中药远志改善D-半乳糖模型鼠学习记忆能力及其机制研究

目的:探讨中药远志改善D-半乳糖模型鼠学习记忆能力及其可能的作用机制.方法:采用皮下注射D-半乳糖建立小鼠衰老模型,并没对照组和远志给药组.采用跳台法检测各实验组小鼠学习记忆能力,分光光度法检测小鼠脑细胞抗氧化能力,ELISA法检测IL-1β和IL-6含量.结果:远志给药组小鼠学习记忆能力及脑细胞的抗氧化能力均较模型组有显著的提高,IL-1β和IL-6的含量则显著减少.结论:远志通过其抗氧化作用可降低氧化损伤所致脑组织炎症因子含量的增加,改善D-半乳糖模型鼠学习记忆能力.

白藜芦醇对神经母细胞瘤SH-SY5Y增殖的影响

目的:探讨白藜芦醇(Resveratrol,Res)对人神经母细胞瘤SH-SY5Y增殖变化规律和生长状况的影响.方法:通过不同浓度(0.15～500)μmol/L Res作用于SH-SY5Y,检测药物作用5 d后各组细胞增殖率和细胞生长状态,同时通过增殖率曲线获得其半数生长抑制浓度(IC50)和杀伤浓度,并对各组细胞进行Hochest染色,检测其细胞凋亡情况.结果:Res 5 μmol/L组细胞增殖率为(117.00 ±15.30)%显著高于空白对照组(P<0.05),15 μmoL/L组细胞增殖率为(31.33 ±2.89)%,50、150、500 μmol/L组,细胞出现负增长.Res对SH-SY5Y的IC50为12.78 μmol/L,细胞杀伤浓度(即增殖率为0%)为19.88 μmol/L.Res 50～500～mol/L各组内,部分细胞皱缩,突起减少或消失,并出现凋亡细胞.结论:Res在0.15～500 μmol/L浓度范围内对SH-SY5Y的增殖影响存在浓度依赖性,并依次表现为促进增殖、抑制增殖和杀伤细胞三个方面效应.其中杀伤细胞效应与促进SH.SY5Y的凋亡启动相关.

长期口服天麻素对SAMP8鼠记忆力及额叶Sst表达的影响

目的:研究长期口服天麻素对SAMP8鼠记忆力的影响及与额叶Sst表达水平的关系.方法:将4月龄雄性SAMP8鼠20只随机分成2组:天麻素治疗组和对照组.治疗组每只鼠平均每日饮10 ml含60μg/ml天麻素的蒸馏水,对照组每日仅饮用蒸馏水,直至12月龄.然后,观察两组鼠皮毛、眼睑、运动等基本情况;并通过passive-avoidance-test实验检测两组鼠对疼痛刺激的短期记忆力;同时用QRT-PCR(quantitative real time polymerasechain reaction)和Western Blot分别检测两组鼠额叶生长抑素(somatostatin,Sst)的转录水平和表达水平.结果:天麻素治疗组小鼠的毛发光泽好、眼睑无炎症、较活跃,而对照组小鼠脱毛明显、部分小鼠眼睑有炎症、运动少;Passive-avoidance-test实验中天麻素治疗组小鼠明室停留时间及进入暗室小鼠的比例与对照组相比具有显著性差别;QRT-PCR结果显示,天麻素治疗组小鼠额叶中Sst转录水平较对照组升高,二者比较差别具有显著性;WesternBlot结果显示,天麻素治疗组小鼠额叶中Sst表达水平较对照组明显升高.结论:天麻素治疗可能通过增进额叶Sst的转录和表达水平以改善SAMP8鼠的学习记忆能力.

