sgp13OcDNA在痘苗病毒载体系统中的表达

gp130是一种分子量为1 30kD的细胞膜糖蛋白,是IL-6等多种细胞因子共用的信号传递分子.本研究将含gp130胞外区全长的可溶性片段的基因(sgp 130 cDNA)构建到痘苗病毒载体中,并与野生型痘苗病毒在TK143细胞中发生同源重组,用BudR和X-gal双重选择,得到带有人sgp130的重组痘苗病毒(Vsgp130).采用IDA和western Blotting法证实:感染Vsgp130的TK-143细胞上清中有较强的sgp130表达,表达产物分子量为100kD左右.

Fas和β-雌二醇受体融合基因在COS-7细胞中的表达

设计三条引物P1、Pz、P3扩增全长hFas基因和只含有跨膜区和胞浆区的mFas基因.P2上设计一个BstXI位点,以与hFas信号肽之后的单酶切位点BstXI连接,获得带信号肽的跨膜区和胞浆区SpmFas基因.另外设计两条引物P4、P5扩增人β-雌二醇受体的激素结合结构域.扩增基因均经DNA序列分析得到证实.P3、P4均设计了Kpn I位点,用于两基因融合,并将此融合基因插入真核表达载体pcDNA3.脂质体法转入COS-7细胞进行瞬时表达,western B1ot检测到约57KDa的表达产物,与融合基因的估算分子量相符.

人Fas抗原表位预测

采用可及性和可塑性方案,结合抗原性方案、二级结构方案及综合位点预测方案对人Fas抗原的B细胞表位进行预测,结果显示:人Fas抗原B细胞表位可能位于N-末端残基51-78,102-110,145-157等区域内或附近.由于残基102、120位有2个潜在的N-糖基化位点(Ash-X-Ser/Thr),对表位的形成有一定影响,人Fas抗原的B细胞表位可能位于51-78,100-157区域内.

人工合成HLA肽对淋巴细胞增殖反应的影响

人工固相合成两种HLA肽(P1:HLA-B0701.75-84;P2:HLA-B2702.75-84),用MTT法观察其在体外对具有不同HLA表型淋巴细胞增殖反应的影响及其等位基因特异性.结果显示:P1和P2均可显著抑制淋巴细胞的增殖反应;且这种抑制作用无等位基因特异性.

为探讨丙型肝炎(HC)病人细胞免疫功能和丙型肝炎病毒(HCV)的致病机制及机体对其免疫保护作用,收集24例HC病人(急性3例,慢性21例),用3H-TdR掺入法研究病人外周血单个核细胞(PBMC)对不同HCV抗原增殖反应,并用流式细胞仪(FACS)检测了PBMC中CD4+、CD8+淋巴细胞亚群在HCV抗原刺激后的变化.结果:HC病人PBMC对HCV合成肽CP9,NS和基因重组抗原C,E1,E2,NS3刺激后出现不同程度增殖反应,刺激指数(SI)分别为1.69±0.51,1.61±0.54,1.68±0.58,1.49士0.44,1.44±0.44和1.33±0.33.3例急性HC中2例病人的PBMC对HCV抗原呈有效增殖反应(SI≥2.1),且血清HCVRNA阴转伴ALT正常.细胞表型分析显示:增殖的细胞表型是CD4+淋巴细胞,而CD8+淋巴细胞增殖反应较弱.结论:HC病人PBMC确实存在对HCV抗原的增殖反应;CD4+淋巴细胞比CD8+淋巴细胞增殖反应要强,急性HC病人PBMC对HCV抗原有效的增殖反应预示可能有良好的临床愈合.

CKIs蛋白在视黄酸诱导HL-60细胞分化中的作用研究

从细胞周期调控这一途径探讨视黄酸抑制细胞增殖、诱导细胞分化的分子机制.结果显示:5×10-6mol/L全反式视黄酸(ATRA)及芳维甲(AE)处理的HL-60细胞生长受抑,4d后90%细胞停滞于G0/G1期,G1→S期转换受阻,同时NBT还原反应增强,Western Blot分析及免疫细胞化学染色表明处理后的细胞p16、p21两种细胞周期素依赖激酶抑制物(CKIs)表达增加,而CyclinD1和pRb蛋白则降低,其中尤以ATRA作用为明显.结果提示,细胞周期调控相关蛋白可能在视黄酸及其衍生物抑制细胞增殖、诱导细胞分化过程中起重要作用.

