中国实验血液学杂志
Journal of Experimental Hematology 중국실험혈액학잡지
- 主管单位: 实验血液学杂志
- 主办单位: 中国科学技术协会
- 影响因子: 0.98
- 审稿时间: 1-3个月
- 国际刊号: 11-4423/R
- 国内刊号: 陈潮
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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野生型p16和p53抑癌基因共转染对 K562细胞增殖的抑制作用
抑癌基因p16和p53在抑制肿瘤的发生中起重要作用,在髓细胞白血病细胞系K562中检测出这两种基因有纯合缺失.为探讨野生型p16和p53基因的转染与表达对K562细胞的生长影响,采用了脂质体介导外源野生型p16和p53共转染K562细胞,用免疫细胞化学染色检测p16和p53基因的表达,检测细胞生长曲线,采用流式细胞术进行细胞周期分析.结果显示,共转染后p53和p16在K562细胞中表达阳性率分别为23%和28%;细胞生长受到一定程度的抑制,G1期细胞的比例增加,S期细胞减少,与单独转染p53或p16基因的抑制作用有明显差别(P<0.05).结论:外源野生型p16和p53基因的共转染比转染单基因对K562细胞生长有更明显的抑制作用,有可能成为白血病基因治疗的一种方法.
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四色荧光标记抗体在白血病免疫分型中的应用及意义
为探讨多参数流式细胞术对白血病免疫分型的方法及意义,本研究自行设计了一系列4种荧光标记的单克隆抗体组合,对88例急性白血病患者骨髓或外周血进行流式细胞仪免疫表型分析.应用本组抗体组合可对T-ALL和B-ALL及AML-M1-M7患者做出诊断,并可诊断形态学难以辨认的AML-M0,及一般免疫分型法较难辨认的单核细胞白血病.应用4组四色荧光标记的抗体组合,共含13种抗体,既可将90%以上的白血病患者分为ALL或AML,并可鉴别急性白血病的主要亚型,及反映血细胞的分化成熟度.结论:四色荧光抗体组合可用较少的抗体,特异地对白血病细胞进行多参数免疫分型分析,提高免疫分型的准确性.
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优化流式细胞术测定保存血小板CD62p表达
CD62p阳性率是保存血小板质量监测的重要指标之一.为在静脉全血内血小板CD62p测定方法的基础上优化建立流式细胞术(FCM)测定保存血小板表达CD62p的方法,在血小板检测标本内加入0.1 mmol/L潘生丁稳定血小板;对TBS溶液进行了改良,添加了1.1mmol/L的EDTA和100μmol/L潘生丁,用以代替PBS;采用新鲜富含血小板血浆(FPRP)制备的阴、阳性对照;进行方法学评价.结果表明:加入0.1 mmol/L潘生丁和1.1mmol/L的EDTA可以有效防止实验过程中的血小板人为激活;采用新鲜富含血小板血浆(FPRP)制备的阴、阳性对照既可优化FCM分析方法,还可用于检验所购荧光抗体的质量,保证实验结果的有效性.采用泛血小板特异性标志物CD61可灵敏特异地识别血小板,提高了实验抗干扰能力.制备保存血小板时采用的是专用大号采血针,抽血流畅,对血小板CD62p表达测定人为影响很小,明显优于用注射器采集患者静脉全血的做法.CD62p测定灵敏度可达1%,制备的标本可稳定48小时.结论:利用该流式细胞术可以灵敏而特异地测定保存血小板的CD62P表达率;该方法简便易行,提高了结果的准确性,具有良好的稳定性和重复性.
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SCL基因反义寡核苷酸对K562和CEM细胞系的作用
干细胞白血病(SCL)基因是新发现的与白血病发生有关的癌基因.为进一步探讨SCL反义寡核苷酸对白血病细胞的作用,本研究应用SCL基因的反义硫代磷酸寡脱氧核苷酸(AS-PS-ODN)分别与K562和CEM白血病细胞系作用,观察细胞生长、分化、凋亡和SCL mRNA变化.结果显示:(1)AS-PS-ODN对K562和CEM细胞的生长有不同程度的抑制作用,并呈量效和时效关系;(2)AS-PS-ODN作用后K562细胞联苯胺染色阳性率明显增加;(3)AS-PS-ODN作用后K562细胞发生凋亡现象,但未观察到CEM细胞凋亡;(4)AS-PS-ODN作用后K562细胞和CEM细胞SCL mRNA表达水平减低,同时CEM细胞SIL-SCL mRNA表达水平也减低.结论:AS-PS-ODN能特异性抑制K562和CEM细胞的增殖,减低SCL mRNA和SIL-SCL mRNA表达水平,同时促进红系分化,诱导K562细胞过早凋亡.