艾芬地尔对大鼠局灶性脑缺血损伤后脑水肿和AQP4表达的影响

目的:研究大鼠腩缺血后水通道蛋白4(AQP4)在脑内的表达及N-甲基-D-天冬氨基酸(NMDA)受体拮抗剂艾芬地尔对其的调节作用.方法:线栓法制作大脑中动脉阻塞(middle cerebral artery oechsion,MACO)局灶性脑缺血模型;干湿重法测量脑组织含水量以评估脑水肿的程度;免疫组化,免疫蛋白印记法测量AQP4(水通道蛋白4)的表达.结果:与假手术组比较,模型组和艾芬地尔组脑组织含水量、梗死灶周围AQP4表达明显增加;与模型组比较,艾芬地尔组能显著减少脑组织含水量,减轻梗死灶周围AQP4表达,差异有统计学意义.结论:缺血损伤后脑组织的AQP4表达上升,脑水肿明显,给予艾芬地尔后可抑制AQP4的表达,减轻脑水肿.

Olig1过表达对大鼠神经干细胞向少突胶质细胞分化的影响

目的:Olig1基因修饰的神经干细胞(NSCs)移植治疗中枢神经脱髓鞘疾病具有重要的应用前景.本研究目的是构建大鼠Olig1真核表达载体,并观察其过表达对大鼠NSCs向少突胶质细胞分化的影响.方法:采用RT-PCR,以新生大鼠脊髓RNA为模板,扩增ohg1基因,定向克隆到pEGFP-N3载体中;用电穿孔方法转染pEGFP-N3-Olig1表达载体至NSCs中,然后用RT-PCR鉴定Olig1的表达,免疫荧光染色鉴定NSCs向少突胶质细胞的分化情况.结果:成功构建了pEGFP-N3-Olig1真核表达载体,Olig1在重组质粒转染的NSCs中能够高效表达.重组质粒转染的NSCs在体外诱导分化后,能够较空质粒转染的NSCs产生更多的少突胶质细胞(P<0.01).结论:Olig1过表达能够显著促进大鼠NSCs向少突胶质细胞方向分化.

中药髓复康对恒河猴脊髓半横断后凋亡相关蛋白表达的影响

目的:探讨中药髓复康(SFK)对恒河猴脊髓半横断后凋亡相关蛋白(Bcl-2、Bax和p53)表达的作用及其机理.方法:实验选用8岁恒河猴14只,随机分为中药治疗组6只、横段脊髓模型组6只、正常对照组2只,采用双盲法复制脊髓T12右侧半横断损伤模型.灌喂SFK溶液1月后,实验恒河猴麻醉、以损伤部位为中心切取长1 cm的脊髓,采用常规SABC免疫组织化学方法检测凋亡相关基因Bcl-2、Bax和p53蛋白表达,并对结果进行定性、定位、图像分析和统计学处理.结果:脊髓Bax免疫组织化学阳性细胞的平均光密度(MOD)模型组略高于正常对照组,中药组明显低于模型组(P<0.05).脊髓Bcl-2免疫组织化学阳性细胞面数密度(NA),中药组明显高于模型组(P<0.05).脊髓Bcl-2免疫组织化学阳性细胞的MOD模型组略高于正常对照组,中药组略高于模型组.脊髓p53免疫组织化学阳性细胞NA,模型组明显高于正常对照组(P<0.05),中药组明显低于模型组(P<0.05).脊髓p53免疫组织化学阳性细胞的MOD模型组明显高于正常对照组(P<0.05),中药组明显低于模型组(P<0.05).结论:髓复康可以促进Bcl-2蛋白表达,抑制Bax、p53蛋白表达和抑制神经元凋亡,对脊髓神经损伤具有保护作用.

严重烫伤大鼠脑内MMP-9及NOS表达变化及意义

目的:观察严重烫伤大鼠脑内基质金属蛋白酶-9(MMP-9)及一氧化氮合酶(NOS)的表达变化,分析两者之间的关系及意义.方法:建立30%TBSAⅢ度烫伤SD大鼠模型,应用免疫组化法检测大鼠脑内MMP-9的表达变化,NADPH-d组织化学方法检测脑内NOS的表达变化,用于湿法检测脑百分含水量.结果:严重烫伤后脑百分含水量增高.以6-12 h为显著;烫伤后3 h MMP-9阳性细胞数开始增多,12～24 h阳性细胞数增加达高峰;48 h阳性细胞数开始下降.大鼠严重烫伤后3,12,24 h大脑皮质及烫伤后3,24 h的纹状体内NOS阳性神经元数量明显增多.讨论:严重烫伤后脑内MMP-9和NOS均升高,可能与血脑屏障损害及脑水肿的形成有关.

