46,XY,t(2;4)(q37;q27)易位一家系两例

患者男,30岁,结婚5年,其妻生育2胎,第1胎生后6个月因患先天性心脏病夭折.第2胎为先天性右足内翻,并伴有智力障碍,虽经矫形手术,但至今已2岁,仍不能独自行走.患者表型、智力正常,无有害物接触史.患者兄弟2人,弟弟未婚,父母非近亲结婚,否认遗传病家族史.

染色体平衡易位五例

例1女,27岁,结婚4年共孕两次,均于孕8～10周无明显诱因自然流产.夫妇表型及智力正常,无毒物及放射性物质接触史,无烟酒嗜好,非近亲婚配.

男性染色体异常三例

例1男,27岁,结婚3年未育.患者表型、智力正常.双侧睾丸小,阴茎小,精液检查3次均为无精.Y染色体无精子因子(azoospermia factor, AZF)区域微缺失筛查:采用多重PCR技术对AZF区4个亚区的8个序列标签位点(sequence tagged sites, STS)位点:AZFa区sY84、sY86,AZFb区sY127、sY134、sY129,AZFc区sY254、sY255,AZFd区sY152及性别决定基因(sex-determining region of Y, SRY)基因扩增,未发现缺失.

46,XY,inv(9)(p11;q13)一例

患者男,25岁,结婚1年,其妻第1次妊娠,孕32周例行产前检查时,B超示胎儿脐带膨出,腹壁缺损,肠外翻.患者夫妇双方表型、智力正常,非近亲结婚,无致畸因素接触史.

18号与其他常染色体平衡易位四例

例1女,32岁,婚后6年自然流产5次,均于孕70～90天无明显诱因阴道流血,经B超检查证实胚胎发育停止而行清宫术.孕期无毒物接触史及其他感染史.夫妇表型、智力正常,非近亲结婚.妇科检查未见异常,ABO、Rh及其辅助检查均无异常.

染色体核型异常八例

例1女,23岁.结婚3年怀孕2次,第1次妊娠4个月时,B超检查示妊娠囊为空囊,第2次妊娠3个月时自然流产,否认孕期有感染和有毒物质接触史.查体:患者表型及外生殖器均正常.外周血淋巴细胞培养染色体检查,G显带,染色体核型为46,XX,t(1;10)(q42;q11).

上海人群面肩肱型肌营养不良症相关位点的D4Z4多态性

目的对上海人群4q35位点D4Z4重复序列进行研究,分析D4Z4的多态性.方法 191名正常上海人的基因组DNA经EcoR Ⅰ/B1n Ⅰ双酶水解后,应用脉冲场凝胶电泳及Southern印迹测定其染色体4q35位点的D4Z4片段长度,并对短的D4Z4片段用KpnⅠ酶进行部分酶切以计数其D4Z4串联重复序列数.结果在191名正常上海人群中,有17人(占8.9%)携带短的D4Z4片段,其长度在22～34 kb之间;其中16人携带的短D4Z4片段位于4q35位点,1人携带的短D4Z4片段为4q35→10q26.结论面肩肱型肌营养不良症的发病虽与4q35位点D4Z4片段的串联重复序列数减少有关,但上海人群中携带4q35位点短的D4Z4片段个体的比例明显高于西方人群,提示其他因素可能也参与面肩肱型肌营养不良症的发病.

光谱核型分析检测人未受精卵细胞非整倍体

目的建立光谱核型分析检测人未受精卵细胞非整倍体的方法. 方法取试管婴儿术后成熟未受精卵细胞,固定后行光谱核型分析,检测卵细胞各染色体的核型情况. 结果 64%的卵细胞核型正常,36 %的卵细胞为非整倍体,其中22%为同源染色体不分离,14%为姐妹染色单体非平衡性过早分离. 结论光谱核型分析可用于检测卵细胞各条染色体的异常.同源染色体不分离和姐妹染色单体非平衡性过早分离均参与了卵细胞非整倍体的产生.

Caspase 9及其相关分子基因表达水平改变对同型半胱氨酸内皮凋亡的影响

目的了解caspase 3信号传导通路中上游分子Bcl 2、细胞色素c(cytochrome-c)、caspase 9在同型半胱氨酸作用下的人脐静脉血管内皮细胞内的mRNA及蛋白表达水平的改变,揭示线粒体参与信号传导链在caspase 3所介导的内皮细胞凋亡过程中的作用.方法培养人脐静脉内皮细胞,用不同浓度同型半胱氨酸作用于细胞后,用逆转录-聚合酶链反应及Western印迹分别检测各分子基因及蛋白表达水平的改变.结果 Bcl 2、cytochrome-c和caspase 9在同型半胱氨酸作用下mRNA及蛋白表达水平下降,并且随同型半胱氨酸浓度的升高而降低.结论 Bcl 2可能参与了同型半胱氨酸促进细胞凋亡的信号传导途径. Caspase 3没有通过上游分子apoptosome和caspase 9途径活化.这些研究结果提示,同型半胱氨酸诱导细胞凋亡并不是通过以线粒体凋亡通路为主的信号传导通路.

