第三军医大学学报杂志
Journal of third military medical university 제삼군의대학학보
- 主管单位： 第三军医大学
- 主办单位： 第三军医大学
- 影响因子： 1.01
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1000-5404
- 国内刊号： 50-1126/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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gp96多肽复合物对树突状细胞成熟及功能的影响
目的探讨gp96多肽复合物对树突状细胞(dendritic cells,DCs)成熟及功能的影响.方法应用液相层析技术从胃癌组织中提取gp96多肽复合物,用SDS-PAGE和Western blot进行性质鉴定,将提取的gp96多肽复合物加入外周血来源的单个核细胞诱导培养DCs,采用流式细胞技术检测DCs的表型变化,用3H-TdR掺入法检测DCs诱导的混合淋巴细胞反应(mixed lymphocyte reaction,MLR).结果从1 g湿重的胃癌组织中可提取gp6多肽复合物30～50μg,用gp96多肽复合物诱导培养的DCs其表面分子的表达明显增高,并具有更强的刺激T淋巴细胞增殖的能力.结论从胃癌组织中可以提取出gp96多肽复合物,gp96多肽复合物可促进DCs分化成熟,使其具有更强的抗原提呈能力.
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反义B7-H1位置特异性腺病毒载体的构建与鉴定
目的构建人反义B7-H1位置特异性腺病毒载体.方法将B7-H1cDNA反向连接到穿梭质粒pDC315上以构建重组反义B7-H1穿梭质粒pDC315.ASB7-H1,用脂质体将pDC315.ASB7-H1和腺病毒质粒pBHGlox△E1,3Cre转染293细胞,通过位置特异性重组产生反义B7-H1腺病毒载体Ad.ASB7-H1.结果穿梭质粒经酶切、凝胶电泳和测序鉴定与预期结果一致,重组腺病毒载体经PCR扩增后得到564 bp和872 bp特征性片段;其病毒滴度达:5×1010pfu/ml.结论利用位置特性重组技术,成功的构建了人反义B7-H1的腺病毒载体,为后续对B7-H1的相关研究创造了条件.
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胃癌gp96多肽复合物树突状细胞疫苗对Th1/Th2平衡的影响
目的探讨gp96多肽复合物树突状细胞(dendritic cells,DCs)疫苗对Th1/Th2平衡的影响.方法从胃癌组织中提取gp96多肽复合物负载从外周血单个核细胞诱导培养的DCs,用gp96多肽复合物DC疫苗诱导同一患者Th0淋巴细胞,ELISA检测培养上清中IFN-γ和IL-10的水平;以胃癌细胞裂解物负载的DC疫苗作对照.结果gp96多肽复合物DC疫苗诱导的T细胞分泌IFN-γ的量为(2 875±177.66)pg/ml,显著高于对照组(1 765±289.07)pg/ml(P＜0.01);分泌IL-10的量为(36±6.72)pg/ml,显著低于对照组(90±11.26)pg/ml(P＜0.05),二者之间存在显著的负相关(r=-0.915,P＜0.01).结论gp96多肽复合物DC疫苗可诱导Th1/Th2平衡向Th1漂移,显示了gp96多肽复合物DC疫苗可显著提高机体的免疫能力,为临床免疫干预治疗奠定基础.
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转染rhscIL-12对人树突状细胞功能的影响
目的观察rhscIL-12基因转染的人树突状细胞(dendritic cells,DCs)功能的改变.方法构建rhscIL-12和逆转录病毒载体的重组体,脂质体介导转染人外周血来源DCs,以流式细胞仪分析细胞表型改变,ELISA检测IL-4、IL-12和IFN-γ的水平.结果rhscIL-12转染DCs后可进一步上调DCs表面分子的表达,IL-12的分泌量明显提高;在混合淋巴细胞反应中,Th1型细胞因子IFN-γ的水平明显上升,Th2型细胞因子IL-4显著下降;随着IL-12的分泌量的增加,IFN-γ含量明显增加,二者存在着显著正相关关系(r=0.955 678,P＜0.01).结论rhscIL-12体外转染DCs能上调DCs表面分子表达,诱导Th0向Th1分化,增强机体抗肿瘤免疫效应.
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自体树突状细胞疫苗诱导胃癌患者术后肿瘤特异性免疫反应的作用
目的探讨胃癌术后患者应用树突状细胞(dendritic cells,DCs)疫苗治疗后机体肿瘤特异性免疫反应的变化.方法采用外周血单个核细胞及自体肿瘤抗原在体外制备DCs疫苗,皮下注射胃癌术后患者,每周1次,共治疗4次.在治疗前后相应各时相点检测针对自体肿瘤抗原的迟发性超敏反应(delayed-type hypersensitivity,DTH),外周血单个核细胞混合淋巴细胞反应(mixedlymphocyte reacion,MLR)及细胞上清IFN-γ及IL-4的水平.结果疫苗治疗后可以明提高外周血单个核细胞混合淋巴细胞反应的强度.治疗前及治疗后第2、4、8周患者外周血单核细胞(peripheral blood monocyte cell,PBMC)分泌IFN-γ的水平分别为(184±20)、(467±55)、(700±88)、(257±38)pg/ml,各组差异显著;而分泌IL-4的水平分别为(66±8)、(69±9)、(66±7)、(61±7)pg/ml.各组之间无明显变化.有16例疫苗注射后患者DTH反应呈阳性.结论树突状细胞疫苗可改善胃癌术后患者免疫功能状态,并诱导出了肿瘤特异性的免疫反应.