血小板生成素转导鼠T淋巴细胞的增殖和分化

为探讨TPO(血小板生成素)基因导入对T细胞增殖和分化影响的规律,将编码人TPO的质粒DNA60μg用脂质体包裹后,经肌肉途径转导入Balb/c小鼠体内.用CD4和CD8的特异性抗体标记小鼠各种免疫组织中的T细胞,借助流式细胞术分析它们的组成和变化.结果发现TPO基因导入使骨髓中的成熟和未成熟T细胞数量在经过短期下降后全部大幅度增多,胸腺未成熟T细胞增加;而脾脏和血液循环中成熟T细胞增多,特别是在血液中CD4阳性细胞的增加为明显.这些特点大约在基因导入后两周内形成,并持续至少两周以上.本文所得的结果提示TPO是一种免疫促进分子,TPO基因导入后小鼠血液中多种淋巴因子的升高与它过量表达对T细胞的刺激有关.

IL-2在体内抗弓形虫作用机制的研究

为观察IL-2在小鼠体内抗弓形虫中的作用,应用3H-尿嘧啶(3H-U)特异性标记的弓形虫在小鼠腹腔巨噬细胞(Mouse peritoneal macrophage,MPM)内的增殖实验及125I-尿嘧啶核苷(125I-UdR)标记的细胞毒实验,观察IL-2的抗弓形虫作用.结果:IL-2对MPM的抗弓形虫作用及对IFN-γ诱导的MPM抗弓形虫作用无明显影响;IL-2体内应用可明显增强小鼠抗急性弓形虫感染的能力,延长小鼠生存时间;IL-2治疗组小鼠脾细胞杀伤肿瘤细胞及杀伤弓形虫自身感染靶细胞的能力,均明显高于对照组;同时也发现,对照组小鼠脾细胞几乎不能杀伤弓形虫感染的自体靶细胞.提示IL-2体内应用的抗弓形虫机制在于提高机体免疫细胞杀伤弓形虫感染细胞的能力.

通过对乙酰胆碱受体(AChR)自身抗体分子结构以及与致病性关系的研究探讨重症肌无力(MG)及其动物模型--实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)的发病机理.AChR抗体被动转移至大鼠后诱导出明显的EAMG.全身肌肉AChR损失率和体重减轻率达47.2±15.3%和13.4±2.2%.这株AChR抗体的重链可变区基因由小鼠Q52胚系基因编码,其同源性为94.8%,将这株抗体的重链和轻链可变区、尤其是互补决定区(CDR)的核苷酸和氨基酸序列与其他致病性AChR抗体比较发现,能诱导MG和EAMG的致病性AChR抗体的结构并不是完全一致的.

TNFα对嗜酸性粒细胞L-选择素表达的影响

多种细胞因子参与了哮喘时嗜酸性粒细胞与血管内皮细胞粘附的调节,但对嗜酸性粒细胞具有选择性作用的细胞因子尚未澄清.采用双色免疫荧光流式细胞技术,研究了炎前性细胞因子TNF α对人外周血嗜酸性粒细胞表面具有介导细胞粘附作用的粘附分子L-选择素和极迟抗原-4表达的影响,并与嗜中性粒细胞作以比较.TNF α对嗜酸性粒细胞和嗜中性粒细胞表面L-选择素均有上调表达的作用,而对极迟抗原-4表达无明显影响.实验结果说明,TNF α对L-选择素介导的嗜酸性粒细胞粘附无选择性作用.

地塞米松对HUVEC表达粘附分子的影响

研究地塞米松、rIL-1ra对内皮细胞表达粘附分子的影响,为炎症反应的病理过程提供理论依据.用rTNFα、rIL-1和LPS诱导培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC),以地塞米松或rIL-lra处理LPS或rIL-1诱导的HUVEC,采用Cell-ELISA法检测粘附分子ICMA-1和ELAM-1的表达.结果:rTNFα、rIL-1和LPS提高HUVEC表达ICAM-1和ELAM-1;地塞米松、rIL-lra抑制rIL-1诱导的粘附分子表达.表明地塞米松、rIL-lra以不同机制抑制HUVEC表达ICAM-1和ELAM-1.

