蓝藻中生物活性物质的研究概况

蓝藻中含有大量的生物活性物质.文章综述了近20年来从蓝藻中发现的各种生物活性物质以及它们可能的相关应用.

凋亡素——候选抗肿瘤制剂

凋亡素是来自于鸡贫血病毒的一个小分子蛋白,能选择性地诱导肿瘤或转化细胞凋亡,对正常的人和鼠二倍体细胞无影响,而且它诱导的凋亡是不依赖肿瘤抑制基因p53,不受原癌基因bcl-2的抑制,相反过表达的bcl-2对其还有促进作用.对凋亡素及其选择性诱导细胞凋亡机制的深入研究,在肿瘤的预防和治疗中具有重要的理论和实践意义.凋亡素有望发展为一新的抗肿瘤制剂.

采用微生物转化J法合成5-羟基普萘洛尔

采用短刺小克银汉霉菌(Cunninghamella blakes1eana AS 3.153)对普萘洛尔进行了代谢转化研究.液相色谱-多级质谱和核磁分析结果证明,转化液中主要含有5-羟基普萘洛尔转化产物;考察了单羟化物形成的影响因素,发现在pH 6.5、底物浓度0.25%和转化反应持续48 h等条件下,5-羟基普萘洛尔的产率可达76%,为活性药物代谢产物的合成开辟了一条新途径.

重组人HSP70的制备及其提呈抗原作用的研究

研究重组人热休克蛋白70(HSP70)的制备及其提呈抗原的作用.采用不含葡萄糖的M9ZB培养基及终浓度为0.02 mmol/L IPTG和5 mmd/L乳糖诱导带有人HSP70基因表达质粒的工程菌,表达效率达到60%,经DEAE阴离子交换层析柱可获得纯度＞90%的HSP70.该纯化产物可于体外结合肿瘤抗原肽.利用含5%甘油的非变性PAGE分析可以快速鉴定HSP70与肿瘤抗原肽的结合.HSP70-肿瘤抗原肽复合物在体外可以激活淋巴细胞的特异性杀肿瘤功能.提示重组人HSP70可作为提呈抗原肽的制剂用于肿瘤免疫治疗.

麦角固醇突变株啤酒酵母S-97-71的诱变选育及其优化发酵条件的研究

采用He-Ne激光和紫外线对啤酒酵母S12进行了诱变,筛选出一株产麦角固醇较高的突变株S97-71,其产量为2.39%(mg/100g),比出发菌株提高了39.8%.该菌株产麦角固醇佳条件为:培养基碳源8%蔗糖,氮源0.5%(NH4)2SO4,培养温度30℃,起始pH6,发酵时间96h.

抗重组人巨细胞病毒单克隆抗体的制备与鉴定

为了获得抗人巨细胞病毒(HCMV)单克隆抗体(McAb).采用重组HCMV(rhCMV)gp52蛋白片段免疫Balb/c小鼠,将免疫鼠脾细胞与Sp2/0细胞融合,经ELISA法筛选阳性克隆及测定效价,用免疫印迹法进行特异性鉴定.终获得4株(3E9,5A6,4G12,2H2)能稳定分泌高效价抗rhCMV McAb的杂交瘤细胞.其培养上清的ELISA效价分别为:1:2048,1:1024,1:1024,1:512;腹水效价分别为:1×10-7,1×10-7,1×10-6,2×10-6.它们分别识别gp52蛋白上的2个不同的抗原表位,2H2识别gp52蛋白上的一个表位,3e9,5A6和4G12识别另一个表位.该单抗可作为快速诊断CMV感染的特异性抗体.

松茸菌丝体糖蛋白MTsGs1抗癌活性及作用机理的研究

松口蘑菌丝体水提液中活性糖蛋白MTSGS1在体外抗肿瘤试验中具有直接杀伤肿瘤细胞的作用,较低剂量(20～160μg/ml)时即能抑制HeLa细胞增殖,诱导细胞形态异常,细胞发生调亡.MTSGS1是通过抑制细胞周期中S到G2M期的转化阶段抑制HeLa细胞增殖,诱导细胞发生调亡的.MTSGS1动物体内抗肿瘤实验具有显著的抑癌作用,在50mg/(kg.d)时抑癌率达65%,脾重及脾指数显著增高.体内外抗肿瘤实验表明具有较好的抑癌活性.

hG-CsF大肠杆菌分泌表达系统的构建

构建了hG-CSF大肠杆菌融合分泌表达载体pSEGF,利用该系统可直接将hG-CSF融合蛋白分泌到培养基中,重组蛋白具有高度的可溶性,并具生物学活性.在该系统中,外源蛋白N端融合了金黄色葡萄球菌蛋白A IgG结合区,由lac启动子与金黄色葡萄球菌蛋白A启动子控制表达,信号肽选用金黄色葡萄球菌蛋白A的信号肽序列.在融合头与目的蛋白之间设计了蛋白酶识别位点,可用FactorXa蛋白酶特异切割,得到与天然氨基酸序列完全相同的重组hG-CSF蛋白.该系统的构建成功,为简化下游纯化工艺,提高收率带来可能.

