中华微生物学和免疫学杂志
Chinese Journal of Microbiology and Immunology 중화미생물학화면역학잡지
- 主管单位： 中国科学技术协会
- 主办单位： 中华医学会
- 影响因子： 0.59
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 0254-5101
- 国内刊号： 11-2309/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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黄芪和地塞米松对哮喘失衡表达转录因子T-bet/GATA-3不同的调节作用
目的 观察T细胞特异转录因子T-bet/GATA-3在支气管哮喘中失衡表达,探讨黄芪和地塞米松对其不同的调节作用.方法 40只雄性SPF级SD大鼠随机分为对照组、哮喘组、地塞米松组和黄芪组,20只雄性SPF级致敏SD大鼠脾脏中分离获得CD4+T细胞,苏木精·伊红染色观察气道病理改变;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测大鼠血清中IL-4、IL-5、IFN-γ含量;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测IL-4、IL-5、IFN-γ、T-bet和GATA-3 mRNA表达;Western blot法检测T-bet和GATA-3蛋白表达.结果 肺组织中嗜酸粒细胞(EOS)、淋巴细胞、管壁面积/支气管管腔内周长(WA/Pi)和支气管平滑肌面积/支气管管腔内周长(ASM/Pi)哮喘组比对照组明显增多或增厚(P均<0.01),地塞米松组和黄芪组明显低于哮喘组(P均<0.01);血清中IL-4和IL-5含量,哮喘组高于对照组(P均<0.01),地塞米松组和黄芪组均低于哮喘组(P均<0.01),血清中IFN-γ含量哮喘组远低于对照组(P<0.01),地塞米松组低于对照组(P<0.01),但黄芪组明显高于哮喘组(P<0.01).在大鼠肺组织和致敏大鼠脾CD4+ T细胞中,IFN-γ mRNA、T-bet mRNA和蛋白表达哮喘组明显低于对照组(P均<0.01),地塞米松组与哮喘组相似(P>0.05),黄芪组与对照组相似,但明显高于哮喘组(P<0.01);IL-4和IL-5 mRNA、GATA-3 mRNA和蛋白表达,哮喘组异常高于对照组(P<0.01),地塞米松组和黄芪组均明显低于哮喘组(P<0.01);肺组织中T-bet/GATA-3蛋白表达量比值,哮喘组明显低于对照组(P<0.01),地塞米松组与哮喘组相近(P>0.05),黄芪组与对照组的比值相近(P>0.05),明显高于哮喘组和地塞米松组(P均(0.01).结论 T细胞特异转录因子T-bet/GATA-3在哮喘中失衡表达,黄芪抑制哮喘气道炎症可能通过双向调节T-bet和GATA-3平衡来实现,地塞米松抑制GATA-3表达,不能增加T-bet表达,其抑制哮喘气道炎症并非通过调节转录因子T-bet和GATA-3平衡实现.
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抗CD20scFv-Fc-CD28/ζ基因修饰T细胞靶向杀伤Raji细胞的研究
目的 研究重组抗cD20scFv-Fc-CD28/ζ基因修饰T淋巴细胞在杀伤Raji细胞时T细胞活化情况和诱导Raji细胞凋亡的变化,进一步探讨特异基因修饰T细胞杀伤淋巴瘤细胞的机制.方法 将重组质粒转染至PA317细胞中,用转染成功的PA317培养液感染外周血T淋巴细胞后,用800μg/ml的G418筛选1周后杀伤Raji细胞,分别在不同时间点用流式细胞仪检测Raji细胞Bcl-2的阳性率,用ELISA检测培养上清液中的IL-10、IFN-γ.结果 Raji细胞Bcl-2的阳性率在24 h内就明显下降,72 h内由98.43%下降到38.45%,下降幅度明显高于对照组和空白组.72 h检测IL-10发现实验组为100.3 pg/ml,明显低于对照组(210.88 pg/ml)和空白组(286.71 pg/ml),同时IFN-γ的分泌量(1487.23 pg/ml)也显著高于对照组.结论 抗CD20介导的T细胞靶向杀伤Raji细胞不需要CD28的协同刺激.CD28和CD3ζ协同刺激可增强T细胞抑制Raji细胞TL-10表达使其降低Bcl-2的表达从而加速靶细胞的裂解.CD28/ζ在没有外源协同刺激分子B7/CD28时能允分激活T细胞,促进其分泌IFN-γ,增强了抗CD20修饰T细胞靶向杀伤Raji细胞的能力.