远志促进AD模型小鼠神经发生的研究

目的:研究远志对Alzheimer病(AD)模型小鼠神经发生的影响.方法:选用健康成年昆明小鼠随即分为5组,分别为对照组,AD模型组,远志高、中、低剂量干预组.除对照组外,其余四组采用联合给予D-半乳糖和亚硝酸钠腹腔注射造模;远志高、中、低剂量干预组通过灌胃给予不同浓度的远志混悬液,用Morris水迷宫测试其空间学习记忆能力,用5-溴脱氧尿嘧啶(BrdU)免疫组织化学染色标记脑内的新生细胞.结果:远志高、中剂量组学习记忆能力显著高于AD模型组(P<0.05);远志高、中剂量组海马齿状回(DG)内的BrdU阳性细胞数显著多于AD模型组(P<0.01).结论:远志能够改善AD小鼠的学习记忆能力,其机理可能与其促进AD模型小鼠海马齿状回的神经发生有关.

钙粘附蛋白N-cadherin基因RNAi质粒载体的构建与鉴定

目的:构建有效的小鼠神经型钙粘附蛋白(N-cadherin)基因RNA干扰质粒载体.方法:在小鼠基因库中选择3个靶序列并设计合成相应3对寡核苷酸序列,同时合成1对阴性对照寡核苷酸序列,然后将以上4对寡核苷酸序列退火后连入pSilencer~(TM)3.1-H1 hygro质粒并分别命名为pSicad1、pSicad2、pSicad3、pSi-control.酶切和测序鉴定后,将以上重组质粒转染MN9D细胞,用Western Blot和半定量RT-PCR方法检测N-cadherin基因mR-NA和蛋白的表达水平.结果:酶切和测序证实目的寡核苷酸片段已被准确克隆到pSilencer~(TM)3.1-H1 hygro质粒,与对照组相比,pSicad 2和pSicad 3转染MN9D细胞后,N-cadherin mRNA和蛋白水平的表达均受到明显抑制,其中N-cadhefin蛋白水平在pSicad3组下降50%(P<0.01).结论:结果表明已成功构建了小鼠N-cadherin基因RNAi质粒载体,为N-cadherin功能研究奠定了基础.

脑缺血再灌注皮质Bax,Bcl-2和GFAP的表达及川芎嗪的干预作用

目的:探讨脑缺血再灌注(CIR)大鼠脑皮质Bax,Bcl-2和GFAP表达及川芎嗪的干预作用.方法:72只Wister大鼠随机分成假手术组,模型组,小剂量治疗组和大剂量治疗组.其中54只大鼠利用Bannister's颈动脉血引流法复制CIR动物模型.治疗组分别向腹腔注射川芎嗪50 ms/kg或100 ms/kg.术后12,24,72 h取脑组织,用免疫组织化学方法检测Bax,Bcl-2和GFAP(胶质纤维酸性蛋白)阳性细胞.结果:模型组Bax,Bel-2和GFAP阳性细胞值明显高于假手术组和治疗组,Bax/Bcl-2大于1;治疗组Bax,GFAP阳性细胞数减少,Bcl-2增多,治疗大剂量组Bax/Bcl-2比值明显下降小于1.结论:川芎嗪能够下调CIR脑皮质Bax和GFAP表达和上调Bcl-2表达,说明川芎嗪通过干预基因表达发挥脑保护作用.

