lincRNA-cox2对小鼠RAW264.7巨噬细胞极化的影响

目的：观察小鼠RAW264.7巨噬细胞不同极化状态下lincRNA-cox2表达变化,初步探讨lincRNA-cox2对巨噬细胞极化的影响。方法以IFN-γ/LPS刺激小鼠RAW264.7细胞诱导M1型极化,IL-4刺激RAW264.7细胞诱导M2型极化,采用实时荧光定量PCR( RT-PCR)检测各组细胞lincRNA-cox2的表达。设计并合成针对 lincRNA-cox2基因的 siRNA 及无关序列,脂质体转染RAW264.7细胞,48 h后分别加入IFN-γ/LPS或IL-4继续诱导M1/M2型巨噬细胞,采用酶联免疫试验( ELISA)检测细胞因子IL-12及IL-10的分泌量；RT-PCR检测与巨噬细胞极化相关的iNOS、TNF-α、Arg-1、Fizz1的表达。将lincRNA-cox2-siRNA转染M1型巨噬细胞,检测其对M1极化表型的影响。结果 RT-PCR结果显示,M1型巨噬细胞的lincRNA-cox2表达水平显著高于未极化细胞和M2型巨噬细胞。与对照组相比,lincRNA-cox2-siRNA转染RAW264.7细胞后,经IFN-γ/LPS诱导的M1型巨噬细胞中IL-12分泌降低, iNOS和TNF-α表达下降；而经IL-4诱导的巨噬细胞中IL-10产生增加, Arg-1和Fizz1表达升高。 lincRNA-cox2-siRNA转染M1型巨噬细胞后,IL-12分泌降低,IL-10产生增加,其特点向M2样巨噬细胞转换。结论 lincRNA-cox2参与调控小鼠巨噬细胞的极化,促进M1型巨噬细胞极化,抑制M2型巨噬细胞极化。

山西省人源羊种布鲁氏菌的MLVA-2 B及rpoB基因分型研究

目的：采用多位点可变数目串联重复序列分析( MLVA-2B)方法及rpoB基因分型方法对山西省分离的布鲁氏菌进行基因型分析。方法2014—2015年在山西省布鲁菌病(简称布病)监测点采集已确诊的布病患者血液进行血培养,对培养出的布鲁氏菌进行传统的生物分型鉴定。选取MLVA panel 2的8个位点进行分型,并对分型结果进行聚类分析。同时采用PCR方法对分离菌株rpoB基因4个相关突变位点进行扩增,PCR 产物测序结果与标准菌16M 进行比对。结果采用MLVA panel 2B分型方法对41株羊3型布氏菌进行聚类分析,所有菌株可分为5个群,31个基因型,基因型相似度在64.78%~100%。 rpoB基因检测发现39株为 rpoB-2型(629-GTG/985-GTC/1309-CTA,95.12%),2株为rpoB-2 variant型(629-GTG/1309-CTA,4.88%)。结论 MLVA基因分型对追溯传染源,分析布病的流行和暴发有重要意义。 MLVA panel 2B位点变异度更高,提示用panel 2B的5个位点对分析研究同一生物型菌株的变异情况更简便和高效。应用rpoB基因多态性分析发现,我省的菌株有39株为rpoB-2型,还有2株为新发现的rpoB-2突变型。同时发现了rpoB基因分型与MLVA分型方法可能存在相关性。