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Heymann肾炎受体相关蛋白羧基端融合蛋白的表达及其对nephrin表达和分布的影响
目的 探讨Heymann肾炎(HN)受体相关蛋白(RAP)羧基端抗原决定簇在HN发病机制中的作用.方法 通过PCR及分子克隆技术,构建RAP全长和羧基端多肽的原核融合表达载体,表达融合蛋白,制备针对RAP全长和羧基端融合蛋白的抗血清,免疫荧光法检测其在肾组织中的定位.利用该抗血清制备两种HN模型,测定24 h尿蛋白定量,免疫荧光法检测肾组织中nephrin表达和分布,并比较组间差异.结果 成功构建了重组原核表达载体pGEX-4T-1-RAP1083/324,表达了RAP全长(相对分子质量,70×103)和羧基端(40×103)的融合蛋白,并制备了相应的抗血清,免疫荧光显示制备的两种抗血清均对肾小管上皮细胞有高亲和性.利用两种抗血清成功制备了HN模型,模型组大鼠24 h尿蛋白定量分别达(21.31±4.15)mg和(19.05±3.72)mg,与正常对照组相比,差异有统计学意义(P<0.01).nephrin在RAP324诱发的大鼠HN肾组织中表达较RAP1083中减弱明显.结论 Heymann肾炎RAP羧基端存在病理性抗原决定簇,能够诱发大鼠HN模型.nephrin在两种HN中表达减少,推测RAP作用机制与减少肾小球内nephrin的表达有关.
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HSP60口服耐受对小鼠脾细胞中调节性T细胞的影响
HSP60特异性免疫反应在许多炎症反应中起重要作用.近来口服耐受(oral tolerance)已成功用于许多自身免疫性疾病的实验研究和临床治疗.但能否通过口服诱导特异性调节性T细胞(Tr),目前国内外研究甚少.本研究通过HSP60口服耐受,观察其对小鼠脾细胞中Tr细胞的影响.
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负性协同刺激分子B7-H4在小鼠树突状细胞上的表达及其生物学意义
目的 探讨B7-H4分子在小鼠树突状细胞分化发育过程中的表达及其在T细胞活化中的作用.方法 采用GM-CSF和IL-4联合方案体外诱导小鼠髓系树突状细胞(DCs);采用流式细胞术检测未成熟DCs、成熟DCs以及IL-10诱导的DCs表面B7-H4分子的表达;采用3H-TdR掺入试验和抗B7-H4单抗(McAb)阻断试验分析DCs表达的B7-H4分子对T淋巴细胞的共刺激效应.结果 经GM-CSF和IL-4联合方案体外诱导的未成熟DCs较高水平表达B7-H4,在IL-10作用下B7-H4表达进一步上调,经TNF-α刺激成熟后,B7-H4的表达显著下调,不同功能状态下DCs表面B7-H4分子均可抑制T细胞的增殖,但以未成熟DCs、IL-10诱导的DCs表面B7-H4分子的抑制作用更为显著.结论 不同功能状态下的DCs均有B7-H4分子的表达,处于抑制状态下的DCs通过高表达B7-H4介导免疫不应答效应.
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16S rDNA快速鉴定血液制品中污染细菌的测序方法的建立
目的 建立基于16S rDNA快速鉴定细菌的PeR测序方法(PCR-SBT).方法 通过一组16S rDNA通用引物扩增得到基因组全长,PCR产物经纯化后直接测序分析.利用BLAST软件从GenBank数据库中搜索相关菌株的16S rDNA全序列,采用Clustal X软件进行多序列比对和同源性分析,确定细菌的种属,并与常规生化鉴定结果比较.利用大肠杆菌基因组一系列稀释度标本进行PeR扩增,检测方法的敏感性.结果 实验利用多对引物建立了16S rDNA全长序列分析方法,13个标准菌株通过PCR-SBT方法获得约1400 bp的全长序列.比对分析13个标准菌株测序结果与预期标准序列完全一致,证实建立的PCR-SBT方法结果可靠.利用建立的PCR-SBT法,对实验室从血小板制品和脐带血中分离得到不同未知菌株进行鉴定,成功确定了这些菌株的种属.以大肠杆菌DNA为模板,方法的低检测限为反应体系DNA含量0.2 ng.结论 建立的基于16S rDNA的PCR-SBT方法是可行的,可快速准确地检测及鉴定细菌种类,尽早发现细菌污染血制品,对污染血制品输注后的针对性治疗方面具有潜在的应用价值.