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人脐血造血干/祖细胞能在鼠肝中生长
肝脏干/祖细胞的分化、再生以及它的生物特性是一个非常活跃的研究领域.本研究报告当人脐血细胞经静脉输注给肝脏受损伤的及免疫功能缺陷的小鼠后,采用流式细胞术和组织配型(HLA)的方法,结果发现,在输注9周后鼠肝脏细胞内还存在有人脐血细胞,即使在灌洗后肝脏细胞的贴壁细胞培养及细胞集落(CFU-GEMM)中,也可以发现人脐血细胞的存在.结论:证实了脐血造血干/祖细胞能长期在肝脏中生长.
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Caspase-3在脐血CD34+细胞中的表达及意义
为探讨脐血CD34+细胞在不同细胞因子支持下体外扩增过程中caspase-3表达及意义,采用RT-PCR,Western blot和流式细胞术对脐血CD34+细胞在体外扩增过程中的细胞增殖、细胞凋亡及caspase-3的表达进行了测定.检测结果显示,caspase-3 mRNA在新鲜分离的脐血CD34+细胞中低水平表达,在细胞因子支持下体外培养3天,扩增的CD34+细胞中caspase-3 mRNA和蛋白质水平表达上调,但在这两种细胞中仅能检测到分子量为32kD的非活性酶原形式的caspase-3,随着体外培养时间的延长,在无早期效应细胞因子sCF或FL存在的条件下,caspase-3被激活,可检测到分子量为20 kD的裂解片段,细胞凋亡率增加.结论:虽然造血干/祖细胞的凋亡是个复杂的过程,但在脐血CD34+干/祖细胞体外扩增过程中,caspase-3参与了细胞凋亡事件并发挥着重要的作用,早期效应细胞因子SCF和FL可减少造血干/祖细胞的凋亡,对造血干/祖细胞有保护作用.
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维甲酸诱导HL-60细胞分化过程中端粒酶活性与 hTERT,c-myc和bcl-2表达的研究
为了探讨全反式维甲酸(ATRA)诱导HL-60细胞分化过程中端粒酶活性与hTERT,c-myc和bcl-2 mRNA表达的变化规律及其意义,复制HL-60细胞的诱导分化模型,在分化前和分化过程中通过端粒重复序列扩增PCR-ELISA方法测定端粒酶活性,采用RT-PCR方法检测hTERT,c-myc和bcl-2 mRNA表达水平.结果显示,在ATRA诱导HL-60细胞分化过程中,端粒酶活性水平逐渐下降,hTERT mRNA表达下调的同时c-myc和bcl-2 mRNA表达亦下调,且hTERT mRNA下调早于端粒酶活性水平下降.结论:全反式维甲酸诱导的HL-60细胞分化过程与端粒酶活性降低和hTERT,c-myc及bcl-2 mRNA表达下降有关.
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白细胞介素-18在急性移植物抗宿主病发病机制中的作用
为了研究异基因外周血造血干细胞(allo-PBSCT)移植期细胞因子白细胞介素-18(IL-18)与急性移植物抗宿主病(aGVHD)的关系,以探讨IL-18在aGVHD发病中的作用,对26例恶性血液病患者进行了allo-PBSCT,并采用双夹心酶联免疫吸附法(ELISA)检测移植前及移植后aGVHD发生时患者外周血单个核细胞分泌的IL-18浓度.结果表明:移植患者中10例发生Ⅰ度GVHD和5例发生Ⅲ-Ⅳ度GVHD,发生aGVHD患者分泌的IL-18浓度显著高于未发生aGVHD患者,并且IL-18浓度与aGVHD的严重程度成正相关,与感染的发生无关.结论:IL-18在aGVHD的发病中起重要的作用.
