胸腺基质细胞的抗原提呈作用

目的 研究胸腺基质细胞的抗原提呈能力.方法 应用OVA-特异的、受I-Ad分子识别限制的辅助T细胞杂交瘤(3DO.18.3)识别由I-Ad分子提呈的OVA的CNBr水解片段而被活化后产生IL-2,测定IL-2活性来分析胸腺基质细胞的抗原提呈作用.结果 IFN-γ能促进MTEC1和MTSC4表达I-Ad分子,并促进MTSC4表达B7-1分子.经IFN-γ作用后,MTEC1和MTSC4均有抗原提呈能力,MTSC4的抗原提呈能力较强.结论 抗原提呈能力的强弱,与TSC表达I-Ad和B7-1分子的水平相关,表明不同类型的TSC有不同的抗原提呈能力.

脐血CIK、PHA-CD3AK、CD3AK细胞的研究

过继免疫疗法在恶性肿瘤的治疗中取得了一定效果,寻求新型免疫效应细胞是当前热点之一.采用脐带血单个核细胞制备CD3AK、PHA-CD3AK、CIK 3种细胞,用MTT法测三者对K562和HL-60肿瘤细胞株的杀伤活性,免疫表型检测采用单克隆抗体APAAP法,采用t检验进统计学分析.

人乙酰胆碱受体α-亚基在大肠杆菌中的表达

目的 通过将乙酰胆碱受体(AchR) α-亚基与分子伴侣蛋白(Chaperonin)共表达,减少包涵体含量,提高可溶性目的蛋白含量.方法 将乙酰胆碱受体α-亚基结构域基因的重组质粒pPR506与含分子伴侣蛋白GroESL基因的重组质粒pGE60一起转入E.coli DH5α,并在IPTG诱导下共表达.结果 由于分子伴侣蛋白具有协助重组蛋白再折叠的功能,其共表达产物与仅含pPR506的工程菌单一表达产物相比,前者增加了以非包涵体形式的表达.产物经SDS-PAGE、免疫印迹试验与FPLC分离等分析,均表明该工程菌的共表达产物为AchR α-亚基结构域(相对分子质量为13×103)及其与GroES的络合物(23×103).结论 分子伴侣蛋白帮助了重组蛋白在菌体内的正确折叠,提高了目的蛋白的可溶性.

大肠杆菌突变的thyA基因的克隆及序列分析

目的 研究thyA基因天然缺陷菌株thyA*基因的改变.方法 用PCR插入法将thyA*基因克隆到pUC18上,进行序列测定及分析.结果 突变的thyA基因其第131位碱基T突变为碱基A.结论 thyA基因缺陷的大肠杆菌的thyA基因第131位碱基T突变为碱基A,是导致该基因功能丧失的直接原因.

双歧杆菌的完整肽聚糖对LPS激活裸鼠腹腔巨噬细胞的影响

目的 了解被LPS激活的裸鼠腹腔巨噬细胞在用双歧双歧杆菌的完整肽聚糖刺激后产生的NO、iNOS及cGMP的水平.方法 以Griess试剂、激光共聚焦显微镜以及放免法分别测定裸鼠腹腔巨噬细胞产生的NO、iNOS及cGMP的水平.结果 完整肽聚糖注射组裸鼠腹腔巨噬细胞在LPS诱导下产生的NO、iNOS及cGMP含量均显著高于对照组(P<0.01).结论 双歧双歧杆菌的完整肽聚糖能协同LPS激活巨噬细胞,使之分泌多量的NO、iNOS及cGMP,这些信号效应分子介导了完整肽聚糖的多种重要生理功能.