先天性多数牙齿缺失家系 PAX9基因两个新突变功能的初步研究

目的对成对盒基因(paired box gene,PAX) PAX9两个新突变109(InsG)及139(C→T)分子生物学功能及与先天性多数牙齿缺失的发病机理进行初步探讨.方法分别以先天性多数牙齿缺失家系A[109(InsG)]、家系B[139(C→T)]中患者及健康成员基因组DNA为模板,PCR扩增 PAX9基因DNA结合域序列(paired domain,PD),构建原核表达质粒GST,进一步在大肠杆菌中诱导表达,纯化表达产物,分离制备PAX9PD蛋白.凝胶迁移试验检测PAX9PD蛋白与靶DNA(CD19-2和Pax6CON)结合活性.结果野生型PAX9PD蛋白与靶DNA结合,109(InsG)及139(C→T)突变的PAX9PD蛋白皆失去与靶DNA结合能力.结论 109(InsG)及139(C→T)突变造成 PAX9基因DNA结合域功能丧失,可能是导致多数牙齿先天性缺失的原因.

TNFA基因启动子区多态性与HBV感染结局的关联研究

目的在中国汉族人群中探讨TNFA基因启动子区单核苷酸多态性是否与HBV感染结局相关联. 方法以148例HBV自限性感染者和207例慢性乙肝患者为研究对象,应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性和序列特异性引物-PCR方法对TNFA基因启动子区5个位点,-238G/A、-308G/A、-857C/T、-863C/A和-1031T/C进行基因型分型,用EPI和EH等统计学软件分析各位点等位基因、基因型、单倍型频率及其组间差异. 结果 TNFA基因-238位GG基因型在慢性肝炎组的频率显著高于自限性感染组(P=0.02),-857 TT基因型的频率在慢性肝炎组显著低于自限性感染组(P=0.02).TNFA基因-238/-308/-857/-863/-1031组成的单倍型GGCCT的频率在慢性肝炎组显著低于自限性感染组(P=0.03),单倍型GGCAT与GGTAT在慢性肝炎组的频率显著高于自限性感染组(P=0.0001,P=0.004).结论 TNFA基因启动子区多态性与HBV感染结局显著关联.

小睑裂综合征家系的FOXL2基因突变研究

目的对小睑裂综合征家系患者的 FOXL2基因突变进行研究,寻找突变位点.方法设计 FOXL2基因特异性引物进行PCR扩增,然后测序,并对突变位点进行克隆后测序.结果在一个类型尚不明确的家系中2例患者 FOXL2基因PCR扩增后测序发现951-953(delC),克隆后多克隆位点测序亦证实951-953(delC).所有正常人均未发现突变.951-953(delC)引起238位S后出现移码突变,终止密码子提前,蛋白截短.结论 951-953(delC)致蛋白截短,可能是导致小睑裂综合征的原因.经查新验证,951-953(delC)是一个新的突变位点,国内外未见报道.

母系遗传耳聋大家系的线粒体基因组全序列分析

目的在江苏淮阴一母系遗传非综合征型耳聋大家系中,寻找线粒体基因组上可能影响1555(A→G)突变表型的其他位点突变. 方法采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析 (PCR-restriction fragment length polymorphism, PCR-RFLP) 和测序技术,检测了核心分支家系中27名母系成员的线粒体DNA上1555位点和7445位点的碱基变化,进而对该家系2名母系成员的线粒体全基因组和其他25名母系成员线粒体12S rRNA基因 MTRNR1和tRNA-Ser(UCN)基因 MTTS1进行了全长测序. 结果再次证明了1555(A→G)突变是该家系成员致聋的分子生物学基础之一;并发现该家系27名母系成员的线粒体基因组中除1555(A→G)突变外,还同时存在有955-960(insC)同质型突变,两突变共分离.另外,新发现一个线粒体DNA突变--7449(insG),但该突变仅在2名母系成员中存在. 结论推测955-960(insC)突变可能通过改变12S rRNA基因的高级结构,并与1555(A→G)突变协同作用,提高了突变携带者对氨基糖甙类药物的敏感性;同时该突变可能也会导致线粒体蛋白质的合成缺陷,从而提高1555(A→G)突变致聋的外显率.

一个中国耳聋家系的SLC26A4基因分析

目的确定一个非综合征型耳聋家系的致病基因.方法应用聚合酶链反应-直接测序方法,对溶质转运蛋白家族26,成员4 (solute carrier family 26, member 4; SLC26A4)基因的所有外显子及其与内含子交界处进行测序寻找突变.结果在该家系先证者发现 SLC26A4基因的N392Y、S448X复合杂合突变,其父亲为S448X的杂合突变,其母亲为N392Y的杂合突变.结论SLC26A4基因的N392Y、S448X复合杂合突变是导致该先证者耳聋发生的原因.

一个X-连锁视网膜色素变性中国家系的RPGR基因的新突变

目的对中国人X-连锁视网膜色素变性一家系进行分子遗传学检测,报告RPGR基因突变.方法首先对该家系X染色体进行致病基因的连锁分析,然后用单链构象多态性技术和直接DNA测序方法进行基因突变分析. 结果连锁分析在多态性微卫星遗传标记DXS8012和DXS8025产生正的Lod值分别为2.41(Zmax=2.40, θ=0) 和1.26.进一步单倍型分析确定该家系致病基因位于Xp21.1, 与 RP3连锁.用RPGR基因突变分析,在外显子ORF15+483_484发现GA缺失,引起阅读框架的改变,该基因缺失突变在家系中共分离.结论报告了中国人X-连锁视网膜色素变性RPGR基因外显子ORF15+483_484的GA缺失突变,丰富了中国人RPGR基因突变谱,为今后研究X-连锁视网膜色素变性的基因奠定基础.

