免疫学杂志
Immunological Journal 면역학잡지
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鼠精子表面蛋白cyritestin在沙门氏菌平衡致死系统中的高效表达
目的构建表达鼠精子cyritestin蛋白的可口服减毒沙门氏菌活疫苗株.方法将编码成熟cyritestin蛋白cDNA序列的酶切片段插入含pUC复制子的表达载体pYA3339中,构建重组质粒pMCY,将该重组质粒转入鼠沙门氏伤寒杆菌疫苗株X4550,获得杂合菌株X4550(pMCY).应用western blot对重组菌所表达的重组cyritestin蛋白进行免疫分析.结果该无抗药性的杂合菌株在体外营养选择压力下可较稳定携带重组质粒传代繁殖,在体内可较稳定地定居于Peyer's结、肠系膜淋巴结和脾脏.该重组菌可高水平表达重组cyritestin蛋白.结论高效表达cyritestin蛋白的X4550(pMCY)疫苗株可用于免疫性避孕研究.
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FMLP刺激HL-60细胞NADPH氧化酶激活的信号转导途径
目的澄清中性粒细胞中[Ca2+]i及某些激酶在NADPH氧化酶激活中的作用和NADPH氧化酶激活的信号转导途径.方法利用中性粒细胞样HL-60细胞,研究[Ca2+]i和某些激酶对fMLP刺激NADPH氧化酶激活的影响.结果用10 μmol/L BAPTA-AM去除[Ca2+]i后使O-2生成明显减少;8 μmol/L的PKC抑制物GF109203x显著地抑制了O-2产生;50 μmol/L的p38抑制物SB203580、50 μmol/L的ERK抑制物PD098059和0.1 μmol/L的PI3K抑制物Wortmannin使O-2产生受到不同程度抑制;PKC、PI3K、p38和ERK激活对[Ca2+]i升高没有影响;[Ca2+]i、PKC和PI3K对p38激活有一定作用,而ERK和Akt激活主要受PI3-K的调控.结论试验说明[Ca2+]i依赖途径(PKC)和[Ca2+]i非依赖途径(PI3K、p38和ERK)对NADPH氧化酶激活都起着重要作用.
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T-ALL中两种新的TCRδ基因重排δRec151051-Jδ1和δRec151298-Jδ1
目的分析T细胞急性淋巴细胞白血病(T-ALL)细胞中TCRδ基因新的重排形式及其在正常人外周血和胸腺细胞中的分布情况.方法利用半巢式PCR扩增2例T-ALL、10例正常人外周血和7例正常人胸腺细胞DNA的TCRδ基因组片段,了解其重排情况,克隆性PCR产物进一步进行核苷酸序列分析确定重排位置,并进一步经RT-PCR检测其重排基因的表达情况.结果在2例T-ALL病人白血病细胞发现两种新的TCR δRec-Jδ1基因重排方式,称为δRec151051-Jδ1和δRec151298-Jδ1,该新的TCR δRec基因重排同时见于大多数正常人外周血和胸腺.RT-PCR显示该两种TCR δRec-Jδ1基因重排的产物可见于2例T-ALL中,而正常人为阴性. 结论本研究发现两种新的TCR δRec151051-Jδ1和δRec151298-Jδ1基因重排.该重排基因表达于T-ALL中,而正常人不表达该重排基因,提示该重排形式可能与T细胞白血病的形成有一定的关系.