耐多药结核分枝杆菌对贝达喹啉的耐药性及其与基因型关系分析

目的：分析耐多药结核分枝杆菌菌株对贝达喹啉( Bedaquiline, BDQ)的耐药性并探讨耐药表型与基因型之间的关联,为临床合理使用贝达喹啉治疗耐多药结核病( multidrug-resistant tu-berculosis, MDR-TB)提供科学依据。方法选取2015年重庆市结核病防治所分离的全敏感临床株100株、MDR-TB临床株77株、2007—2008年全国结核病耐药基线调查收集的 MDR-TB菌株210株,采用微孔板法测定BDQ的低抑菌浓度(MIC),并采用间隔区寡核苷酸分型方法(Spoligotyping)对其进行基因分型,进一步比较MDR-TB菌株中北京基因型和非北京基因型的BDQ耐药率差异。结果287株MDR菌株中,BDQ的MIC50为0.03μg/ml,MIC90为0.25μg/ml,BDQ耐药株19株,耐药率为6.6%(19/287),北京基因型菌株195株,非北京基因型菌株92株,北京基因型菌株对BDQ的耐药率[4.6%(9/195)]低于非北京基因型[10.9%(10/92)](χ2=3.955,P=0.047)。100株全敏感菌株中, BDQ的MIC50为0.03μg/ml,MIC90为0.12μg/ml,北京基因型与非北京基因型菌株数分别为63株、37株,均未发现BDQ耐药株。结论 BDQ对MDR结核分枝杆菌有较好的体外抗菌活性,MDR菌株非北京基因型与BDQ耐药相关,北京基因型菌株对BDQ的敏感性优于非北京基因型。

携带HLA-G外泌体与肿瘤免疫

人类白细胞抗原G( human leukocyte antigen G,HLA-G)属于非经典HLA I类分子,是机体内一种重要的免疫耐受分子。其表现形式多样化,初始转录产物经选择性剪接后可产生膜结合型与可溶型两种形式。 HLA-G可通过多种途径促进肿瘤细胞侵袭与转移。外泌体是由绝大多数细胞释放的具有脂质双分子层和丰富内容物的纳米级微囊泡结构,作为一种全新的疾病标志物,广泛参与疾病发生及发展。近研究发现,外泌体上表达可溶性HLA-G。外泌体上HLA-G的发现揭示了HLA-G发挥免疫抑制作用,调节肿瘤微环境的另一种途径。本文就携带HLA-G外泌体在肿瘤免疫中的进展作一综述,为肿瘤早期发现与治疗提供新思路。

带状疱疹流行病学研究进展

带状疱疹是由潜伏在神经节的水痘-带状疱疹病毒再激活引起的急性感染性皮肤病。老年人是带状疱疹发病的高危人群，随着我国人口老龄化程度日益加重，带状疱疹研究应受到重视。本文就带状疱疹病原学特征、临床诊断、流行病学特征、疾病负担、危险因素及防控措施的研究进展进行了综述。

铅结合蛋白PbrR的大肠埃希菌外膜展示株构建及体内定植初步研究

目的：构建铅特异性结合蛋白PbrR的大肠埃希菌外膜展示株,并考察其在小鼠体内的定植及外膜展示的重组蛋白在消化道内环境耐受能力。方法全基因合成嵌合蛋白Lpp-OmpA编码序列,将其插入表达载体pET-21a,构建外膜蛋白展示载体pLOA。全基因合成PbrR编码序列,将其插入pLOA,构建PbrR 外膜展示质粒 pLOA-pbrr。转化表达宿主大肠埃希菌 BL21( DE3) pLysS, IPTG诱导表达,15% SDS-PAGE及Western blot分析表达情况。考察PbrR外膜展示株在人工肠液中的铅吸附能力及在人工胃液中的存活能力。 KM小鼠经口连续7 d给予诱导后的展示株,终止染菌后,继续饲喂至30 d,稀释涂平板法检测第7、15、30天小鼠粪便中重组菌含量,免疫印迹法检测第7和第15天小鼠粪便中的重组蛋白残留。结果基于Lpp-OmpA展示载体,成功构建了PbrR的外膜展示质粒。融合蛋白Lpp-OmpA-PbrR-His tag得到了高水平表达,展示株在人工肠液中表现出了显著升高的铅离子吸附能力。展示株表现出了一定的胃酸耐受性,经口染菌后可定植于小鼠肠道,外膜展示的重组融合蛋白对消化道内环境表现出较好的抵抗能力。结论大肠埃希菌PbrR外膜展示株在体外模拟肠道环境中表现出了较强的铅富集能力,体内可定植小鼠消化道,外膜展示蛋白也有较好的消化液耐受能力。本文为进一步基于动物模型的生物吸附选择性驱铅的研究提供基础资料。