白念珠菌在肠腔中的增殖与局部IgA抗体分泌的关系

目的 观察白念珠菌(白念菌)在肠腔内增殖与局部粘膜免疫反应的关系.方法 采用无特殊病原菌动物经口喂入白念菌,在不同时相处死后,观察肠内白念菌总数及肠粘膜表面白念菌粘附数量;取肠系膜淋巴结做白念菌选择培养,观察移位体内发生率;采用Brdu体内掺入显示局部粘膜淋巴细胞的增殖情况;流式细胞计数潘伊尔氏结细胞表面IgA(SmIgA)阳性率;免疫组化染色后计数固有层中IgA浆细胞数量变化;ELISA法测定肠粘液中特异抗白念菌IgA含量.结果 肠内白念菌总量及粘膜表面粘附数量随给菌后时间延长而明显下降;移位主要发生于给菌后早期;给菌后固有层淋巴细胞增殖活跃,分泌IgA浆细胞数量明显增加;粘液层中特异抗白念菌IgA含量在给菌后上升明显.结论 带菌动物首次白念菌肠内给入后以固有层中淋巴细胞反应为主,增殖及分化均增加;白念菌总量和粘附数量减少与局部粘膜免疫反应及特异IgA抗体含量上升的关系十分密切.

E test测定酵母样真菌药物敏感试验初步应用

酵母样真菌已成为医院内感染的主要病原之一,体外药敏试验对合理筛选抗真菌药物、发现耐药菌株等有重要意义[1].NCCLS的"M27-T"酵母样真菌大量稀释法药敏试验方法比较繁琐[2].近,瑞典的AB.Biodisk公司推出了酵母样真菌药敏试验E test试纸条.我们以"M27-T"为参比方法,对标准菌株和临床菌株进行MIC测定,比较E test 与"M27-T"所测结果的符合程度,并对E test方法学特点和MIC检测的临床意义作了初步评价.

TT病毒在肝炎患者中的检测及意义

自1997年底,日本学者报道TT病毒(TTV)以来,国内外已相继有TTV感染的报道.为了解西安地区TTV感染情况,我们采用PCR法检测了25例肝炎患者并对3例进行序列分析,证实西安地区也存在TTV感染.

丙型肝炎病毒血清学分型应用的研究

为了探讨丙型肝炎病毒血清学分型的可行性,对148份抗-HCV阳性标本进行血清分型和基因分型.血清分型应用EIA技术,采用HCV核心区第65～81氨基酸合成多肽,血清1型为RPKARRPEGTWAQPGY,血清2型为IPKDRRSTGKSWGKPGY,可将HCV分为血清1型和2型;基因分型应用型特异性PCR法,设计3条通用引物和4条分型引物,可将HCV分为基因Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型.

轮状病毒北京地方株VP4基因的序列分析和原核系统的初步表达

A组轮状病毒是引起婴幼儿重症腹泻的主要病原[1],结构蛋白VP4是A组轮状病毒感染后刺激机体产生保护性抗体的主要抗原之一.由于VP4仅占病毒毒粒蛋白的1.5%,对VP4的高效表达将非常有助于进行其多肽的功能性、抗原性和免疫原性的研究.我们先前的工作发现A组轮状病毒在我国的流行以P1A型为主,本文初步探讨了轮状病毒P1A型我国地方株VP4基因的一级结构特点及通过序列分析预测血清型的分子基础,并且将地方株VP4完整基因在原核系统中进行了表达.

抗HBV佳反义寡核苷酸片段的体外筛选

目的 寻找抗HBV佳反义寡核苷酸区段. 方法合成4种互补于HBV不同区段的反义硫代寡核苷酸(asON),加入HBV基因转染的肝癌细胞模型HepG22.2.15,以ELISA法测定HBsAg、HBeAg含量.结果 互补于pre-S2翻译起始区的asON(序列Ⅰ)抗HBV基因表达作用强(P<0.02),对HBsAg、HBeAg的高表达抑制率分别为66%和91%,针对增强子Ⅱ(ENⅡ)的序列Ⅲ也有较强的抑制作用(52%、56%).asON抗HBV作用具有明显时相性,其抑制作用随时间延长而有反跳,且针对增强子Ⅱ的反义序列Ⅲ和针对S基因起始区的反义序列Ⅱ的抑制作用规律相似,并在时相上与序列Ⅰ互补.结论 4种asON中,序列Ⅰ抗HBV基因表达作用强,而且序列Ⅰ与Ⅲ或Ⅱ配伍有望成为理想的抗HBV基因药物.