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HDV/HBV感染树鼠句肝组织中的肝细胞凋亡
目的探讨HDV/HBV感染树鼠句肝组织中Fas/FasL、Bcl2/Bax和ICE表达与HDV感染之间的关系,以及Fas/FasL、Bcl2/Bax和ICE在丁型肝炎肝细胞凋亡中的作用.方法采用免疫组化技术对HDV/HBV感染树鼠句肝组织中Fas/FasL、Bcl2/Bax和ICE的表达进行检测;应用原位末端标记技术对肝细胞凋亡进行检测.结果 HDAg表达与Fas/FasL、Bcl2/Bax和ICE表达之间关系密切(P＜0.05),HDAg表达越强,Fas、FasL、Bax和ICE表达也越强,而Bcl2表达则越弱.Fas/FasL、Bcl2/Bax 和ICE表达与肝细胞凋亡之间关系密切(P＜0.05), Fas、FasL、Bax和ICE表达越强,凋亡细胞越多;相反,Bcl2表达越强,凋亡细胞越少.结论肝细胞内HDAg表达可诱导Fas、FasL、Bax和ICE表达,但对Bcl2表达无明显诱导作用;Fas/FasL、Bcl2/Bax和ICE在肝细胞凋亡中起重要作用.
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HCV结构区DNA疫苗诱发小鼠特异性细胞免疫反应的研究
目的通过HCV结构区DNA疫苗直接免疫小鼠,诱发其体内特异性细胞介导的免疫反应的研究,为HCV DNA疫苗的研制打下基础.方法用重组的pBK-CMV质粒体外转染小鼠骨髓瘤细胞SP2/0,建立了能体外表达HCV结构区蛋白的SP2/0D细胞系,分别用SP2/0和SP2/0D细胞攻击用空质粒或pBK-CMV质粒免疫过的Balb/c小鼠,通过肿瘤形成、肿瘤重量、肿瘤组织淋巴细胞的浸润以及不同免疫组小鼠血清中IL-2和IFN-γ含量来观察小鼠体内T淋巴细胞的活性.结果用SP2/0和SP2/0D攻击空质粒或pBK-CMV质粒免疫过的小鼠15 d后,SP2/0D攻击的pBK-CMV质粒免疫鼠肿瘤重量(0.9±0.12)g明显低于空白质粒免疫组和SP2/0接种组(P＜0.001),且该免疫组小鼠血清中IL-2和IFN-γ的浓度明显高于其它免疫组;此外,用SP2/0D攻击的pBK-CMV免疫鼠,肿瘤病理切片中可见明显的T淋巴细胞浸润.结论重组的HCV结构区DNA疫苗(pBK-CMV)能诱导小鼠体内特异性T淋巴细胞反应,HCV DNA疫苗可能为临床疾病的治疗和预防提供一种新的途径.
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人白细胞介素10重组腺病毒载体的构建
目的构建人白细胞介素10重组腺病毒载体,为真核表达及其临床研究提供实验基础.方法自行设计一对引物,应用逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)技术,从活化的正常人外周血单个核细胞中扩增出hIL-10cDNA,并将hIL-10cDNA克隆到腺病毒载体pAdCMV-Link1中,构建pAdCMV/hIL-10表达质粒.将此表达质粒与腺病毒重组质粒pJM17共转染293细胞,通过同源重组产生hIL-10重组腺病毒.结果扩增到的cDNA片段经酶切鉴定、PCR扩增、DNA测序终确定为hIL-10cDNA;所得人白细胞介素10重组腺病毒滴度为1.9×109 pfu/mL.结论本实验为今后研究hIL-10的生物学活性及炎症性疾病的基因治疗提供了基础.
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正常人外周血和胸腺T细胞中TCR δRec151051-Jδ1和δ Rec151298-J δ 1基因重排的分布特点
目的分析正常人外周血和胸腺细胞中TCR δRec151051-Jδ1和δRec151298-Jδ1基因重排分布特点.方法利用半巢式和巢式PCR扩增10例正常人外周血单个核细胞(PBMCs)、4例分选的外周血CD3+T细胞和7例正常人胸腺细胞DNA的TCR δRec基因与J δ 1、Dδ3和ψJα重排的基因片段,从不同含量DNA的PCR分析,了解其重排分布频率.结果 TCR δRec151051分别与Jδ1、Dδ3和ψJα的重排和TCR δRec151298-Dδ3重排见于大多数外周血T细胞和胸腺细胞中,而TCR δRec151298与Jδ1和ψJα的重排则多见于胸腺细胞中.对不同含量的DNA的PCR分析显示δRec重排的分布频率在外周血和胸腺细胞有所不同.结论 TCR δRec151051、TCR δRec151298与Jδ1、Dδ3和ψJα的重排均存在于多数正常人T细胞中,TCR δRec151051-Dδ3常见于成熟和未成熟T细胞中,而TCR δRec151298-J δ 1和TCR δRec151298-ψJα则主要见于未成熟T细胞中.
