中华检验医学杂志
Chinese Journal of Laboratory Medicine 중화검험의학잡지
- 主管单位： 中华医学检验杂志
- 主办单位： 中国科学技术协会
- 影响因子： 1.40
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 11-4452/R
- 国内刊号： 韩锟
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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1035例乳腺肿物细针吸取细胞学的分析
目的分析乳腺肿物细针吸取细胞学(FNAC)对乳腺恶性肿瘤诊断的敏感性。方法复习乳腺肿物FNAC检查1035例，与其中手术后获病理组织学诊断502例做对照比较。结果乳腺肿物FNAC对乳腺恶性肿瘤诊断的敏感性为98.9%，特异性为85.7%。细胞学诊断为阳性者(Ⅳ、Ⅴ级)，术后除1例(Ⅳ级)外，均证实为恶性。结论FNAC诊断乳腺癌较为敏感。
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血小板血栓形成过程中脂蛋白（a）作用的实验研究
目的研究脂蛋白（a）［Lp（a）］对血小板血栓形成的作用及其机理。方法制备健康成人血小板，设分别加Lp（a）及凝血酶的两个实验组及空白对照组，观察三组血小板膜、浆蛋白激酶C（M-PKC，P-PKC）活性变化及加Lp（a）组与空白对照组，血小板蛋白激酶C(PKC)底物分子量为47 000的蛋白磷酸化程度。结果 Lp（a）组随Lp（a）浓度升高及其作用时间延长，血小板 P-PKC活性降低，M-PKC活性增高，与凝血酶组作用相似，两组血小板 M-PKC活性的增高与空白对照组比较差异均有非常显著意义（P＜0.01），血小板 P-PKC的降低Lp（a）组比凝血酶组更明显，与空白对照比较，差异分别有非常显著（P＜0.01）及显著意义（P＜0.05）；加Lp（a）组随Lp（a）的浓度增高及其作用时间的延长，血小板PKC底物蛋白磷酸化程度亦不断增高，均明显高于空白对照组。结论 Lp（a）能激活血小板，使血小板PKC活性增高，PKC底物蛋白磷酸化程度增强，直接促进血小板血栓形成。
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荧光偏振免疫法检测血浆同型半胱氨酸水平的临床评价
目的对荧光偏振免疫法(FPIA)检测血浆同型半胱氨酸(HCY)进行方法学评价，并初步探讨其临床应用价值。方法系统研究了FPIA法测定HCY的精密度、灵敏度、稀释线性、校准曲线的稳定性及干扰因素，并分析了其与高效液相色谱法(HPLC)检测结果的相关性。同时应用FPIA法测定了北京地区77名正常人及61例冠心病患者血浆HCY水平。结果 FPIA法检测HCY具有较高的精密度(总CV为1.93%～3.60%)，分析灵敏度为0.21 μmol/L，校准曲线至少可稳定3周，稀释标本回收率为92.28%～102.41%，黄疸、脂血和溶血现象基本不影响测定结果。FPIA法(X)与HPLC法(Y)具有良好相关性(Y=0.977X+0.690，r=0.992)。冠心病患者血浆HCY［(16.83±6.70) μmol/L］明显高于正常人［(9.67±3.00) μmol/L］(P<0.05)。结论FPIA法操作简单、结果准确可靠、自动化程度高，且检测速度快，具有较高的精密度，非常适合普通实验室应用。
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骨代谢生化指标测定在妇科临床中的应用价值
目的探讨四项骨代谢酶免疫生化指标：血骨钙素(BGP)、骨碱性磷酸酶(BAP)、Ⅰ型前胶原羧基肽(CICP)、尿吡啶酚(PYD)及传统的Ca/Cr及HOP/Cr 比值对由于雌激素缺乏引起的高骨转换及骨量减少的诊断意义。并了解上述哪些指标对绝经引起的雌激素缺乏更敏感。方法测定51名绝经前妇女(Ⅰ组)，42名绝经后妇女(Ⅱ组)，和53例双侧卵巢切除术(OVX)患者(Ⅲ组)的上述各项指标，同时对各项生化指标间作相关分析。并与超声骨密度值(BMD)作相关分析。结果绝经后组与卵巢切除术组的大部分酶免疫骨生化指标均显著高于绝经前组，与BMD的下降变化一致。但传统的HOP/Cr及Ca/Cr各组间无差异。相关性：所有病例中，BGP、BAP、CICP、PYD间均有相关性，尽管r值较低，但统计学分析差异有显著意义(P<0.01)。其中BGP与BAP，BGP与PYD/Cr间相关性较好。BMD与BGP、BAP、CICP及PYD呈明显负相关。Ca/Cr及HOP/Cr与所有其他指标无相关。结论BGP、BAP、CICP、PYD等骨代谢生化指标是反映绝经后(自然绝经及手术后绝经)妇女由于雌激素降低导致的高骨转换及骨量减少的敏感指标，在妇科临床中有较好的应用前景。而传统的Ca/Cr、HOP/Cr测定由于方法的不敏感、不特异而在妇科临床中应用受到限制。
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不同血样收集和模板制备方法聚合酶链反应检测疟疾比较
目的在聚合酶链反应(PCR)检测疟疾中寻找佳的标本采集和模板制备方法。方法以3种方法收集标本，8种方法制备模板，通过复合PCR对其在疟疾检测中的结果进行比较研究。结果冻存血标本检出率略高达93%，磷酸三钠法制备模板方便且检出率高为96%。结论冻存血标本采集法和磷酸三钠制备模板的方法用于疟疾PCR检测效果好，值得推广。
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低水平血清乙肝病毒表面抗原测定及其临床意义
目的了解低水平血清乙肝病毒表面抗原(HBsAg)的人群分布及其相关乙肝病毒血清标志物模式特征。方法微粒子酶免疫分析技术测定8?089例非肝炎病区住院患者血清HBsAg及其表面抗体(抗-HBs)、乙肝病毒e抗原及其e抗体(HBeAg、抗-HBe)和乙肝病毒核心抗体(抗-HBc)；根据定值参比血清和样本的HBsAg荧光速率值/阴性对照荧光速率值之比值 (S/N值)，并结合中和试验结果，确定浓度在5 μg/L以下的HBsAg阳性例数，并分析相关乙肝病毒(HBV)血清标志物模式。结果共检出HBsAg阳性816例，HBsAg浓度在5 μg/L以下的有189例，占总数的2.34%，占HBsAg阳性人群的23.16%。其中，HBsAg浓度在1 μg/L以下的有84例(44.40%)；1～2 μg/L的有33例(17.5%)；2～5 μg/L的有72例(38.10%)。对上述低水平HBsAg人群的5项HBV血清标志物检测获得8种模式，以“HBsAg、抗-HBc、抗-HBe阳性”，“HBeAg和抗-HBs阴性”模式为主(74.60%)；累计HBsAg和抗-HBc同时阳性者占94.17%；HBsAg与抗-HBs同时阳性只出现在HBsAg 1 μg/L以下人群中(6.45%)。结论低水平血清HBsAg人群不容忽视，提高HBsAg检测灵敏度有重要意义；同时检测相关HBV血清标志物，对于确定上述人群有帮助。
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诱导胃上皮细胞白细胞介素-8分泌的幽门螺杆菌基因型
目的分析临床分离的幽门螺杆菌的cag致病岛的差异和不同激酶抑制剂对幽门螺杆菌诱导人胃上皮细胞白细胞介素-8(IL-8)分泌的影响。方法分别用临床分离的不同基因型的cagA+cagE+、cagA+ cagE-、cagA-cagE+、cagA-cagE- 幽门螺杆菌与人胃上皮细胞MGC-803共同培养，IL-8分泌用酶联免疫吸附试验进行检测，比较蛋白激酶A、C、G和蛋白酪氨酸激酶的抑制剂对幽门螺杆菌诱导胃上皮细胞IL-8分泌的影响。结果 cagA+cagE+基因型幽门螺杆菌显著增加了胃上皮细胞IL-8的分泌，cagA+ cagE- 、cagA-cagE+幽门螺杆菌作用次之，而cagA-cagE-幽门螺杆菌不能增加胃上皮细胞IL-8的分泌。蛋白激酶A、C、G的抑制剂不能阻断幽门螺杆菌增加胃上皮细胞IL-8的分泌，而蛋白酪氨酸激酶的抑制剂阻断了幽门螺杆菌增加胃上皮细胞IL-8的分泌。结论cagA+cagE+基因型幽门螺杆菌显著增加了胃上皮细胞IL-8的分泌并且依赖于蛋白酪氨酸激酶的磷酸化。
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嗜血杆菌分离培养基的评价与应用