TT病毒与肝炎关系的临床流行病学研究

目的 对闽南地区各种肝炎患者、健康体检者、义务献血员和肝癌患者共480例从临床流行病学角度探讨TT病毒(TTV)的致病性及其与各种肝炎的关系.方法 采用巢式PCR检测血清TTV DNA、 ELISA检测血清抗HAV IgM、 HBsAg、抗HBc IgM、抗HCV IgG、抗HEV IgG, 用EPI INFO 6.0软件进行统计分析.结果 480名研究对象中TTV DNA的总检出率为23.96%.各种肝炎患者的TTV总阳性率为23.94%,肝癌患者的TTV阳性率为20.69%,而健康者的TTV阳性率为24.84%,义务献血员的阳性率为30.00%,均未见明显差别.从临床类型看,急性肝炎、慢性肝炎和重症肝炎的TTV阳性率都在25%左右;从病原类型看,非甲～戊型肝炎的TTV阳性率为26.19%,并未见与相应健康者的25.23%阳性率的差别;除HCV由于感染率太低而无法分析外,HAV、HBV、HEV阳性肝炎患者间TTV的阳性率分别为20.00%、23.14%、21.79%,未见TTV与这些已知肝炎病毒的明显相关.对一个时期内的全部135例住院肝炎患者及153名健康者进行肝炎病原分析,HAV、HBV、HEV在肝炎患者中的阳性率都要明显高于健康人(P=0.0142),而TTV在肝炎患者中的阳性率与健康人没有明显差别(P=0.6021);对病毒的单独致病性进行分析,HAV、HBV、HEV在非重叠感染的肝炎患者中的阳性率都要明显高于健康人(P=0.0037),而TTV在非甲～戊型肝炎患者中的阳性率仍不高于健康人(P=0.5256).结论 闽南地区的临床流行病学研究未见TTV感染与肝炎的明显相关性.

喘康平冲剂抗病毒作用的观察

喘康平冲剂(黑龙江中医药大学制备)主要由麻黄、白果、杏仁、黄芩等中药组成,实践证明该方能有效地治疗支气管哮喘.为了探讨喘康平冲剂对病毒的疗效,我们将喘康平冲剂作了体外抗病毒实验.

HTHV核蛋白诱导产生特异性CTL的实验研究

目的 建立稳定表达核蛋白(NP)的P815细胞株,并以此作为CTL的靶细胞,研究汉滩病毒(HTHV)诱导产生的NP抗原特异性CTL.方法 脂质体介导pEF-BOS/HTHV-NP和pDORneo质粒DNA共转染P815细胞株,用免疫组化染色法证实NP在胞浆中的表达.分别取HTHV感染小鼠的脾细胞和pEF-BOS/HTHV-NP质粒DNA免疫小鼠的脾细胞,经体外抗原和IL-2再刺激诱导产生CTL效应细胞,进行4h 51 Cr释放实验.结果 杀伤试验结果表明,无论通过病毒感染还是基因免疫获得的CTL效应细胞,均可以特异性杀伤NP基因转染的靶细胞.结论 HTHV NP可以有效诱导CTL的产生,该研究结果为进一步设计HTHV合成肽疫苗或基因疫苗提供了重要实验依据.