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中国人前列腺特异膜抗原基因的克隆及序列测定
目的克隆人前列腺膜特异抗原(prostate-specific membrane antigen,PSMA)的编码区cDNA片段.方法从前列腺癌组织提取总RNA,利用RT-PCR技术扩增出人PSMA基因编码区序列,将其克隆至pcDNA3.1载体中,并行序列测定.结果序列测定表明,克隆获得的2 253 bp片段与文献报道的人PSMA基因编码区cDNA序列一致.结论本研究为进一步研究PSMA的生物学性能和用于前列腺癌诊断治疗的可能性打下了基础.
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细胞因子诱导HepG2细胞ICAM-1表达的研究
目的研究IFN-γ、TNF-α和IL-1对HepG2细胞细胞间粘附分子-1(ICAM-1)表达的影响.方法用IFN-γ、TNF-α和IL-1在体外诱导HepG2细胞表达ICAM-1,并用细胞ELISA检测HepG2细胞ICAM-1表达水平.结果未经刺激的HepG2细胞ICAM-1表达水平很低.TNF-α、IL-1、IFN-γ刺激后,HepG2细胞ICAM-1表达均明显增强,其表达水平与细胞因子浓度呈一定的剂量依赖关系;随着细胞因子刺激时间的延长,HepG2细胞ICAM-1表达也逐渐增多.结论 IFN-γ、TNF-α和IL-1等细胞因子能诱导体外培养HepG2细胞ICAM-1增强表达.
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二十碳五烯酸联合视黄酸对HL-60细胞增殖与
目的研究二十碳五烯酸(eicosapentaenoic acid, EPA)及其联合视黄酸(retinoic acid, RA)对白血病细胞增殖与分化功能的影响.方法采用MTT法测定细胞增殖功能,NBT还原实验鉴定细胞分化,高效液相色谱法分析细胞内RA代谢.结果与对照组相比,EPA组细胞增殖抑制率为24.38%,RA组为35.74%,EPA+RA组为42.75%;NBT还原实验,EPA+RA组OD值约为对照组的5.9倍,而RA组为2.6倍,EPA组为1.3倍;分析HL-60细胞及其培养介质中RA含量,发现EPA+RA组高于RA组.结论 EPA可抑制HL-60细胞增殖和诱导其分化,与RA联合应用能明显增强HL-60细胞的增殖抑制及诱导分化效应,这种联合效应可能与EPA减缓HL-60细胞内RA的代谢相关.
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大鼠γ-干扰素基因转染大鼠气道上皮细胞的实验研究
目的探讨大鼠γ-干扰素基因转染大鼠气道上皮细胞的可行性.方法构建重组大鼠γ-干扰素真核表达载体,将其转染大鼠气道上皮细胞,检测外源质粒的整合和培养上清液中γ-干扰素浓度和活性.结果构建的重组载体中γ-干扰素的基因序列与Genebank中大鼠的γ-干扰素cDNA序列相同.转染后气道上皮细胞基因组DNA的PCR产物电泳可见转染的基因片段条带,培养上清液中γ-干扰素浓度和活性显著高于对照组.结论本研究构建的重组大鼠γ-干扰素真核表达载体可成功地转染大鼠气道上皮细胞,整合入基因组DNA,并分泌有活性的γ-干扰素.