沙门菌H抗原的xTAG法鉴定

目的：利用Luminex xTAG技术，建立能高通量鉴别沙门菌H抗原的xTAG悬浮芯片法，用于沙门菌的血清型别鉴定。方法以沙门菌编码H抗原的fliC和fljB基因为目标基因，选取其保守片段设计上游通用引物，选取可变片段设计下游特异性引物；合成时上游引物的5′端用生物素标记，下游引物的5′端连接特定的TAG序列；标本经多重PCR扩增并标记生物素和TAG序列后，与含anti-TAG序列的编码磁珠混合液杂交分型，通过生物素与链霉亲和素-藻红蛋白的反应报告结果。利用建立的xTAG悬浮芯片法鉴定145株沙门菌日常分离株的H抗原，并与传统的血清凝集试验比较。结果31种沙门菌H抗原经多重PCR扩增后，与xTAG磁珠杂交后可鉴别分型，各H抗原间无交叉反应，且重复性良好，与大肠埃希菌、霍乱弧菌、副溶血性弧菌及志贺菌DNA等亦无交叉反应。对145株沙门菌进行H抗原鉴定，与传统的血清凝集试验比较，其敏感度为95.1%，特异度为100%。结论利用xTAG悬浮芯片法鉴定沙门菌H抗原，特异准确，可在4~5 h内完成90多株常见血清型沙门菌的H抗原鉴定。

重组诺如病毒GⅠ.1和GⅡ.4型类病毒颗粒免疫效果初步评价

目的：初步评价基于汉逊酵母表达系统的重组诺如病毒( norovirus,NoV) GⅠ.1和GⅡ.4型VP1蛋白类病毒颗粒( virus-like particles,VLPs)的免疫效果。方法将纯化后VLPs经SDS-PAGE和Western blot分析及鉴定,透射电镜观察颗粒形态,动态光散射仪分析颗粒粒径大小及分布情况。将GⅠ.1和GⅡ.4型VLPs按照不同的免疫方案免疫BALB/c小鼠,组织血清抗原( histo-blood group antigen,HBGA)-VLPs阻断试验检测50%阻断滴度(50% of blocking titer,BT50)。结果纯化后重组GⅠ.1和GⅡ.4型VP1蛋白纯度大于90%,Western blot分析可见特异性条带。 VLPs直径为30~50 nm,界限清晰,颗粒直径与天然病毒颗粒接近,颗粒大小分布均一。免疫小鼠血清中佐剂组BT50明显高于无佐剂组。结论应用含铝佐剂的GⅠ.1和GⅡ.4型VP1 VLPs 免疫小鼠,诱生了较好的HBGA阻断抗体,可作为诺如病毒疫苗的组分抗原。

2004-2015年上海市金山区麻疹流行病学特征分析

目的：分析2004—2015年金山区麻疹流行特征,为完善本区消除麻疹策略提供依据。方法通过国家传染病报告信息管理系统、麻疹监测信息报告管理系统( Measles Surveillance System, MSS)及个案流调资料,收集2004—2015年金山区麻疹报告确诊病例,了解金山区麻疹发病特征。结果2004—2015年金山区共报告麻疹确诊病例225例,平均年发病率2.66/10万,2005年发病率(11.27/10万)高,2011年(0.14/10万)低,发病率总体呈下降趋势(Z=-6.689, P<0.0001)；3~5月病例数占总体的65.33%；流动人口发病率(4.00/10万)高于户籍人口(2.18/10万,χ2=20.467, P<0.0001)；发病年龄呈双峰分布,主要集中在≥20岁和<5岁年龄组；工人和民工、散居儿童、家政和家务及待业、农民和渔民是麻疹高发人群；有明确麻疹免疫史者9例。结论2004—2015年金山区麻疹发病率总体呈下降趋势,发病有时间和人群聚集性,提示金山区麻疹发病处于可防可控状态。建议进一步加强麻疹疫情的监测,重点做好适龄儿童和成人的麻疹常规免疫和查漏补种,特别是流动人口的免疫预防,保持人群高免疫保护水平。