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肺炎克雷伯临床菌株新基因组岛KpGI-2的鉴定
目的 研究肺炎克雷伯临床耐药菌株新基因组岛KpGI-2的结构和功能.方法 采用PCR方法自一株肺炎克雷伯耐药菌株HS04160扩增得到新的插入序列KpGI-2,通过测序以及生物信息学方法分析其序列结构并推测其生物学功能,采用细菌生长试验证实其生物学功能.结果 phe55 tRNA基因位点处PCR扩增得到的6.4 kb的插入序列KpGI-2,序列分析发现其GC含量为38.03%,明显低于肺炎克雷伯菌株基因组平均的GC含量(57.5%).KpGI-2中含有163 bp的重复序列,可以确定为一个新的基因组岛.KpGI-2携带有5个orf,其中orf5与沙门菌属中的Fic(fllamentation induced by cAMP)蛋白具有高度相似性.肺炎克雷伯临床菌株普遍携带有一个高度保守的fic基因以及一个相对保守的fic基因,携带有KpGI-2的临床菌株HS04160丢失了相对保守的fic基因.通过细菌生长试验分析发现orf5以及KpGI-2在cAMP诱导下对细胞生长具有调节作用,KPGI-2的功能可能与细菌生长的调节相关.结论 KpGI-2是位于肺炎克雷伯临床菌株基因组岛插入热点phe55 tRNA基因位点上的一个新基因组岛,其携带的基因与细胞生长相关.
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毒素基因exoS,exoU在铜绿假单胞菌肺炎临床株中的分布及对感染预后的影响
铜绿假单胞菌为临床常见的条件致病菌.铜绿假单胞菌Ⅲ型分泌系统主要分泌4种毒素,ExoS、ExoT、ExoY、ExoU.本研究选取在铜绿假单胞菌中具有互斥性和致病机制中更为重要的exoS、exoU基因为研究对象,调查铜绿假单胞菌肺炎临床株中携带两种基因的情况,通过回顾性队列研究分析患者的预后,对ExoS、ExoU致病性作初步探索.
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异质性万古霉素耐药金黄葡萄球菌分子流行病学特征
金黄葡萄球菌对万古霉素耐药已成为全世界共同关注的问题.为了解本地区异质性万古霉素耐药金黄葡萄球菌(h-VRSA)的分子遗传学起源,以及与耐甲氧西林金黄葡萄球菌(MRSA)国际流行株之间的关系,我们采用多位点测序分型(multilocus sequence typing,MLST)联合葡萄球菌盒式染色体(staphylococcal cassette chromosome mee,SCCmec)分型对临床标本中筛选出的13株h-VRSA进行分析,报道如下.
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金黄葡萄球菌肠毒素A诱导的免疫应答
目的 研究超抗原金黄葡萄球菌A型肠毒素(SEA)在体内诱导的体液免疫反应、T淋巴细胞增殖及免疫无应答的规律和作用.方法 利用重组SEA蛋白免疫小鼠,酶联免疫吸咐试验(ELISA)检测特异性抗体及其亚类水平,观察两者的产生过程及变化规律.RT-PCR反应检测免疫后小鼠脾脏内细胞因子的mRNA表达水平,EUSPOT法检测rSEA对脾细胞分泌IFN-γ能力的影响,流式细胞术检测T淋巴细胞表面抑制性受体PD-1的表达.结果 BALB/c小鼠在低剂量的rSEA初次免疫后2周,即产生了高水平的特异性抗体,此时体内以体液免疫应答为主,IgG2a/IgG1＜1;而在免疫早期,Th1型细胞因子的mRNA表达水平高于Th2型,以细胞免疫应答为主.短时期内进行再次免疫后脾细胞的IFN-γ分泌频率显著下降;流式细胞仪在rSEA激活的T淋巴细胞表面检测到了PD-1(programmed death-1)分子的表达,其表达量随时间及免疫次数增加.结论 超抗原SEA初次免疫即能引起强大的体液免疫应答与细胞免疫应答;再次免疫引起了免疫无应答,这与PD-1介导的抑制作用增强有关.
