第三军医大学学报杂志
Journal of third military medical university 제삼군의대학학보
- 主管单位： 第三军医大学
- 主办单位： 第三军医大学
- 影响因子： 1.01
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1000-5404
- 国内刊号： 50-1126/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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吸入炭黑气溶胶致小鼠肺和外周血的炎性改变及相关性分析
目的 研究反复吸入炭黑气溶胶致小鼠肺和外周血急性期反应蛋白、炎性细胞因子及免疫细胞的改变,并探讨吸入炭黑后肺和外周血炎性改变的相关性.方法 染毒组将小鼠全身暴露于15.16 mg/m3炭黑气溶胶中6 h/d,分别连续染毒7d和14 d;恢复组于染毒14 d后恢复14 d,而对照组给予空气.末次染毒24 h或恢复14 d后,收集血液、肺泡灌洗液、肺组织匀浆后进行急性期蛋白、炎性细胞因子及免疫细胞检测.解剖取肺进行病理组织学及超微结构观察.结果 与对照组相比,染毒7、14 d组肺组织匀浆、肺泡灌洗液及血清中CRP、SAA、IL-6、IL-8、TNF-α水平均显著高于对照组(P＜0.05),肺泡灌洗液及外周血中嗜酸性粒细胞百分比显著升高(P＜0.05),单核/巨噬细胞百分比显著降低(P＜0.05),且这些炎症变化在恢复期并未得到改善.相关分析结果显示,肺组织和外周血的炎性水平存在较好的相关性,且相关系数r=0.665以上.病理检查可见染毒及恢复组肺组织呈灰黑色,镜下支气管壁及肺泡壁结构紊乱、肺间隔增厚、炎性细胞浸润,肺泡腔和肺间隔可见黑色颗粒和巨噬细胞.电镜结果显示,染毒及恢复组巨噬细胞中可见较多溶酶体,且在溶酶体内存在电子密度与炭黑颗粒一致的黑色颗粒.结论 反复吸入15.16 mg/m3炭黑气溶胶造成小鼠肺组织炭黑颗粒沉积和炎性损伤以及循环系统炎症反应,炭黑吸入后小鼠外周血中炎性生物标志物的变化可以准确地反映肺组织的炎性改变.
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类鼻疽杆菌Ⅲ型分泌系统BPSS1617蛋白的重组表达及其抗体制备
目的 构建重组表达类鼻疽杆菌Ⅲ型分泌系统蛋白BPSS1617,并制备其抗体.方法 采用PCR扩增BPSS1617全长序列,克隆至原核表达载体pET-22b,将重组表达质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达,免疫新西兰兔,制备其多克隆抗体,并通过Western blot、免疫荧光和ELISA检测抗体的特异性,并分析该蛋白在类鼻疽杆菌中的亚细胞定位.结果 成功扩增类鼻疽杆菌BPC006株基因组中的BPSS1617基因;酶切和测序验证重组表达质粒pET-22 b-BPSS 1617构建成功;经IPTG诱导表达、包涵体洗涤、纯化以及变性复性,成功获得纯度＞95％,分子量为25×103的目的蛋白;将纯化的BPSS1617重组蛋白免疫新西兰兔,获得抗BPSS1617蛋白多克隆抗体,经实验验证其特异性良好;同时BPSS1617蛋白主要定位于类鼻疽杆菌的细胞质中.结论 成功构建、表达、纯化获得BPSS1617蛋白,并成功制备了其特异性多克隆抗体,并且该蛋白定位于类鼻疽杆菌的细胞质中.
