.4±3.4)%,体外释放符合一级动力学方程.结论:采用联合载体技术制备的双嘧达莫缓释滴丸缓释性良好,药物释放不受pH变化影响,兔体内药动学研究表明生物利用度优于市售普通制剂.

红景天苷对麻醉犬脑循环及大鼠全脑缺血再灌注的影响

目的:研究红景天苷对麻醉犬脑循环及大鼠全脑缺血再灌注的影响.方法:以电磁流量计测定麻醉犬颈内动脉和椎动脉的血流量,用多导生理记录仪记录血压、心率(HR)的变化;采用Pulsinelli四动脉结扎法略加改良制作大鼠全脑缺血再灌注模型,记录脑电图(EEG)和翻正反射恢复时间以及脑组织匀浆伊文思蓝(EB)含量.结果:静脉滴注红景天苷(8,4,2 mg/kg)能明显增加麻醉犬的脑血流量(CBF)和降低脑血管阻力(CVR)对平均动脉压(MAP)和HR无明显影响;静脉注射红景天苷(24,12,6 mg/kg)能明显缩短全脑缺血再灌注大鼠EEG和翻正反射恢复时间,降低脑匀浆EB含量.结论:红景天苷可通过增加CBF和降低CVR改善脑血液循环,并且对全脑缺血再灌注有明显的保护作用.

荜茇宁对动脉粥样硬化家兔抗氧化酶活性的影响

目的:观察荜茇宁对实验性动脉粥样硬化(AS)家兔抗氧化酶类活性的影响.方法:以高脂饲料喂养家兔建立AS模型,给予高脂饲料的同时给予荜茇宁,连续60 d.检测血清、肝脏和主动脉组织中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性和丙二醛(MDA)含量,并且测定血清总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)的含量,计算各组兔主动脉粥样硬化斑块面积比.结果:荜茇宁能提高AS家兔SOD、CAT、GSH-Px的活性(P＜0.05),降低MDA(P＜0.05),并且降低血清TC和LDL-C水平和主动脉斑块面积比(P＜0.05).结论:荜茇宁具有增强抗氧化酶活性、调节血脂作用,可预防动脉粥样硬化的发生.

人白介素-2/人血清白蛋白融合蛋白在毕赤酵母中的表达

目的:构建编码人白介素-2/人血清白蛋白的重组表达质粒pPIH,在毕赤酵母(Pichia pastria)中进行表达,获得具有白介素-2(IL-2)活性的融合蛋白.方法:通过逆转录方法从人外周血单核细胞得到人IL-2的cDNA,再通过重叠PCR方法,将编码人IL-2的cDNA和编码人白蛋白的cDNA拼接起来,克隆至T载体获得含有融合基因IH的质粒pMD19/IH.用Eco RI和NotI 双酶切pMD19/IH和pPIC9K两种质粒,通过琼脂糖凝胶电泳分离,试剂盒纯化,将IH片段和pPIC9K连接获得表达型pPIH的重组质粒,利用电转化方法转化毕赤酵母KM71获得重组表达质粒pPIH;CTLL-2/MTT法测定融合蛋白中人IL-2活性.结果:成功构建了人白介素-2/人血清白蛋白的重组表达质粒pPIH,融合蛋白得到了较理想的表达;重组菌经甲醇诱导表达后含有融合蛋白IL-2-HSA发酵上清液表现100 U/mL的生物学活性.结论:成功获得具有人IL-2生物活性的重组人白介素-2/血清白蛋白融合蛋白,该研究结果未见文献报道.

7种龙胆科蒙药药材中龙胆苦苷的含量测定

目的:建立测定7种龙胆科药材中龙胆苦苷的含量反相高效液相色谱法.方法:采用色谱柱:Lichrospher C18(150 mm×4.6 mm,5 μm);流动相为乙腈-水(0.1%磷酸),线性梯度洗脱:0～7 min,乙腈-水比例由19:81至25:75,7～12 min,乙腈-水比例由25:75至30:70;流速为0.5 mL/min;检测波长为254 nm;柱温为28 ℃.结果:7种药材中龙胆苦苷的色谱峰与共存组分完全达到基线分离,线性范围0.26～26.12 μg(r=0.999 7).结论:所建立的方法测定快速,结果准确可靠.