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睾酮对未成熟雄性大鼠体液和细胞免疫力的影响
目的以生理浓度的丙酸睾酮处理未成熟的雄性SD大鼠,探讨睾酮对免疫功能的影响.方法用放射免疫法检测了睾酮和雌二醇水平;用流式细胞仪分析淋巴细胞总数及其亚类;用MTT法测定淋巴细胞转化能力;用酶联免疫吸附法测定白细胞介素6(IL-6)和IgG的水平.结果睾酮一方面可以下调IL-6、IgG水平,降低淋巴细胞转化能力以及CD4/CD8比率,另一方面可上调抑制性T细胞数目.结论睾酮对免疫系统起抑制作用,提示可以应用雄激素对免疫系统的调节作用来治疗某些免疫反应增高性疾病,如:某些自身免疫性疾病.
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人CD7 cDNA在HEK293细胞中的表达
目的建立表达人白细胞分化抗原CD7蛋白的哺乳动物细胞模型,为深入研究CD7的功能奠定基础.方法采用PCR方法扩增CD7 cDNA,将目的片段定向克隆于真核表达载体pcDNA3,限制性内切酶酶切分析重组质粒并进行序列测定;通过电穿孔法将重组真核表达载体pcDNA3/CD7转染于人胚肾293细胞(HEK293),经G418筛选得到抗性克隆;利用FCM检测CD7分子在HEK293细胞的表达.结果得到了含CD7全长cDNA的重组真核表达载体pcDNA3/CD7.FCM分析表明:转染了pcDNA3/CD7的HEK293细胞表达人CD7蛋白.结论为深入研究CD7的作用机制提供了条件.
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脐血B淋巴细胞的免疫表型及临床意义
目的分析脐血B淋巴细胞(B细胞)的免疫表型及其临床意义.方法直接免疫荧光标记,流式细胞仪检测并对比研究26例正常足月儿脐血和15例正常成人外周血B细胞相关表型表达.结果足月儿脐血中成熟B细胞表型CD19+,CD20+CD19+,CD22+CD19+,CD23+CD19+,CD40+CD19+的表达以及不成熟B细胞表型CD10+CD19+,CD5+CD19+的表达,除CD23+CD19+和CD40+CD19+外,均比正常人外周血高(P＜0.05),并且无性别之间差异(P＞0.05).结论与成人外周血比较脐血B淋巴细胞相对不成熟.
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胎儿及新生儿脐带血T淋巴细胞表型的比较研究
目的探讨胎儿及足月新生儿外周血T淋巴细胞表型的演变.方法通过B超定位穿刺获得不同孕周正常胎儿脐带血,并分离其T淋巴细胞,与同期获得的孕足月脐带血及孕妇外周血T淋巴细胞,均予荧光抗体双标,流式细胞仪分析各组T淋巴细胞表面分子;分析胎儿T淋巴细胞表型与孕龄的关系,并对比研究胎儿与成人T淋巴细胞表型之差异.结果随着胎龄增加,胎儿外周血白细胞中淋巴细胞百分率逐渐下降;T淋巴细胞中CD4+/CD8+比率亦逐渐下降;胎儿CD3+TCRγδ及CD45RO阳性细胞群显著低于成人外周血相应百分率.胎儿脐血中CD34+细胞百分比明显高于成人外周血.结论胎儿T淋巴细胞表型与孕龄有关,与成人外周T淋巴细胞相比,具有不成熟性,或与人类胎儿逐渐获得外周免疫耐受有关.
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原发性肾小球肾炎患者外周血IL-18 mRNA表达的研究
目的探讨白细胞介素18(IL-18)在原发性肾小球肾炎(PGN)中的作用.方法采用反转录多聚酶链反应(RT-PCR)及酶联免疫吸附法(ELISA)测定11例正常人及46例不同病程PGN患者外周血单核细胞(PBMC)IL-18 mRNA表达量及血浆中IL-18分泌水平.结果肾功能代偿期原发性肾小球肾炎患者PBMC IL-18 mRNA表达量及血浆中IL-18的水平与正常对照组无统计学差异,而伴有肾功能损害的PGN患者则显著增高,且与肾功能损害相平行;直线相关分析显示:血浆内IL-18水平与Scr呈正相关、与Ccr呈负相关、与24 h尿蛋白排泄量不相关.结论外周血IL-18不参与PGN早期的发病过程,但当疾病进一步发展至伴有肾功能不全时,IL-18分泌水平相对升高可能在本病的进一步发展中发挥一定的作用.