小热休克蛋白22基因在腓骨肌萎缩症中的突变分析

目的探讨小热休克蛋白22(small heat-shock protein 22, HSP22)基因在中国人腓骨肌萎缩症(Charcot-Marie-Tooth disease,CMT)中的突变特点.方法应用聚合酶链反应和DNA直接测序方法,对1个发现HSP22基因423(G→T)突变的CMT2L家系外的114个CMT家系先证者进行了HSP22基因的突变分析.结果114个先证者中有2例患者在 HSP22基因的第3外显子发生了582(C→T)碱基改变,由于编码的氨基酸未改变,均为色氨酸(Thr),为一种同义突变.结论HSP22基因突变在中国人的腓骨肌萎缩症患者中少见,突变率为0.87%(1/115).

小鼠植入前胚胎对输卵管上皮细胞DNA甲基转移酶1表达的影响

目的探讨小鼠植入前胚胎对输卵管上皮细胞DNA甲基转移酶1(DNA methyltransferase 1,Dnmt1)表达的影响. 方法应用免疫组织化学方法确定Dnmt1蛋白在小鼠输卵管的组织学定位;选取植入前胚胎的2细胞期、4细胞期和8细胞期作为3个观察点,采用实时逆转录-聚合酶链反应和Western印迹分别检测正常妊娠和假孕小鼠输卵管上皮Dnmt1 mRNA和蛋白表达水平的变化. 结果 Dnmt1蛋白主要表达于上皮层;妊娠组小鼠各期Dnmt1 mRNA表达水平均显著性低于同期假孕组(P<0.05),妊娠组4细胞期Dnmt1蛋白表达水平显著性低于同期假孕组(P<0.05). 结论小鼠植入前期的胚胎对母体输卵管上皮Dnmt1 mRNA和蛋白表达存在调节作用,提示胚胎可能通过DNA甲基化间接调控输卵管上皮某些基因的表达,Dnmt1可能参与胚胎-母体交流的部分机制.

CYP3A5基因的多态性及其临床意义的研究

目的了解中国人群中细胞色素P450 3A5基因 CYP3A5的多态性及其基因型与临床功能之间的关联.方法应用变性高效液相色谱技术对180份样本进行基因变异的检测,并经测序验证;以免疫荧光偏振技术监测12例造血干细胞移植患者环孢素(cyclosporin A,CsA)血浓度,数据经统计学软件分析和处理.结果 180份样本中,共检测出1种等位基因即CYP3A5·3,其频率为76.1%(274/360);3种基因型,即纯合子CYP3A5·1/·1 10份,占总数的5.6%;杂合子CYP3A5·1/·3 66份,占总数的36.7%;纯合子CYP3A5·3/·3 104份,占总数的57.8%.12例造血干细胞移植患者中检测出两种基因型,即CYP3A5·1/·1 2例和 CYP3A5·1/·3 10例.CYP3A5·1/·1患者外周血均一化后的CsA浓度与CYP3A5·1/·3相比较,前者谷浓度C0较后者低,相差2.3～6.6倍,差异有统计学意义(P<0.01);服药后2 h峰值C2亦较后者低,相差1.4～3.8倍,同样差异有统计学意义(P<0.01).结论 CYP3A5·3是中国人群中主要的多态性, CYP3A5基因型与造血干细胞移植患者血中CsA浓度紧密关联,CYP3A5·1/·1比CYP3A5·1/·3需要更大剂量的CsA以维持相同的血浓度.应用变性高效液相色谱对 CYP3A5进行基因型分型,可以预测患者CYP3A5的功能,进而预测其CsA的需求量,使临床应用CsA更加安全有效和个体化.

IRS2基因G1057D变异与中国汉族人肥胖型2型糖尿病的相关性

目的研究 IRS2基因G1057D突变与中国汉族人2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus, T2DM)的相关性.方法选取辽宁汉族人T2DM组218例,健康对照组221名,各分为肥胖和非肥胖两个亚组.应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性方法筛查 IRS2 G1057D突变并探讨与T2DM的相关性. 结果 (1) IRS2 G1057D总突变频率为29%.非肥胖DM组DD型频率显著低于非肥胖对照组,Logistic回归分析显示DD型OR值为0.265;而肥胖DM组DD型频率则显著高于肥胖对照组,Logistic回归分析显示DD型的OR值为3.991.(2)在非肥胖亚组:DM组DD型的WHR高于同组GG型(P<0.01);对照组DD型的FPG及2hCP低于同组GG型(P<0.05,P<0.01),HOMA-B高于同组GG型(P<0.01).在肥胖亚组:DM组DD型的WHR、HOMA-IR及2hPG、2hINS、2hCP均高于同组GG型,HOMA-B低于同组GG型;对照组DD型的WHR、2hINS 、HOMA-IR及HOMA-B也分别高于及低于同组GG型(均P<0.05).结论 IRS2基因G1057D突变以肥胖为中介与T2DM相关联.