老龄男性血浆性激素与T淋巴细胞功能的关系

为探讨老年男性人群血浆雌二醇及睾酮含量与T淋巴细胞功能的相关性,以50岁以上男性为研究对象,应用放射免疫法和生物测定法分别检测了血浆睾酮、雌二醇含量和T淋巴细胞功能.①随增龄血浆雌二醇(E2)含量明显升高,睾酮(T)含量显著降低,二者呈明显的负相关关系,E2/T比值随增龄明显增大;②外周血淋巴细胞丝裂原反应性和血浆IL-2活性随增龄而下降;③E2/T比值与外周血淋巴细胞丝裂原反应性和血浆IL-2活性均呈明显的负相关关系(r=-0.3017,P＜0.0001;r=-0.1478,P＜0.01).E2/T比值失衡可能是老龄男性人群T淋巴细胞功能下降的原因之一.

轻链比值和免疫球蛋白含量测定在诊断轻链病中的重要意义

用速率散射比浊测定26例轻链病(Light Chain Disease,LcD)血清、尿液中IgG、A、M和轻链κ、λ含量并计算重链/轻链比值和κ/λ比值.结果表明:血清IgG含量均明显低于正常对照(P＜0.01);血清κ或λ含量高于或等于正常对照,但κ/λ比值异常,轻链蛋白总和大于重链蛋白总和;尿液中异常升高的κ或λ轻链含量高于血清同一轻链水平(P＜0.01);LcD以λ型多于κ型,λ型血清和尿液中κ/λ比值明显小于1,而κ型血清和尿液中κ/λ比值明显大于2.轻链蛋白是LCD患者肾功能损害的重要致病因素,测定血清、尿液Ig和轻链含量并计算κ/λ比值是诊断LCD和判断预后的重要依据.

毛细支气管炎细胞因子与发病机理的研究

为了解毛支发病机理与机体免疫功能的关系,探讨环境与遗传因素对发病的影响,对30例不同病毒感染的毛支患儿取血清及外周血单个核细胞(PBMC)培养,用ELISA方法测定培养上清中细胞因子及血清IgE浓度.结果表明:①毛支急性期IFN-γ水平降低,IL-4、IL-10及血清IgE水平增高.②毛支IL-4、IL-10、IgE水平增高与感染病毒的种类关系不明显,与机体遗传特应质有关.提示:毛支患儿存在细胞免疫功能异常,表现在细胞因子分泌紊乱.遗传因素在细胞因子分泌异常中可能有重要作用.

多发性硬化患者血清sIL-6R 水平观察

为探讨可溶性白细胞介素-6受体(sIL-6R)在多发性硬化(MS)发生、发展中的作用,采用双抗体夹心ELISA方法,对28例MS患者和25例正常对照组血清sIL-6R水平进行了测定.结果显示缓解-复发型和进展型MS患者血清sIL-6R水平明显高于正常对照组和良性型组(P＜0.05,P＜0.01);而良性型MS患者血清sIL-6R水平与正常对照组相比,未见明显改变.缓解-复发型MS患者血清sIL-6R水平随着病情的好转而下降.sIL-6R水平与MS患者头颅MRI上的病灶大小和部位无明显相关性(r1=0.124,P＞0.05;r2=0.091,P＞0.05).推测sIL-6R水平的高低可作为判断MS患者病情变化的指标之一.

抗肝癌NMP单克隆抗体的制备及初步鉴定

为制备出具较高特异性抗肝癌核基质蛋白单克隆抗体,以用于肝癌的基础和临床的研究.首次免疫用肝癌细胞纯核,用高盐抽提法提取的肝癌细胞核基质蛋白加强免疫Balb/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,ELISA法同时测定培养上清对肝癌核基质蛋白及正常肝细胞核基质蛋白的免疫反应,LSAB法进行单抗的鉴定.结果:建立了一株能稳定分泌抗肝癌核基质蛋白单抗的杂交瘤细胞株2G8,染色体数目为86-92,Ig亚类鉴定为IgM,它与HBsAg、HBeAg等HBV相关抗原无交叉反应,与AFP亦无阳性反应,LSAB法证实单抗定位于肝癌细胞核上,与正常肝及胎肝细胞没有交叉反应,与4种癌症细胞和3种正常细胞的反应发现仅食管癌细胞核上有较弱的阳性反应.结论:获得一株较特异的抗肝癌核基质蛋白单抗,可望进一步用于肝癌的诊断治疗及肝癌发生发展的研究.