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三氧化二砷对慢性粒细胞白血病细胞系的作用
本研究探讨三氧化二砷(As2O3)对两种慢性粒细胞白血病(CML)细胞系有无作用及作用机制.实验选用了两种不同的CML细胞系KU812和MEG-01及两种其它白血病细胞系U937和PL21,加入不同浓度的As2O3(0.2,2和10μmol/L),在不同时间计数活细胞数,观察细胞形态,并以TUNEL法和DNA凝胶电泳检测细胞有无凋亡的发生;同时检测0.2 μmol/L As2O3作用时细胞表面CD34,CD13,CD33,CD19,CD11b,CD14和CD7的变化,并通过RT-PCR检测细胞bcr-abl水平及caspase-3的变化.研究结果发现,不同浓度的As2O3对4种细胞系的作用不同,10μmol/L时4种细胞系均会发生细胞凋亡,2μmol/L时则仅CML细胞系KU812和MEG-01会产生凋亡,0.2μmol/L时4种细胞系均不发生凋亡.在培养24小时后,4种细胞系表面的CD34,CD13,CD33,CD19,CD11b,CD14和CD7等均无明显改变.RT-PCR检测bcr-abl的水平发现在2种CML细胞系中无明显改变,其caspase-3的活性较对照细胞均有所增加.结论:As2O3在较高浓度下可诱导4种白血病细胞系产生凋亡,在2μmol/L仅可诱导CML来源的两种细胞系产生凋亡,CML细胞系对As2O3较其它两种细胞系敏感,其作用机制与caspase-3有关.
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人类染色体17p13.3位点新克隆基因HC56,HC71 和HC90在白血病细胞的表达
为研究人类染色体17p13.3位点新克隆的基因HC56,HC71和HC90在白血病细胞中的表达,应用同位素标记的、以βM2基因作为内参的半定量RT-PCR法,检测35例急性白血病和4株白血病细胞系的HC56,HC70和HC90基因的表达.结果显示,急性淋巴系白血病病人的HC90基因和T淋巴系白血病细胞系Jurkat细胞HC90基因表达水平降低.急性髓系白血病病人HC71基因表达水平降低.HC56基因表达在急性白血病和正常对照间未见显著差异.结论:在人类白血病有HC70和HC90的基因表达异常.
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原代骨髓基质细胞层对逆转录病毒载体介导的造血干/祖细胞基因转导的支持效应
为探讨建立原代骨髓基质细胞层的方法并观察基质接触对造血干/祖细胞(HSC/HPC)基因转移的影响,采用Ficoll-Hypaque分离成人骨髓单个核细胞(MNC),用基质细胞培养液培养,传代4次以建立原代骨髓基质细胞层.将经细胞因子预刺激的造血干/祖细胞接种到经辐照处理的基质细胞层上,进行逆转录病毒介导的多药耐药基因(mdr1)转导,以半固体集落培养和聚合酶链反应法(PCR)检测长春新碱(VCR)抗性集落数和mdr1基因扩增片段以测定转导效率.结果表明:原代骨髓基质细胞培养传代4-6周形成混合贴壁细胞层,主要由成纤维细胞组成.集落法和PCR法检测显示基质接触能提高骨髓造血干/祖细胞基因转导效率2.1-3.3倍,对逆转录病毒介导的造血干/祖细胞基因转导具有明显的支持效应.结论:基质细胞接触联合细胞因子作用可提高逆转录病毒介导的造血干/祖细胞基因转导效率.
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原位检测细胞凋亡率及增殖率对骨髓增生异常综合征的诊断意义
观察原位检测骨髓细胞凋亡率及增殖细胞核抗原(PCNA)表达率在MDS临床鉴别、疗效观察及向白血病转化中的诊断作用.采用原位末端转移酶介导标记(TUNEL)法和免疫组化ABC法对60例MDS,30例AML,21例CAA,16例溶血性贫血,15例巨幼细胞性贫血以及30例正常对照进行检测,统计凋亡细胞阳性率及PCNA表达率.结果发现,骨髓有核细胞凋亡率及PCNA表达率在各类疾病的表达有显著差异,低增生MDS可与其他疾病相鉴别,MDS转化的白血病与原发白血病的骨髓有核细胞凋亡率及PCNA表达率无差异,临床治疗对MDS组,CAA组,AML组骨髓有核细胞凋亡率及PCNA表达率有显著影响.结论:原位检测骨髓有核细胞凋亡率及PCNA阳性表达率可作为MDS临床诊断、鉴别诊断的有效方法,临床治疗对凋亡率及PCNA表达率有明显影响,可作为疗效判断指标之一.