紧密连锁的多态性位点在β地中海贫血植入前遗传学诊断中的应用

目的探讨与β珠蛋白基因紧密连锁的多态性位点 HumTH01在β地中海贫血(β地贫)植入前遗传学诊断(preimplantation genetic diagnosis,PGD)中的作用.方法对4例已出生重型β地贫患儿的、双方均为β地贫基因携带者的夫妇进行了6个周期的PGD治疗,应用多重巢式PCR同时检测β珠蛋白基因及 HumTH01基因,选择健康的胚胎移植入子宫.结果 6个周期共活检44个胚胎,获得44个卵裂球,其中41个卵裂球扩增成功,35个胚胎经PCR分析后获得明确诊断,移植了14个胚胎,获得1例临床妊娠.孕17周时经脐带血穿刺,证实为完全正常胚胎,现已出生一正常女婴.单个卵裂球平均扩增效率为89.7%,等位基因脱扣(allele drop-out, ADO)率为14.4%. HumTH01基因可以帮助检测出ADO及污染的发生.结论本研究为国内首次报道应用多重巢式PCR同时检测β珠蛋白基因及 HumTH01基因对β地贫进行植入前遗传学诊断并成功获得临床妊娠.在PGD中同时检测与β珠蛋白基因紧密连锁的多态性位点可以降低PGD中由于ADO及污染造成的误诊的风险.

DNA修复基因XPC Ala499Val、Lys939Gln多态与肺癌易感性

目的探讨中国人DNA修复基因XPC Ala499Val、Lys939Gln多态与肺癌易感性的关系. 方法以社区为基础的病例对照研究.经组织学确诊的肺癌病例320例,相同地区年龄和性别频数匹配的人群对照322人,以PCR为基础的方法进行多态性检测,比较不同基因型与肺癌风险的关系,并探讨吸烟在其中的影响. 结果与携带499 Ala/Ala基因型者比较,携带至少1个499Val等位基因者(即Ala/Val 和Val/Val基因型)肺癌风险增加1.54倍(95%CI=1.11～2.14),而同时有499和939两个位点变异等位基因者肺癌风险增加2.55倍(95%CI=1.45～4.52).交互作用分析显示,XPC 499Val变异基因型与吸烟具有超相乘模型的交互作用,同时有两个位点变异等位基因并吸烟者肺癌风险增加可高达7.36倍(95%CI=3.19～17.0). 结论 XPC Ala499Val和Lys939Gln多态可能与中国汉族人群肺癌遗传易感性有关,并可显著增加吸烟对肺癌的危险性.

脐血干细胞移植治疗假肥大型肌营养不良症

目的比较假肥大型肌营养不良症(Duchenne muscular dystrophy, DMD)患者经脐血干细胞移植治疗前后其肌肉再生、抗肌萎缩蛋白表达和运动功能的改变;以及评价治疗的安全性.方法对1例经基因分析和肌肉活检及抗肌萎缩蛋白检测确诊的、已丧失行走能力的DMD患儿,经HLA配型,在脐血库中寻找到一个全相合的脐血供体.采用白消安+环磷酰胺+兔抗胸腺淋巴细胞球蛋白预处理后进行异基因脐血干细胞移植;术后采用环孢素A和骁悉方案预防移植物抗宿主反应(graft versus host reaction,GVHD).同时定期检测原发病的生化指标如血清肌酸激酶(creatine kinase, CK)、造血重建的植入证据 (血型转变、肌肉和血液系统的聚合酶链反应-短串联重复序列分析)、缺陷基因是否纠正、新生肌肉是否出现、肌肉中抗肌萎缩蛋白是否表达和运动功能是否改善.结果 (1)中性粒细胞在脐血干细胞移植后第15天(+15天)达到0.5×109/L,白细胞在+25天达正常水平;血小板于+22天达到20×109/L;血红蛋白维持于85～100 g/L.术后140天骨髓穿刺提示三系生长旺盛; (2)移植后140天血型转为供体AB型.至今没有出现移植物抗宿主反应. (3)术后18天、30天、43天、55天、74天、233天患者外周血DNA和术后140天、183天、235天骨髓细胞DNA经PCR-STR检测为供者独立植入;(4)患儿术后60天取外周血做基因分析,显示19号缺失的外显子得到完全纠正,患儿转变为正常基因型;(5)患儿在移植后75天的肌肉活检可见新生肌管形成,抗肌萎缩蛋白免疫组化呈弱阳性,少数为强阳性反应,DNA分析:供者基因DNA占1%～13%;移植后126天抗肌萎缩蛋白免疫组化检测显示阳性的肌纤维明显增多,供者基因DNA上升至2.5%～25%;(6)患儿血清CK从移植治疗前的5735 U/L降至274 U/L; (7)术后100天体检发现患儿肌力略有改善,肢端温暖.结论异基因脐血干细胞移植治疗DMD,可在移植后短期内重建造血功能、血清CK显著下降、肌肉抗肌萎缩蛋白表达,患儿运动有所改善,提示造血干细胞移植将有益于DMD的治疗.

21三体综合征并发急性单核细胞白血病一例

患儿男,3岁,因"发现全身皮肤出血点"于2004年12月10日入院.患儿为第2胎,足月顺产.查体:呈先天愚型外貌,头短小、鼻梁低平、眼间距宽并斜视、眼球震颤;舌厚外露,流涎;手掌纹呈通贯手;不能独立行走.四肢及躯干见散在针尖样出血点,颌下可触及增大淋巴结.胸骨压痛;肝脾未触及.心率90次/分,听诊正常.

先天性外胚层发育不良一家系

先证者(Ⅱ2)男,12岁,身高130cm,较同龄人矮小,消瘦.经常发热,毛发稀疏,无毳毛,牙齿脱落较多,仅剩磨牙,且为锥形尖牙,智力正常.