人参皂甙Rd对皮层神经元兴奋性毒性损伤后胞内游离钙的影响

目的:探讨人参皂甙Rd(Ginsenoside Rd,GSRd)对皮层神经元兴奋性毒性损伤后细胞内游离钙离子浓度变化的影响.方法:采用原代方法培养大鼠皮层神经元,免疫荧光染色鉴定神经元纯度.应用激光共聚焦显微镜,观察GSRd对谷氨酸(Glutamate,Glu)和N-甲基-D-天门冬氨酸(NMDA)刺激后神经元胞内游离钙离子浓度变化的影响.使用钙离子荧光探针Fho-4,AM标记细胞内游离钙,以Fho-4的荧光强度反映细胞内游离钙浓度变化.结果:空白对照组荧光强度没有明显变化,而高浓度Glu刺激可迅速升高神经元胞内的荧光强度;在给予GSRd干预时,荧光强度升高的幅度明显降低,与MK-801的作用相似;NMDA刺激亦可使神经元胞内荧光强度明显升高,而加入GSRd干预时,荧光强度升高的幅度较NMDA损伤组有明显减小.结论:GSRd能够抑制高浓度Glu和NMDA引起的大量钙内流,提示减轻兴奋性毒性损伤过程中的钙超载可能是GSRd神经保护作用的机制之一.

地塞米松对宫内感染致胎鼠脑TNF-а表达及脑损伤的影响

目的:早产儿脑损伤有很高的发病率且愈后很差,目前认为宫内感染、炎症反应是导致早产儿脑损伤的重要因素.本研究通过给予孕鼠腹腔注射脂多糖(LPS)制作宫内感染的动物模型,探讨地塞米松(Dex)对早产儿脑损伤是否具有保护作用.方法:将孕18 d孕鼠随机分为盐水对照组、LPS组和Dex干预组,分别腹腔注射药物.采用免疫组化法及RT-PCR法观察腹腔注药4 h后胎鼠脑肿瘤坏死因子(TNF)表达的变化;采用原位末端标记法检测注药48 h后LPS组、对照组及干预组胎脑细胞凋亡的变化.结果:Dex干预组胎脑TNF-а蛋白水平及mRNA表达较LPS组明显减弱(P<0.05),且与Dex的剂量呈负相关.Dex干预组凋亡细胞与LPS组相比较明显减少(P<0.01).结论:宫内注射LPS可导致胎鼠脑损伤,地塞米松可能通过抑制胎脑TNF-а的表达,降低脑细胞凋亡,对宫内感染致脑损伤具有保护作用.

颈淋巴管阻塞对脑缺血BBB通透性和MMP-9表达的影响

目的:探讨脑梗塞后给予大鼠颈淋巴管阻塞对缺血侧大脑皮质基质金属蛋白酶9表达水平及血脑屏障通透性和脑含水量等的影响.方法:用线栓法复制大鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)模型,以及行大鼠大脑中动脉阻塞15 min后摘除双侧颌下腺的颈浅和颈深淋巴结,造成脑梗塞后颈淋巴管阻塞(MCAO+CLB)模型去检测缺血侧大脑皮质脑含水量、血脑屏障通透性和基质金属蛋白酶9 mRNA表达水平和免疫活性的变化.结果:在不同的时点,上述各指标在MCAO+CLB组大鼠明显高于MCAO组.结论:MCAO后,CLB通过上调梗塞侧皮质MMP-9的表达水平而加重脑水肿和提高血脑屏障通透性.

电刺激大鼠伏隔核对腹侧苍白球神经元自发放电的影响

目的:研究电刺激大鼠伏隔核(nucleus accumbens,NAC)对腹侧苍白球(ventral pallidum,VP)神经元放电的影响,探索电刺激NAC治疗药物成瘾的机制.方法:本实验应用细胞外记录方法观察不同频率电刺激(强度0.4 mA,波宽0.06 ms,时程5 s,频率5,10,20,50,80,100,130,150和200 Hz)大鼠NAC对VP神经元放电的影响.结果:刺激频率低于20 Hz时,大多数VP神经元的放电频率无变化,电刺激频率大于20 Hz可使大多数VP神经元的放电频率降低.结论:本研究提示高频刺激NAC对药物依赖可能有治疗作用.