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牛磺熊去氧胆酸抑制Kupffer细胞减轻大鼠肝移植后缺血再灌注损伤
目的 探讨牛磺熊去氧胆酸(tauroursodeoxycholic acid,TUDCA)减轻大鼠肝移植后肝脏缺血再灌注损伤的机制.方法 分离雄性SD大鼠Kupffer细胞并培养,按不同浓度梯度给予TUDCA体外处理24 h,收集细胞上清液并提取蛋白和mRNA.共分为4组:①非活化组;②活化+0μmol/L组;③活化+50 μmoL/L组;④活化+100 μmol/L组.检测炎症因子、IRE1α/TRAF2/NF-κB通路活性、P65入核程度.雄性SD大鼠于术前3d经腹腔注射TUDCA 400 mg·kg-1·d-1或者等量生理盐水后,建立大鼠肝移植模型,分为3组:①假手术组;②缺血再灌注组(IR组);③IR+ TUDCA组.各组大鼠分别于再灌注3、6、24 h后收取肝组织标本以及血液标本,并提取Kupffer细胞中蛋白.检测肝脏病理改变、肝功能、肝细胞凋亡程度、肝脏炎症因子、Kupffer细胞中IRE1 α/TRAF2/NF-κB通路活性.结果 TUDCA处理活化的Kupffer细胞后,IL-1β、IL-6、TNF-α分泌减少(P＜0.05),并且IRE1 α、TRAF2、p-IKKα、p-IκB、p-P65表达降低(P＜0.05),P65细胞核相对表达程度降低.TUDCA干预大鼠肝移植模型后,肝组织中气球样变性、点灶坏死,汇管区大量中性粒细胞、淋巴细胞浸润,肝血窦变窄等病理改变显著减轻,IR+ TUDCA组Suzuk's评分(2.95±0.15)较IR组(4.78±0.36)明显降低,肝功能标志物水平下降(P＜0.05),肝实质细胞凋亡数量减少(P＜0.05),IR+TUDCA组凋亡指数(29.1±12.3)较IR组(56.3±17.5)明显降低(P＜0.05),并且IL-1β、IL-6、TNF-α分泌减少(P＜0.05),Kupffer细胞中IRE1α、TRAF2、p-IKKα、p-IκB、p-P65表达降低(P＜0.05).结论 牛磺熊去氧胆酸能够减轻大鼠肝移植后肝脏缺血再灌注损伤程度,其机制可能是下调IRE1 α/TRAF2/NF-κB通路活性抑制Kupffer细胞功能.
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下调整合素连接激酶对宫颈癌细胞糖酵解及增殖、凋亡的影响
目的 观察下调整合素连接激酶(integrin-linked kinase,ILK)对宫颈癌细胞糖酵解及增殖、凋亡的影响,探讨其相关作用机制.方法 选择宫颈癌细胞CaSki,细胞分3组,转染ILK siRNA、siRNA control分别为干扰组和阴性组,以未转染的细胞为对照组.qRT-PCR、Western blot检测细胞中ILK mRNA、蛋白表达水平.试剂盒检测细胞中丙酮酸激酶(pyruvate kinase,PK)、己糖激酶(hexokinase,HK)、三磷腺苷(adenosine triphosphate,ATP)水平和培养液中乳酸水平,MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测细胞中活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(cleaved Caspase-3)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶9(cleaved Caspase-9)、β-连环蛋白(β-catenin)、c-myc蛋白水平.结果 ILK siRNA能够下调宫颈癌细胞中ILK mRNA和蛋白水平,siRNAcontrol对细胞中ILK mRNA和蛋白水平没有影响.阴性组PK、HK、ATP、乳酸水平、细胞存活率、凋亡率、cleaved Caspase-3、cleaved Caspase-9、β-catenin、c-myc表达水平与对照组相比差异均无统计学意义(P＞0.05).与对照组比较,干扰组PK、HK、ATP、乳酸水平明显降低,细胞存活率明显降低,细胞凋亡率明显升高,细胞中cleaved Caspase-3、cleaved Caspase-9表达水平升高,β-catenin、c-myc表达水平下降,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 下调ILK抑制宫颈癌细胞糖酵解和细胞增殖,促进细胞凋亡,作用机制可能与下调Wnt/β-catenin信号通路的激活有关.