Merosion缺失型先天性肌营养不良一例

患儿男,7岁,因"四肢软弱无力7年,点头样发作1月"就诊.患儿系第1胎,足月顺产,出生体重1.95 kg,生后即全身松软,吸吮力差.3月龄时头不能竖起,四肢松软无力,仅见腕、指运动,下肢小幅度水平移动,腱反射迟钝.

常染色体显性遗传Stargardt病Ⅲ型一家系10例

先证者男,汉族,50岁.双眼视力进行性减退10年,视力为0.01,不能矫正.色觉轻微异常.眼底黄斑区2×2 视盘直径金箔样反光,散在色素沉着,中心凹光发射消失,伴黄色斑点.外周视网膜可见骨针样色素沉着,视网膜动脉血管变细.光学相干断层成像术检查视网膜变薄.荧光血管造影显示黄斑区强荧光,未见脉络膜湮没.

直立性低血压一家系

先证者男,49岁.因不省人事,跌伤头部1 h入院.患者凌晨3时左右在家,长时坐位,起身小便时感头晕,继之不省人事,跌倒,约10 min后渐醒,发现头部跌伤,鼻孔及外耳道流血,无肢体麻木、运动异常、抽搐及二便失禁,经我院CT检查以“颅底骨折”收住神经外科,观察治疗半月后转入我科.

寻常型银屑病一家系

先证者(Ⅲ2) 男,37岁,因"全身皮疹12 年,加重10余天"就诊.患者于25岁时,胸部及背部首先出现绿豆大小的鲜红色丘疹,后皮疹逐渐波及头皮部及四肢,且渐扩大,有的相互融合成片,表面覆有银白色的鳞屑,除去鳞屑,基底可出现点状出血.每逢秋冬季节或饮酒时病情加重,曾多次在外院治疗未愈.近10余天来因饮酒上述症状再次加重.查体:发育正常,营养良好,全身表浅淋巴结不大.

2型糖尿病一家系12例

先证者(Ⅱ1) 女,自小喜食油腻食品,饭量大.自年轻时就很胖,中年时更加肥胖,身高165 cm,体重85 kg左右,50岁后经常头晕无力.查体:血压170/110 mmHg,甘油三脂4.32 mmoL/L,胆固醇8.74 mmoL/L.经饮食控制,血压、血酯仍高于正常.55岁时,脑溢血,右半身偏瘫.2年后,身体逐渐消瘦,且多饮、多尿、饥饿感明显.空腹血糖10 mmoL/L以上(正常值≤6.1 mmol/L).

发作性运动诱发性运动障碍64例临床分析

发作性运动诱发性运动障碍(paroxysmal kinesigenic dystonia,PKD)或称发作性运动诱发性舞蹈指痉症(paroxysmal kinesigenic choreoathetosis,PKC),是一种反复发作的,以突然运动诱发出现肌张力障碍、舞蹈、手足徐动、投掷动作等运动增多症状为特征的运动障碍性疾病.国内报道较少,为提高对本病的认识,现将我院近10年门诊诊治的64例PKD患者的临床资料报告如下,并结合文献进行讨论.

逆转录-多重巢式聚合酶链反应技术在急性单核系白血病M4/M5 MLL基因重排检测中的应用

目的探讨逆转录-多重巢式聚合酶链反应(多重PCR)技术在初诊M4/M5患者MLL基因重排检测中的价值.方法采用骨髓直接或短期培养法制备染色体,应用R显带技术进行核型分析.采用多重PCR技术,检测40例初诊M4/M5患者中5种急性髓系白血病常见的MLL融合基因以及MLL部分串联重复.结果 R显带揭示7有涉及11q23的易位,包括t(6;11)(q27;q23)、t(9;11)(p21;q23)、t(11;17)(q23;q21)、t(11;19)(q23;p13.1),14例有其他核型异常,19例为正常核型.多重PCR证实了7例核型分析显示11q23易位标本中的6例,例3核型分析揭示46,XX, t(6;11) (q27;q23),多重PCR检测 MLL/AF6为阴性;19例显带分析为正常核型标本中检出2例MLL部分串联重复.结论多重PCR是对初诊M4/M5患者进行各种MLL重排筛检的有效方法.

雌激素受体-α基因Xba Ⅰ、 Pvu Ⅱ和BstU Ⅰ多态性与男性骨量的关系

目的了解雌激素受体-α(estrogen receptor-α, ER-α)基因多态性与男性骨密度(bone mineral density, BMD)的关系.方法 PCR-限制性片段长度多态性检测上海市388名46～80岁无血缘关系的健康汉族男性 ER-α基因Xba Ⅰ、 Pvu Ⅱ和BstU Ⅰ多态性,双能X线吸收仪检查腰椎1～4(L1～4)和股骨近端股骨颈(femoral neck)、大转子区(trochanter)和Ward's三角部位BMD. 结果被研究人群Xba Ⅰ和Pvu Ⅱ等位基因频率分布符合Hardy-Weinberg定律.未发现 ER-α基因第1外显子区存在BstU Ⅰ多态性,所有对象均是BB基因型.Xba Ⅰ多态性与各部位BMD值均无相关;Pvu Ⅱ多态性与L1～4和Ward's三角部位BMD值均有关联 (P<0.05),Pp基因型在上述部位平均BMD值明显高于PP和pp基因型 (P<0.05). 结论本研究结果提示中国汉族人群缺乏或罕有 ER-α基因BstU Ⅰ多态性; ER-α基因Pvu Ⅱ多态性可能影响老年男性松质骨骨量的丢失.