重组人酸性成纤维细胞生长因子对创面愈合的作用

目的:观察重组人酸性成纤维细胞生长因子(rhaFGF)对创面愈合的影响,探讨rhaFGF在组织修复中的作用机制.方法:利用大鼠创伤模型,采用HE染色观察不同时间点创面愈合情况;采用免疫组化方法检测伤后不同时间点创面愈合组织中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase-3)的表达情况;采用羟脯氨酸测试法检测伤口中胶原纤维的含量,并对照观察创面应用rhaFGF后以上各项指标的变化.结果:外用rhaFGF后创面组织中伤后第8天毛细血管胚芽与成纤维数量显著多于单纯创伤组,伤后第14天,经rhaFGF治疗的大鼠创面的再上皮化明显强于单纯创伤组.创面组织中caspase-3的表达量逐渐增加,外用rhaFGF后第14天和第21天的caspase-3表达量显著高于单纯创伤组.伤口中羟脯氨酸的含量逐渐增加,外用rhaFGF后第8天和第14天的羟脯氨酸含量显著高于单纯创伤组.结论:外用rhaFGF在创伤愈合的前期可以促进肉芽组织生长使得愈合周期缩短.在创伤愈合的后期可以直接或间接的促进成纤维细胞的凋亡,维持了细胞增殖与凋亡的平衡.

用于不同证型痛经的四物汤类方生物效应评价(Ⅰ)

目的:探讨用于治疗原发性痛经的四物汤基本方及衍化方(桃红四物汤、香附四物汤、少腹逐瘀汤、芩连四物汤)对离体子宫收缩、COX-2活性及血小板聚集等效应的影响,从类方的生物效应角度探讨方剂的配伍效应特点.方法:采用缩宫素诱导的小鼠离体子宫收缩模型,观察四物汤类方对离体子宫收缩各指标的影响;采用TMPD氧化法测定体外COX-2抑制活性;采用体外血小板聚集实验观察对血小板聚集的影响.结果:四物汤对子宫收缩频率具有明显的抑制作用,总活动力减弱;芩连四物汤除抑制频率外,还可抑制平均肌张力,总活动力同样表现为减弱;桃红四物汤及少腹逐瘀汤对收缩频率、幅度、平均肌张力均具有抑制作用,使总活动力减弱,香附四物汤表现了强的抑制作用,对收缩频率、幅度、平均肌张力及子宫活动力均呈现强的抑制作用,总的活动力显著减弱.对COX-2酶抑制作用强弱顺序为:芩连四物汤＞香附四物汤＞少腹逐瘀汤＞桃红四物汤＞四物汤.体外血小板聚集抑制作用效应强弱顺序为:桃红四物汤＞四物汤＞少腹逐瘀汤＞香附四物汤＞芩连四物汤.结论:四物汤基本方及其用于治疗不同证型原发性痛经各衍化方表现出了各自的配伍效应特点,为类方研究和深入探讨类方中"方-证-病"间的科学内涵提供了依据.

薄膜包衣对头孢氨苄胃内漂浮片的影响

目的:考察薄膜包衣对头孢氨苄胃内漂浮片释药特性和起漂性能的影响.方法:采用3种不同型号欧巴代(Opadry、OpadryⅡ和Opadry AMB)膜材和3种渗透性的丙烯酸树脂[Eudragit RL 30D、RS 30D和RL 30D/RS 30D(1:1)]对头孢氨苄胃内漂浮片包衣,分别以Opardry和Eudragit RL 30D/RS 30D(1:1)对4,6,9,12 kg硬度的片剂包衣,增重1%～3%,考察上述包衣条件对头孢氨苄胃内漂浮片释放特性和起漂性能的影响.结果:3种不同型号欧巴代包衣、不同包衣增重及4种硬度片芯包衣的片剂与未包衣片相比,释放特性无明显变化,起漂时间均大于15 min,比未包衣前显著延长;6～9 kg硬度片芯以渗透性适宜的Eudragit RL 30D/RS 30D(1:1)包衣,增重1%～2%均能保证15 min内起漂,释药特性与未包衣前无明显变化.结论:对水具有渗透性、能束缚二氧化碳气体并具有一定抗张强度的衣材是胃内漂浮片优选的包衣材料.

羽叶千里光中一个新的双黄酮

目的:对羽叶千里光(Senecio argunensis Turcz.)全草的化学成分进行研究.方法:应用柱层析色谱技术分离羽叶千里光全草提取物,根据理化性质和光谱数据鉴定各化合物结构.结果:分离鉴定了11个化合物,分别为8,8″-亚甲基双(3,3',4',5,7-五羟基黄酮)(1)、异鼠李素(2)、克氏千里光碱(3)、琥珀酸(4)、β-胡萝卜苷(5)、槲皮素、金丝桃苷、槲皮素-5-O-β-D-葡萄糖苷、千里光碱、千里光菲林碱和β-谷甾醇.结论:化合物1为新化合物,命名为8,8″-亚甲基双槲皮素,化合物2～5为首次从该植物中分得.