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CD83+肿瘤浸润性树突状细胞在胃癌组织的表达及临床意义
目的肿瘤组织浸润树突状细胞(tumor infiltrating dendritic cells,TIDCs)数量和功能对患者预后有显著床意义,但CD83+TIDCs在胃癌组织中的表达情况尚不清楚,需要进行研究.方法采用免疫组化、原位杂交及流式细胞术检测45例胃癌TIDCs的CD83蛋白、CD83 mRNA以及S-100表达,并分析其临床意义.结果免疫组化显示胃癌组织(42/45)中有S100+散在表达;CD83主要表达于胃癌组织癌旁及正常胃黏膜上.原位杂交显示CD83 mRNA在少数标本中(7/45)表达.流式细胞术检测到低水平CD83表达(4%,45/45).S-100和CD83 mRNA表达数量与患者年龄、性别、肿瘤部位、浸润深度、病理分期及淋巴结转移情况无显著相关性.CD83蛋白免疫组化表达与胃癌TNM分期显著负相关(r=-0.924,P＜0.01);CD83流式细胞检查的表达率与胃癌TNM分期及淋巴结转移呈显著负相关(r=-0.879,P＜0.01;r=-0.782,P＜0.05).结论胃癌TIDCs CD83表达与胃癌TNM分期及淋巴结转移有关,可作为临床研究指标使用.
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反义B7-H1对人树突状细胞生物学特性的影响研究
目的研究反义B7-H1基因转染对人树突状细胞(dendritic cells,DCs)生物学特性的影响.方法以稳定表达反义B7-H1的重组腺病毒Ad.ASB7-H1转染DCs,转染后1、3、5、7及9 d以流式细胞术检测转染DCs表面B7-H1、CD1、CD14、D80、CD83及HLA-DR的表达,ELISA技术检测Ad.ASB7-H1转染DCs培养上清中IL-12的水平,3H-TdR掺入法检测Ad.ASB7-H1转染DCs诱导的T淋巴细胞增殖能力.结果反义B7-H1转染DCs后可明显抑制细胞表面B7-H1表达,其抑制效应在转染后24 h即开始出现.对DCs其他粘附分子表型表达无明显影响.Ad.ASB7-H1转染DCs刺激同种异体混合淋巴细胞反应能力增强;Ad.ASB7-H1转染DCs分泌IL-12能力提高.结论Ad.ASB7-H1转染可抑制DCsB7-H1的表达并使DCs生物学行为发生改变,反义B7-H1可能成为提高DCs疫苗生物学效能的一个潜在靶点.
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晚期胃肠道肿瘤癌性腹水对树突状细胞的抑制效应研究
目的对癌性腹水体外抑制树突状细胞(dendritic cells,DC)免疫功能的效应进行观察,着重探讨癌性腹水免疫抑制效应与腹水中IL-10含量的关系.方法分离10例晚期胃肠道恶性肿瘤患者癌性腹水上清,检测IL-10含量;癌性腹水采用抗IL-10中和或直接加入DC体外培养的系统,观察癌性腹水对DC表面分子表达、细胞凋亡及T淋巴细胞刺激功能的影响.结果癌性腹水较对照IL-10含量显著增高,体外对DC有显著抑制作用,能降低DC表面分子表达、抑制DC对T淋巴细胞刺激增殖效应,并显著促进DC凋亡.中和IL-10处理显著减低癌性腹水对DC的抑制效应,但对DC凋亡率无明显影响.结论晚期胃肠道恶性肿瘤患者癌性腹水对树突状细胞免疫功能有显著抑制作用,IL-10含量增高可能是其抑制效应的重要机制.
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胃癌细胞-树突状细胞融合疫苗肿瘤细胞杀伤活性研究
目的对胃癌细胞-树突状细胞(dendtitic cells,DCs)融合疫苗激活杀伤性T淋巴细胞体内外肿瘤细胞杀伤活性进行研究,为胃癌DC疫苗免疫治疗提供实验依据.方法胃癌患者外周血单个核细胞经GM-CSF,IL-4,TNF-α定向诱导获取DC.DC与SGC7901胃癌细胞经PEG诱导融合、HAT/HT筛选培养获得纯净融合细胞.MTT比色法检测融合疫苗体外杀伤胃癌细胞的细胞毒作用.观察融合疫苗对胃癌裸鼠种植瘤模型肿瘤生长的影响,流式细胞术AnnexinV/PI双标法检测瘤细胞凋亡,观察融合疫苗对肿瘤组织病理学改变的影响.结果①胃癌患者外周血单个核细胞体外定向诱导分化,可获得具备典型形态特征及表型的DC.②DC与SGC7901细胞经PEG诱导融合,HAT/HT筛选培养,可获得纯净融合细胞.③体外MTT比色检测,融合疫苗胃癌细胞杀伤率为(81.47±5.25)%,与混合培养DC组(70.53±2.46)%差异显著(P＜0.05),与单纯T细胞组(21.67±2.55)%差异非常显著(P＜0.01).④融合疫苗组荷瘤裸鼠终末肿瘤体积平均(1.298±0.021)cm3,与对照组差异非常显著(P＜0.01),抑瘤率为57.8%.⑤融合疫苗组肿瘤细胞凋亡率(54.9±1.38)%,坏死率为(21.04±1.47)%;与对照组瘤细胞凋亡百分率(20.02±0.39)%,坏死百分率(1.23±0.03)%比较差异非常显著(P＜0.01).⑥融合疫苗组肿瘤组织与对照组比较显著出血、坏死,瘤组织内大量淋巴细胞浸润.结论融合细胞疫苗激活T淋巴细胞体内外均可诱导显著胃癌细胞杀伤细胞毒活性;其应用于荷瘤动物体内,可以明显减慢肿瘤生长速度,诱导更多肿瘤细胞凋亡.