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输血前Rh(D)检测及其在输血中的意义
探讨输血前检测受血者Rh血型的意义及对Rh(D)阴性者能及时输用同型血或采用自体输血的可能性.对近5年来住院治疗首次申请输血的病人共2 168例,在输血前1天进行Ph(D)血型抗原的检测,应用BASO公司生产的IgM抗-D血清,采用试管法进行检测.结果表明:在2 168例病人中检测出Rh(D)阴性者7例,Rh(D)阴性率占0.32%,其中2例采用自体输血,2例输用ABO同型的Rh(D)阴性血液,3例未输血.结论:输血前检测Rh(D)血型能防止溶血性输血反应;如果病人是Rh(D)阴性,只要身体条件允许可采用自体输血.
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移植物体外净化白血病细胞模型的建立
本实验采用荧光素Calcein-AM标记白血病细胞后分别接种入细胞株或骨髓细胞中以建立3个白血病移植物细胞模型,采用免疫磁珠法对细胞模型进行选择,并用流式细胞术(FCM)评价移植物模型中白血病细胞的净化效果.结果表明:所建立的移植物细胞模型既可以用荧光显微镜分析,又可以用FCM进行精确评价.模型Ⅱ经免疫磁珠法体外净化后髓系白血病KG1a细胞的清除率为(0.98±0.09)log,模型Ⅲ中淋巴系白血病NALM-6细胞的清除率为(1.82±0.51)log.结论:建立的模型直观、稳定、重复性好,能用于免疫磁珠法体外净化移植物白血病细胞效果的精确评价及体外杀伤肿瘤作用的实验研究.
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单独采集血小板和浓缩血小板在保存期中的活化情况
研究单独采集血小板(单采血小板)和浓缩血小板在保存期中的活化情况.用流式细胞术对这两种血小板的CD62p和CD41表达量进行测定.结果表明:在保存0,1,3和5天时,单采血小板的CD62p阳性率和CD41的平均荧光强度分别为(18.91±6.25)%,(19.48±8.27)%,(22.82±6.06)%,(56.71±11.79)%及(8.09±2.38)%,(8.13±2.45)%,(8.44±2.51)%,(19.87±6.13)%,而浓缩血小板的分别为(30.65±12.33)%,(31.46±11.86)%,(32.51±13.05)%,(63.55±13.27)%及(10.33±4.37)%,(11.09±6.61)%,(13.46±9.69)%,(24.41±10.15)%.二项指标均随保存时间推移而上升.对这两种血小板的计数和pH值测定显示,二者均随保存时间推移而下降.在保存0-3天内两种血小板的计数,pH值,CD62p和CD41表达量无显著差异.在第5天血小板计数和pH值出现显著下降(P<0.001);而CD62p和CD41表达量出现显著上升(P<0.001).结论:单采血小板优于浓缩血小板.
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异基因骨髓移植小鼠联合输注IL-3/IL-6双基因转导的骨髓基质细胞促进造血恢复
探讨用逆转录病毒载体转入IL-3和IL-6双基因的骨髓基质细胞系QXMSC1IL-3/IL-6对异基因骨髓移植小鼠造血功能的促进作用.用逆转录病毒载体(含小鼠IL-3 cDNA,人IL-6 cDNA)分别转导到骨髓基质细胞系QXMSC1(H-2d),构建骨髓基质细胞系QXMSC1IL-3/IL-6.供体小鼠BALB/c(H-2d)骨髓去除骨髓中T细胞,受体小鼠C57BL/6(H-2b)经γ射线致死量照射后,输入去除T细胞的供体骨髓(1×107/鼠)的同时输入骨髓基质细胞QXMSC1IL-3/IL-6(5×105/鼠).在骨髓移植后20和40天,分别检测骨髓移植小鼠外周血RBC,WBC和骨髓有核细胞数及骨髓中CFU-S,CFU-GM,CFU-E和CFU-GEMM数.结果:异基因骨髓移植共输入QXMSC1IL-3/IL-6基质细胞系可使异基因骨髓移植小鼠外周血RBC,WBC数明显恢复,骨髓中有核细胞数,CFU-S,CFU-GM,CFU-E和CFU-GEMM明显增加.基质细胞系QXMSC1可作为有效的基因载体促进骨髓移植后造血功能重建.结论:基质细胞转入细胞因子IL-3或IL-6基因可以进一步促进骨髓移植后造血功能重建,联合转导IL-3和IL-6有协同作用.