TT病毒的检测及部分核苷酸序列比较

目的 为阐明TT病毒(TTV)流行病学特征和基因组异质性以及为血清学诊断试剂的研制提供资料.方法 从健康查体者的血清中提取DNA,设计一套引物,采用套式聚合酶链反应(nested-PCR),检测TTV,对其中7例阳性标本进行了克隆测序,并与2株日本株TTV的核苷酸序列作了比较.结果 111例正常人中TTV的感染率为12.6%.7株中国株TTV间的核苷酸同源性为90.6%～95.4%,与日本株TX011(O)的核苷酸同源性93.0%～95.0%,而与日本株TA278同源性则在72.9%～74.7%之间.所推测的7株中国株TTV间氨基酸同源性为81.9%～99.4%,与日本株TX011(O)氨基酸同源性为85.5%～88.6%,而与日本株TA278氨基酸的同源性仅为68.1%～71.7%.结论 正常人群中TTV的携带率比较高.7株中国株TTV变异相对较小,同源性比较高,与日本株TX011(O)属于同一基因型.氨基酸的变异大于核苷酸变异.

人外周血NK细胞3种纯化方法的比较

NK细胞是机体抵抗肿瘤生长和病毒感染的重要的免疫监视细胞.近年来,关于NK细胞本质及其功能和机制的研究已成为免疫学研究的热点内容之一.但国内NK细胞的研究大多是检测NK细胞毒活性和NK细胞数量,很少直接观察NK细胞的特征及其功能特点,NK细胞分离纯化,是进行NK细胞基础与临床研究的基础和基本手段.我们分别采用Percoll不连续密度梯度离心法、单抗铺皿法(Panning)及补体依赖的细胞毒法对人外周血NK细胞进行了初步分离纯化,现将结果报告如下.

梅毒螺旋体基因重组抗原酶联免疫吸附实验的探讨

梅毒是由苍白螺旋体(T.pallidum)感染引起的一种严重危害人类健康的性传染性疾病.血清学非特异性试验是目前诊断梅毒的主要方法,例如快速血浆反应素实验(RPR),不加热血清反应素实验(USR);应用梅毒螺旋体抗原检测梅毒患者体内的特异性抗体,已被用于确诊梅毒感染,例如荧光螺旋体抗体吸收试验(FAT-ABS),梅毒螺旋体血凝实验(TPHA)等,但使用的均为全抗原,由于可能存在的非特异性交叉反应,使上述方法受到一定的限制.

抗HPV16E6核酶的原核表达与体外活性研究

目的 获得一种特异性抗人乳头瘤病毒(HPV)16型E6基因的核酶,用以在基因调控水平预防、治疗HPV相关性肿瘤.方法 以核酶(ribozyme,Rz)的锤头结构为模型,采用计算机软件针对HPV16E6基因,设计相应的Rz;体外合成其基因后,克隆于原核表达质粒中.将HPV16E6基因片段也克隆于原核表达质粒中,通过体外转录而得到核酶和病毒mRNA,进行体外切割试验以鉴定核酶的活性.结果 抗HPV16E6核酶(简称抗16HRz)被装入pRG523中而构成pRG16HRz,体外转录后能将核酶独立地释放出来.HPV16E6 mRNA转录质粒pTZ16E6含有HPV16E6基因片段(+94位～+296位),体外切割实验证明抗16HRz具备切割活性,在体外能准确、有效地识别和切割HPV16E6 mRNA片段,得到82nt和132nt的切割产物.结论 所获得的抗HPV16E6核酶能特异性切割HPV16E6 mRNA,可作为对HPV相关性肿瘤进行基因治疗的工具.