目的选择合适的嗜血杆菌分离培养基提高嗜血杆菌分离率。方法将嗜血杆菌接种于7种培养基上，计算和比较7种培养基上嗜血杆菌的平均生长指数（GI）；对325份呼吸道标本进行检测，比较巧克力琼脂（BRchoc）和加万古霉素巧克力琼脂（BRchoc-V）的嗜血杆菌分离率。结果添加2%鲜酵母浸液和50%鲜牛肉浸液的各种培养基，较未加者的GI值明显增高；兔血巧克力琼脂培养基较羊血巧克力琼脂培养基的GI值为高（P<0.001）；加万古霉素（50 μg/ ml）的兔血巧克力琼脂培养基，较未加者对嗜血杆菌的分离率（77.2%/32.0%）明显提高（P<0.001）。结论培养基中增加鲜酵母浸液等营养物质可促进流感嗜血杆菌的生长，制培养基所用血源以兔血佳，其次为羊血；分离培养基中加入50μg/ml的万古霉素，可显著提高嗜血杆菌的分离率。
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液相杂交技术在聚合酶链反应酶联免疫检测的应用
目的采用液相杂交技术，简化核酸杂交过程，建立乙肝病毒（HBV）的液相杂交的聚合酶链反应-酶联免疫检测（PCR-ELISA）方法。方法将5′端标记生物素的PCR扩增产物与5′端标记地高辛的探针呈液相混合，90℃ 2 min，55℃ 1 min杂交。杂交后产物被链霉亲和素酶标板固定，经酶标记抗地高辛标记抗体结合、显色。结果液相杂交酶联免疫检测条件优化：探针浓度3 pmol/次, 酶标记抗体稀释度1∶1000。液相杂交时间3 min，固相杂交时间120 min，但其检测结果无明显差别。检测灵敏度1×104拷贝/ml, 34份HBsAg(+)，HBeAg(+)，抗HBc(+)标本的阳性检出率为97.1%;34份HBsAg(+)，抗HBe(+)，抗HBc(+)标本的阳性检出率67.7% ；17份HBsAg(+)、抗HBc(+)阳性检出率58.8%；其他免疫检测指标组合标本为34份(5.9%)；34份献血员标本均为阴性。结论在PCR-ELISA中使用液相杂交技术可使实验操作简便、快速，更适合临床实验室实际应用。
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肝癌患者红细胞补体受体I型分子及其基因多态性变化
目的探讨红细胞补体受体Ⅰ型分子（CR1）在肝癌疾病发生、发展中的意义。方法采用聚合酶链反应(PCR)和Hind III酶切技术测定红细胞CR1分子基因型，采用酶联法定量测定红细胞CR1分子的数量，以红细胞天然免疫粘附试验测定红细胞CR1分子粘附活性。结果 104例肝癌患者红细胞CR1分子密度相关基因多态性分布（HH: 70.2%, HL: 24.0%, LL: 5.8%）与75名正常人(HH: 74.7%, HL: 21.3%, LL: 4.0%)比较差异无显著意义；肝癌患者红细胞CR1分子的数量（0.83±0.22）及粘附活性（47.1±6.5）均显著低于正常人组，差异有非常显著意义（1.26±0.33、62.4±7.6，P<0.01）；并且CR1分子基因多态性为：高表达的肝癌患者其红细胞CR1分子数量表达与粘附活性都明显下降；伴有肝功能明显异常的肝癌患者其红细胞CR1分子数量及粘附活性显著低于早期或肝功能正常的肝癌患者。结论提示肝癌患者红细胞CR1分子数量及粘附活性的变化主要是后天因素引起，肝癌患者红细胞CR1分子数量及粘附活性的变化与病情发展及严重程度密切相关。
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血栓与止血试验诊断的现状及发展
人类正以豪迈的步伐进入21世纪。作为检验医学工作者，直面一个被称为生命科学世纪和生物技术世纪的新时代，如何抓住机遇，乘势而上，加强检验医学领域各分支学科建设，促进检验医学全面发展，是值得认真思考和研讨的重要课题。近十几年来，随着血栓性疾病与出血性疾病在人类疾病谱中地位的变化及防治研究的迅速进展，血栓与止血的实验诊断技术也不断有新的发展并在全国逐步普及。但由于试验的标准化程度尚不够高，试验的质量控制也有待改进。清楚地了解血栓与止血实验诊断的现状和存在的问题，将有助于这项工作的进一步发展，特作概略评述。 一、血栓与止血试验的标准化 血栓与止血试验的标准化是指对检测标本、试剂、仪器、技术和操作等制定统一标准，按照标准的要求对试验进行科学管理，以减少误差，提高试验的精密度、准确性和可靠性。由于血栓与止血试验的特殊性，迄今关于血小板功能、抗凝因子、纤溶成分的检测尚缺乏成熟的标准化方案，仅在凝血酶原时间（PT）、活化的部分凝血活酶时间（APTT）和纤维蛋白原试验(Fg)等3项试验，国际血液学标准化委员会（ICSH）、国际血栓与止血委员会（ICTH）或美国临床生物化学标准化委员会（NCCLS）有较明确的规定。对于PT试验，规定：(1)用不同级别的凝血活酶国际参考品（如原级凝血活酶参考品67/40，次级参考品68/434等），校正本土制备或生产的组织凝血活酶参考物，本土生产的凝血活酶试剂必须标有国际敏感指标(ISI)值；(2)结果的报告方式弃用“活动度”，采用“秒（s）”和“患者PT与正常PT比率（PRT）”，在口服华法林类药物监控时，采用“国际标准化比值（INR）”。对于APTT试验，推荐的方法与仪器要求基本同PT试验。但应该注意，不同的部分凝血活酶、不同的活化剂和不同的激活时间，对各种因子缺陷、对肝素和狼疮抗凝物质的敏感性差异很大，应根据不同的检测目的选择相应敏感的凝血活酶或活化剂。对于纤维蛋白原试验，世界卫生组织的生物标准化委员会已将1992年问世的纤维蛋白原标准品89/644定为国际参考品（IRP），并推荐采用改良Jacobsson法和IRP来标准化本地区的次级标准品。在常规纤维蛋白原含量测定时建议使用Clauss法。需要注意的是，目前国内使用的某些仪器可以根据PT的变化换算出纤维蛋白原含量，这种方法只能对纤维蛋白原含量作出大致估计，当含量明显异常特别是明显减低时，不能准确判断。根据手术前出血、凝血时间测定结果预测患者是否会术中出血，一直存在争议。20世纪90年代初，Lind在著名的《Blood》杂志上直截了当地用《出血时间不能用于预测外科手术是否出血》的标题阐述其观点。Rodgers通过对862篇文献的复习，也得出同样的结论，指出尽管出血时间对评价血小板及血管功能有一定价值，但用它来预测外科手术是否出血，没有什么意义。我国的专家也进行了多次研讨。2000年7月，中华医学会检验医学分会和血液学分会共同起草文件给有卫生部临床检验中心，提出“终止使用一般外科手术前的常规出血时间检测，建议用活化的APTT、凝血酶原时间试验和血小板计数联合检测，如临床有出血史时另加模板式（出血时间测定器）法进行出血时间检测”。据悉，国家卫生部将批准并下文件建议执行。
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免疫组化技术检测膀胱癌尿脱落细胞角蛋白20的临床价值
非侵入性的尿脱落细胞检查对膀胱癌早期诊断、监测复发及预后判断具有实用性，但受主、客观因素的影响，其敏感性受到一定限制。细胞角蛋白（CK）是一个大家族，其中CK20正用于膀胱癌早期诊断及预后观察的研究。用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）方法检查尿标本CK20，目前认为是比常规尿脱落细胞（HE）染色更敏感的方法。但RT-PCR需特殊的仪器设备，价格昂贵。免疫组化技术用于细胞学诊断，可以通过直接观察抗原在细胞中的表达来证实和解决许多在常规染色中难以解决的问题，同时也克服了RT-PCR的不足。我们以免疫组化技术检测尿脱落细胞CK20的表达，报道如下。 一、材料和方法 1.检测对象：(1)肿瘤组：40例膀胱癌为本院泌尿科收治的住院患者。全部病例经病理证实，其中膀胱移行细胞癌Ⅰ级26例，Ⅱ级、Ⅲ级分别为11及3例。初发30例，复发10例。年龄47～79岁。(2)对照组：全部20例病例均为临床明确诊断的住院患者，其中前列腺增生16例，尿路结石4例。 2.方法：免疫组化法使用链霉素亲生物素过氧化物酶连接法（S-P法）。收集晨尿，离心后取沉渣涂片，固定液（无水乙醇∶冰醋酸=3∶1）固定30 min，3%过氧化氢浸泡10 min，胰酶消化10 min，加一抗CK20单抗30 min，加二抗及S-P复合物各10 min，重氮氨基苯(DAB)显色，苏木素复染，各步之间用0.01 mol/L磷酸盐缓冲液（PBS，pH 7.2）洗片，以PBS液代替一抗作阴性对照。结果判断：有棕黄色颗粒着色的细胞为阳性细胞。判断标准，本文分“阳性(+)”“阴性(-)”两级。