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亚硒酸钠在诱导NB4细胞凋亡的过程中抑制了转录因子NFκB的激活
本实验研究亚硒酸钠在诱导NB4细胞凋亡过程中对转录因子NFκB活性的影响.用Westem印迹法检测细胞核提取物中NFκB亚基P65的含量;用形态学观察、DNA琼脂糖凝胶电泳和流式细胞术检测细胞凋亡;用MTT法观察对细胞的生长抑制.结果显示:亚硒酸钠(≥5μmol/L)可抑制NB4细胞生长和诱导细胞凋亡,同时亚硒酸钠作用时间和浓度相关性地抑制了转录因子NFκB的激活.结论:抑制NFκB激活可能是亚硒酸钠诱导NB4细胞凋亡的途径之一.
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检测白血病细胞增殖力的MTS/pms比色分析法的建立
为了探讨建立一种更为快速、安全、灵敏的白血病细胞增殖力的检测方法,本研究应用HL-60和K562细胞可转化MTS/pms形成水溶性待测产物,其光密度值在492 nm波长下半自动测定的特点,研究了MTS/pms比色分析法取代MTT和INT用于白血病细胞增殖力的检测.结果表明,只有活的白血病细胞才能转化MTS/pms形成待测产物,且白血病细胞数与所测光密度值(OD)之间具有良好的相关性(r=0.963);与MTT和INT法相比较,MTS/pms比色分析法中所形成的终待测产物为水溶性,省略了上清液去除和加入有机溶剂的步骤.结论:MTS/pms比色分析法对白血病细胞增殖力的检测更具有快速、安全、准确、灵敏的优点.
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中国人HLA-A和B位点血清学分型错误的分析
对27例HLA-A和-B位点血清学分型错误进行分析.结果表明,HLA-A和-B位点的误检型错误均高于漏检型错误(P<0.05),A和B位点分型间则无显著差别.中国人分型错误频率高的有A1(66.7%),A3(50.0%),A11(13.5%),A9(11.8%)和A19(7.1%)及B16(50.0%),B48(43.9%),B15(16.7%),B40(11.1%),B13(10.0%)和B17(9.1%)等抗原.结论:血清学分型方法应与基因分型技术互为补充.
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G-CSF预处理供者单倍体相合骨髓移植加用CD25 单克隆抗体预防急性GVHD的临床研究
探索单倍体相合未去T细胞骨髓移植应用CD25单克隆抗体预防急性移植物抗宿主病(GVHD)的疗效.在1999年2月至2001年11月期间,对28例白血病病人进行HLA 2-3个位点不合骨髓移植,其中2000年11月前完成的不使用CD25单抗的15例为对照组,此后完成的13例为本方案组,两组供者均接受粒细胞集落刺激因子(G-CSF,Lenograstim)250μg/d,皮下注射,连用7天后采髓;环孢菌素A,氨甲蝶呤,抗胸腺细胞球蛋白和霉酚酸酯(MMF)联合用于GVHD预防.研究组病例在移植前2 小时和移植后第4天加用CD25单克隆抗体(Basiliximab)进一步预防GVHD;并对两组移植后植入,GVHD发生和无病存活情况进行比较.结果表明,28例患者移植后均植入成功,植入直接证据的检测证实完全供者造血,两组造血重建时间比较无显著性差异(P>0.05);未用抗体的对照组急性Ⅱ-Ⅳ度GVHD发生率33.3%,本方案组加用CD25单克隆抗体,无1例发生急性Ⅱ-Ⅳ度GVHD,两组之间差异有显著性(P<0.05);慢性GVHD发生均为局限性,两组的差异无显著性(P>0.05).对照组中位随访26(15-36)月,活存9/15例,本方案组中位随访8(3-15)月,活存12/13例,Kaplsn-Meier存活曲线分析与对数秩检验,本方案组1年无病生存率明显高于对照组(P<0.05).结论:单倍体相合骨髓移植加用CD25单克隆抗体有利于急性重度GVHD的预防,显著提高单倍体相合骨髓移植无病生存率.