血小板活化因子乙酰水解酶基因994(G→T)突变与脑梗塞的关联性

目的研究血浆型血小板活化因子乙酰水解酶(platelet-activating factor-acetylhydrdase, PAF-AH)基因994(G→T)点突变与脑梗塞常见类型的相关性.方法应用聚合酶链反应技术,检测108例脑梗塞患者(分为动脉粥样硬化性脑梗塞组、腔隙性脑梗塞组和心源性脑梗塞组)和215名正常对照中,血浆型PAF-AH基因该突变的基因型频率和等位基因频率.结果对照组994(G→T)突变的基因型频率为20.46%(杂合子:18.60%;纯合子:1.86%).全部脑梗塞患者人群中,突变基因型频率为35.19%(杂合子:32.41%;纯合子:2.78%),明显高于对照组(P<0.01);其中动脉粥样硬化性脑梗塞组该突变基因型频率为38.10%(杂合子:34.92%;纯合子:3.18%),与对照组相比差异有统计学意义(P<0.01).腔隙性脑梗塞组和心源性脑梗塞组的该突变基因型频率分别为:32.35%(杂合子:29.41%;纯合子:2.94%)和27.27%(杂合子:27.27%;纯合子:0);与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05).结论血浆型PAF-AH基因994(G→T)T点突变与中国人脑梗塞的发生显著相关,其相关性主要来源于动脉粥样硬化性脑梗塞,而与腔隙性脑梗塞可能无明显关联.

四氢生物蝶呤负荷试验在高苯丙氨酸血症鉴别诊断中的价值

目的对高苯丙氨酸血症患者进行口服四氢生物蝶呤(tetrahydrobiopterin,BH4)负荷试验,了解该方法在高苯丙氨酸血症中的鉴别诊断价值.方法新生儿筛查阳性以及临床诊断的高苯丙氨酸血症患儿73例(男47例、女26例),中位数年龄1.93月,进行口服BH4负荷试验(20 mg/kg).对其中血苯丙氨酸(phenylalanine Phe)浓度＜600 μmol/L者给予口服Phe-BH4联合负荷试验,同时进行尿蝶呤谱分析,红细胞二氢生物蝶啶还原酶测定.结果在BH4负荷试验或Phe-BH4联合负荷试验中,经典型苯丙酮尿症(phenylketonuria, PKU)的血Phe对BH4无反应;苯丙氨酸羟化酶缺乏引起的中度PKU的血Phe 24 h下降32.8%;BH4缺乏症患者服BH4后血Phe表现出特征性的快速下降,4 h降至正常水平,并且维持至24 h.结合其他检测结果,22例诊断为经典型PKU,39例中度PKU,12例BH4缺乏症.结论高苯丙氨酸血症是由苯丙氨酸羟化酶缺乏或者BH4缺乏所引起,早期鉴别诊断十分重要.BH4负荷试验是快速、简便的体内诊断试验,安全可靠,有较高的鉴别诊断价值.

中国上海地区汉族人PGC-1α基因多态性与2型糖尿病相关性研究

目的研究过氧化物酶增殖激活受体-γ共激活子-1α(peroxisome proliferators-activated receptor-γ coactivator-1α, PGC-1α)基因单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)与2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus, T2DM)的关联性.方法应用聚合酶链反应-限制性内切酶片段长度多态性技术,选择 PGC-1α基因4个常见SNPs位点:Thr394Thr(ACG→ACA)、Gly482Ser(GGT→AGT)、Thr612Met(ACG→ATG)和IVS2+52C→A,对69个T2DM家系(310例)进行基因分型,并用传递不平衡检验(transmission-disequilibrium test,TDT)和同胞传递不平衡检验(sib transmission-disequilibrium,STDT)进行分析.用同样方法在无家族史的156例T2DM患者及111名糖耐量正常者中进行病例-对照关联分析,检验Gly482Ser多态性在散发人群中的分布.结果 (1)经TDT-STDT检验,未发现单个 PGC-1α基因SNPs位点在T2DM患病子代中优势传递;(2)在病例-对照关联分析中,Gly482Ser位点多态性在两组人群的分布差异有统计学意义,携带者GA基因型罹患T2DM的危险性可增加1.85倍,且等位基因在两组人群的分布差异有统计学意义(P=0.046);(3)在无家族史的糖耐量正常者中,Gly482Ser位点的GG基因型的高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇和甘油三酯水平与GA+AA基因型比较,差异有统计学意义 (分别为P=0.043,P=0.046,P=0.037).结论PGC-1α基因Gly482Ser多态性可能与T2DM的易感性相关.

精神分裂症与KCNN3基因1137～1140缺失移码突变传递不平衡研究

目的探讨 KCNN3基因1137～1140的4个碱基缺失所致移码突变与精神分裂症的关系.方法 95个核心家系共289名家庭成员,包含107例精神分裂症患者纳入本研究.精神分裂症采用CCMD-Ⅱ-R诊断标准. KCNN3基因1137～1140的4个碱基缺失基因型检测使用PCR技术和限制性内切酶DdeⅠ消化方法.精神分裂症与 KCNN3基因1137～1140缺失4个碱基的关联分析采用基于单倍型的单倍型相对风险率和传递/不平衡检验.结果患者组与正常父母组比较, KCNN3基因1137～1140的4个碱基缺失的基因型频数和等位基因频率分布差异无统计学意义(χ2=0.253, P>0.05和χ2=0.010, P>0.05).基于单倍型的单倍型相对风险分析发现父母传递与不传递给患者的 KCNN3基因等位基因之间差异无统计学意义(χ2=0.042, P>0.05).传递不平衡检验结果发现 KCNN3基因等位基因传递不存在连锁不平衡(χ2=3.000, P=0.0833).结论本组研究对象中, KCNN3基因第1外显子1137～1140的4个碱基缺失的发生率少;分析结果提示 KCNN3基因第1外显子1137～1140的4个碱基缺失的等位基因与精神分裂症无关联.