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应用多重荧光标记的流式细胞分选技术检测小鼠肌卫星细胞数量及其分化能力的增龄性变化
目的 应用流式细胞分选技术(fluorescence-activated cell sorting,FACS)分离检测不同鼠龄小鼠骨骼肌卫星细胞数量并观察其成肌分化能力.方法 取雄性C57BL小鼠腓肠肌等组织,机械剪碎后胶原酶/分散酶联合消化,过滤离散细胞进行免疫标记染色,流式细胞仪分选CD45 /CD31-/Sca1-/α7-integrin+细胞群体,培养分选细胞并进行Pax7和Desmin肌原性分子鉴定和分化诱导;观察比较青年、成年和老年小鼠骨骼肌组织中静止肌卫星细胞数量和成肌分化能力的变化.结果 分选出的成年CD45-/CD31-/Sca1-/α7-integrin+细胞群体约占离散细胞总数的2％ ～ 3％,呈现Pax7、Desmin等染色阳性,经分化诱导能形成典型肌管并表达胚胎肌球蛋白重链(eMHC),青年组小鼠静止卫星细胞比例及每克肌肉内肌卫星细胞数量明显较高(P＜0.05),老年组则明显下降(P＜0.05),同时其肌管融合指数及大肌管比例明显减少(P＜0.05).结论 基于多重免疫荧光标记的流式分选术能实现骨骼肌卫星细胞的快速高效分离,分选细胞可诱导形成肌管;老年骨骼肌组织肌卫星细胞数量与功能呈现显著下降.
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二氢杨梅素通过抑制mTOR信号通路抑制乳腺癌细胞迁移和侵袭
目的 探讨二氢杨梅素(dihydromyricetin,DHM)对人乳腺癌细胞迁移和侵袭的抑制作用及其可能的分子机制.方法 以不同浓度DHM(0、10、20 μmol/L和40 μmoL/L)处理乳腺癌细胞MDA-MB-231,采用Transwell实验检测DHM对癌细胞迁移和侵袭能力的影响,采用蛋白印迹法检测迁移与侵袭标志蛋白(Snail、vimentin、MMP-2和MMP-9)及抑迁移蛋白E-cadherin表达的变化;同时利用乳腺癌细胞裸鼠移植瘤模型和免疫组织化学检测法,观察DHM膳食干预(100 mg/kg)对体内癌细胞迁移与侵袭相关蛋白表达的影响.结果 DHM处理乳腺癌细胞24 h,与对照组相比,细胞迁移和侵袭能力均显著降低(P＜0.05),40 μmol/L处理组细胞迁移能力下降至(37.8±3.1)％,侵袭能力下降至(21.4±2.3)％;蛋白表达检测结果显示,DHM处理细胞其Snail、vimentin、MMP-2和MMP-9表达水平显著降低(P＜0.01),40 μmol/L处理组蛋白表达分别下降至(31.2±2.9)％、(11.1±0.9)％、(14.4±1.2)％、(12.7±1.1)％,而E-cadherin表达水平显著升高(P＜0.01),升高至(3.9±0.4)倍;体内研究结果也显示,DHM膳食干预可显著降低移植瘤组织内Snail、vimentin和MMP-9的表达,提高E-cadherin的表达(P＜0.01).进一步研究表明,DHM处理细胞24 h,与对照组相比,细胞内p-mTOR、p-4EBP1、p-S6 K70和p-eIF4B表达水平均显著降低(P＜0.05),表明其mTOR信号通路被显著抑制.结论 DHM可有效抑制乳腺癌细胞的迁移和侵袭,其机制可能是通过抑制mTOR信号通路实现的.