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多发性硬化患者外周血淋巴细胞CD56的表达
目的探讨CD56+淋巴细胞在多发性硬化(MS)的变化.方法流式细胞仪测定32例复发缓解型MS患者(复发期23例,缓解期9例)及13例复发期MS患者予糖皮质激素治疗后外周血淋巴细胞CD56表达的阳性百分率.结果复发期和缓解期MS患者CD56的表达均高于对照组,15例复发期MS患者CD56的阳性百分率与血脑屏障受损呈正相关,复发期MS患者CD56的水平与距发作时间、整个病程、EDSS伤残评分无关;缓解期MS CD56的水平与病程无关,激素对CD56的表达无影响.结论 CD56+淋巴细胞涉及MS的发病机制.
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慢性乙型肝炎病人HBcAg特异性CTL的体外诱导及活性
目的从慢性乙型肝炎病人外周血单个核细胞(PBMC)中诱导和扩增乙型肝炎病毒核心抗原(HBcAg)特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL).方法含乙型肝炎病毒重组逆转录病毒载体转染病人自身永生化的B细胞作为抗原递呈细胞,联合重组HBcAg和IL-2,从病人PBMC中诱导和扩增HBcAg特异性CTL,51Cr释放法检测其细胞毒活性.结果此方法诱导的CTL可以有针对性的杀伤靶细胞,而不能够杀伤空载体转染及未经转染的B细胞.结论所建立的方法可以在慢性乙型肝炎病人的PBMC中诱导出HBcAg特异性CTL活性.
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促肾上腺皮质激素单克隆抗体的筛选和鉴定
目的制备促肾上腺皮质激素(ACTH)单克隆抗体,拟建立高灵敏度ACTH-IRMA或ELISA.方法 ACTH1-13、ACTH1-28、ACTH1-39和ACTH18-39分别与牛血清白蛋白偶联制备免疫原,在背部皮下和腹腔注射免疫BALB/c鼠.按常规方法进行细胞融合,以RIA法检测培养上清液,阳性孔经亚克隆,获得2株分泌特异性抗体的杂交瘤细胞株;瘤细胞种于预致敏的BALB/c鼠腹腔,批量生产单抗性腹水;琼脂扩散法鉴定抗体类型;利用标准曲线的参数计算单抗的亲合常数;亲合纯化单抗并进行抗体固化试验.结果从ACTH1-28免疫鼠获得单抗株为5G2,从ACTH1-13免疫鼠获得单抗株为D3;单抗腹水50%结合率时腹水终稀释度分别为5×103和2×103;抗体类型均为IgG1/λ;5G2和D3亲合常数分别为5.1×109 LM-1和4.9×107 LM-1;抗体包被实验显示5G2和D3的固化抗体量分别为1.4 μg和8.8 μg时结合率达到饱和.结论 5G2和D3可以用于构建灵敏的ACTH-IRMA或ELISA.
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不同培养条件下CIK细胞纯度变化的研究
目的为了研究不同培养条件对CIK细胞(cytokine-induced killer cells, CIK细胞)纯度的影响.方法分别从脐血和成人外周血单个核细胞定向诱导CIK细胞的产生,用流式细胞分析法对不同培养条件下CIK细胞的纯度进行了分析.结果培养到第14、21 d时,脐血来源的CIK细胞纯度分别为38.68% 和 53.11%.成人来源的CIK细胞纯度分别为33.90% 和63.26%,说明培养时间对CIK的纯度具有明显影响.CIK细胞培养14 d后,在无细胞因子或受到再次激活的条件下继续培养7 d,与连续培养的CIK细胞相比,两种来源的CIK细胞的纯度都没有明显的变化.结论这一结果对于CIK细胞的大量扩增和临床应用具有重要的指导意义.