Turner综合征患儿标记染色体的来源研究

目的了解Turner综合征患儿标记染色体的来源,以指导遗传咨询及治疗.方法在染色体核型分析的基础上,对32例Turner综合征患者进行回顾性分析.对3例含有标记染色体的患儿进一步用荧光原位杂交技术研究标记染色体的来源.结果 3例含有标记染色体的Turner综合征患儿中,确定1例患儿的标记染色体来源于Y染色体,含有性别决定基因;1例来源于X染色体;另外1例未能确定其来源,该标记染色体可能来源于性染色体的其他片段或其他端着丝粒染色体.结论 Turner综合征患者的标记染色体大多来源于性染色体(X染色体、Y染色体),也可能来源于其他端着丝粒染色体.有必要同时应用X染色体和Y染色体特异性探针对Turner综合征患者进行标记染色体的荧光原位杂交分析,以明确标记染色体的来源.

人类白细胞抗原分子遗传中的基因重组

深入研究人类白细胞抗原(human leucocyte antigen, HLA)基因重组的分子生物学特性,对于揭示其等位基因多样性形成的演化机理以及人体所具有的抵抗多样致病微生物的防御能力具有重要意义.国外学者通过家系调查研究、统计学分析等方法估算了HLA的重组频率,证实了一些重组发生的热点,并且对重组的单倍型特异性、序列基序特异性、性别特异性等进行了深入研究.本文就HLA重组的交换频率、重组热点以及其它特性的研究现状作一综述.

西北地区汉族人群HLA-A、-B、-DRB1基因座单倍型分析

目的分析西北地区汉族群体HLA-A、-B和-DRB1基因座等位基因频率和HLA-A-B、B-DRB1和A-B-DRB1单倍型,获得单倍型频率数据.方法采用序列特异性寡核苷酸探针反向斑点杂交技术对西北地区62个家系和101个无关个体HLA-A、-B和-DRB1基因座进行基因分型,分析HLA单倍型.结果在西北地区汉族人群中检出15个HLA-A等位基因,28个HLA-B等位基因,13个HLA-DRB1等位基因, A02、A11、A24、B13、B15、B40、DRB1·04、DRB1·07、DRB1·09和DRB1·15基因频率较高(>10%),A02(0.3244)、B13(0.1200)和DRB1·15(0.1400)等位基因频率高.分析得出HLA-A-B、B-DRB1、A-B-DRB1单倍型分别有122、147和278种,83种A-B-DRB1单倍型有至少两条以上相同的单倍型,占总单倍型数的18.44%(83/450).A30-B13-DRB1·07、A02-B46-DRB1·09、A01-B37-DRB1·10、A24-B15-DRB·15、A02-B46-DRB1·08、A33-B58-DRB1·03是常见的单倍型.结论西北地区汉族群体HLA单倍型多态性较为丰富, 等位基因频率和单倍型频率数据可用于骨髓移植供者的选择、法医学亲权鉴定以及人类学研究.

载脂蛋白E基因多态性与新疆维吾尔族自然长寿的相关性研究

目的探讨载脂蛋白E(apolipoprotein E,apoE)基因多态性与新疆维吾尔族自然长寿的关系.方法应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性方法检测百岁组42名,90岁组102名,65～70岁组70名和对照组53名的apoE基因多态性.结果百岁组apoE的ε3/3、ε2/3和ε3/4基因型频率分别为69.0%、23.8%和2.4%,其ε3、ε2和ε4等位基因频率分别为82.1%、16.7%和1.2%,百岁组ε3/4基因型及ε4、ε3等位基因频率显著低于对照组(P<0.01),ε2/3基因型及ε2等位基因频率则显著高于对照组(P<0.01).百岁与apoE基因的ε2等位基因呈正关联,与ε4等位基因呈负关联.结论在新疆维吾尔族,apoE基因多态性与个体寿命密切相关,同时也应考虑到长寿是年龄依赖的多种因素影响的结果.

青岛地区D6S477等五个短串联重复序列基因座的遗传多态性研究

目的了解D6S477等5个基因座在青岛地区汉族群体中基因型分布及等位基因频率等遗传多态性数据,初步探讨其应用价值.方法收集200名青岛地区汉族无关个体的静脉血,ACD抗凝,采用Chelex法提取DNA,应用聚合酶链反应技术,扩增D6S477、D9S1118、D18S865、D19S400和D20S161基因座的短串联重复序列,聚丙烯酰胺凝胶垂直电泳,银染显色分型.结果获得了青岛地区汉族群体上述5个基因座的等位基因频率,基因型分布均符合Hardy-Weinberg平衡(P>0.05).结论这5个基因座在青岛地区汉族群体中有较高的非父排除率和个人识别机率,在遗传学研究中有较高的应用价值.