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脑梗死患者的血脂与抗氧化能力的变化
心脑血管疾病是危害人类生命及生活质量的主要疾病之一。国外常见为脑出血，我国常见为脑梗死，其发病机制的研究日益受到人们的关注。血浆中的血脂水平与血栓形成关系密切。血脂水平升高易导致血栓形成，继而发生脑梗死。近年来，国内外学者发现机体的抗氧化能力与血脂水平相关。为此，我们就脑梗死患者的血脂水平的几项指标［甘油三酯(TG)、总胆固醇(TCHO)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)］及抗氧化能力的指标［全抗氧化状态(TAS)］变化作初步研究，旨在探讨两者的关系及对疾病发生发展的影响。 一、材料和方法 1.研究对象：脑梗死患者组，本院神经科及二门诊患者30例［男16例，女14例，平均年龄(62±8)岁］。根据临床病史，神经系统体检和CT检查结果确认，符合全国第二次脑血管病学术会议诊断标准(1986年)。对照组，本院门诊健康人30名［男14名，女16名，平均年龄(56±9)岁］。 2.研究方法：抽取3 ml静脉血，4?000 r/min离心10 min。血浆分离后留取血清，置-20℃保存待测。TG、TCHO来自上海东菱科华公司，HDL、LDL、TAS来自英国Randox公司。上述5个指标在ABBOT AEROSSET型生化自动分析仪上进行测定。 3.统计学处理：应用SPSS 8.0版统计学软件进行处理(独立样本t检验)。 二、结果TG、TCHO、HDL、LDL、TAS测定结果的比较见表1。脑梗死组的TG、TCHO、LDL的平均水平高于正常对照组，HDL、TAS的平均水平低于正常对照组。经统计学处理两组的TG、TCHO、LDL、TAS的P值均小于0.05，差异有显著意义，而尽管脑梗塞组的HDL均值低于正常对照组，两组的HDL的P值大于0.05未得出有显著性差异的结论。而且在统计学处理TG、TCHO、HDL、LDL与TAS有无线性关系时，尽管看上去TG、TCHO、LDL与TAS成负相关，HDL与TAS成正相关，但结论是TG、TCHO、HDL、LDL与TAS之间并无线性或对数处理后的线性关系。
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产孢丝状真菌NCCLS药敏试验方法的应用
美国国家临床实验室标准化委员会(NCCLS)于1997年推出了关于酵母菌的液体培养基稀释(多量法与微量法)抗真菌药敏试验方案M27-A，建立了被众多实验室认同的重复性好、准确性较高的标准化体外药敏试验方法。但由于丝状真菌本身的诸多特点如产孢条件难以控制、接种量难以精确量化、孵育时间长等，使其试验方法标准化具有一定难度。近年来NCCLS分会成员以M27-A的微量法为基础进行了多中心广泛深入研究［1，2］，于1998年提出了《产孢丝状真菌的液基稀释抗真菌药敏试验参考方案》(M38-P)。该方案在提出了一些建设性意见的同时，重申了多量法与微量法的一致性。现将其方法简介如下。 一、材料和方法 1.抗真菌药物：测试用药物包括氟康唑(FCZ)，5-氟胞啶(5-FC)、酮康唑(KCZ)、伊曲康唑(ICZ)和两性霉素B(AmB)。药物来源、贮备液的制备等同M-27方案［3］。 2.被检测的真菌：本方案主要针对常见侵袭性真菌感染的菌种：曲霉、镰刀霉、根霉，波氏假阿利什霉及申克孢子丝菌的菌丝相。不包括其他非产孢丝状真菌，也不适应于双相真菌的酵母相。 3.培养基：建议应用RPMI-1640培养基，配制方法要求同M27-A方案。 4.真菌接种液的制备：(1)为保证受试菌的纯度及活性，需在马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA）上35℃培养7 d或35℃培养48～72 h后，转至25～28℃至7 d(镰刀菌)。(2)取1 ml无菌0.85%盐水加入培养7 d的培养皿中，用巴氏吸管轻轻抽吸，制备菌悬液(加入1滴吐温20将有利于曲霉的接种)，将菌悬液吸至无菌试管中，静置3～5 min后，取上部匀质液体(含孢子或孢子囊孢子和菌丝片断)，在振荡器上振荡15 s。(3)用分光光度计调整菌悬液浓度，波长530 nm，A值曲霉、申克孢子丝菌0.09～0.11，镰刀霉、波氏假阿利什霉及根霉0.15～0.17。(4)将上述菌悬液用RPMI-1640稀释50倍得2倍终浓度(0.4～5×104)的菌悬液备用。(5)为保证试验准确性应做菌落计数，取0.01 ml终浓度菌悬液接种于改良的沙氏萄葡糖琼脂培养基的平皿中(28～30℃)，每天观察并计数肉眼可见的真菌菌落(尤其是对于镰刀菌)，孵育时间为24 h以内(镰刀菌)至5 d(波氏霉)。 5.液体培养基的接种：在96孔板的1～10列孔中每孔加入0.1 ml的2倍终浓度的菌悬液。每次试验均应包括质控、参考菌株。 6.培养：35℃条件下(不要摇动)大多数菌需46～60 h判定低抑菌浓度(MIC)结果，根霉则需21～26 h，波氏假阿利什霉则需70～74h。
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一种新型快速检出分枝杆菌变色液体培养基的评价
结核病的早期发现主要靠实验室诊断，涂片抗酸染色（或荧光染色）找抗酸杆菌阳性率低（10%～20%）；常用的固体培养基阳性率虽可达40%。但时间长。尽管BACTEC 460TB检测系统能快速检出分枝杆菌，但其仪器及试剂价格昂贵、且有放射性污染［1］。近年来，变色液体培养基在国外应用的越来越广泛［2］。我们将一种新型的分枝杆菌快速变色液体培养基与改良罗-琼（Lowenstein-Jensen,L-J）培养基进行了比较研究，现将结果报道如下。 一、材料 1.标准菌株：人型结核分枝杆菌、浅黄色分枝杆菌、草分枝杆菌、戈登分枝杆菌、堪萨斯分枝杆菌、胞内分枝杆菌、马耳摩分枝杆菌、爱知分枝杆菌、田鼠分枝杆菌、偶发分枝杆菌、副偶发分枝杆菌、龟分枝杆菌龟亚种、龟分枝杆菌脓肿亚种、耻垢分枝杆菌、次要分枝杆菌、非洲分枝杆菌、胃分枝杆菌、不产色分枝杆菌、金色分枝杆菌、新金色分枝杆菌、鸟分枝杆菌、瘰疬分枝杆菌、卡介苗和蟾蜍分枝杆菌由我们研究所保藏。 2.标本：141份临床标本，其中139份痰、1份伤口脓性分泌物和1份支气管肺泡灌洗液。 3. 快速变色液体培养基：由深圳市怡百世生物技术有限公司提供。其主要成分为磷酸盐缓冲液、谷氨酸钠、多种维生素、多种微量元素、甘油、马血清、变色剂以及甲氧苄氨嘧啶、氨苄青霉素、多粘菌素B、两性霉素B和萘啶酸等多种抗生素。 4. 改良罗-琼（L-J）培养基：按照文献［1］配制。 二、方法 1.取对数生长期的标准人型结核分枝杆菌和偶发分枝杆菌于含10%吐温80磨菌瓶中，磨菌混匀，用无菌磷酸盐缓冲液调其浊度为No1 MacFarland单位，再用无菌磷酸盐缓冲液作1∶10系列稀释，各分别接种100 μl于变色液体培养基和改良L-J培养基，37℃培养。当培养基变为紫红色或底层有紫色颗粒沉淀时，取少量液体涂片，进行金胺O荧光染色证实为分枝杆菌。 2. 标本处理：标本经2～4倍体积的4%NaOH消化20 min，离心10 min，沉淀经无菌磷酸盐缓冲液洗涤2次，再加入400 μl无菌磷酸盐缓冲液，混匀后，分别取200 μl接种于变色液体培养基和改良L-J培养基，37℃培养。 3．结果观察与报告：变色培养基接种后，每24 h观察1次，2周后每周观察3次，若培养基变为紫红色或底层有紫色颗粒沉淀，经荧光染色证实有分枝杆菌时，报告分枝杆菌生长阳性。改良L-J培养基接种后3 d、7d观察结果，以后每周观察1次。8周未见液体培养基变紫红色或底层有紫色颗粒沉淀，固体培养基上未见菌落，报告分枝杆菌培养阴性。
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添加色彩凝固指示物检测凝血酶原时间试剂的应用