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抗人禽流感病毒H5N1人源化单链抗体噬菌体文库的构建和筛选
目的 利用抗人禽流感病毒H5N1 IgG抗体阳性的人禽流感康复患者外周血淋巴细胞,构建人源化Fv段单链抗体(seFv)噬菌体文库,并筛选与禽流感病毒相关蛋白有结合活性的scFv抗体文库.方法 提取人外周血淋巴细胞总RNA,逆转录成cDNA,以其为模板,利用家族特异性IgG基因的引物,扩增重链和轻链的可变区基因,并用合成的连接子将轻链和重链基因连接成单链抗体片段后,重组到噬菌粒载体pCANTAB5E中.将重组噬菌粒载体电转化大肠杆菌TG1,酶切和PCR鉴定抗体库的重组率,通过测定噬菌体抗体库的滴度计算抗体库的库容,用特异性禽流感病毒相关蛋白筛选表达的单链抗体.结果 构建了源于人禽流感康复患者血清的scFv抗体文库,库容为3.75×104;筛选出与禽流感病毒相关蛋白有结合活性的scFv抗体文库.结论 成功构建了抗人禽流感病毒H5N1的人源scFv噬菌体抗体库,并筛选出特异性结合人禽流感病毒相关蛋白的单链抗体,为进一步制备快速检测试剂和治疗研究提供了基础数据.
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人参皂苷Rg1和Rb1对流感病毒感染细胞的影响及其机制研究
目的 研究人参皂苷Rg1和Rb1对流感病毒感染所致的细胞氧化应激损伤、细胞内转录因子(NF-κB和AP-1)转录活性及前炎症细胞因子IL-8释放的影响.方法 甲型流感病毒H3N2作为刺激因素,以DCFH-DA为探针,流式细胞仪检测细胞内活性氧(iROS)产生水平.利用双荧光素酶顺式报告系统,检测人参皂苷Rg1和Rb1对NF-κB-luc及AP-1-luc相对荧光素酶值的影响.RT-PCR法进一步验证人参皂苷Rg1和Rb1对IL-8 mRNA表达水平的影响.结果 病毒感染后细胞中ROS产生增加45%～55%,而给予有效浓度人参皂苷Rg1和Rb1后,荧光强度降低,与正常细胞内自由基含量基本相同.通过NF-κB及AP-1双荧光素酶报告系统检测发现,与正常对照组比较,病毒感染的细胞中NF-κB及AP-1荧光素酶报告活性明显升高;与病毒损伤组比较,人参皂苷Rg1、Rb1治疗组NF-κB及AP-1荧光素酶报告活性明显受到抑制.RT-PCR结果显示人参皂苷Rg1和Rb1能明显抑制病毒诱导的IL-8 mRNA表达水平的变化,使之趋近于正常对照组水平.结论 人参皂苷Rg1和Rb1可拮抗病毒感染细胞中ROS产生水平、降低氧化应激敏感的信号传导通路NF-κB及AP-1的转录活性,并抑制二者下游靶基因IL-8表达.
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重组9型腺相关病毒载体转染小鼠心脏及对心功能的影响
目的 探讨重组9型腺相关病毒(recombinant adeno-associated serotype 9,rAAV9)载体对小鼠心脏的转染效果及对心功能的影响.方法 16只昆明种小鼠经尾静脉将携带增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,eGFP)报告基因的rAAV9(rAAV9-eGFP)转染入小鼠,于7、14、21、28 d留取标本,使用荧光显微镜观察eGFP在心肌、肝、肺、肾、脑、骨骼肌的荧光表达,Western blot法检测eGFP)的蛋白表达.另20只昆明种小鼠随机分为2组,每组10只,分别经尾静脉注射rAAV9-eGFP)和生理盐水,28 d后行心脏超声及血流动力学检查.结果 rAAV9-eGFP经尾静脉注射21 d时eGFP表达在心脏达到高峰,转染效率可达32%,在其他脏器表达量少或无表达.rAAV9-eGFP组较生理盐水组心功能差异无统计学意义(P＞0.05).结论 rAAV9可通过外周静脉注射在心脏较高表达,且对心功能无不良影响.