大鼠阴茎海绵体感觉传入的脊髓投射-双标记电镜观察

目的:本研究观察了大鼠阴茎海绵体感觉传人纤维在脊髓中的终止部位.方法:将麦芽凝集素-辣根过氧化物酶(WGR-HRP)注入大鼠阴茎海绵体,示踪阴茎海绵体感觉神经元及其纤维分别在脊神经节和脊髓中的分布.结果:标记神经元出现在胸12-腰2和腰5-骶1脊神经节内.标记神经纤维出现在胸13-腰1和腰5-6脊髓横切面两侧,主要集中于后角Ⅰ-Ⅱ层,少量可见于中间带外侧核.免疫电镜观察证实,WGR-HRP示踪标记神经纤维与脊髓P物质神经纤维存在突触联系.结论:大鼠阴茎海绵体感觉神经纤维终止在脊髓的胸、腰段浅层,与脊髓P物质神经纤维形成突触联系.

切断膈肌下迷走神经对应激大鼠延髓、下丘脑Fos表达的影响

目的:探讨在束缚.浸水应激状态下,情绪变化、体温降低、胃肠道的反馈信息三者中哪种因素是诱发延髓、下丘脑神经元Fos表达的主导因素.方法:将雄性Wistar大鼠随机分两组:手术组、对照组.手术组切断双侧膈肌下迷走神经,对照组同样暴露神经但不切断.术后6 d进行实验,将大鼠束缚-浸水应激3 h后处死,测腹腔温度;取胃,观察胃粘膜损伤程度;取脑,应用免疫组化染色方法观察两组动物延髓、下丘脑神经元的Fes表达.结果:手术组动物延髓迷走神经运动背核、孤柬核、下丘脑室旁核Fos表达较对照组减弱(P<0.05),延髓后区减弱为显著(P<0.01);腹腔温度低于对照组(P<0.05);胃粘膜损伤程度较对照组减轻(P<0.05).结论:研究表明,束缚-浸水应激过程中,诱发延髓迷走神经背核、孤束核、后区、下丘脑室旁核神经元Fos表达的主要因素是胃肠的反馈信息.

大鼠海马神经元核受体-糖皮质激素受体在穹窿切断同时摘除肾上腺后表达的变化

目的:通过建立穹窿切断的动物模型来检测糖皮质激素的浓度和穹窿切断同时摘除肾上腺的动物模型检测海马神经元核受体-糖皮质激素受体(GR)的表达变化,以探讨GR参与下丘脑-垂体-肾上腺(HPA)轴调节的机制.方法:建立大鼠穹窿切断模型,采用ELISA方法检测穹窿切断0,4,7,10 d血中糖皮质激素的浓度、建立大鼠穹窿切断同时摘除肾上腺7d的模型,采用免疫组织化学、免疫印迹方法检测海马神经元核受体GR表达变化的观察及定量检测.结果:穹窿切断7 d后血中糖皮质激素的浓度升高,穹窿切断同时摘除肾上腺7 d后,海马神经元GR表达升高.结论:海马核受体GR的表达变化可能与糖皮质激素的浓度呈负相关.