海南汉族人群九个纤维蛋白原基因多态性及其与血浆纤维蛋白原水平的关系

目的调查海南汉族健康人群αTaqⅠ和βBclⅠ、 HinfⅠA/C、448 G/A、βBsmAⅠG/C、+1689T/G、-148C/T、-249C/T、-455G/A多态性的等位基因频率及其与血浆纤维蛋白原(fibrinogen,Fg)水平的关系.方法用比浊法测定238名健康个体的血浆Fg浓度,用PCR-限制性片段长度多态性方法及测序法分析多态性基因型,并用协方差分析比较9个位点的基因型与血浆Fg水平的关系.结果海南汉族人群αTaqⅠ、βBclⅠ、 HinfⅠA/C、C448、βBsmAⅠG/C、+1689T/G、-148C/T、-249C/T、-455G/A稀有位点的等位基因频率分别为0.445、0.239、0.134、0.235、0.273、0.241、0.265、0.441、0.254,9个位点之间存在连锁不平衡;在总人群中,-455GA和AA基因型、-148CT和TT基因型、αTaqⅠT1T1基因型组的血浆Fg水平比野生型组高(P值均<0.01);在男性人群中,-455GA和AA基因型、-148CT和TT基因型、αTaqⅠT1T1、αTaq ⅠT1T2基因型组的血浆Fg水平比野生型组高(P值均<0.01).在女性人群中,携带稀有位点A-455、T-148、αTaqⅠT1的基因型组与野生型组之间的血浆Fg水平差异无统计学意义.结论在9个多态性位点之间存在连锁不平衡;A-455、T-148、αTaqⅠT1位点与血浆Fg水平增高关联,β-Fg-455G/A、-148C/T及α- TaqⅠ多态性与男性血浆Fg水平关联.

湖南地区汉族人多巴胺D4受体基因48 bp可变数目串联重复多态性分布

目的了解湖南地区汉族人群多巴胺D4受体(dopamine D4 receptor, DRD4)基因48 bp可变数目串联重复(variable number tandem repeat,VNTR)多态性基因型及等位基因的频率分布.方法随机抽取湖南地区304名汉族健康正常人,采用聚合酶链反应、变性聚丙烯酰胺凝胶电泳结合银染技术检测基因型和等位基因的频率.结果 (1)湖南汉族人群 DRD4基因48 bp VNTR多态性共检测出7种等位基因、12种基因型.常见的等位基因是5等位基因(DRD4*5),频率为70.6%.(2)湖南汉族人群 DRD4基因48 bp VNTR多态性各等位基因频率与中国上海、北京、四川地区人群存在明显的差异.(3)湖南汉族人群 DRD4基因48 bp VNTR多态性各等位基因频率与日本、美国、墨西哥、意大利人群也存在明显差异.结论 DRD4基因48 bp VNTR多态性分布存在不同程度的地区差异和种族差异.

广东汉族人群HLA Ⅰ、Ⅱ基因多态性及单倍型分析

目的检测广东汉族人群HLA-A、B、Cw、DRB1基因频率,分析该人群HLA Ⅰ、Ⅱ等位基因多态性及其单倍型特点.方法骨髓移植供者160人,抗凝血提取DNA,半量全自动聚合酶链反应-单链构象多态分型检测HLA-A、B、Cw、DRB1基因型.结果在低分辨水平分别检出HLA-A、B、Cw及DRB1等位基因12、23、11、13个.统计分析呈现显著连锁不平衡的HLA-A-B单倍型9个, B-Cw单倍型20个,A-Cw单倍型7个,HLA-A-DRB1单倍型8个,B-DRB1单倍型9个,Cw-DRB1单倍型10个.结论广东汉族群体HLA-基因具有较为丰富的多态性,其双座位连锁不平衡单倍型具有地区性遗传特征.

非法医学期刊曝光台

应用RNAi抑制细胞中绿色荧光蛋白的表达

目的在293T和Mel细胞中研究RNA干扰(RNA interference, RNAi)对绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein, eGFP)表达的沉默作用.方法以巢式PCR方法从人胚肾293T细胞中克隆出依赖于RNA 聚合酶Ⅲ的H1启动子,并用于驱动RNAi片段的合成; 构建能抑制eGFP特异性表达的RNAi载体(TR1).将eGFP载体和RNAi干扰载体共转染293T和Mel两类细胞中,应用荧光显微镜观察、逆转录-PCR、荧光辅助细胞分选技术和定量逆转录-PCR方法分析上述细胞中RNAi对eGFP表达的抑制情况. 结果 RNAi载体能有效地使293T和Mel细胞中红系特异的eGFP表达量均降低约50%以上. 结论本文构建的RNAi载体能有效的抑制目的基因eGFP在细胞中的表达.

改良羊水细胞染色体制备法在产前诊断中的效果分析

目的探讨改良羊水细胞染色体制片法在产前诊断中的效果.方法对孕14.3～37周具有产前诊断指征的孕妇,抽取羊水细胞培养6～7天,换液第2天取出观察,当有许多圆形透亮的细胞时,加入秋水仙素3 h后收获.改良收获过程,将上清倒入离心管处理,瓶内细胞经低渗、预固定、固定后,刮下瓶壁细胞离心制片.结果 692例羊水细胞培养成功691例,成功率99.86%; 24～37孕周的成功率与<24孕周比较,差异无统计学意义(P>0.05);90.74%的收获时间是7～8天;有效分裂相数为20～118个以上的占97.83%,较原方法有显著提高(P<0.01).结论该方法有效分裂相多、出结果快、成功率高.