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北京市2006年新确认HIV-1感染者耐药突变的流行性研究
目的 研究北京市2006年新确认HIV-1感染者毒株的耐药突变本底数据.方法 随机选取北京市2006年新确认HIV-1感染者抗凝全血标本50份,提取血浆病毒RNA,用逆转录聚合酶链反应扩增HIV-1 pol区基因片段,并进行序列测定及耐药基因型分析.结果 成功扩增出34份标本的pol区基因;在1例样本的蛋白酶编码区检测出1个主要耐药突变,7例样本检测出7个次要耐药突变,主要耐药突变为M46L,毒株是CRF01_AE亚型,次要耐药突变有4种,出现的频率分别为A71T(2个)、A71V(3个)、Q58E(1个)、V11IV(1个).在14例样本逆转录酶编码区检测出一种或多种核苷类和(或)非核苷类逆转录酶抑制剂耐药突变,9例标本检出核苷类逆转录酶抑制剂耐药突变,出现频率分别为:V118I(42.9%)、M184V(7.1%)、A62V(7.1%)、K70T(7.1%)、K65R(7.1%)、K219N(7.1%)、T69d(7.1%)、V75LV(7.1%)、K219R(7.1%);10例标本检出核苷类逆转录酶抑制剂耐药突变,出现的频率分别为V1061(35.5%)、Y181C(15.4%)、K103KR(7.7%)、K103R(7.7%)、L100LV(7.7%)、V1081(7.7%)、V179D(7.7%)、V179DV(7.7%).结论 北京市2006年新确认HIV-1感染者毒株中已经存在一定比例耐药突变,有必要定期进行耐药性监测研究.
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HMGB1在系统性红斑狼疮肾损害中的作用
目的 研究高迁移率族蛋白1(high mobility group protein box 1,HMGB1)在系统性红斑狼疮肾损害中的作用.方法 ELISA检测12例健康对照、16例系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)无肾脏损害和14例合并肾脏损害的系统性红斑狼疮患者(lupus nephritis,LN)血清中HMGB1的表达情况.将体外培养的人系膜细胞分为正常对照组和HMGB1刺激组,于培养6、12、24 h后收集细胞,免疫细胞化学检测增殖细胞核抗原(PCNA)的表达变化;免疫细胞化学和流式细胞术检测Toll样受体2(TLR2)、NF-κB 065蛋白的表达变化.结果 血清中HMGB1蛋白在LN组明显高于SLE组和健康对照组,且血清中HMGB1水平与LN患者的蛋白尿呈显著正相关;人重组HMGB1能够促进系膜细胞增殖;与正常对照组相比,HMGB1刺激组中TLR2、NF-κB p65蛋白表达增强;TLR2蛋白与NF-κB p65蛋白表达呈显著正相关(r=0.658,P=0.000);NF-κB p65蛋白表达与PCNA阳性表达率呈显著正相关(r=0.536,P=0.007).结论 HMGB1是狼疮性肾炎发病中的重要的细胞因子之一,可能部分通过与其受体蛋白TLR2结合激活NF-κB促进系膜细胞增生,从而引起肾脏损害.
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中国HIV/AIDS患者保守表位的2F5抗体与疾病进展关系
目的 研究中国HIV/AIDS患者gp41保守表位中和抗体2F5与疾病进程的关系.方法 应用合成4(ELDKWA)-C24肽及gp41抗原肽包被96孔酶标板,ELISA方法检测特异性抗体水平.提取正常人外周血单个核细胞(PBMC),应用HIV-1 SF33毒株进行病毒多轮感染PBMC中和试验.结果 缓慢进展者(slow progressor,SP)的2F5样中和抗体水平显著高于典型进展者(typical progressor,TP)(P<0.05);2F5样中和抗体水平与gp41特异性抗体水平正相关(r=0.406,P<0.05).结论 中国HIV.-缓慢进展者体内具有高水平的2F5样抗体,2F5抗体可能是疾病不进展的保护性因素之一.