目前临床实验室凝血酶原时间(PT)常规测定，采用仪器和手工两种方法。手工法是中小实验室的常用方法，并且是所有凝血功能试验的参考方法。但传统的手工法凝固终点较难观察，使得结果不稳定，特别是技术不熟练者误差较大。徐元斌等报道了一种添加凝固指示物测定部分凝血活酶时间(APTT)的方法，我们采用这种添加凝固指示物的方法测定PT，取得了满意的结果，现报道如下。 一、材料 1. 试剂：国产凝血活酶试剂，国际敏感指标(ISI)1.39, 批号：9901018，南京军区福州总医院提供。IL公司凝血活酶试剂, ISI 1.41, 批号：8468210。IL公司质控血浆，批号：8268316；国产质控血浆，批号：9901018。色彩凝固指示物，批号：9901018，南京军区福州总医院提供。 2. 标本：健康者新鲜血浆30人份，临床送检病人新血浆60人份；口服华法令治疗病人新鲜血浆20人份。 二、方法 1. 用手工（倾斜试管）法测PT。添加色彩凝固指示物试剂操作如下：在塑料试管中加入血浆0.1 ml，置（37±1）℃水浴中预温2 min。加入已复溶20～30 min（按用量以每毫升复溶凝血活酶试剂添加色彩凝固指示物20 μl）并预温至37℃的凝血活酶试剂0.2 ml，混匀；同时立即开动秒表计时。试管仍置于水浴中，至约10 s时自水浴中取出，迅速拭去管外水珠，在白色背景下不断倾斜试管至90°，仔细观察，当见到纤维蛋白丝或颗粒形成时，立即停表，记录时间；每份标本检测双份，取平均值。 2. 选择国产定质值血浆和IL公司质控血浆，分别用进口和国产两种试剂,添加和不加色彩凝固指示物作10次测定，计算PT（s）的CV值，观察重复性。
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抗栓与溶栓药物的血液学监测
血栓问题分为血栓性疾病和血栓相关性疾病。筛选和判断血栓高危人群，预防血栓形成；用溶栓和抗栓的方法实现和维持血管完全、持续通畅；降低近远期总死亡率和其他重要的心血管事件，是血栓或血栓相关性疾病现代预防和治疗的核心，因此溶栓、抗栓药物的实验室监测非常重要。溶栓疗法的监测 作为临床治疗常规，临床急性心肌梗死溶栓疗法不以血液指标作为是否溶栓的入选或排除标准，但应注意有无凝血障碍或出血性疾病病史。在不用静脉肝素抗凝的情况下，在溶栓过程中或溶栓后亦无需血液因子监测。 但长时间应用溶栓药物（超过2 h），则应进行血液监测，常用的监测指标有凝血酶时间（TT）和活化的部分凝血活酶时间（APTT），维持正常的1.5～2.5倍。纤维蛋白原定量、纤维蛋白降解产物测定和D-二聚体（D-D）等仅作为参考，与溶栓治疗的效果或安全性相关性并不好［1］。 急性心肌梗死溶栓的病人，如使用静脉肝素抗凝［如使用组织型纤溶酶原激活剂（tPA）溶栓］，则按肝素抗凝常规监测方法进行。有关肺栓塞溶栓后的抗凝问题，有学者在APTT降低至正常的1.5倍后开始使用静脉肝素。 如欲观察溶栓疗法对凝血系统激活的情况，则应选择凝血相关的指标，如纤维蛋白原片断1+2（F1＋2）、凝血酶-抗凝血酶复合物（TAT）、纤维蛋白肽A（FPA）等［2］。抗栓疗法监测 所有凝血标志物和血小板激活标志物都可作为抗凝治疗的监测指标，有些指标与治疗的效果相关。 一、静脉肝素的监测 小剂量皮下肝素（小于12 500 U/d）不能可靠地产生抗因子Xa活性，无需监测，皮下应用超过12 500 U/d或静脉用药必须监测。肝素皮下应用时，APTT测定的采血时间应在注射后的4～6 h。 静脉肝素监测多采用APTT或活化的凝血时间（ACT），肝素浓度测定较好反映肝素的抗凝活性。由于肝素影响血小板的功能和数量，还应常规血小板计数。连续静脉滴注肝素的病人，应常规定期查血红蛋白浓度和红细胞压积（不少于每日1次），以监测出血情况。1．APTT：APTT与肝素浓度有中度相关性。同剂量肝素测得的APTT受血浆肝素中和蛋白（如血小板第4因子）和因子VIII浓度的影响，而因子VIII常在急性反应，如妊娠、急性血栓形成、大手术时增高［3］。
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血库贮存过期的血液可以用来做血液琼脂培养基吗?
答：肯定不能。首先，血库贮血来自健康人，其体内存有多种抗微生物的抗体，冷藏贮存期间仅有轻度减弱，用于制做培养基将抑制细菌生长；第2，细菌的溶血性状是依对兔(羊)血的溶血特征来判定的，用人血则不可靠；第3，贮存血中多种微量营养成分消耗贻尽，而细胞内钾大量移入血浆，均不利细菌生长；第4，贮存血液颜色暗红，且易溶血难以制成合格培养基。
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何谓流式细胞仪的调准?
答：为了保证仪器分析结果的稳定性、提高精密度，使测量出的同一种样品的数据结果接近，在分析标本前仪器必须用标准品进行调准(校正)，一般通过变异系数(CV)来观察。CV值很大的仪器常能带来一些假象，同一群体在CV值不同的仪器上可测得不同形状的直方图。仪器的调准方法是使用标准品来校正仪器，使其在激光功率、光电倍增管电压、放大器增益一定的情况下所得到的荧光强度强，且变异系数小。常用的标准品为厂家提供的标准微球或醛化固定的鸡红细胞悬液。
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甲苯胺红梅毒血清试验与酶免疫法的比较
我们通过对甲苯胺红梅毒血清试验(TRUST)、梅毒螺旋体-酶免疫法(TP-ELISA)的比较，探讨采用TP-ELISA试剂筛查献血人群的可行性。结果报告如下。 一、材料与方法 1.标本来源：系1999年在我中心献血者1?683名；梅毒可疑样本165份，来源于献血者TRUST初筛阳性样本，部分来源医院梅毒病人血样。 2.试剂和方法：TRUST：上海荣盛生物试剂公司提供。TPPA试剂由日本富士株式会社提供。TP-ELISA：试剂盒由华南生物科学与技术研究中心惠赠。实验操作严格按其试剂盒说明书进行。 二、结果 1.TRUST与TP-ELISA试验特异性比较：1 683名献血者中，TP-ELISA筛查出18例阳性，16例经TPPA确证为梅毒阳性，2例为假阳性反应，其TP-ELISA假阳性率为0.12%。TRUST检出19例阳性，其中4例为假阳性反应，其假阳性率为0.24%。TRUST漏检1例(6.3%)。 2.TRUST、TP-ELISA检测结果与TPPA试剂作相关分析：165份可疑样本经TPPA试剂确证，142份为梅毒阳性。TRUST筛出阳性135份，其检测灵敏度为95%。TP-ELISA筛出阳性142份，其检测灵敏度为100%。经相关分析(χ2检验)，TP-ELISA与TRUST检测结果经TPPA试剂确证，差异无显著性(χ2=124.5,P<0.005)，相关系数分别为r=0.975,0.775。综上所述，TP-ELISA试验具有：(1)操作简便，适合大批量样本的自动化检测；(2)具有较好的灵敏度和特异性；(3)结果判定客观准确，避免了主观因素对结果的影响。因此，笔者认为TP-ELISA是值得推广应用于献血者梅毒血清学筛查的新方法。
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肠出血性大肠埃希杆菌O157:H7溶血毒素的检测方法
我们曾和美国马利兰大学发展了鉴定肠出血性大肠埃希杆菌的探针，其特异性和灵敏性极高。经序列分析发现该探针是溶血素基因的部分片段。我们又从溶血表型进一步完善了这一鉴定方法。由于其溶血条件特殊，人们一直认为该菌不溶血。我们将经验总结报告如下。 一、材料和方法 1．菌种来源：肠出血性大肠埃希杆菌882364，1986年江苏省徐州市卫生防疫站分离，经本实验室鉴定，并保存。851006为本实验室筛选到的溶血素基因的天然缺失株（对照菌株）。 2．菌株鉴定：生化鉴定为大肠埃希菌。O157单抗和H7血清为本实验室制备。用O157：H7 PCR诊断试剂盒检测882364、851006的溶血素基因，882364的扩增结果为阳性，851006为阴性。 3. 血平板的制备［1］：脱纤维羊血用磷酸盐缓冲液(PBS)洗3次，加入至终浓度为3%。培养条件：于混合气（8%CO2，40%H2，52%N2）环境中37℃培养16 h，然后置21℃空气中6 h。 4．液体溶血活性检测［2］：(1)标准1%羊红细胞的制备；(2)活化菌体；(3)活性检测。 二、结果血平板检测的结果需对光观察，如发生溶血，可见菌落周围透明溶血环。液体溶血检测的结果如只需定性，则A值大于完全不溶血管即可；如需相对定量，可用溶血单位（HU）表示，一个溶血单位(HU)为裂解50%羊红细胞的检测样品的量。
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吸入性肺炎的病原学研究