白血病患儿巨细胞病毒感染的PCR与抗原检测方法比较

目的 对不同种类标本应用PCR检测巨细胞病毒(cytomegalovirus,CMV)DNA,并与外周血白细胞CMV抗原检测比较,以了解PCR方法在诊断白血病患儿活动性CMV感染时的意义.方法 实验组为31例白血病患儿,对照组为31例免疫功能正常儿童,两组儿童的年龄、性别无差异.应用PCR方法检测血清、尿液和脑脊液CMV DNA,间接免疫荧光方法检测外周血白细胞CMV抗原,ELISA方法检测血清抗CMV IgG.结果 实验组CMV感染率为100%(31/31例CMV IgG阳性),对照组CMV感染率为83.9%(26/31例CMV IgG阳性),两者之间无差异(P=1).实验组检测CMV抗原,有9例阳性且均发生了活动性CMV感染,活动性感染率为29.1%,对照组活动性感染率为0%,两者之间差异有非常显著性(P=0.002).与CMV抗原检测相比,PCR方法检测尿、血清和脑脊液CMV DNA诊断白血病儿童活动性CMV感染的敏感性为(88.9～100)%,特异性为(68.2～81.8)%.结论 白血病患儿易发生活动性CMV感染.在诊断CMV感染时,应用PCR方法检测CMV DNA的敏感性较高,但要注意区分活动性感染和潜伏性感染.

人朊病毒多肽抗体的制备及应用

目的 利用人工合成人朊病毒蛋白(PrP)多肽制备特异性抗PrP抗体,以期用于朊病毒相关疾病的临床诊断.方法 根据PrP基因编码的氨基酸序列合成多肽,与载体偶联后免疫动物,所制备的抗血清用ELISA及Western blot鉴定.结果 ELISA检测表明所制备的抗血清可同多种PrP发生阳性反应;Western blot结果显示抗血清可与正常组织PrPc和病理组织的PrPsc反应;用蛋白酶K处理,可鉴别二者.此外,人、小鼠和兔的脑组织细胞膜提取物在Western blot中显示一相对分子质量约30×103的条带,而相应肝、脾细胞膜提取物中无此条带出现.结论 所制备的PrP多肽抗血清可识别正常的PrPc和病理的PrPsc,合成肽抗原是制备抗朊病毒PrP抗体的一条有效的途径,可用于临床病例的检测.

两性霉素B免疫作用的研究

本研究的目的是发展一种简便快速的检测两性霉素B(Amphotericin B,AMB)血药浓度的酶联免疫吸附试验(ELISA).以AMB与小牛血清白蛋白(Bovine serum albumin,BSA)连接物作为免疫原,AMB与中国鲎血蓝蛋白(TTH)的连接物作为检测抗原,用弗氏完全佐剂乳化抗原,分别免疫日本大耳兔、新西兰大白兔和BALB/c小鼠.大白兔的体重为2.5kg/只,BALB/c小鼠为6～8周龄.

斯奇康(卡介苗多糖核酸注射液)临床应用学术研讨会征文通知

第二届国际抗病毒药物学术会议在京召开

第六届全国红细胞免疫学术大会在黄山市召开

第四届上海国际肝癌肝炎会议征文启事

类风湿关节炎患者外周血与滑膜液Ⅰ、Ⅱ、Ⅸ、Ⅹ、Ⅺ型胶原反应性B细胞频率的比较

目的 探讨抗不同类型胶原B细胞反应在类风湿关节炎(RA)出现的意义.方法 以EL-4OUrBUr/rIL-2/ PMA作为刺激系统,应用酶联斑点技术,检测抗Ⅰ、Ⅱ、Ⅸ、Ⅹ、Ⅺ型胶原免疫球蛋白分泌细胞(anti-HCⅡ ISC).结果 28例RA患者外周血及滑膜液中21例出现anti-HCⅡ ISC,Ⅰ、Ⅸ、Ⅹ、Ⅺ型胶原反应性B细胞阳性者分别为5、6、11及9例.虽然对某种胶原的反应水平与抗其它型胶原反应水平并不一致,但抗Ⅰ、Ⅸ、Ⅹ、Ⅺ型胶原反应多与Ⅱ型胶原反应同时存在.结论 Ⅰ、Ⅱ、Ⅸ、Ⅹ、Ⅺ型胶原特异性B细胞均参与RA的免疫病理反应.