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GSK-3β抑制剂对肾移植冷缺血再灌注损伤的保护作用
目的 分析GSK-3β抑制剂TDZD-8对大鼠肾移植缺血再灌注损伤(ischemia reperfusion injury,IRI)中NF-κB的活化、炎症反应和氧化应激的作用.方法 选用250 ～ 280 g雄性SD大鼠,建立大鼠肾移植模型和冷IRI模型.肾移植模型:将大鼠分为假手术组、肾移植组、肾移植+5 mg/kg TDZD-8组和肾移植+1 mg/kg TDZD-8组,每组6只;冷缺血再灌注模型:将大鼠分为假手术组、IRI组、IRI+5mg/kgTDZD-8组和IRI+1 mg/kg TDZD-8组,每组6只.采用Western blot和IHC检测两个模型各组大鼠p-RelA/p65、p-GSK-3β、GSK-3β、RelA/p65变化;ELISA检测血清TNF-α、IL-1β、SOD和MDA的变化;HE染色观察肾脏的病理改变,进行肾小管坏死评分;检测血清肌酐和尿素氮.结果 与假手术组相比,肾移植组或冷IRI组血清肌酐、尿素氮、TNF-α、IL-1β和MDA活性明显增高(P＜0.01),血清SOD活性降低(P＜0.01),肾小管坏死评分明显升高(P＜0.01);免疫组化检测结果显示p-GSK-3β和p-RelA/p65磷酸化水平上调(P＜0.01),Western blot检测结果显示NF-κB p65活性升高和GSK-3β活性降低(P＜0.01),病理损伤加重.使用TDZD-8干预后,大鼠血清肌酐、尿素氮、TNF-d、IL-1β和MDA活性降低(P＜0.05),血清SOD活性升高(P＜0.05),肾小管坏死评分降低(P＜0.05);免疫组化检测结果显示p-GSK-3β和p-RelA/p65磷酸化水平下调(P＜0.05),Western blot检测结果显示NF-κB p65活性降低并且GSK-3β活性增高(P＜0.05),病理损伤减轻.结论 GSK-3β抑制剂能降低NF-κB活性,下调NF-κB的磷酸化,减少下游炎症因子的释放,减轻肾脏病理和氧化应激损伤,减轻肾移植缺血再灌注损伤.
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前置胎盘患者深层植入的临床特征分析
目的 探索前置胎盘患者深层植入(肌层植入及穿透性植入)的临床特征从而指导临床治疗并改善临床结局.方法 回顾性分析我院4年间诊断为前置胎盘的患者571例.采用单因素及Logistic回归分析临床特征与深层植入间的关系,采用受试者工作(ROC)曲线评估各临床特征对深层植入的诊断敏感度及特异度.结果 剖宫产次数每增加1次,胎盘深层植入的风险就增加3.433倍,OR=3.433,P＜0.01.超声发现胎盘陷窝者、胎盘低回声带模糊或消失者、膀胱-子宫间隙血供增加者胎盘深层植入的风险的OR值及P值分别为:OR=5.047,P＜0.01;OR=2.913,P=0.008;OR=2.838,P＜0.05.结论 前置胎盘患者有2次以上剖宫产史,超声发现胎盘陷窝、胎盘后低回声模糊或消失、膀胱子宫间隙血供增多者发生深层植入的风险增加,应有针对性地设计围术期多学科团队协作方案以改善临床结局.