熄风止颤合剂对PSI诱导的帕金森病大鼠黑质超微结构的影响

目的:观察熄风止颤合剂对帕金森病模型大鼠行为学及脑内黑质多巴胺神经元、神经胶质细胞超微结构的影响.方法:雄性SD大鼠背部皮下注射蛋白酶抑制因子(proteasome inhibitors I,PSI)造模,造模成功的大鼠随机分为三组:模型组、西药组、中药组.造模完毕四周后,连续3周分别灌胃给予生理盐水、美多巴、熄风止颤合剂.灌胃前、后观察各组大鼠行为学改变.各组大鼠以4%多聚甲醛经心脏灌注固定后取黑质,应用透射电镜观察其神经元、神经胶质细胞超微结构的改变.结果:模璎组大鼠出现不自主动作增多、颤抖、卷曲姿态、运动迟缓等表现,中药组上述行为学异常明显减轻.电镜下观察到模犁组黑质多巴胺神经元胞膜不连续,核内染色质凝集,线粒体空泡样变或髓样变,高尔基复合体囊泡变,核糖体明显减少.神经胶质细胞核异染色质边集,核周隙增宽,多条胞周有髓神经纤维髓鞘明显剥离.上述病理性改变在中药组较模型组明显轻微.结论:熄风止颤合剂能改善帕金森病模型大鼠的行为学异常、减轻黑质多巴胺神经元和神经胶质细胞的超微病理变化.

TLR4与TNF-а在脑缺血再灌注小鼠海马CA1区神经元中的表达

目的:探讨Toll样受体4(TLR4)在脑缺血再灌注损伤炎症反应中的作用.方法:采用抗TLR4抗体封闭阻断TLR4,应用HE染色观察小鼠海马CA1区组织病理学改变、Western Blot和RT-PCR检测海马TLR4蛋白和mRNA表达量,免疫组化方法检查TNF-а表达.小鼠随机分为3组,即假手术组(S组)、缺血再灌注组(I组)和TLR4阻断组(T组),各组又分12,24,48和72 h 4个时间点组.结果:缺血再灌注组TLR4蛋白、TLR4 mRNA和TNF-а表达水平明显高于假手术组表达水平(P<0.05),而TLR4阻断组TLR4蛋白、TLR4 mRNA和TNF-а表达水平明显少于缺血再灌注组(P<0.05).相关分析表明,TLR4mRNA表达水平与TNF-а含量呈显著正相关(P<0.01).结论:本结果提示缺血再灌注可激活TLR4,TLR4在脑缺血再灌注损伤中起重要作用;炎性因子TNF-а的产生、分泌可能与TLR4mRNA表达存在密切联系.

StAR在雌性SD大鼠海马、基底前脑及前额叶皮层中的表达与ChAT正相关

目的:探讨基底前脑胆碱能系统(basal forebrain cholinergic system,BFCS)中是否存在神经甾体的合成及局部合成的神经甾体与BFCS功能之间的关系.方法:利用免疫荧光及Western Blot方法检测甾体合成急性调节蛋白(steroidogenic acute regulatory protein,StAR)及胆碱乙酰转移酶(choline acetyltransferase,ChAT)在1月龄、6月龄及24月龄雌性SD大鼠海马、基底前脑及前额叶皮层中的表达情况,并对StAR与相应脑区中ChAT的表达量进行相关性分析.结果:海马、基底前脑及前额叶皮层多种形态的细胞中均存在StAR的表达.StAR与ChAT在1月龄及24月龄组的表达量均显著低于6月龄组(P<0.05),24月龄组的表达量均略低于1月龄组(P>0.05),且StAR的表达量均与相应脑区中ChAT的表达量正相关.结论:BFCS中存在神经甾体的合成,且局部合成的神经甾体与BFCS功能状态密切相关.

神经颗粒素与脑突触可塑性的相关性研究进展

大量研究表明,突触损伤是各种疾病导致学习记忆等智能障碍的重要病理机制之一,而脑内突触蛋白在突触信号传递中发挥重要作用.因此,脑特异性蛋白质在生理及疾病状态下突触传递功能改变中的作用已成为当前的研究热点之一.

NF-κB及其抑制因子Ⅰ-κBs与神经细胞凋亡

核转录因子-κB(nuclear factor zB,NF-κB)是广泛存在于多种细胞中,具有多向转录调节作用的蛋白质.NF-κB抑制因子(inhibitory κB,Ⅰ-kB)作为NF-κB的抑制子,在NF-kB的活化过程中起着分子开关的作用.

《第四军医大学学报》更名为《医学争鸣》