自身免疫病患者外周血γδT细胞系的功能研究

目的 研究自身免疫病人外周血TCRγδ细胞系在微生物及寄生虫抗原刺激下细胞因子的分泌情况.方法 以TCRγδ单克隆抗体固相法体外选择性扩增获得7例胰岛素依赖型糖尿病(IDDM)及3例类风湿性关节炎(RA)病人外周血TCRγδ细胞系,平均纯度可达(84.7±5.9)%.在体外培养条件下,以植物血凝素(PHA)、结核分枝杆菌(M.tb)、阴道毛滴虫(TV)、人类6型疱疹病毒(HHV-6)刺激24h及48h后,测定细胞因子分泌情况.结果 HHV-6刺激组IL-2的分泌量显著高于其它各实验组;M.tb及HHV-6的刺激可导致IFN-γ的高产量.TNF-α的产生未见有显著性差异.结论 γδT细胞可能通过细胞因子的产生来影响自身免疫病的发生与发展.

男性类风湿关节炎性激素异常的探讨

半个多世纪前人们就已注意到不少风湿病有明显的性别差异,近年来随着免疫内分泌学的飞速发展,人们发现性激素可在免疫应答的多个水平上产生明显的影响.流行病学等资料表明类风湿关节炎(RA)的发病率男女比例为1:3,男性在45岁以后RA的发病率较高.为探讨男性RA患者性激素水平的改变,对近3年收治的男性RA患者进行了性激素的检测,并与同年龄组正常男性性激素水平进行对比.

我国北方地区Ⅰ型糖尿病患者与HLA-DR,DQ的关联研究

目的 研究我国北方胰岛素依赖型糖尿病人与HLA-DR,DQ的关联.方法 对华北地区53名胰岛素依赖型糖尿病(IDDM)儿童进行了HLA-DRB1、DQA1、DQB1分型,同185名进行了同样分型的华北正常对照组人群进行关联分析.结果 发现DRB1*0301/DRB1*04杂合子个体具有高的风险( RR=51.13 ).进一步分析DQ分子,将DQ α链第52位为精氨酸和DQ β链第57位为非天冬氨酸分别命名为S(易感)因子,发现当个体拥有的易感基因组合S≥3时具有很大的风险(RR=29.89),反之,当P(保护因子)≥2时即显保护作用.但考虑到DR3/DR4杂合子的风险较高,DR分子与IDDM易感性的关联仍不能忽视.结论 DR3/DR4杂合子可以作为预测和预报IDDM风险的首选指标提示发病明显提早.DQA-DQB的S因子组合≥3可作为预测和预报IDDM的次级指标.某些DR分子与IDDM易感性的关系有可能通过DR4亚型分析得到进一步明确.

系统性红斑狼疮临床表现与HLA Ⅱ类单倍型关联的研究

目的 探讨系统性红斑狼疮(SLE)易感基因致病的模式.方法 利用多聚酶链反应/特异序列寡核苷酸探针杂交(PCR/SSOPH)方法检测113例确诊SLE病人的HLAⅡ类基因型并进行单倍型分析.结果 SLE病人的单倍型具有特定的结构特征,即以2个或3个重型SLE相关基因共同组成1个单倍型;反之,2个或3个轻型SLE相关基因组成另1个单倍型;重型基因和轻型基因之间很少有强连锁不平衡.DQA1*0301-DQB1*0302、DRB1*1501-DQA1*0102-DQB1*0303和DRB1*1501-DQA1*0103-DQB1*0303与肾损害正相关,DQA1*0501-DQB1*0301和DRB3*0202-DQA1*0501-DQB1*0301与肾损害负相关;DRB1*1501-DQA1*0301-DQB1*0601与狼疮性神经精神症状正相关;DQA1*0201-DQB1*0201与白细胞减少正相关;均Pc<0.05.结论 特异单倍型可能是影响SLE亚型临床表达的决定性因素.