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119例肝豆状核变性临床特征及致病基因ATP7B变异谱分析
目的 探讨肝豆状核变性的临床特征及其致病基因ATP7B的中国人群变异谱.方法 收集2011年1月-2017年10月我院肝豆状核变性119例,随访至2018年4月,分析发病年龄、临床特征、生化指标、ATP7B基因变异谱及转归,比较肝型和脑型患者的差异.结果 119例患者中肝型占57.1％,脑型占27.7％,混合型占15.1％.肝型与脑型患者发病年龄差异有统计学意义(P=0.0036),脑型患者全部集中在儿童青少年期起病,肝型患者各年龄段均有发病.本组患者肝损害主要表现为肝功能异常(53.8％)、肝硬化(50.4％)、肝脾肿大(47.9％)和皮肤巩膜黄染(40.3％);神经系统损伤主要表现为口下颌肌张力障碍(31.9％)、精神症状(24.4％)和不自主运动(23.5％);成年患者的肝硬化、腹水、不自主运动等症状显著多于未成年患者(分别为:P=0.005、0.008、0.026).对诊断时效进行分析,从首次发病至明确诊断中位病程为5个月,长82个月,52.1％的患者在起病5个月之后才得以明确诊断,肝型患者确诊所用时间显著少于脑型和混合型患者(分别为:Z=-2.233,P=0.026;Z=-2.424,P=0.015).31例患者进行ATP7B基因检测,阳性率83.9％,常见致病变异位点是Arg778Leu,等位频率17.4％,其次是Pro992Leu、Met769 HisfsX26、Ala874Val和Ile1148Thr.生存分析结果显示,有肝硬化的肝豆状核变性患者的生存率显著低于非肝硬化患者(x2=4.202,P=0.04).结论 婴幼儿及中老年人发病并不少见,应重视年幼和年老患者的诊治;进展为肝硬化的患者因铜沉积久、肝损伤重,其生存率显著低于非肝硬化患者,而基因检测有助于提高早期诊断率.
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基于功能近红外光谱技术的镜像运动脑激活特征的初步研究
目的 研究在镜像运动任务时大脑功能激活特征,为镜像运动疗法治疗截肢后幻肢痛提供脑功能影像学依据.方法 招募13名健康被试,被试者均为本校的在校师生,采用功能性近红外光谱技术检测被试在左足运动执行和右足镜像运动时其大脑感觉运动皮层激活情况,以及大脑皮层含氧血红蛋白(HbO2)相对浓度变化时程特点.结果 右足镜像运动与左足运动执行时,均显著激活双侧大脑主运动区和初级感觉皮层,其中激活强的脑区在大脑右侧的初级感觉运动皮层(P＜0.05).镜像任务HbO2相对浓度时间变化曲线出现下降趋势的时间早于运动执行,但两种任务HbO2浓度变化均值差异无统计学意义(P＞0.05).结论 功能近红外光谱技术研究结果证实了镜像运动和运动执行具有相似大脑激活模式和激活强度.
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肺超声在成人社区获得性肺炎诊断和随访中的应用价值
目的 明确肺超声在成人社区获得性肺炎诊断中的准确性及随访的可行性.方法 对2017年2-12月我院呼吸科39例疑诊社区获得性肺炎患者同时行肺超声和胸部CT检查(“金标准”对照),分析肺超声对社区获得性肺炎的诊断价值.肺超声的随访在治疗第5～7天、第10 ～ 14天进行,评估肺实变位置、实变范围、空气支气管征和胸腔积液的比例.结果 39例患者中经胸部CT诊断社区获得性肺炎31例,经肺超声诊断社区获得性肺炎28例.肺超声诊断肺炎的敏感性为90.3％,特异性为87.5％,肺超声诊断肺炎的阳性预测值为96.6％,阴性预测值为70％;超声诊断显示82.1％患者空气支气管征阳性,35.7％患者胸腔积液.在治疗第10 ～ 14天,病灶面积中位数由8.75 cm2降至2.65 cm2,病灶面积变化差异有统计学意义(P＜0.05);空气支气管征比例从82.1％降至62.5％,胸腔积液比例从35.7％至完全消失.结论 肺超声诊断社区获得性肺炎准确率高,能动态实时观察病灶变化,是一种无创的、重复性好的、可靠的检查手段,可用于成人社区获得性肺炎的诊断和随访.