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CD4+CD25+调节性T细胞在胃癌患者的表达及其临床意义
目的研究胃癌患者肿瘤组织、淋巴结及外周血中CD4+、CD25+调节性T细胞(T regulatory cells,Treg)的表达情况与胃癌临床病理的关系并分析其意义.方法胃癌患者肿瘤组织、淋巴结、外周血及对照组中Treg表达情况分别以冰冻切片荧光抗体染色、流式细胞仪进行检测,结合胃癌患者临床病理情况分析.结果健康成人对照外周血Treg表达率为(4.1±5.7)%,胃癌患者外周血Treg表达显著增高(16.8±7.9)%.胃癌组织Treg表达为(6.5±7.2)%,胃癌周围淋巴结Treg比例为(8.4±7.2)%,均较对照组显著增高.胃癌外周血和淋巴结Treg表达与淋巴结转移率和TNM分期有着负相关性,淋巴结转移阳性和TNM分期越晚,Treg表达率越高.结论Treg在胃癌患者的瘤组织、淋巴结及外周血中表达较对照组显著增高,并与临床病理存在显著相关性.
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胃癌患者外周血树突状细胞的分离与培养
目的探讨从胃癌患者外周血分离与扩增树突状细胞(dendritie cells,DCs)的有效方法.方法从胃癌患者外周血分离出贴壁单个核细胞,实验组将其与细胞因子GM-CSF、IL-4和TNF-α共同培养,对照组不加细胞因子,动态观察细胞生长情况,流式细胞仪检测实验组不同培养时相细胞表面分子CD86、CD80、HLA-DR的表达水平,并和对照组比较.结果与对照组比,实验组诱导出大量具有典型形态的DCs,培养至第7天,胃癌患者外周血DCs细胞表型表达较第3天增高非常显著(P＜0.01),与对照组相差显著(P＜0.01);培养第12天,DCs细胞表型表达与第3天比较相差非常显著(P＜0.01),与培养第7天比较相差不显著(P＞0.05),与对照组相差显著(P＜0.01).结论联合应用GM-CSF、IL-4和TNF-α能有效的从胃癌患者外周培养出大量具有活性的DCs.
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树突状细胞在胃癌组织中的分布特征及与预后的关系
目的探讨S-100蛋白阳性肿瘤浸润树突状细胞(tumor infiltrating dendritic cells,TIDC)在胃癌组织中的分布及意义.方法将S-100蛋白抗体作为TIDC的特异性标记物,对30例胃癌标本进行免疫组化染色,对TIDC进行定量计数分析.结果胃癌患者TIDC高度浸润率随肿瘤TNM分期趋向晚期而显著降低(P＜0.05);淋巴结转移阳性组TIDC高度浸润率显著低于阴性组(P＜0.01);不同部位、不同分化程度和不同浸润程度的病例间无显著差异(P＞0.05).结论胃癌组织中TIDC浸润情况改变,可能是导致机体细胞免疫功能低下的重要原因之一.检测胃癌组织内TIDC浸润程度对判断胃癌预后有一定意义.
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胃癌患者外周血MoDCs功能活性检查及意义
目的以胃癌患者外周血单个核细胞培养树突状细胞(monocyte derived dendritic cells,MoDCs)为研究对象,检测功能表达,分析其临床意义,并初步探索改进MoDCs功能的方法.方法胃癌患者及健康成人外周血单个核细胞体外经GM-CSF/IL-4诱导培养MoDCs,检测其CD40、CD80和CD83表达.在DCs培养中分别加入不同浓度LPS和TNF-α,检测对DCs表面分子表达及T淋巴细胞刺激增值作用的改变.结果胃癌患者外周血培养获成熟MoDCs数量较少,其CD40、CD80、CD83表达较正常对照显著下调,对T淋巴细胞的刺激增殖作用显著低于正常.LPS(100ng/ml)和TNF-α(1 000 U/ml)能刺激CD40、CD80和CD83表达上调并改善其活化T淋巴细胞功能.结论胃癌患者MoDCs与正常成人相比有很大差异,免疫功能差.LPS、TNF-α可显著改善MoDCs功能状态,可作为以DCs为基础的胃癌生物治疗细胞来源.
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失血性休克复合氰化钠中毒对兔血清氧化应激水平的影响
目的探讨失血性休克复合氰化钠中毒对兔血清氧化应激水平的影响.方法日本大耳白兔15只,随机分为对照、失血性休克、氰化钠中毒、失血性休克复合氰化钠中毒和4-DMAP治疗共5组.动物麻醉后行左侧颈总动脉插管手术,连接三通管和RM6240生理信号系统,建立失血性休克复合中毒模型(血压控制在5.3 kPa).腹腔注射2.5 mg/kg氰化钠及抗氰药物4-二甲氨基苯酚(4-dimethyl aminophenol,4-DMAP)3.2 mg/kg,分别于0.5 h、1 h以及2 h抽取血液样本,采用分光光度法检测血清超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活力、丙二醛(malondialdehyde,MDA)和活性氧(active oxygen,ROS)的含量.结果失血性休克、氰化钠中毒以及失血复合中毒后SOD活力明显下降(P＜0.01),MDA、ROS含量显著上升(P＜0.01),复合致伤组与单纯休克以及单纯中毒组有明显差异(P＜0.01);4-DMAP干预后SOD活力较复合致伤组明显提高,MDA和ROS的含量则明显降低(P＜0.01).结论失血性休克条件下,氰化钠中毒严重影响兔血清氧化应激水平,4-DMAP能部分改善此作用.