为给临床吸入性肺炎的诊断和治疗提供依据，我们自1996年2月～1997年3月，对来我院就诊的有误吸史的28例患者的纤维支气管镜（纤支镜）刷检物进行需氧和厌氧培养，获得了有关吸入性肺炎的病原学资料，报告如下。 一、材料与方法 1．病例选择：28例有误吸史、被诊断为支气管肺炎的患者中男性21例，女性7例，年龄在22～65岁之间。21例男性患者中，10例有经常酗酒史。7例女性患者中，1例有服农药自杀史，疑昏迷时误吸呕吐物，引起支气管肺炎。 2．标本采集及培养: (1)需氧培养取支气管刷检物接种血琼脂平板、巧克力平板和麦康凯平板，35℃培养24 h, 选择可疑菌落进行常规鉴定和药敏试验。(2) 厌氧培养采用纤支镜在双套管防污染毛刷双塞保护下刷取病变部位的分泌物，将刷检物立刻接种到已预还原24 h的强化血琼脂平板（BAP ）上，同时涂片进行革兰染色。将已接种的BAP平板立即放入厌氧罐中，35℃培养72 h，挑取不同菌落分离纯培养，并进行耐氧试验，以确定厌氧菌和兼性厌氧菌。 3．细菌鉴定: 需氧菌和厌氧菌的鉴定采用生物梅里埃公司生产的API生化系统，严格按照说明书进行操作。 4．药敏试验:采用纸片扩散法，按美国临床实验室标准化委员会1994年标准进行操作和结果解释。
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参加澳大利亚梅毒血清学国际室间质评五年回顾
质量控制是提高临床医学检验水平的重要途径，为提高梅毒血清学检验水平，我们从1984年起参加了澳大利亚微生物学会主持的微生物学国际室间质评活动，该项质评包括细菌学、血清学、病毒学、寄生虫学、真菌学。有300多家医院的实验室参加，主要是澳大利亚本国，部分来自东南亚国家。通过参加质评，我们积累了经验，对提高梅毒实验室诊断水平很有帮助。现将1994～1998年梅毒血清学部分作一总结。报告如下。 一、材料和方法 1.质控血清：澳大利亚微生物学会提供。每6周1次，每次2份样品，每年8次。每份样品均有简要病历介绍。 2.试剂：梅毒快速血浆反应素试验(RPR)试剂：上海实业科华生物技术有限公司；梅毒螺旋体血凝试验(TPHA)试剂：英国OMEGA公司。 3.评价方法：在规定的时间内完成测试，并将结果寄给澳方，澳方回报参考实验室结果和群体结果供我方评估。 二、结果 1.每份样品均做RPR筛选试验和TPHA确证试验，5年内共完成了80份样品的检测，共计160个测试，其中158个测试结果与澳方参考实验室回报结果一致，正确率98.6%。 2.错报两次，1995年第4次，样品“7A”，我室报告TPHA阳性，澳方回报为阴性；1995年第8次样品“7A”，我室报告RPR弱阳性，澳方回报为阴性。3.从群体结果，可以了解其他实验室的情况。如：1995年第8次共有145个实验室参加梅毒血清学质控，RPR试验样品A与参考实验室回报一致的为63%，样品B为72%。TPHA试验样品A为65%，样品B为76%。与群体结果比较，我室成绩优良。
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脑脊液中分离出2株肺炎链球菌
肺炎链球菌目前仍是引起儿童和成人社区获得性肺炎的重要致病菌，同时也是引起中耳炎、副鼻窦炎、脑膜炎的主要病原菌［1］，尤其是小儿机体免疫力较弱，血脑屏障功能较差，易成为脑膜炎的主要病原菌，报告两例肺炎链球菌引起的脑膜炎。 例1，女，2个月，以“发热伴咳嗽6 d，抽搐1 d”为主诉入院。无明显诱因出现发热，体温39℃以上，伴咳嗽，查体：对光反射迟钝，肌张力增高，肌腱反射迟钝，巴氏征、克氏征、布氏征均（+）。脑脊液常规检查：黄色微混，糖半定量＜0.55 mmol/L，蛋白定量：10.2 g/L，氯化物120 mmol/L，脑脊液中2次分离出肺炎链球菌生长，脑脊液直接涂片检出革兰阳性球菌，矛头状成双排列，临床使用氨苄西林和头孢噻肟治疗后，脑脊液再培养阴性，病人痊愈出院。 例2，男，3个月，无明显诱因高热4 d，体温40℃，抽搐2次为主诉入院，心肺无明显异常，WBC：7.8×109/L，N：0.75，L：0.25，脑脊液检查：白色浑浊，细胞计数：0.3×109/L，蛋白定量：7.2 G/L，氯化物118 mmol/L，糖半定量：<0.55 mmol/L，脑脊液涂片检出革兰阳性球菌，矛头状成双排列，脑脊液培养检出肺炎链球菌，患儿入院3天死亡。 细菌学鉴定：2例脑脊液标本均注入生物梅里埃公司生产的Hemoline双相血培养瓶中，置35℃培养24 h，液体呈混浊，管底有少许沉淀生长，固体面有灰白色小菌落生长，转种血平板置35℃培养24 h，呈圆形，开始扁平，后中心凹陷，光滑湿润，α溶血的小菌落，涂片为革兰阳性球菌，矛头状成双排列。触酶阴性，氧化酶阴性，无动力，Optochin敏感（例1抑菌环直径为16 mm，例2抑菌环直径为15mm），胆汁溶菌试验阳性，β-内酰胺酶阴性（β-内酰胺酶测定纸片由梅里埃公司提供），经法国梅里埃Vitek-32全自动细菌分析仪鉴定为肺炎链球菌，生化编码均为为11003132000，鉴定符合率为98%。
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肌肉注射引起偶发分枝杆菌局部感染的细菌学鉴定
1998年8月～1999年3月，福建省南平市樟湖镇，先后发生了59例患者因肌肉注射引起的局部细菌感染，且久治不愈,主要表现为感染部位肿痛，无发烧，局部组织病理学检查表现为脓肿及肉芽肿小结节形成的空泡细胞条带。所有患者感染部位渗出液标本经培养均分离出一种分枝杆菌，经鉴定确定为偶发分枝杆菌(M. Fortuitum)。报道如下。 一、材料和方法 1.标本来源：59例因肌肉注射引起局部感染久治不愈而收治入院的患者。临床根据患者情况不定期抽取炎性渗出液作细菌培养及鉴定，先后送检96份标本（每个患者先后送检1～3份标本）。 2.细菌鉴定仪器及试剂盒：Hemoline双相血培养瓶，细菌生化鉴定卡(ATB和API)和药敏卡(Rapid ATB STAPH和ATB G-)，细菌鉴定仪均由生物梅里埃公司提供。菌株的生物学及生化反应特性的鉴定参照有关文献［1-3］。药敏纸片由浙江省军区后勤部卫生检定所生产。 3.标本接种及鉴定：将96份感染部位渗出液标本接种Hemoline双相血培养瓶和改良罗氏结核菌培养基，同时接种麦康凯、SS、普通营养琼脂和血琼脂平板等，置28℃需氧培养。所有分离出的菌株接种API、ATB生化鉴定卡作出初步鉴定，对符合分枝杆菌属的菌株再按上述文献中有关分枝杆菌分类方法作进一步的生物学及生化特性鉴定。对确定为偶发分枝杆菌的菌株再接种上述药敏试验卡，37℃孵育36～48 h后用ATB鉴定仪或手工判读药敏结果，同时有部分药物用药敏纸片扩散法作对照检测。 二、结果 1.生物学特性：从患者感染部位采取的96份标本，均检出分枝杆菌，各菌株的生物学特性基本相同。标本接种Hemoline双相血培养瓶培养48 h后，液体明显混浊，有薄层菌膜形成，半固体斜面生长出灰白色菌落，直径1～2 mm。在改良罗氏培养基和血平板上，28℃培养48 h后，菌落形态及大小与上述相似，继续培养后，菌落表面逐渐干燥和粗糙。在SS和麦康凯平板上，生长缓慢，培养3天后，形成1～1.5 mm大小的菌落，呈紫红色。各菌株在pH 4～11.5培养可生长，但以pH 8.0～10.0佳。涂片革兰染色阳性，菌体呈杆状或球杆状，长约1～3μm；抗酸染色阳性或弱阳性。
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麻疹孪生球菌致小儿败血症
患儿，男，两岁3个月，因口腔溃疡并伴突发性高热入院。住院期间连续2次(第1 d，第3 d)抽取小儿股动脉血做血培养，均培养出麻疹孪生球菌。参考药敏试验结果采用阿莫西林和头孢噻肟抗感染治疗，7天后患儿痊愈出院。 细菌培养与鉴定：血标本经BacT/Alert 120自动监测培养仪培养12 h，仪器显示结果阳性，然后复种哥伦比亚琼脂血平板35℃培养24 h。血平板上长出灰白色中等大小、光滑、圆形、突起、边缘整齐，稍干燥，不透明且无溶血环的菌落。该菌用生理盐水涂片不易涂散，不易乳化。染色可见革兰阳性双球菌，成双球菌状排列，少有部分成四联或短链状排列。氧化酶试验，触酶试验均为阴性，6.5% NaCl、七叶苷阴性。 用ID32 strep鉴定卡经api/ATB鉴定系统鉴定为麻疹孪生球菌。鉴定率id%=99.4%，符合率T=0.99，生化反应编码为00002401100。生化反应结果符合该菌。 药敏试验：采用配套的ATB strep药敏试验卡做药敏试验：红霉素、四环素、呋喃妥因、链霉素、阿米卡星、青霉素、氨苄西林耐药；复方磺胺甲恶唑、利福平、万古霉素、替考拉宁、阿莫西林、阿莫西林/棒酸、头孢噻肟敏感。 讨论：麻诊孪生球菌属孪生球菌属，包括溶血孪生球菌和1998年Collins报道的柏格孪生球菌也属孪生球菌属。均为革兰阳性兼性厌氧双球菌，成双排列，少有四联、短链状排列，氧化酶试验、触酶试验阴性，鉴别试验：麻疹孪生球菌在血平板上没有溶血环，APPA、GTA阳性；溶血孪生球菌在血平板上有溶血环，APPA、GTA阴性；柏格孪生球菌部分在马血平板上有溶血环，菌落扁平，光滑透明，6.5%NaCl、10℃和45℃生长、葡萄糖产酸、尿素、七叶苷、明胶、马尿酸，VP、靛基质、硝酸盐、精氨酸双水解酶均阴性。