阿托伐他汀大鼠体内药动学及肠肝循环研究

目的:建立测定大鼠血浆、胆汁中阿托伐他汀的浓度的LC-MS方法,研究其在大鼠体内的药动学和肠肝循环情况.方法:测定大鼠静脉注射和灌胃给予阿托伐他汀后血浆中的药物浓度,对灌胃给药的吸收程度进行研究;测定大鼠给药后12 h胆汁中的药物浓度,计算其累积排泄率;运用大鼠肠肝循环模型研究阿托伐他汀在大鼠体内从胆汁重吸收的药动学过程,经3P87程序计算药动学参数.结果:大鼠静脉注射和灌胃给予阿托伐他汀后体内药动学过程均符合二房室一级吸收模型,灌胃给药的绝对生物利用度为10.2%,两种途径给药后12 h的胆汁累积排泄率分别是(7.3±1.4)%和(3.3±0.02)%.大鼠肠肝循环模型表明,胆汁供体组大鼠的AUC和胆汁受体组大鼠的AUC分别是(26 383.0±9 870.5)ng/mL·min和(2 636.8±1 815.0)ng/mL·min.结论:阿托伐他汀在大鼠体内口服吸收程度较低,静脉注射给药后存在肠肝循环现象.

黄芪中环阿屯烷型三萜皂苷的二维核磁共振研究

目的:应用二维核磁共振技术(2D NMR)技术对蒙古黄芪[Astragalus membranaceus (Fisch.) Bge.var.mongholicus (Bge.) Hsiao]中环阿屯烷型四环三萜代表性化合物黄芪甲苷(astragaloside IV)的1H NMR和13C NMR信号进行准确归属,在此基础上,对其他6个环阿屯烷型皂苷的13C NMR信号进行准确归属.方法:运用2D NMR技术(1H-1H COSY、HSQC、HMBC 、TOCSY和 ROESY实验)和选用高灵敏度低噪声的二维脉冲序列、梯度场技术.结果:首次准确地归属了7种环阿屯烷型四环三萜皂苷NMR谱中1H、13C信号的化学位移,并确定了其相对构型.结论:2D NMR是确认环阿屯烷型四环三萜皂苷NMR信号及相对构型的有效技术.

日本刺参胶原蛋白多肽对紫外线诱导的光老化模型小鼠皮肤的保护作用

目的:研究日本刺参胶原蛋白多肽(AJCP)对紫外线诱导的光老化模型小鼠皮肤的保护作用.方法:采用AJCP灌胃紫外线诱导的光老化模型小鼠,检测小鼠血清及皮肤组织中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)活性和丙二醛(MDA)、羟脯氨酸(Hyp)含量;通过HE、Van Gieson染色观察皮肤组织学变化.结果:AJCP显著提高了光老化模型小鼠血清和皮肤中SOD、GSH-Px、CAT活性,降低了MDA含量(P＜0.05,P＜0.01),同时显著提高了皮肤组织中总Hyp含量(P＜0.01);皮肤组织的形态学观察结果表明,AJCP能有效改善小鼠皮肤胶原纤维的受损程度.结论:AJCP能显著提高机体的抗氧化能力,对紫外线诱导的光老化模型小鼠皮肤具有保护作用.

HPLC-MS法快速定量分析人血浆中硫普罗宁浓度

目的:建立快速测定人血浆中硫普罗宁浓度的HPLC-MS联用分析方法.方法:在全血中加入抗氧剂半胱氨酸后,于分得的血浆中加入霉酚酸为内标,酸化后经乙酸乙酯提取,进行HPLC-MS测定.色谱柱为Shim-pack VP-ODS C18 column (250 mm×2.0 mm,5 μm),流动相为甲醇-0.1 %乙酸(70:30),流速为0.2 mL/min.结果:方法的线性范围为30～4 000 ng/mL,提取回收率大于70%,批间和批内精密度均小于8.5%,单样品分析时间7.5 min.并将所建立的方法成功地应用于硫普罗宁片生物等效性研究.结论:本方法操作简单、快速,灵敏度、准确度、精密度和定量分析线性关系均良好,符合生物样品测定要求.

肿瘤转移相关分子PRL-3:结构、功能及其作为抗肿瘤治疗药物靶点的可能性

肝再生磷酸酶-3 (PRL-3)是肝再生磷酸酶家族中的一员,因在肿瘤转移过程中的突出作用而备受关注.本文从PRL-3与肿瘤发生发展的关系出发,结合作者的科研工作实践,对PRL-3在肿瘤转移中的作用及其机制的研究现状进行综述,并对其作为肿瘤治疗和药物作用靶点的可能性进行展望.

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