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急性期川崎病Th17细胞变化初探
目的 探讨Th17细胞在川崎病(Kawasaki disease,KD)免疫发病机制中的作用.方法 急性期KD患儿60例,正常同年龄对照组32例,KD患儿分别于静脉丙种球蛋白(IVIG)治疗前后直接取血备检.采用荧光定量PCR(real-time PCR)检测CD4+T细胞IL-17A/F、转录因子ROR-γt、Foxp3及PBMC IL-6、TGF-β、IL-23p19、IL-27p28、IL-27EBI3、IFN-γ等mRNA表达;酶联免疫吸附试验检测血浆中IL-6、TGF-β、IL-23、IL-27、IFN-γ的蛋白浓度;流式细胞术检测外周血CD4+CD25+调节性T细胞(Tr)的比例.结果 急性期KD患儿CD4+T细胞高表达IL-17A及IL-17F(P<0.01),IVIG治疗后明显降低(P<0.01);急性期KD患儿IL-17A/IL-17F与红细胞沉降率(ESR)、C反应蛋白(CRP)、白细胞数目(WBC)呈正相关(IL-17A:0.70,0.85,0.80,P<0.01;IL-17F:0.63,0.65,0.69,P<0.01);急性期KD患儿Th17细胞转录因子ROR-γt及前炎症细胞因子IL-6转录水平明显高于对照组(P<0.01),IVIG治疗后显著降低(P<0.01);TGF-β、IL-23p19、IL-27p28、IL-27EBI3 mRNA水平及血浆蛋白浓度与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);血浆IFN-γ浓度显著升高,mRNA水平无变化;急性期KD患儿CD4+ CD25+ Tr细胞比例明显低于正常对照组(P<0.01),其转录因子Foxp3表达亦明显降低(P<0.01).结论 急性期KD患儿Th17细胞过度活化可能参与了KD免疫发病机制.
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HIV-1蛋白诱导T细胞产生IFN-γ反应特征及对HIV-1感染者病情进展的影响
目的 探讨HIV-1特异性T细胞反应特征及对HIV-1感染者病情进展的影响.方法 通过合成重叠肽技术及ELISPOT技术,采用队列研究方法对37名HIV-1感染者的病毒特异性T细胞免疫反应进行分析.结果 83.78%(31/37)的HIV-1感染者对1个或多个合成肽反应(反应强度大于50 SFU/106 PBMCs).HIV-1B型病毒不同蛋白均可激发HIV-1感染者的特异性T细胞反应,其中HIV-1 Gag蛋白被识别的频率高,81%的HIV-1感染者识别HIV-1 Gag而且HIV-1 Gag蛋白诱导的T细胞反应强度高,相对强度达到28.25%,明显高于其他蛋白,差异具有统计学意义(F=17.969,P<0.001);重叠肽诱导T细胞分泌IFN-γ反应频率、反应强度在HIV-1感染无症状期和艾滋病期无明显区别,但是HIV-1 Gag蛋白诱导的T细胞反应强度在无症状期明显高于艾滋病期.结论 HIV-1B型病毒不同基因编码蛋白激发T细胞分泌IFN-γ反应小同,其中HIV-1 Gag蛋白特异性T细胞在控制病情进展方面发挥了重要作用.
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IDO调节Th1/Th2平衡的研究进展
吲哚胺2,3双加氧酶(indoleamine 2,3-dioxygenase,IDO)是色氨酸代谢的限速酶,在人和动物的许多组织和细胞中,如树突状细胞(DC)、巨噬细胞、上皮细胞、嗜酸性粒细胞及肿瘤细胞等均可见IDO的表达[1-4].一些细胞因子如IFN-γ、脂多糖(LPS)和CpG寡脱氧核苷酸(ODN)等可通过Toll样受体(TLR)信号途径及CTLA-4-B7的相互作用诱导其高表达[5-7].
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2009亚洲核酸疫苗学术会议纵观
受国际DNA疫苗协会(International Society for DNA Vaccines)委托由中国农业大学农业生物技术国家重点实验室主办的2009亚洲.DNA疫苗学术会议于2009年7月8日-9日在北京召开.此次会议共有来自美国、韩国、日本等国家20多位核酸疫苗研究方面的国际知名专家,和中国科学院、中国医科院、中国疾病控制中心、复旦大学、武汉大学、军事医科大学等国内从事核酸疫苗研究的30多个科研院企近150位学者代表参加.
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E型沙眼衣原体主外膜蛋白DNA疫苗和重组蛋白疫苗联合免疫诱导出的免疫效应
目的 研究沙眼衣原体主要外膜蛋白(MOMP)DNA疫苗和重组蛋白(rMOMP)疫苗联合免疫小鼠诱导出的免疫效应.方法 3～4周BALB/c雌鼠60只,分5组,每组12只,于第0、2、4周通过双侧股四头肌肌注免疫相应的疫苗.通过血清IgG抗体和IFN-γ含量、阴道冲洗液sIgA抗体含量、脾淋巴细胞增殖指数、迟发型超敏反应、阴道脱落细胞种植等指标进行小鼠免疫效应的测定.结果 DNA蛋白联合组小鼠血清IgG抗体水平A405值为0.629±0.052;sIgA,A450值为0.379±0.052;脾淋巴细胞增殖指数为5.682±0.484;淋巴细胞培养上清液中IFN-γ含量为(1265±128)ps/ml.DNA蛋白联合组小鼠的各项指标均好于EB阳性对照组除外的其他组(P<0.01).结论 沙眼衣原体DNA疫苗和蛋白疫苗联合免疫可以增强免疫保护效应.