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定量聚合酶链反应技术及在临床实验室应用的价值
随着分子生物学技术的发展，聚合酶链反应（PCR）技术已逐渐应用于遗传性疾病、肿瘤及感染性疾病等方面的诊断，如检测临床标本中病原体核酸序列、肿瘤基因突变情况、遗传性疾病的基因序列、人类白细胞表面抗原（HLA）配型、法医学方面的鉴定工作等。目前基因芯片的问世，将分子生物学技术又推向一个新的高潮。现就临床实验室开展PCR技术及PCR技术检测病原微生物及肿瘤基因的临床意义和定量PCR技术，谈谈我们的看法。 1．目前国内临床实验室应用PCR技术存在的问题：在设施方面，如仪器显示的温度与孔内的温度不一致，有孔内差；自动化程度较低，人工操作人为误差较大；实验室布局不合理，不能满足3个分开的房间进行分阶段操作（第1间实验室为混合试剂和质控，第2间实验室为标本提取和试剂混合，第3间实验室为PCR扩增及产物检测，工作人员应从第1间依次到第3间实验室，不能返回工作。室内空气流向依次从第1间到第3间实验室，不能逆流，以防止空气污染）；加样器及试剂等容易污染导致假阳性。另外，标本采集及保存不合适和操作不当易出现假阴性。例如检测痰中结核杆菌，标本采集一定是痰而不是唾液。血清中检测HCV-RNA标本保存不当，使病原体被破坏.操作者不戴手套或说话唾液溅入标本，RNA降解，失去PCR的模板，造成假阴性结果。合理设计寡核苷酸序列，好在保守区，特异性强，无干扰。 琼脂糖凝胶电泳鉴别PCR产物的影响因素较多。如模板量大则拖尾现象严重，非特异性干扰带多。结果难于清楚判断。标本中有抑制物（Hb,高浓度尿素）均可出现假阴性。 目前美国病理学会（CAP）等组织以及临床实验室改进修正案（CLIA 1988）要求正规检测方法是先行PCR扩增，然后进行杂交来判断结果。但美国一些实验室，如印第安纳大学医学中心的病理和医学实验室用PCR方法检测临床标本中乙肝病毒(HBV)、EB病毒(EBV)、人巨细胞病毒(CMV)的DNA。他们认为在他们的实验室里，用琼脂糖凝胶电泳和电泳后再杂交的两种判断结果是一致的。因为他们实验室条件非常严格，而且每年都要通过美国CAP检查。但仍有些检测项目未得到美国FDA的批准。 2 .PCR技术检测的临床意义：我们认为对灵敏度和特异性基本上达到临床需要的检测技术，不必一律采用PCR技术。目前没有其他诊断技术可以检测的疾病，如基因缺失、易位、突变及病原体需要较长时间培养或培养难度较大的疾病应考虑用PCR方法。如人类免疫缺陷病毒（HIV）是一种慢性病毒，在细胞内的繁殖水平比较低，感染后潜伏期较长，病毒难以培养而且需要较长时间培养。在对HIV抗原（HIV-Ag）和抗体（HIV-Ab）的检测结果难以判断时，可用PCR技术作为确认手段。当前临床标本一般仅检测HIV-Ab。在美国，血液制品既检测HIV-Ab也检测HIV-P24Ag 。国外有学者报道，感染HIV的患者血清HIV-P24Ag出现早于HIV-Ab10天左右。发现HIV-P24Ag（+）者，HIV PCR（+）。但HIV PCR（+）者，HIV- P24Ag可呈现（-），此时患者已具有传染性。PCR技术可用于艾滋病的早期诊断，定量PCR技术还是艾滋病疗效观察的有效检测手段。 用PCR和杂交方法对HCV基因分型、早期诊断和治疗监测均具有较大的临床意义，这已被国内外医学界的工作者公认。 结核分枝杆菌（MTB）培养时间一般要30～50天，培养出来的分枝杆菌还要鉴定是人型还是鸟型。涂片检查所需的抗酸杆菌也要一定的浓度。因此可以采用PCR方法检测。但PCR技术不能完全取代结核杆菌培养。PCR在药敏结果判断方面亦不理想。 当前有检测沙眼衣原体抗原的试剂盒，特异性高，但敏感性不甚满意。衣原体需在细胞中培养后进行鉴定，对临床常规检验工作有一定的难度。应用PCR技术检测沙眼衣原体有一定的临床意义。 美国FDA已批准HIV、MTB、沙眼衣原体的PCR或杂交检测试剂盒。也批准了HPV的过筛检测，对于HPV各型的检测，目前尚未批准。MTB的靶序列是16 s DNA的584bp。其后带用杂交检测。沙眼衣原体的检测试剂盒于1993年通过FDA批准，目前用特殊探针进行杂交后用免疫化学法检测。
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第二届Sysmex血栓、止血学术研讨会通讯
由威士达医疗有限公司承办为期3天的第二届Sysmex血栓、止血学术研讨会于2000年9月26日在中国青岛香格里拉大酒店圆满结束。 来自全国各地的检验界代表共计350余人参加了此次研讨会。中国人民解放军总医院丛玉隆教授、中国医科院血液学研究所李家增教授、上海第二医科大学血液研究所的王鸿利教授、北京朝阳医院许俊堂博士、卫生部临床检验中心彭明婷副研究员、日本Sysmex公司彭作辉博士等国内血栓、止血研究领域的知名学者应邀出席了大会。中国医科院血液学研究所李家增教授应邀担任大会主席。会上，解放军总医院丛玉隆教授在题为《血小板功能测定几种试验临床价值探讨和选择》的学术报告中对血小板功能试验的临床价值做了深入的探讨，并对检测血小板功能的试验方法的选择提出了个人独到的观点，激发了与会代表的极大兴趣。上海第二医科大学血液研究所王鸿利教授、卫生部临床检验中心彭明婷副研究员、北京朝阳医院许俊堂博士及日本Sysmex公司彭作辉博士也分别将各自在血栓、止血治疗与检测方面所得的研究成果及其进展向与会代表做了详尽的讲解。代表们积极发言对相关课题进行了生动的讨论，并一致认为此次大会对国内血栓、止血方面的研究起到了总结和推进的积极作用。代表们对主办此次大会的威士达公司多年来为推动国内血栓、止血研究所做的工作表示认可和感谢。
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中华医学杂志2001年改为半月刊
中华医学杂志是中华医学会会刊，为了适应21世纪医学科学技术的迅猛发展，加快信息的交流和传播，中华医学杂志将从新世纪的第1年起由月刊改为半月刊，并对杂志的栏目和内容作较大更新与调整。 1．改版后中华医学杂志全年出版24期，篇幅增加近一倍，将为广大临床和科研人员发表论文提供更大的空间，为满足医学各学科学术交流的需要创造更好的条件。 2．中华医学杂志除了继续办好现有述评、专家论坛、医药卫生策略探讨、临床研究、基础研究、综述、讲座、病例报告、临床病理讨论、专题笔谈、心理与疾病、国内外学术动态等栏目外，将逐步开辟一些新栏目，如医学新闻、临床案例分析、新药与临床、细菌耐药监测报告、全科医师园地、政策法规透视、争鸣与讨论、对策与建议、读者来信等，栏目设置将由原来的十几个扩展到30个以上，使各类专业人员都能在本刊找到发表论文和见解的园地，为广大读者提供更贴心的知识更新课堂。 3.改版后本刊在信息容量增加的同时将大大缩短稿件刊用周期，从而为广大作者提供更快捷的学术交流工具。目前本刊已经实现编辑工作的微机化管理，并正着手对编辑流程进行改革，可望逐步将稿件采用时间控制在收稿后6个月内，反映国际领先水平的论文将在收稿后3个月内刊出，国际首报论文将争取在收稿后1个月内刊出。今后将进一步向网络化发展，实现读者、作者、编者的双向、互动交流。 4.中华医学杂志的发展始终离不开全国医药卫生科技人员的大力支持。本刊编辑委员会和编辑部全体同志真诚地感谢来自各方面的支持，恳切地希望全国医药卫生科技人员继续与我们携手共创中国科技期刊的精品。 欢迎投稿本刊欢迎围绕社会-心理-生物医学模式开展的一切临床和科研工作的论文，以及围绕本刊现有与即将开辟的新栏目撰写的文稿。为缩短审稿周期，来稿应一式三份，可以附对论文创新性的说明。欢迎利用本刊电子信箱投稿。 欢迎订阅 2001年中华医学杂志每期每册人民币14元，全年336元。可到当地邮局办理订阅手续(邮发代号2-588)，也可向中华医学会杂志社出版发行部办理邮购。凡订阅2001年全年本刊者，只要将订阅本刊收据复印件寄至本刊编辑部，可免费获赠与订阅份数相应的本刊2001年多媒体光盘。 欢迎刊登广告中华医学杂志的科学性、权威度、覆盖面和影响力，将有助于产品的成功宣传。1年内在本刊刊登广告多期，价格可以优惠。广告代理：北京华康广告公司。 欢迎随时对本刊的工作提出意见和建议 中华医学杂志编辑部地址：北京市东四西大街42号(邮政编码100710)，电话：010-65273362，010-65285255，传真：010-65273362，Email:cmayx@public.sti.ac.cn。 中华医学会杂志出版发行部地址同上，电话：010-65251918，传真：010-65221454，Email:cmacb@ public.sti.ac.cn。北京华康广告公司地址同上，电话：010-65232552，010-65257552，传真：010-65232552。《中华医学杂志》编辑部