苦瓜籽蛋白的分离、纯化及其抗氧化作用的研究

苦瓜籽经粉碎抽提,硫酸铵沉淀,阳离子交换及凝胶柱层析等步骤纯化,得到一种蛋白,SDS-SPAGE和IEF显示为单一条带,相对分子质量28000,PI 8.9～9.0,该蛋白类SOD活性为16.71U/mg pr.

以硅胶和Agarose 6B为载体金属螯合亲和层析分离纯化重组人Cu,Zn-sOD

以层析硅胶Agarose 6B,制备了Cu2+螯合亲和载体,利用合成的Cu2+-IDA-硅胶亲和柱和Cu2+-IDAAgarose 6B亲和柱分离纯化了重组人Cu,Zn-SOD,并比较了这两2亲和载体的纯化效果和性能.硅胶纯化SOD的比活、纯化倍数和回收率分别为7586U/mg@protein、6.5倍和86.7%;而Agarose 6B纯化SOD的比活、纯化倍数和回收率则分别为6223/mg@protein、5.8倍和93.0%.2种亲和载体5次使用后,对SOD的纯化效果不变.

大肠杆菌CaiDE的克隆测序及表达研究

用聚合酶链反应(PCR)从大肠杆菌K12s基因组DNA中扩增大肠杆菌肉碱消旋酶及相关酶基因CaiDE,将其克隆到克隆载体pBluescript SK中,该基因有1500bp,与文献报道相比,有21个核苷酸不同,相应翻译的氨基酸有11个差异.将该基因重组到corEl为复制子,T7为启动子控制下的表达载体pET-24a(+)中,构建表达质粒pETCaiDE,转入大肠杆菌BL21(DE3)中,经1mmol/L异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导后进行SDSPAGE分析,表达蛋白相对分子质量为32000和26000,表达量占菌体总蛋白质的比例分别为10%和5%.

灰树花多糖体内抗肿瘤作用的实验研究

灰树花是近年来开发出来的一种珍稀食药两用真菌.灰树花多糖具有明显的抗肿瘤和免疫调节活性.动物体内实验灰树花发酵菌丝体多糖和发酵液多糖具有显著的抗肿瘤活性.其抑瘤率分别为80.5%和58.4%～63.8%.灰树花多糖还能增加小鼠免疫器官脾脏的重量,增加小鼠腹腔巨噬细胞数量和吞噬功能,提高机体的免疫力.急性毒性实验,灰树花发酵液及发酵多糖对小鼠的大安全量不低于3g/kg,发酵浓缩液对小鼠的大安全剂量不低于30ml/kg.

板蓝根多糖对NF-кB活性的作用

观察板蓝根多糖对核因子-кB(nuclearfactor Kappa B,NF-кB)核结合活性的影响.以内毒素(LPS)刺激J744.a.1小鼠的巨噬细胞株,可诱生出较高的NF-кB与DNA结合活性,分别采用LPS预刺激、LPS后刺激和LPS与板蓝根多糖同时刺激等3种方法对其处理,分离核蛋白,进行NF-кB与DNA结合活性测定,结果用光密度扫描定量分析.板蓝根多糖在3种情况下均可降低LPS刺激所致的NF-кB与DNA的结合活性升高.

明胶包被的琼脂糖微载体及其细胞培养特性

以乳化法制备的琼脂糖凝胶颗粒为基质,用包被法制备了细胞培养微载体.考察了Vero细胞在自制微载体上的培养状况以及微载体的回收性能、消化性能等性质.培养1周后,Vero细胞密度可达到9.93×105cells/ml,与Cvtodex-3的细胞培养性能相近(微载体量为1.2g/L).

文摘和文题

酪氨酸E值计算法测定多酶片的改进

用酪氨酸吸收系数E法测定多酶片中胃蛋白酶与胰蛋白酶的含量.用不同型号的紫外分光光度计测定不同浓度的酪氨酸吸收度,计算出E值,用E值法测定胃蛋白酶和胰蛋白酶的活力单位数U.测定胃蛋白酶时,可采用酪氨酸E1cm1%.275nm=76.6(o.065mol/L盐酸溶液);测定胰蛋白酶时可采用酪氨酸E1cm/1%.275nm=75.3(0.2mol/L盐酸溶液).该法结果准确,精密度高,操作简便,适用胃蛋白酶和胰蛋白酶的活力测定.