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hBD2修饰真皮多能干细胞促进感染创面修复的初步实验研究
目的观察人β防御素2(human β-defensin 2,hBD2)修饰的大鼠真皮多能干细胞(dermal multipotent stem cells,dMSCs)移植后对细菌感染创面修复的影响.方法制作大鼠全层皮肤切割伤伴感染模型,点状注射的方法将hBD2腺病毒载体转染修饰的dMSCs移植到伤口,通过测定痂下菌量及创面愈合面积百分率和创面愈合时间等评价hBD2修饰的dMSCs局部移植的促愈效果.结果和局部单纯移植dMSCs组和单纯损伤组相比,hBD2修饰的dMSCs移植组痂下菌含量低(P＜0.05),且创面愈合时间明显缩短(P＜0.05).结论hBD2修饰的dMSCs可有效地促进大鼠感染创面的修复.
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HSP90表达对乳腺癌细胞侵袭转移能力的影响
目的研究HSP90的表达与乳腺癌细胞侵袭转移能力的相关性.方法采用RT-PCR和Western blot检测HSP90在MDA-MB-435s和MDA-MB-231细胞中mRNA水平和蛋白质水平的表达差异.Transwell小室人工重组基底膜侵袭迁移实验检测经HSP90抑制剂Geldanamycin(GA)处理前后两株细胞侵袭迁移能力的改变.结果MDA-MB-435s细胞中HSP90α的mRNA表达水平明显高于MDA-MB-231细胞(P＜0.01),MDA-MB-435s和MDA-MB-231细胞中HSP90β的mRNA表达水平没有明显差异(P＞0.05),MDA-MB-435s细胞中HSP90的蛋白质表达水平明显高于MDA-MB-231细胞(P＜0.01).两株细胞用药前侵袭迁移能力无明显差异(P＞0.05),HSP90的抑制剂GA对MDA-MB-435s和MDA-MB-231细胞的侵袭迁移能力均呈现明显抑制作用(P＜0.01,P＜0.05),对MDA-MB-435s细胞的抑制作用更明显(P＜0.01).结论HSP90的表达影响乳腺癌细胞侵袭转移能力.
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VEGF受体3亲和肽亲和特性研究
目的通过测定人源VEGF受体3(VEGFR3)亲和肽(WHGSLKQNLWWY)及VEGF-D与VEGFR3的功能性亲和常数,鉴定亲和肽的亲和特性.方法通过戊二醛耦联法包被多肽,确定佳多肽包被浓度,佳多肽与VEGFR3结合反应时间以及包被系数后,采用非竞争性ELISA固项法,得到多肽及VEGF-D与VEGFR3的结合反应曲线,计算多肽及VEGF-D与VEGFR3的亲和常数.结果多肽及VEGF-D与VEGFR3的功能性亲和常数分别为(1.42±1.45)×107mol/L-1和(1.03±1.16)×108mol/L-1.结论该多肽与VEGFR3亲合能力较强,为今后开发以该多肽为基础的靶向治疗药物提供了理论依据.
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高温复合脂多糖应激大鼠血浆TNF-α、IL-6含量的变化规律
目的探讨高温与脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)复合应激大鼠血浆TNF-α、IL-6含量等指标的变化规律.方法雄性SPF级Wistar大鼠随机分为:常温生理盐水组(C组)、高温生理盐水组(H组)、常温脂多糖组(L组)、高温脂多糖组(HL组).持续监测动物肛温(rectal temperature,Tr)、心率(heat rate,HR)、平均动脉压(mean arterial pressure,MAP)以及呼吸频率(respiratory rate,RR),并检测动物应激0、40、80、120 min时血浆TNF-α、IL-6含量.结果①复合应激120 min,HL组Tr上升到(43.04±0.11)℃,HR加快到(660±42)次/min,RR加快到(150±11)次/min,MAP下降到(49.0±3.5)mmHg;HR、MAP与同时相各组之间存在显著性差异;②HL组于应激40min时血浆TNF-α、IL-6水平即显著升高,TNF-α峰值(80 min)显著高于各组TNF-α水平,IL-6表达水平极度升高,显著高于同时相各组.结论高温与LPS复合应激可能促发、扩大全身炎症反应综合征.
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Reg Ⅳ在胃癌中的表达及其临床意义
目的检测RegⅣ蛋白在人胃癌组织中的表达与分布,探讨其作为胃癌检测标志物的可能性.方法免疫组织化学染色检测26例临床胃癌组织及10例正常胃组织中RegⅣ蛋白的表达.结果RegⅣ蛋白在正常胃组织表达阴性(0/10),在胃癌组织表达阳性率为42.31%(11/26),具有显著的统计学意义(P＜0.05);RegⅣ蛋白在Ⅰ/Ⅱ期胃癌中表达阴性(0/3),而在Ⅰ/Ⅱ期胃癌中表达阳性率为47.83%(11/23),二者差异有显著统计学意义(P＜0.05).但RegⅣ蛋白的表达与胃癌分化程度及有无淋巴结转移等无明显的差异(P＞0.05).结论RegⅣ蛋白在胃癌中表达较高,约50%左右,主要为Ⅰ/Ⅱ期胃癌,提示RegⅣ蛋白可能与胃癌的生长侵袭等有关,作为浸润癌的病理诊断具有一定的实际意义.