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抗地高辛Fab片段治疗时监测未结合地高辛——一种未来的治疗药物监测新模式
地高辛是能被解除毒性的少数治疗药物之一。用抗地高辛Fab片段成功地治疗因服用地高辛过量而造成的毒性作用已超过20年。用木瓜蛋白酶裂解绵羊地高辛特异抗体IgG，产生两个地高辛特异的Fab片段(每个50 000 000)和一个50 000 000的Fc片段。平衡透析后测定上述处理过的Fab片段，测得其结合地高辛的内源性亲和常数为1010 L/mol。在一定实验条件(一定的K+浓度和膜分离的类型)下，地高辛与其受体(钠泵)结合的亲和常数为106～108 L/mol。Fab片段与地高辛的亲和力比钠泵更高，这是使用Fab片段来减少地高辛毒性作用的理论基础。使用Fab片段后，细胞外未与受体结合的地高辛浓度有所下降，这时由于胞内外的平衡作用，与受体结合的地高辛终与受体解离并释放至细胞外。尽管毛地黄毒甙与Fab片段结合的亲和力比地高辛低10倍，毛地黄毒甙中毒时使用Fab片段也足以发挥临床功效。 临床上运用Fab片段的剂量必须与体内总的地高辛量大致上等摩尔，而了解地高辛量可通过检测血清地高辛浓度或进一步了解病人用药情况。Glaxo Wellcome公司的Digibind是美国及世界各地的抗地高辛Fab片段常用的药品商标。Boehringer-Mannheim公司也生产解毒用的抗地高辛Fab片段。抗地高辛Fab片段也已作为因过量服用其他地高辛属如夹竹桃甙、含蟾蜍二烯羟酸内酯的催欲药、毛地黄毒甙和洋地黄提取物等药物时的解毒药。抗地高辛Fab片段还成功地用于治疗由血中地高辛样免疫反应因子增高引起的高血压。在90%的洋地黄中毒的病人中，用Digibind治疗达到佳疗效时间的中位数为19 min。由洋地黄中毒引起的高血钾也可通过应用Fab片段而使血钾下降。 Fab片段在体内的分布为0.4 L/kg，半衰期为16～20 h，体内清除率为0.324 ml*min-1*kg-1。肾脏和肾外组织(例如经网状内皮系统的代谢或清除)都可清除Fab片段，大约65%的Fab片段和Fab—地高辛复合物经由肾脏清除。Fab—地高辛复合物不能经血液透析清除，甚至持续的动静脉透析也不能清除。在肾功能衰竭的病人中，应用Fab片段后由于肾功能衰退，可使其在血浆中滞留达2～3周。 应用Fab片段后，血清中总地高辛浓度将增高大约10～30倍，而未结合的地高辛部分却迅速下降。鉴于未结合的地高辛才具有药理学活性，准确可靠地检测应用Fab片段后不同时间的血清非结合地高辛浓度就显得至关重要。这是因为从服用地高辛的病人体内快速清除所有具有生物活性的地高辛显然在临床上是不可行的，而测定未结合的地高辛浓度则是有意义的。尽管还没有确切的证据证明上述论点，但这一想法是合理的。服用Fab片段后的体内地高辛的药代动力学变化与Fab的分布有关。监测服用Fab片段后未结合地高辛浓度适用于控制肾衰病人地高辛毒性复发、估价是否需要加服Fab以及是否需要加服地高辛。然而，对服用地高辛Fab片段的血清标本来说，用现有的大部分免疫检测法得出的地高辛浓度值多会产生误导。检测用的抗体和Fab片段对地高辛及其示踪物具有相似的亲和力，因此大部分检测方法中Fab片段由于能与示踪物结合而干扰测定。事实上，近几年来大量文献注意到了由于血中的这类解毒药引起的地高辛测定值的不一致性。有篇文章特别报道了一位病人服用Fab后用几种不同的免疫测定法得出的地高辛测定值的差异长达14d之久。通常来说，免疫测定中的清洗步骤使清除未结合Fab片段早于示踪物的加入，从而并不容易受到Fab片段的干扰。
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先天性疟疾1例的实验室诊断体会
患儿男性，39 d，足月顺产。出生3 d后出现发热，体温在38～39℃之间。曾在当地医院治疗后稍好转。因隔日发热9 d于1998年6月9日入我院。体检：T：38.2℃，神志清，贫血貌，肝、脾肿大，质软。其母孕6个月时患疟疾，经治疗自觉症状消失。实验室检查：RBC 2.55×1012/L，Hb 74 g/L，WBC 21.6×109/L，PLT 110×109/L，分类N 0.94，L 0.06，血涂片找到裂殖体及配子体间日疟原虫。住院诊断：先天性间日疟。经抗疟疾治疗7 d，复查血片未见疟原虫后，带药出院。 讨论：先天性疟疾是指新生儿在没有因蚊直接感染或输血等情况下，由母体感染的疾病。感染途径主要有两种：(1)宫内感染，多于出生后5～7 d内起病；(2)产时感染，潜伏期一般为7～30 d。本例患儿出生3 d后突然发热，出现症状时间短于间日疟短的潜伏期，结合其母孕期有疟疾发作史，患儿血涂片找到间日疟原虫，可诊断为先天性疟疾，考虑是宫内感染所致。疟疾患者除血涂片可查见疟原虫外，血液学检查会出现特征性改变，表现为：血红蛋白降低，红细胞大小不均，出现异形红细胞甚至有核红细胞；血小板降低；白细胞在初期有轻度增高，其后减少；单核细胞增多等。本例患儿血液学检查结果比较特别：红细胞呈小细胞低色素性改变，白细胞显著增加，达21.6×109/L，分类中性粒细胞高达0.94，单核细胞极少见，表现为典型的急性感染样血象。检验科日常使用全自动血液分析仪进行白细胞分类，很容易使这类患者漏检，而笔者考虑其血红蛋白下降明显，认真细致地检查血涂片并找到疟原虫，为临床诊断提供了确切证据。由此认为，目前在医院普遍使用先进的血细胞分析仪时，应注重显微镜涂片检查，特别是仪器提示有红细胞、白细胞、血小板等参数异常时，以防特殊的寄生虫病及血液病漏检。
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石油醚替代二甲苯作油镜头和染油标本片脱油剂
二甲苯作脱油剂洗脱血片、骨髓片和显微镜镜头上的香柏油由来已久，其缺点也是显而易见的，使用者长期接触可出现头晕、乏力、失眠、记忆力减退等症状，偶见白细胞降低及接触性皮炎者，误入口、眼毒害有加。有的使用70∶30的乙醇乙醚混合液，但乙醚刺激气味太大，在阳光下遇空气，有形成爆炸性过氧化物的危险，长期接触也会导致头痛、眩晕、疲惫、胃肠功能紊乱。我们用石油醚作脱油剂为时不短，涂片不褪色、有核细胞无裂纹、洗脱效果佳。石油醚属于烷烃类，微毒、无刺激性气味，使用方便，但石油醚亦属易燃品，使用时仍须注意防火。
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介绍一种乳糜尿的定性方法
乳糜尿是乳糜微粒分散于尿液中而形成的乳浊尿液，而乳糜微粒的主要化学成分是甘油三酯，笔者根据甘油三酯酶法(GPO-PAP法)测定原理，取酶试剂1 ml于试管中，滴加尿液1滴，混匀，置37℃，10min观察结果，显红色为阳性，不变色为阴性，本法与传统的乙醚抽提后苏丹Ⅲ染色法比较，具有操作简便、特异性强，试剂易得等优点，值得同行一试。
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循证医学与循证检验医学的概念