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西藏日喀则藏族456例9项单基因遗传性状分析
目的 调查西藏日喀则藏族9项人类单基因遗传性状的分布特征,探讨遗传性状与民族之间的相关性.方法 2017年8月收集在西藏某大学籍贯为日喀则的藏族大学生456例,其中男性220例,女性236例.调查其9项人类学指标(眼睑、耳垂类型、拇指指型、酒窝、惯用手、卷舌、发旋、头发类型、发际),判别标准主要依据吴汝康等(1984)的《人体测量方法》和邵象清(1985)的《人体测量手册》.调查数据采用SPSS17.0统计软件进行处理.结果 在日喀则藏族群体中拇指指型、头发类型、发际类型的隐形基因频率高于显性基因频率,其余6对性状反之;不同性别眼睑、发际及头发类型分布差异有统计学意义(P＜0.05);相关性分析结果显示,发旋与耳垂类型、拇指指型、发际存在相关性,头发类型与耳垂、发际与酒窝也存在相关性(P＜0.05),而其他性状间无相关性;日喀则藏族与文献报道的西藏林芝藏族和我国其他民族各性状分布特征进行比较,发现存在不同程度的差异.结论 日喀则藏族群体9项单基因遗传性状分布具有其特异性,提示环境因素在性状的形成过程中有一定的影响.
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负性认知加工偏向问卷在军人群体中的信效度评价
目的 将自编负性认知加工偏向问卷施测于军人群体,以进一步探索问卷的结构及信度.方法 通过问卷调查法[负性认知加工偏向问卷(Negative Cognitive Processing Bias Questionnaire,NCPBQ)、状态一特质焦虑问卷(State Trait Anxiety Inventory,STAI)以及流调中心用抑郁量表(Center For Epidemiological Survey-Depression Scale,CES-D)],对某部4 631名军人进行测查.并对所收集数据进行统计分析,以检测负性认知加工偏向问卷的结构以及信度指标.结果 终保留问卷的13个题项,删除负性解释偏向这一维度的题项,保留负性注意偏向、负性记忆偏向、负性沉思偏向3个维度,3个维度共可解释总问卷60.78％的变异;模型拟合指标都在标准范围之内(RMSEA=0.05,GFI=0.974,NFI=0.967,CFI=0.970,IFI=0.970).问卷及各维度的内部一致性信度在0.79 ～ 0.89之间,各维度之间及其与总分之间呈正相关(r为0.57 ～0.89,P＜0.01),各维度及总分与流调中心用抑郁量表总分呈正相关(r为0.41 ～0.53,P＜0.01).结论 经过删减后的负性认知加工偏向问卷在军人群体中的测量具有良好的信效度.
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广西部分艾滋病高流行区人类免疫缺陷病毒母婴阻断效果及及时性、依从性研究
目的 系统评价广西部分高流行区人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)母婴阻断效果及及时性、依从性,探讨相关影响因素.方法 2011年1月至2017年9月,采取非概率整群抽样和随访观察研究,对广西部分艾滋病高流行区内3 19例调查对象进行母婴阻断干预,从传播率、及时性和依从性等方面了解HIV母婴阻断效果,采用Logistic回归模型分析接受干预及时性和依从性的相关影响因素.结果 继续妊娠HIV感染孕产妇用药率为95.92％ (306/319);安全分娩率70.51％(225/319),呈逐年升高趋势(Z=2.03,P=0.042),累计分娩活婴295例;儿童用药率98.31％(290/295),人工喂养率98.64％(291/295),早期诊断率96.20％(152/158),18月龄抗体检测率93.90％(277/295),随访率97.97％(289/295),死亡率1.69％(5/295),失访率4.1％(12/295).HIV母婴传播率1.06％(校正1.92％).HIV母婴阻断及时性好率54.86％(175/319),其影响因素包括稳定住址、妊娠意愿、确认时间、艾滋病认知、配偶支持和焦虑情绪.HIV母婴阻断依从性好率52.04％(162/319),其影响因素包括文化程度、稳定住址、产前保健次数、病毒载量、CD4水平、艾滋病认知、配偶支持和焦虑情绪.结论 广西贵港市等部分艾滋病高流行区HIV母婴阻断成功率比较高,但母婴阻断及时性及依从性差,服务利用质量有待提高.