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唾液酸相关物质对盐酸致伤大鼠气管铜绿假单胞菌感染的抑制作用
目的探讨唾液酸双糖、特异性植物凝集素及唾液酸酶对盐酸致伤大鼠气管铜绿假单胞菌感染的抑制作用.方法大鼠气管内滴入盐酸致伤,接种分别含唾液酸双糖(唾液酸α2,3-半乳糖、唾液酸α2,6-N-乙酰氨基半乳糖)、特异性植物凝集素(Maackia amurensis agglutinin,MAA;Sambucus nigra agglutinin,SNA)及唾液酸酶(特异性α2,3-唾液酸酶和非特异性唾液酸酶)的铜绿假单胞菌混合液,分别在30 min和48 h后处死动物,完整取气管称重、匀浆后做细菌定量培养.结果唾液酸α2,3-结构的双糖、凝集素和唾液酸酶都能明显减少铜绿假单胞菌接种30 min后气管粘附的菌落数,而只有双糖和唾液酸酶能显著减少接种48 h后气管的菌落数;唾液酸以,6-结构的相关物质没有类似的作用.结论唾液酸α2,3-结构相关物质能干预铜绿假单胞菌在气管的粘附/繁殖,双糖和唾液酸酶的作用更明显.
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重组人源MPG基因真核表达载体构建及转染非小细胞肺癌多药耐药细胞的研究
目的构建人N-甲基化嘌呤DNA糖基化酶(N-methylpurine DNA glycosylase,MPG)基因真核表达载体,并研究其在稳定转染的人非小细胞肺癌多药耐药细胞中的表达情况.方法应用分子克隆技术构建pCMV-Script/MPG重组真核表达载体;应用脂质体介导的基因转染技术将其导入人非小细胞肺癌多药耐药细胞株A549/CDDP内;应用G418筛选稳定表达的转染细胞;应用PCR检测pCMV-Script载体上的NEOr基因,应用RT-PCR及Western blot检测MPG基因的表达.结果构建产物经限制性酶切分析及基因序列测定证实为pCMV-Script/MPG重组表达载体;转染pCMV-Script/MPG载体组(MP组)及转染pCMV-Script载体组(P组)细胞内检测到NEO r基因,未转染组(C组)则未检测到;MP组细胞内MPG mRNA水平较P组及C组细胞显著增高(P＜0.01);MP组细胞内MPG蛋白质水平较P组及C组细胞显著增高(P＜0.01).结论成功地构建了人MPG基因表达载体,并在人非小细胞肺癌多药耐药细胞A549/CDDP获得了稳定、高效的表达.
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维拉帕米抑制快速起搏诱导心房肌细胞离子通道重构的研究
目的利用原代培养的心房肌细胞建立快速起搏模型,研究维拉帕米对L-型钙通道及钾通道Kv4.3在快速起搏早期的表达的影响.方法原代培养大鼠心房肌细胞,并建立快速起搏细胞模型,实验分为:对照组、快速起搏组、维拉帕米+快速起搏组以及维拉帕米组,利用RT-PCR以及Western blot方法检测L-型钙通道α1c及钾通道Kv4.3在不同情况下mRNA和蛋白的表达变化.结果快速起搏24 h后L-型钙通道α1c的mRNA和蛋白表达较对照组明显降低,起搏前给予维拉帕米预处理,再经24 h起搏后,L-型钙通道α1c以及钾通道Kv4.3 mRNA及蛋白表达较对照组稍降低,二者差异无显著意义,但与未经维拉帕米处理的起搏组比较差异有显著意义(P＜0.05).结论快速起搏早期,原代培养心房肌细胞L-型钙通道α1c及钾通道Kv4.3的mRNA和蛋白表达均出现不同程度的降低,提示其发生了离子通道重构,但维拉帕米能明显抑制快速起搏早期离子通道重构的发生.
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MPTP致小鼠黑质致密部多巴胺能神经元损伤及定量研究
目的建立正常小鼠黑质致密部部位-细胞数量标准曲线,并以之判定MPTP损伤的小鼠PD模型中多巴胺能神经元的损失.方法根据小鼠大脑解剖图谱观察小鼠黑质致密部的走向,酪氨酸羟化酶免疫组化染色显示正常小鼠大脑黑质致密部及多巴胺能神经元;观察计数MPTP处理小鼠的大脑黑质致密部多巴胺能神经元,与正常小鼠的相似部位进行比较.结果建立了正常小鼠黑质致密部部位-细胞数量分布图,利用曲线对MPTP处理小鼠所得到的切片进行分析,发现样本中多巴胺能神经元明显减少,证明判定方法可行而有效.结论本实验成功建立了MPTP致小鼠黑质致密部多巴胺神经元损伤模型,并对其损伤判定进行了标准化.
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带有不同亚型HPV L1基因片段的哺乳动物细胞克隆的建立
目的构建携带HPV亚型L1基因片段的标准细胞株.方法根据HPV通用引物GP5+/GP6+,用重叠延伸PCR方法合成HPV亚型L1基因中约150 bp片段;插入真核细胞表达载体EGFP-N1,用脂质体转染SPC细胞,筛选以获得带有不同HPV L1基因片段细胞克隆,并用定量PCR方法确认.结果重叠延伸PCR后得到约150 bp的基因片段,测序结果经BLAST比对,分别与相应HPV亚型公开报告序列一致;将所获片段与EGFP-N1载体连接后酶切及测序鉴定正确;经筛选获得了携带HPV6、11、16、18、31、35亚型L1基因片段的细胞株;并用定量PCR方法进行了确认.结论成功构建了带有不同HPV亚型L1基因片段的30个亚克隆和6个细胞株,为进一步的HPV分型检测研究提供了保证.