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重组膜联蛋白Ⅱ表达载体构建及其促纤溶特性研究
膜联蛋白Ⅱ(annexinⅡ)是纤溶酶原和组织型纤溶原激活物的共同受体.本研究旨在探讨annexinⅡ引起急性白血病及其它肿瘤患者原发性纤溶亢进的分子病理机制,阐明annexinⅡ促纤溶活性,为探讨annexinⅡ在凝血障碍中的作用提供理想的载体模型.用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增annexinⅡ基因片段,经纯化及连接,用脂质体转染入HL-60细胞中表达;用多光子激发的共聚焦显微镜观察其表达产物的胞内分布及结构特性;用流式细胞术及Western印迹对转染的细胞表达进行定量及定性分析,并揭示其对纤溶酶活性的影响.结果显示:成功地构建了pZeoSV2(+)/ANNⅡ真核表达质粒,经转染HL-60细胞后,可表达annexinⅡ活性蛋白,荧光检测显示其表达蛋白分布在转染细胞的膜表面;FCM检测annexinⅡ在转染后48小时呈高表达;annexinⅡ可显著增加纤溶酶的活性,且瞬时表达及稳定表达具有相同的结果.annexinⅡ反义寡核苷酸与单抗均可显著抑制annexinⅡ的促纤溶活性(P<0.01).结论:annexinⅡ在纤维蛋白溶解中具有重要作用,用本研究构建的annexinⅡ重组载体可为今后的相关研究提供实验基础,并为防治出血及血栓性疾病研究有可能提供新的思路和开辟新的途径.
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TRAIL信号传导途径和造血系统恶性肿瘤
肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体(TRAIL)是TNF家族中的一个新型凋亡分子.白血病细胞表达TRAIL可使其逃脱免疫监视;TRAIL死亡受体突变具有一定致癌作用.TRAIL能诱导造血系统肿瘤细胞凋亡,同时还具有生长抑制作用,是一个潜在的抗肿瘤药物.
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白细胞去除及其临床应用进展
输血可因输入同种异体血液及其制剂而导致白细胞介导的输血反应及输血相关病毒的传播.去除血液及其制剂中白细胞则可有效地减低免疫抑制效应及传播病毒的危险.成分血液因制备时采用白膜法,通常可去除全血中2/3的白细胞.采用白细胞专用滤器,则可去除血液中99.9%的白细胞,可以明显减少白细胞介导的输血反应,如非溶血性发热性输血反应和移植物抗宿主病.白细胞去除可减少输血传播病毒的危险.另外,白细胞去除对治疗心外科病人因白细胞介导的炎症和器官再灌注损伤、溃疡性结肠炎以及一些自身免疫性和神经性疾病等均有重要作用.
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间充质干细胞与相关因子
间充质干细胞(mesenchymal stem cell,MSC)具有向成骨细胞、成软骨细胞、脂肪细胞及成肌细胞分化的多向潜能,可在造血微环境形成、组织修复及基因治疗中得到应用.多种生长因子如TGF-β,IGF-Ⅰ,BMP及FGF在MSC分化中发挥不同的促进作用并有协同性;MSC可分泌G-CSF,SCF,LIF,M-CSF,IL-6和IL-11等多种细胞因子支持造血并与某些疾病的发生有关;相关因子作用后的MSC将在基因工程应用中发挥重要作用.
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黎族地中海贫血患者血清促红细胞生成素和转铁蛋白受体水平的研究
为研究地中海贫血患者与血清可溶性转铁蛋白受体(sTfR)和红细胞生成素(EPO)的关系,并估计地中海贫血骨髓红系增生程度,应用酶联免疫法检测50例地中海贫血患者和50例正常人对照的sTfR和EPO水平.结果显示,β-重型地中海贫血患者血清EPO和sTfR水平均明显高于正常对照组(P<0.05),而轻型患者与正常人无显著差别.结论:黎族地中海贫血患者血清中EPO和sTfR水平升高与地中海贫血的类型有关.
年 | 期数 |
2019 | 01 |
2018 | 01 02 03 04 05 06 |
2017 | 01 02 03 04 05 06 |
2016 | 01 02 03 04 05 06 |
2015 | 01 02 03 04 05 06 |
2014 | 01 02 03 04 05 06 |
2013 | 01 02 03 04 05 06 |
2012 | 01 02 03 04 05 06 |
2011 | 01 02 03 04 05 06 |
2010 | 01 02 03 04 05 06 |
2009 | 01 02 03 04 05 06 |
2008 | 01 02 03 04 05 06 |
2007 | 01 02 03 04 05 06 |
2006 | 01 02 03 04 05 06 |
2005 | 01 02 03 04 05 06 |
2004 | 01 02 03 04 05 06 |
2003 | 01 02 03 04 05 06 |
2002 | 01 02 03 04 05 06 |
2001 | 01 02 03 04 |
2000 | 01 02 03 04 |