儿童慢性淋巴细胞性甲状腺炎T细胞CD40L表达及其与细胞因子失衡的关联研究

为研究慢性淋巴细胞性甲状腺炎(CLT)患儿发作期T细胞CD40L mRNA表达及其与TH1/TH2细胞因子失衡的关系,以8例CLT患儿为研究对象,采用RT-PCR技术和ELISA法分别检测在丝裂原诱导下外周血T细胞CD40L mRNA的表达及单个核细胞(PBMC)产生IFN-γ、IL-4的水平.

人噬菌体抗体库的构建和甲肝抗体的筛选

目的 构建人噬菌体抗体组合文库,筛选人单克隆抗体.方法 用RT-PCR扩增人全套抗体基因片段,克隆于pComb3载体,电转化E.coli形成噬菌体抗体库;以固相化抗原淘筛抗体库,ELISA鉴定噬菌体抗体.结果 17对免疫球蛋白引物全部能够扩增出目的片段;经数次电转化构建了库容为6.93×107的抗体库,滴度为8×1014 PFU/ml,Fab基因重组率为40%.以单抗捕获的甲肝抗原淘洗3轮,出现特异性富集;阳性克隆经直接ELISA和竞争抑制性ELISA实验证实具有良好的抗甲肝抗原特异性,无交叉反应性.结论 成功构建了抗体组合文库,从中获得抗甲肝抗原的特异性人抗体.

抗VEGF165的嵌合抗体在小鼠骨髓瘤细胞中的表达

目的 减少鼠源性单抗的免疫原性,获得抗人血管内皮生长因子165(vascular endothelial growth factor 165, VEGF165)的人/鼠嵌合抗体.方法 将抗VEGF165鼠单抗VmD11的轻链可变区基因VL和重链可变区基因VH分别克隆到带有人IgG1轻链恒定区基因Cκ,重链恒定区基因Cγ1的真核表达载体pAcyc-neo-Cκ和psv2-gpt-Cγ1上,构建了真核表达载体pAcyc-neo-Cκ/hu和psv2-gpt-Cγ1/hu,并应用脂质体转染的方法将其共同导入小鼠骨髓瘤细胞Sp2/0中进行表达.结果 转染后通过筛选培养获得了7个抗性细胞克隆,经亚克隆化培养得到4个稳定表达的阳性细胞株,ELISA检测到抗VEGF165人/鼠嵌合抗体表达,RT-PCR也证实了该嵌合抗体在mRNA水平上的表达.培养上清液中的抗体表达量约为10μg/L,腹水中约为100μg/L,经竞争ELISA实验和Western blot实验证实其具有与亲本鼠源单抗相同的VEGF165结合特性.结论 成功的构建了能与VEGF165结合的人/鼠嵌合抗体.

将抗体库所获抗-HBs Fab转换为全长人IgG

目的 将大肠杆菌表达的抗-乙肝表面抗原(HBs)人Fab转换为真核表达的全长人IgG1.方法 用重叠PCR法将人工合成的人Vκ前导序列拼接到抗-HBs的VH和Vκ上,构建人IgG1真核表达载体,转染真核细胞,通过ELISA、RT-PCR、免疫印迹检测抗-HBs人IgG的表达.结果 用轻链和重链同时表达的单一载体在CHO细胞中获得了抗-HBs人IgG的表达.结论 通过噬菌体抗体库所获Fab段可经拼接人Vκ前导序列在真核获得功能性表达.

1999年度国家自然科学基金生命科学部免疫学学科受理项目评析

1999年度国家自然科学基金委员会免疫学学科共受理面上项目298项,其中自由申请项目223项,青年基金70项,地区基金5项.受理项目的研究内容主要涉及四大领域,即基础免疫学、应用免疫学,临床免疫学和移植免疫学.本文将具体介绍所受理基金项目的研究方向、研究基础、专家评价等情况,希望能为2000年免疫学科研工作者申报国家自然科学基金项目提供参考.