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shRNA沉默VEGF基因表达对大肠癌细胞生物学特性的影响
目的观察Pavu6+27-VEGF siRNA重组体在细胞体内表达的VEGF短发夹状RNA(short hairpin RNA,shRNA)对人大肠癌HCT116细胞株生物学特性的影响.方法将自行构建的表达短发夹状RNA的重组质粒转染到大肠癌HCT116细胞株中,以空质粒Pavu6+27转染为对照,经G418筛选出稳定表达shRNA细胞,行RT-PCR检测VEGF-mRNA表达的改变,Western blot检测VEGF蛋白表达,流式细胞技术分析细胞周期分布,MTT比色法检测细胞的生长抑制率.结果成功转染重组体的HCT116细胞中VEGF-mRNA表达明显下降,约降低为对照组的61.2%(P＜0.05).VEGF蛋白表达明显下降,光密度分析比较差异有显著性(P＜0.05).G0/G1期细胞比例增高,另一方面S期和G2/M期细胞比例降低,细胞的增殖指数明显降低,实验组细胞增殖指数为(25.63±4.54)%,对照组细胞的增殖指数为(31.90±2.19)%(P＜0.05).结论Pavu6+27-VEGF siRNA重组体在细胞内表达的短发夹状RNA能有效抑制人大肠癌细胞VEGF-mRNA和VEGF蛋白表达,细胞增殖能力减弱,为质粒介导的RNAi技术运用于大肠癌的基因治疗提供一定的实验依据.
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大鼠骨髓间充质干细胞诱导分化为心肌样细胞内向钠电流的研究
目的研究大鼠骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cell,MSCs)诱导分化为心肌样细胞内向钠电流的状态.方法取健康SD大鼠骨髓,经密度梯度离心和贴壁培养获得MSCs,传至第两代,以10 μmol/L的5-氮杂胞嘧啶(5-aza)孵育诱导24h.培养4周,用免疫细胞化学染色方法鉴定心肌样细胞(cardiomyocyte-like cells);用全细胞膜片钳技术,检测胞膜内向钠电流,并与未经诱导的MSCs和急性分离的心肌细胞进行比较.结果MSCs经5-aza诱导后部分表达心肌特异性肌钙蛋白T,在诱导后4周记录到快速激活和失活的膜内向钠电流.与急性分离的心肌细胞比较,相同刺激脉冲下心肌样细胞所产生的电流幅值较小,Ⅰ-Ⅴ曲线向右偏移.结论经5-aza诱导后,MSCs可分化成具有兴奋性内向钠电流的心肌样细胞.
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塞来昔布对人结肠癌细胞裸鼠移植瘤肝转移和血管生成的影响
目的研究COX-2选择性抑制剂塞来昔布对结肠癌肝转移瘤微血管生成以及血管生成因子VEGF、bFGF表达的影响,从而探讨COX-2对结肠癌肝转移瘤血管形成的作用机制.方法细胞培养建立稳定的结肠癌细胞株HT-29和HCT-116,利用脾切除法建立结肠癌肝转移动物模型,免疫组化检测结肠癌肝转移瘤MVD、VEGF、bFGF蛋白表达.结果结肠癌肝脏转移率,HT-29组、HCT-116组和塞来昔布组分别为83.33%、16.67%和33.33%.肝脏转移瘤MVD、VEGF、bFGF的表达,HT-29组与HCT-116组、塞来昔布组比较治疗组表达减弱,有显著统计学差异(P＜0.01,P＜0.05);塞来昔布组与HCT-116组比较无显著性差异(P＞0.05).结论塞来昔布可能通过抑制促血管生成因子VEGF、BFGF的表达,进而抑制了结肠癌肝转移瘤新生血管生成.
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慢性马兜铃酸肾病大鼠模型肾组织中差异蛋白质的筛选
马兜铃酸肾病(aristolochic acid nephropathy,AAN)在临床上十分常见,对人们的身体健康带来极大的危害.目前马兜铃酸导致肾损害的分子机制不清楚[1],其早期诊断尚无法解决,更谈不上有效的药物治疗[2].因此,为了阐明马兜铃酸肾损害的分子机制,我们通过建立慢性马兜铃酸肾病模型,用双向电泳技术筛选和比较模型动物肾组织中马兜铃酸诱导的差异蛋白质分子,为进一步确定马兜铃酸导致肾损害的分子靶点奠定基础.
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儿童颌下castleman病1例
患者,女,12岁,因"左侧颌下逐渐长大的包块2年"于2001年4月入院.患者家长诉两年前发现患者颌下有一包块,包块无疼痛,发现包块前无畏寒发烧史.亦无牙痛史和扁桃体发炎史.在当地医院给予青霉素和甲硝唑输液治疗5 d,包块无任何变化.2年来自觉包块逐渐长大.检查见左侧颌下有一约3 cm×4 cm大小包块,位于颌下腺前方,质地中等,边界清楚,无压痛.包块活动度好,与皮肤无粘连.双合诊未扪及左侧颌下腺肿大,未触及导管结石.导管通畅,涎液清.牙列完整,无病灶牙.全身浅表淋巴结未扪及肿大.