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肠病毒71型分离株的鉴定及免疫原性研究
目的 在对肠病毒71型(enterovirus 71,EV71)分离株进行鉴定的基础上,对其诱导小鼠产生的免疫应答水平进行研究,拟为进一步的EV71候选疫苗研究奠定基础.方法 超速离心纯化病毒后,采用磷钨酸负染法通过电镜观察病毒形态、大小;采用特异性EV71单抗通过间接免疫荧光法(IFA)检测病毒的特异性;合成EV71特异性引物,通过RT-PCR对病毒进行分子生物学鉴定;病毒的VP1基因序列测定后,与其他EV71序列进行比较,绘制种系发育树,确定病毒基因型;通过腹腔注射途径免疫小鼠,免疫后分离血清通过微量细胞病变抑制法测定血清中和抗体效价,ELISA法检测血清抗体水平和抗体亚型水平.结果 电镜下可观察到典型的圆形病毒颗粒,直径为20～30 nm,呈典型的肠病毒形态;085和087株病毒感染细胞中均能观察到黄绿色荧光,提示该两株病毒可与EV71单抗特异性结合;RT-PCR可以从病毒感染细胞中扩增出226 bp大小的特异性产物带,而采用CA16特异性引物则不能扩增出相应大小的产物带;基于VP1基因序列的种系发育分析显示,087和085株均为C4基因型;085和087株EV71免疫小鼠后可诱导产生能中和包括其本身在内的多个病毒株的中和抗体,针对同一株中和病毒,实验组间差异无统计学意义;针对不同中和病毒株,各实验组中和本株、523-07T株的能力明显高于FY-02T株(P<0.05);ELISA法检测结果显示,接种灭活前后的EV71病毒085和087株后均能诱导小鼠产生抗EV71特异性IgG;IgG亚型为IgG1/IgG2a混合型,灭活病毒免疫组小鼠血清EV71特异性IgG、IgG1、IgG2a水平明显高于活病毒免疫组(P<0.05).两株病毒之间差异无统计学意义.结论 本研究分离到的085和087株病毒均为EV71 C4基因亚型,并具有一定的免疫原性.
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九价肺炎链球菌荚膜多糖-蛋白质结合制剂对小鼠免疫应答的影响
肺炎链球菌荚膜多糖是主要致病抗原.根据荚膜多糖的抗原性分为不同的血清型,共有90个血清型,近30个血清型对人有致病性,可引起肺炎、中耳炎、脑膜炎等多种疾病,肺炎链球菌是导致婴幼儿、儿童和老人发病及死亡的重要原因.因此研发多糖蛋白结合疫苗以预防由该菌引起的疾病颇为重要.
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水痘-带状疱疹病毒疫苗株ORF62碱基突变及ORF62编码IE62反式激活力的分析
目的 分析水痘-带状疱疹病毒(VZV)疫苗株(vOka)ORF62碱基突变及ORF62编码即刻早期蛋白(IE62)对VZV基因启动子的反式激活力.方法 分别以vOka及其亲本株(pOka)基因组DNA为模板,PCR扩增获得ORF62全序列,克隆到高效表达质粒pCAGGS中构建vOka和pOka ORF62表达质粒;采用双脱氧核苷酸链末端终止法对表达质粒中ORF62测序;应用基因转染瞬时表达技术比较vOka和pOka IE62在MeWo和CV1细胞中对VZV基因启动子的反式激活力差别.结果 成功构建vOka和pOka ORF62表达质粒pCAG-vOka62和pCAG-pOka62;测序结果发现,与pOka比较,vOka ORF62至少有9个碱基突变,其中106262、107136和107262位点碱基突变后分别产生Sma Ⅰ、BssH Ⅱ和Nae Ⅰ酶切位点.vOka IE62在MeWo细胞中对ORF4、ORF10和ORF61启动子的反式激活力低于pOka IE62,但在CV1细胞中对ORF9启动子的反式激活力高于poka IE62.结论 利用vOka ORF62碱基突变产生的酶切位点可鉴别vOka和pOka,vOka和poka IE62对VZV基因启动子的反式激活力差别可能与转染细胞类型有关.
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