贵州2起麻疹暴发疫情病毒分离株基因特征分析

目的：对2014年11月—2015年3月贵州发生的2起麻疹暴发疫情病毒分离株进行基因特征分析。方法采集暴发麻疹病例咽拭子标本,经Vero/SLAM细胞分离培养,从阳性培养物中提取病毒RNA,用逆转录-聚合酶链反应( RT-PCR)扩增麻疹病毒核蛋白( N)基因,对扩增产物进行测序与分析。结果2起麻疹暴发共分离到11株麻疹病毒野毒株,均为H1基因型中的H1a基因亚型；进化树分析有2个明显的分支。11株暴发麻疹病毒与H1a基因亚型参考株Chin9322的核苷酸和氨基酸遗传距离差异分别为1.1%~1.6%和0.7%~3.4%。推导出氨基酸序列与参考株Chin9322及近年来贵州流行株比较,结果显示有6株在主要位点[47(G-S)、82(S-G)、122(R-K)]发生变异；2株在位点98(P-L)发生变异。结论 H1a基因亚型麻疹病毒是引起2014—2015年贵州省2起麻疹疫情的主要病原,也是贵州省以及全国本土流行的优势基因亚型；且多个不同的H1 a基因亚型病毒传播链在贵州省持续流行。本研究为贵州省麻疹的控制和消除提供了一定的基础资料。

海口地区4037例健康体检女性HPV亚型感染的研究

目的：探讨海口地区女性宫颈上皮23种人乳头瘤病毒( human papillomavirus, HPV)的亚型感染情况,及其与年龄、细胞学结果的关系。方法以2013年7月至2016年8月我院体检中心的4037例当地女性体检者为研究对象(其中1967例有宫颈细胞学诊断结果),采用PCR-反向点杂交法对其宫颈脱落细胞进行HPV分型检测。结果(1)4037例样本的HPV总阳性率为22.15%(894例),致癌型、可能致癌型及非致癌型HPV的检出率分别为16.13%、3.99%及5.55%(分别为651、161及224例),阳性率高的6种基因型依次是HPV52、53、81、51、16及58。(2)致癌型、可能致癌型HPV及部分基因型(HPV18、52、53、66)的检出率均随年龄增长有增高趋势(均P<0.05)。(3) HPV阳性者中多重感染占24.38%(218/894),其中单纯致癌型的多重感染率随年龄增长呈下降趋势,致癌型HPV的感染型别数与年龄负相关(均P<0.05)。(4)细胞学阳性(≥ASC-US)者仅占2.49%(49/1967),8种致癌型与2种可能致癌型 HPV 在≥ASC-US 组中的检出率明显高于阴性(NILM)组(均P<0.05)。结论海口女性HPV感染率较高,感染高峰出现在高龄组；亚型感染有一定的地域特点,感染类型以单一感染为主；人群宫颈癌筛查应联合HPV与细胞学检查以提高有效性。

《中华微生物学和免疫学杂志》2016年36卷关键词索引

说明：(1)本索引关键词按汉语拼音字母顺序排列；(2)冠有阿拉伯数字、西文字母、西文姓氏的关键词，按其后的汉字拼音排序，在汉字相同的情况下，按数字、西文字母顺序先后排列；(3)为了集中同一性质的关键词，采用倒装词，如多糖类，细菌；(4)关键词后括号内数字为起页。

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