关键词： Castleman病 儿童 -
反(牙合)前牙残根的正畸与修复联合治疗
反(牙合)前牙残根并不多见,且临床中往往作拔除残根后的固定义齿修复处理.作者在近6年中采用正畸与修复联合治疗方法,保存此类残根作桩核冠修复,取得了良好疗效.
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β-阻滞剂治疗慢性心力衰竭的临床疗效观察
β-阻滞剂在充血性心力衰竭治疗中的地位已获得充分肯定,各种心力衰竭治疗指南陆续将其列为心功能稳定状态下心力衰竭治疗的一线用药,但β-阻滞剂在心力衰竭患者临床应用的比例至今仍然不高[1].我院2001年4月至2002年9月选择CHF84例,旨在观察美托洛尔对改善CHF患者心功能的疗效.
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奥美拉唑与莫沙比利联合治疗中、重度反流性食管炎疗效观察
反流性食管炎是消化系统的常见病.其发病原因是食管下段括约肌(low esophageal sphincter,LES)功能失调、张力降低,使胃酸、胃蛋白酶反流入食管所致的炎性病变[1].近年国内发病率日趋增高,患病率约为1.9%.目前药物治疗主要以抑酸剂和促动力药为主.我们选择常用的抑酸剂奥美拉唑和促动力药莫沙比利,观察其联合治疗中、重度反流性食管炎的疗效.
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隐匿性甲状腺癌诊断与治疗1例
患者,女性,36岁,因发现右侧颈部包块2个月余,活检病理报告为右颈部淋巴结转移性乳头状癌,收入院治疗.查体:甲状腺不肿大,未扪及包块.超声示:①右颈部多个稍减弱回声,考虑淋巴结肿大.②甲状腺左叶下极下方可探及淋巴结回声.③甲状腺未探及异常.核素扫描:甲状腺右叶上份"凉结节".其余检查未发现有远处转移现象.血清学检查T3:1.59μg/L、T4:99.71μg/L,均正常.在局部麻醉下手术探查,术中见甲状腺约2.5 cm×2.5 cm×3.0 cm大小,质硬.颈内静脉外侧多个肿大质硬淋巴结,大有3.5 cm×3.5 cm×3.0 cm大小.切取淋巴结送冰冻检查提示:甲状腺乳头状腺癌Ⅰ级.将右侧甲状腺、甲状腺峡部、左侧大部甲状腺切除,并行右侧颈部淋巴结清扫.术后石蜡切片提示:右甲状腺乳头状癌Ⅰ级.找见淋巴结12枚,其中6枚见癌转移.伤口愈合出院行同位素治疗.
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反复发作的急性药物性肝炎1例
患者,女性,38岁,因"反复肤黄、尿黄8年"入院.1997年3月因感冒口服解热镇痛药6 d后开始出现肤黄、尿黄,伴乏力、厌油、食欲不振,无畏寒、发热,当地医院诊断"急性黄疸型甲型病毒性肝炎",但肝炎病毒学标志阴性,保肝治疗8 d,肝功能正常、症状消失出院.2000年1月因发热再次服用解热镇痛药后4 d又出现上述症状,自述转氨酶显著升高,皮肤黄染明显,在当地诊所治疗10 d后症状好转.2002年1月再次感冒服用解热镇痛药后5 d出现肤黄、尿黄收入我科住院治疗.
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超声诊断原发性输卵管癌1例
患者,女性,61岁,已婚,因"绝经10年,阴道不规则流液9个月",于2003年8月7日入院.患者自1993年绝经后一般情况良好,于2002年11月阴道出现不规则流液,色淡红,先后在当地医院行B超、宫腔镜检查均未见异常,2003年7月行"诊刮术",病理见"少许零碎增生内膜腺体及间质",术后予止血、消炎等综合治疗效果不佳,为进一步检查治疗入我院妇产科,入院查体未见异常.
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原发性恶性听神经瘤1例
患者,女,45岁.2005年11月1日因"右耳耳鸣9年,右耳听力进行性下降3年,头痛1个月"入院.查体:双侧眼底视乳头水肿;右侧面部疼、触觉减退,右侧角膜反射减弱;右侧鼻唇沟、额纹变浅;右耳听力明显下降;右侧咽反射减弱;向右侧注视时有粗大水平眼震;四肢肌力正常,双侧巴氏征阴性.右手指鼻试验阳性,昂伯氏征阳性.头部MRI平扫见右桥小脑角混杂信号分叶状病灶,大小约3.5 cm×4 cm×4.5 cm;增强见肿瘤明显、不均匀增强,肿瘤部分嵌入脑干内,脑干及四脑室受压左移,右侧内听道开口喇叭状扩大,听神经内听道段明显强化,肿瘤呈鼠尾状突入内听道(图1).入院诊断:右侧听神经瘤.
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21例肺硬化性血管瘤的诊断与外科治疗分析
目的分析硬化性血管瘤的临床特点、诊断、外科治疗和预后情况,进一步提高对该病的认识.方法回顾分析我院1999-2005年收治的21例肺硬化性血管瘤.结果全组中女性占85.71%(18/21),发病中位年龄40岁;14例(66.67%)无任何症状,放射影像学表现为边缘清晰的圆形或类圆形软组织结节影,19例(91.48%)密度均匀,4例(19.05%)有点状钙化;全部行手术治疗,无并发症和手术死亡;全组术后平均随诊2.7年无转移复发.结论肺硬化性血管瘤术前诊断较困难,确诊依靠病理,手术是肺硬化性血管瘤的有效治疗方法.