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系统性红斑狼疮与CTLA-4基因多态性的相关性研究
系统性红斑狼疮(SLE)是自身免疫性疾病的原型,以自身抗体的产生和免疫复合物的聚集为特征.而B淋巴细胞产生自身抗体有赖于CD4+T淋巴细胞的活化.细胞毒性T淋巴细胞相关分子-4(CTLA-4)和CD28结构相似,同属免疫球蛋白超家族的成员,且结合的配体(B7)相同.CD28与B7分子结合,可产生共刺激作用并进一步引起T细胞的活化;相反,CTLA-4与B7结合对T细胞活化则起负性调节作用[1].CTLA-4基因位于人类染色体2q33,已发现其外显子1第49位碱基A→G点突变与Graves'病和Ⅰ型糖尿病发病有关[2],本研究欲探讨该多态性改变是否与SLE的遗传易感性有关.
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系统性红斑狼疮患者血浆神经肽Y水平变化
神经肽Y(neuropeptide Y,NPY)是一个含有36个氨基酸残基多肽的神经递质,分布于哺乳动物的中枢和外周神经系统.近年来的研究发现,在类风湿关节炎及系统性硬化症患者中,患病局部或全身的NPY浓度增高.系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)是一种典型的自身免疫性疾病,但患者体内NPY的浓度变化,尚未见报道.我们检测了30例SLE患者血浆NPY浓度,现报告如下.
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大劣按蚊核糖体蛋白S7cDNA克隆
随着多种非哺乳动物的核糖体蛋白相继克隆成功,通过同源分析查找核糖体蛋白保守氨基酸序列并推测其功能,已成为核糖体蛋白研究的重要手段之一.然而,昆虫核糖体蛋白的研究仅仅集中在黑腹果蝇、烟草天蛾和冈比亚按蚊等少数几种昆虫[1～3].本实验首次克隆成功东南亚疟疾的重要传播媒介--大劣按蚊,核糖体蛋白S7cDNA,是对昆虫核糖体蛋白研究的重要补充.
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正常人外周血单个核细胞端粒酶各组分基因的表达
端粒酶是一种具有特殊性质的逆转录酶,能以自身的RNA为模板合成约10 kb的端粒重复序列.端粒酶在大多数肿瘤细胞、干细胞、淋巴细胞中有表达.我们以前的研究显示:正常人外周血单个核细胞(PBMC)可表达端粒酶活性[1].人端粒酶主要由3部分组成,即,端粒酶RNA(hTR),端粒酶相关蛋白(TP1),端粒酶催化亚单位(hTERT)[2].我们进一步研究了这3个组分基因表达的状况,现报道如下.
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大胶质细胞混合培养与分离培养的方法评价
反应性胶质化是一个比较复杂的病理生理过程,在此过程中许多因素均可影响胶质细胞的反应,使得在体情况下评价和分析反应性胶质化比较困难.本实验旨在寻找一种能获得比较理想的、纯化单一的胶质细胞的方法,为进一步深入研究反应性胶质化机制创造条件.
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蛋白酶体与MHC-Ⅰ类抗原的加工呈递
蛋白酶体是普遍存在于所有被检测过的细胞中的一种保守的蛋白酶复合物,有着广泛的功能.它在MHC-Ⅰ类抗原的加工呈递过程中起着非常重要的作用,而MHC-Ⅰ类抗原的加工呈递效率对肿瘤和胞内感染性疾病的防治特别重要,因此,本文对蛋白酶体的结构、MHC-Ⅰ类抗原加工呈递的作用及其作用的分子机制研究进展作一综述.
| 年 | 期数 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 12 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2011 | 01 02 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2008 | 01 02 03 04 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 z1 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 z1 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 z1 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 z1 |
| 2001 | 01 02 03 04 05 06 z1 |
| 2000 | 01 02 03 04 05 06 Z1 |
| 1999 | 01 02 03 04 |