循证医学（evidence-based medicine）是二十一世纪临床医学的发展趋势，将循证医学的原则运用到检验医学中，将会更好地促进检验医学的发展,“循证检验医学(evidence-based laboratory medicine，EBLM)”的概念就反映了这种趋势。循证检验医学的基本概念 一、循证医学的基本概念 循证医学，简言之，就是任何临床的诊治决策，必须建立在当前好的研究证据与临床专业知识和患者的价值相结合的基础上。所谓好的研究证据，就是指迄今已有的，包括新的，接近事实的证据，它们是指来自于当前所有与临床相关的研究(包括医学基础研究)，特别是以患者为中心的临床研究所得出的证据，如：精确的诊断试验（包括临床检查）、预后指标的强度、治疗和康复及预防措施的有效性和安全性等。这些不断更新的证据，不仅可以否定以前已被接受的诊断试验和治疗方案，并且也能被更强、更精确、更有效和更安全的证据所取代。所谓临床专业知识，是指临床医师用其临床技能和经验去迅速辨别每一位患者的健康状况、诊断其潜在的危险或有利之处、以及患者的个人价值和期望的能力。而所谓患者的价值是指当患者被作为服务对象的时候，他们每个人所特有的爱好、关切的事情和期望都必须在临床决策中得到充分的考虑、结合和体现［1］。 我们收集上述证据的来源主要是医学期刊和生物学期刊中的文献，而这些论著的水平不一，还可能存在发表偏倚(publication bias)。据美国内科医师学院杂志俱乐部统计，即使是国际著名的医学期刊杂志，平均的佳论著率也仅及2%左右。因此，要保证收集到的论著证据是好的，必须运用临床流行病学的科研设计原则和评价方法对各种论著进行严格的质量评价，去伪存真，去芜存菁，才能获得“当前好的证据”。随机对照试验（randomized control trial，RCT）是进行临床治疗性研究和预防研究的好的研究方案，而Cochrane图书馆（Cochrane Lib, CL）则是对临床医学各专业防治研究中的RCT的系统评价（SR）资料库，其评价资料根据全世界同类研究的新发展而迅速更新。“循证医学”是一种以证据为基础的医学模式，是传统的以经验为基础的经验医学的发展和变革；而循证医学的实施，必须首先依靠临床流行病学的方法来提供获得好证据的研究方法和评价原则，是实践循证医学的重要工具之一。 二、循证检验医学的基本概念检验医学属于诊断试验，循证检验医学就是按照循证医学“以当前好的证据为基础”的原则，用临床流行病学的方法学规范检验医学的研究设计和文献评价、用当前好的检测技术和质量控制体系对检测结果进行严格的质量控制和评价，其任务是向临床医师提供反映患者真实情况的证据。循证医学将证据的使用者称为user，证据的研究和提供者称为doer；在使用生物医学基础研究作为方法学证据时，检验医学具有user的特征；作为向临床医师提供患者证据者，检验医学又具有doer的特征。
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国外检验医学相关专业刊物和杂志
Advances in Clinical Chemistry临床化学进展（纽约） Aerztliche Laboratorium医疗实验室（柏林） American Journal of Medical Technology美国医疗技术杂志 (休斯敦) Analyst化验师（伦敦） Annals of Clinical and Laboratory Science临床和实验室科学记事（费城） Annals of Clinical Biochemistry临床生物化学记事（伦敦） Archives of Pathology and Laboratory Medicine病理和实验室医学文献集（芝加哥） Australian Journal of Medical Laboratory Science澳大利亚医学实验室科学杂志（布里斯班） Canadian Clinical Laboratory加拿大临床实验室（多伦多） Canadian Journal of Medical Technology加拿大医疗技术杂志（哈密尔顿Hamilton） Clinical Chimica Acta临床化学学报（阿姆斯特丹） Clinical Biochemist Reviews临床生化学家评论（澳大利亚） Clinical Biochemistry临床生物化学（多伦多） Clinical Chemistry临床化学（夏洛茨维尔Charlottesville） Clinical Chemistry and Laboratory Medicine临床化学和实验室医学（柏林） Clinical Chemistry Lookout 临床化学文献概览（阿姆斯特丹） Clinical Laboratory International国际临床实验室（布鲁塞尔） Clinical Laboratory Letter临床实验室快报（黑格斯敦） Clinical Laboratory Management Review临床实验室管理评论（巴尔的摩） Clinical Laboratory Science临床实验室科学（华盛顿） Clinics in Laboratory Medicine 实验医学临床（费城） Critical Reviews in Clinical Laboratory Sciences临床实验室科学鉴定性评论（美国，博卡拉顿） Current Advances in Clinical Chemistry现代临床化学进展（牛津） Current Clinical Chemistry现代临床化学（牛津） Diagnostic Laboratoryjna实验诊断学（华沙） Diagnostic Medicine 诊断医学（美国，奥拉德尔） International Journal of Clinical and Laboratory Research国际临床与实验研究杂志（柏林） Japanese Journal of Clinical Chemistry临床化学（大阪） Japanese Journal of Clinical Laboratory Automation日本临床检查自动化学会志（东京） Japanese Journal of Clinical Pathology临床病理（东京） Journal of Clinical Biochemistry and Nutrition临床生物化学与营养杂志（川崎） Journal of Clinical Laboratory Analysis临床实验室分析杂志（纽约） Journal of Clinical Laboratory Automation临床实验室自动化杂志（纽约） Journal of Laboratory and Clinical Medicine实验室与临床医学杂志（圣路易斯） Journal of Medical Technology临床检查（东京） Klinicheskaia Laboratornaia Diagnostika临床实验诊断（莫斯科） Klinische Chemie临床化学（格拉费尔芬Graefelfing） Klinishe Chemie Mitteilungen临床化学通报（格拉费尔芬） Laboratory Medicine实验室医学（费城） Laboratory World实验室世界（费城） Medical Laboratory Science医学实验室科学（牛津） Medical Laboratory World医学实验室世界（伦敦） Medical Technology医疗技术（东京） Meditsinskaia Tekhnika医疗技术（莫斯科） Medizintechnik医疗技术（斯图加特） Modern Medical Laboratory检查与技术（东京） Proceedings of Japan Society of Clinical Biochemistry and Metabolism日本临床生化与代谢学会纪录（东京） Quaderni Sclavo di Diagnostica Clinica e di Laboratorio临床与实验室诊断季刊（意大利锡耶纳） Revue de Investigacion Clinica 临床检查杂志(墨西哥城) Scandinavian Journal of Clinical and Laboratory Investigation 斯堪的纳维亚临床与实验研究杂志(挪威，奥斯陆) Sudebno-Meditsinskaia Ekspertiza法医检验（莫斯科） Zeitsshrift fur MedizinischeLaboratoriumsdiagnostik医学实验室诊断杂志（柏林）
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| 2000 | 01 02 03 04 05 06 |
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| 1998 | 01 02 03 04 05 06 |