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71例儿童急性髓系白血病多参数流式细胞术免疫表型分析
目的为了解儿童急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)免疫表型特征,分析儿童AML不同亚型抗原表达的差异,并探讨其诊断价值.方法采用三色FCM CD45/SSC双参数散点图设门方法,对71例患者幼稚细胞表面及胞浆内分化抗原进行分析,结合FAB分类进行比较分析.结果在儿童急性髓系白血病患者中,CD33和CD13的表达常见,分别达97.2%和94.4%,其次为HLA-DR(69%).57.7%的病例伴有淋系抗原表达,以CD19表达常见(36.6%),其次为CD7(28.2%),未见CD20的表达.3例M0患儿经免疫分型确诊.结论结合FAB分类,多参数流式细胞术有助于对AML的准确诊断和分型.FAB不同型别具有不同的免疫表型特征.
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5kg以下婴儿先天性心脏病体外循环管理
目的探讨5 kg以下婴儿先天性心脏病(先心病)(congenital heart diseases,CHD)心内直视手术的体外循环(cardiopulmonary bypass,CPB)管理策略,以减少婴儿先心病术后并发症的发生.方法对5 kg以下婴儿先心病心内直视手术的CPB情况进行回顾性分析.全组34例,年龄13 d至9个月,平均(3.71±2.25)个月、体质量2.5～5.0(4.23±0.59)kg;采用中低温中等流量CPB 18例、深低温停循环(DHCA)3例、深低温低流量CPB(DHLF)9例、DHCA结合DHLF 4例;26例行超滤.结果开放主动脉后心脏自动复跳34例(100%),无严重心律紊乱;32例顺利停体外循环,无严重的CPB并发症.死亡4例,死亡率为11.8%.结论小预充、CPB中较高的血球压积(HCT)和胶体渗透压、充分静脉引流及与温度匹配的足够灌注流量、良好的心肌保护和脑保护是低体重儿成功CPB的关键,适时的超滤是减少CPB术后并发症的有力措施.
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自体CIK细胞治疗肝癌患者的护理
肝癌在我国是一种多发性肿瘤,且大多数合并严重肝硬化,易发生肝内播散和转移,严重危害人们的健康.肝癌患者经手术、化疗及放疗后难以改变患者的生存质量,且预后极差[1].我院生物治疗研究中心研究发现,细胞因子诱导杀伤细胞(cytokine induced killer,CIK)具有较强的体内外抗肝癌细胞活性CIK细胞毒活性和细胞增殖力可以满足过继免疫治疗中抗肿瘤细胞的要求[2,3] CIK细胞成为肝癌手术、放疗、化疗后的一种新的治疗模式.我院自2001年11月开始成功地应用于肝癌的临床治疗.CIK细胞治疗后的肝癌患者免疫活性细胞的检测表明,CIK细胞治疗可提高肿瘤患者的细胞免疫功能,提高对肿瘤细胞的杀伤作用[4],且有较好的疗效和很好的安全性[5].
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胃大部切除术后胃瘫综合征原因分析及护理
胃大部切除术后残胃胃瘫综合征(postsurgical gastroparesis syndrome,PGS)是一种手术后的非机械性梗阻,是以胃排空延迟为主要临床表现功能性胃排空障碍,也称为胃术后胃无力症.我院近10年来胃大部切除术后发生PGS的24例.现报告如下.
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CXCR4腺病毒表达载体的构建及其在真皮多能干细胞中的表达
目的构建大鼠CXCR4的腺病毒表达载体,并观察其转染真皮多能干细胞(dermal multipotent stem cells,dMSCs)后的表达情况.方法扩增含有CXCR4的全长cDNA,然后亚克隆至穿梭质粒pAdTrack-CMV中,再与pAdEasy-1质粒在大肠杆菌BJ5183中进行同源重组产生含有CXCR4的骨架质粒(pAdEasy/CXCR4).将验证正确的pAdEasy/CXCR4用Pac Ⅰ酶切后转染293细胞,从而包装出CXCR4的腺病毒表达载体(Adv-CXCR4).用Adv-CXCR4转染dMSCs,并采用RT-PCR、免疫荧光细胞化学和荧光激活细胞分类计数的方法检测其表达情况.结果PCR、酶切和测序结果证明,成功地将CXCR4全长cDNA克隆到骨架质粒中,并包装出腺病毒表达载体.同时,Adv-CXCR4转染dMSCs后可有效地增加dMSCs中CXCR4的表达.结论CXCR4的腺病毒表达载体的成功构建和其在dMSCs中的表达,为研究CXCR4在干细胞移植中的应用奠定基础.
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树突状细胞抗肿瘤作用研究进展
树突状细胞(dendritic cell,DCs)是体内有效的专职抗原递呈细胞(antigen presenting cell,APC),是识别病原侵入的第一道防线.机体的免疫识别首先由DCs捕获、加工和处理抗原,再将抗原递呈给T、B淋巴细胞,从而引发一系列免疫应答,在体内发挥强大的免疫监视功能[1].近年来,DCs在抗肿瘤免疫中所发挥的重要作用日益受到人们的重视.随着对DCs肿瘤抗原识别、摄取、加工处理及提呈的分子基础和作用机制的进一步阐明,以DCs为基础的肿瘤疫苗治疗得到快速发展.目前在DCs疫苗抗肿瘤实验研究和临床研究方面已取得了令人振奋的进展,显示了广泛的应用前景.