豚鼠血清功能纯C2分子的制备和鉴定

以低渗沉淀方法制备的豚鼠血清功能纯C1及人血清为实验材料,建立C2溶血活性检测方法,经CM-Sephadex C50离子交换色谱分离纯化豚鼠血清功能纯C2分子.经鉴定,所得功能纯C2具有良好活性,无C1及C3～C9活性成份,可用于体外组装经典途径C3转化酶.本工作为进一步研究经典途径C3转化酶的补体调控蛋白奠定了基础.

两种不同方法纯化抗血清IgG的效果比较

为寻找一种操作简便、效率高、纯度好的纯化抗体的方法,比较了辛酸法和离子交换葡聚糖凝胶法,通过纯化兔抗HCG抗血清和羊抗HBsAg抗血清,结果显示辛酸法纯化血清中IgG有以下优点:纯度高,用PAGE方法鉴定可显示两条带.收率高,辛酸法纯化兔抗HCG IgG,每毫升抗血清高可得25.56mg IgG.效率高,辛酸法纯化血清中IgG的整个过程可在1d内完成.操作方法简便,不需上柱,不需昂贵仪器和试剂.适于大批量纯化,适于基层实验室推广使用.

人甲状腺球蛋白的纯化和鉴定

新鲜甲状腺组织经硫酸铵沉淀和两次Sephadex G-200凝胶层析后,可获得较高纯度的甲状腺蛋白.经SDS-PAGE鉴定,显示了3条区带,主带为19S,另两条为27S和12S.经双向琼脂扩散和免疫电泳鉴定,提纯的甲状腺球蛋白未见血清蛋白质的污染.

白细胞介素6单克隆抗体的研制

采用纯化的工程菌表达产物白细胞介素6(Interleukin 6,IL-6)免疫BALB/C小鼠,取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞(SP2/0)在PEG作用下进行融合,通过ELISA筛选并多次亚克隆,获得了1株能分泌抗IL-6单克隆抗体的杂交瘤细胞Ic-1.3.4.5.Western blot显示:抗体结合抗原的分子量与IL-6相符,为特异性抗IL-6抗体.亚类鉴定表明:该细胞分泌的单克隆抗体为IgG1亚类,kappa型.染色体数目为100条左右.腹水效价为1:104,无血清培养液效价为1:102.此杂交瘤细胞株体外传代培养6个月以上,ELISA检测抗体滴度无明显降低.

白细胞介素18研究进展

1995年Okamura等报道从中毒性休克的小鼠肝脏克隆到了一种由应激诱生的蛋白.该蛋白的生物学活性与白细胞介素12非常相似,但其诱生干扰素γ的能力要强于白细胞介素12,因而将其命名为干扰素γ诱生因子(interferon gamma inducing factor,IGIF)[1].随后的研究表明该因子与白细胞介素1α和白细胞介素1β在结构上有一定的相似性,因而认为该因子可能是白细胞介素1家族的成员,有人将其称为白细胞介素1γ[2].1996年将其命名为白细胞介素18.研究表明该因子在抗肿瘤、抗过敏以及抗感染方面有一定的作用,也可能是一种神经免疫调节因子.现将这一因子的研究进展作一综述.

细胞因子受体的信号传导

细胞因子受体信号传导是当前细胞因子研究领域的热点.由于多种细胞因子受体存在共同的信号传导链.使得细胞因子在功能上具有多效性和重复性.细胞因子通过与其受体结合后诱导受体聚化成多肽复合物,其中包含了信号传导链,聚化的受体复合物使受体本身和细胞浆内的酩氨酸激酶磷酸化而活化,激发一股下传的信号流,活化相应的转录因子,从而启动基因的转录,表达细胞因子的特定功能.目前细胞因子受体信号传导的研究已取得了很大进展.本文就细胞因子受体及其聚化,转录因子的活化研究进展综述如下.

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