药物生物技术杂志
Chinese Journal Of Pharmaceutical Biotechnology 약물생물기술
- 主管单位： 中华人民共和国教育部
- 主办单位： 中国药科大学;中国医药科技出版社;中国药学会
- 影响因子： 0.46
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1005-8915
- 国内刊号： 32-1488/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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响应面法优化肿节风多糖超声提取工艺的研究
采用响应面优化法研究肿节风多糖的超声提取工艺及纯化得到的肿节风多糖( SGP-U)对人肺癌细胞株(NCI-H460)的抑制作用.选择提取时间、超声功率、液料比作为影响因素,以多糖提取率为评价指标,进行单因素考察.在此基础上,应用Box-Behnken中心法则,经响应面(RSM)软件分析得到优提取条件.超声提取多糖经纯化后得到肿节风多糖SGP-U,并采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测其对NCI-H460细胞的抑制作用.在佳优化条件为提取时间46 min、超声功率180W、液料比44 mL/g时,多糖提取率理论值为6.35％,验证值为(6.31±0.09)％.利用响应面优化法可以获得肿节风多糖超声提取的优工艺条件,并且经纯化后的SGP-U对NCI-H460肿瘤细胞具有抑制作用.
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重组细胞色素酶P450 3A4表达和鉴定
细胞色素酶P450是代谢内源性物质和外源性物质的重要的酶,在药物治疗和药物开发领域以及了解潜在的毒性物质和致癌性物质的代谢机制起决定性作用.旨在构建细胞色素酶P450 3A4的表达载体,在大肠杆菌中表达并纯化得到CYP3A4蛋白.用逆转录-聚合酶链反应方法从人肝脏总RNA中得到CYP3A4的cDNA,然后直接插入pMD(R)20-T Vector中,将测序正确的N-末端和C-末端进行修饰.然后利用双酶切插入到表达载体pET-28a-c(+)Vectors,转化到大肠杆菌BL21( DE3)中表达.并通过定点突变的方法获得CYP3A4亚型P467S(CYP3A4 * 19).采用SPSS13.0设计4因素2水平正交实验,对α-ALA(0.5 mmol/L和1 mmol/L)、IPTG (0.5 mmol/L和1 mmol/L)、卡那霉素(50 μg/mL和100 μg/mL)添加浓度及菌的接种密度(接种1％和接种2％)进行优化.并用SPSS13.0对结果进行分析,选择出比较好的组合进行下一步的大规模的诱导表达.经定点突变的方法成功获得了CYP3A4* 19亚型.经IPTG诱导获得CYP3A4蛋白,并通过Western blot验证.用BCA蛋白浓度定量分析试剂盒测定的膜蛋白浓度在65 μg/mL左右,α-ALA、抗生素(卡那霉素)、T7启动子诱导剂IPTG及接种密度高低两水平中对膜蛋白的表达水平的影响没有统计学意义.
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重组肝素酶Ⅰ在大肠杆菌中的表达及纯化
优化肝素裂解酶Ⅰ在大肠杆菌E.coli BL21( DE3 )/pOFX-T7-SL1中的重组表达条件,结果显示接种6h(OD600≈2.5)后加入0.25 mmol/L IPTG,在25℃下表达8h目标蛋白酶活达到高值1.49×105 IU/L.进一步于5L发酵罐中扩大培养,20 h后高酶活达到5.55×105 IU/L.利用亲和层析分离目标蛋白,肝素裂解酶Ⅰ的纯度可达到96％,回收率为37.58％,比酶活达到1.12×103 IU/mg.肝素裂解酶Ⅰ的高效表达为大规模利用酶法制备低分子肝素打下了坚实的基础.
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生物转化法提高虎杖中白藜芦醇的含量
利用微生物产生的糖苷酶将虎杖中的虎杖苷转化为白藜芦醇,可以提高虎杖中白藜芦醇的含量.本文从虎杖的微生物富集物中分离筛选到一株霉菌XW-2,其发酵制备的糖苷酶粗酶液处理虎杖,能显著提高其白藜芦醇含量.依据形态学特征和18 SrDNA序列比对,XW-2菌株鉴定为黑曲霉(Aspergillus niger);产酶培养基的主要成分和pH值经过优化后,发酵制备的糖苷酶粗酶液处理虎杖,虎杖中的白藜芦醇含量达到了9.24 mg/g,是未经处理虎杖中2.27 mg/g的4.1倍.利用黑曲霉发酵制备的糖苷酶粗酶液直接处理虎杖来提高虎杖中白藜芦醇含量,具有方法简单、成本低等优点,在中药现代化中有较高的应用价值.
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临床分离革兰阴性菌产β-内酰胺酶的检测与分析
分析近两年临床分离革兰阴性菌的耐药情况及相应基因型分布特征,为指导临床抗感染治疗提供可靠依据.采用肉汤稀释法和K-B纸片扩散法分别对超广谱β-内酰胺酶(ESBL)和头孢菌素酶(AmpC)进行表型初筛;采用肉汤稀释法、头孢西丁三维试验法对ESBL和AmpC进行表型确证;采用EDTA协同试验对金属酶(MBL)进行表型筛选.并用PCR方法对3种酶型的阳性菌株进行基因检测,从而对β-内酰胺酶基因进行确证.表型筛选中ESBL、AmpC和MBL阳性率分别为25.45％ (28/110),18.01％ (29/161)和45.57％( 36/79);经基因型确证试验终得到ESBL、AmpC和MBL阳性率分别为25.45％( 28/110),15.53％( 25/161)和37.97％( 30/79).临床分离菌中产β-内酰胺酶菌株数量只增未减,应加强对β-内酰胺酶的检测和对相关感染疾病的合理治疗.
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全局转录工程法构建产S-腺苷蛋氨酸重组酿酒酵母的研究
利用全局转录工程(global transcription machinery engineering,gTME)方法对酿酒酵母RNA聚合酶Ⅱ中的转录因子SPT15和TAF25编码的基因进行克隆并结合易错PCR随机突变,将SPT15和TAF25的易错PCR产物连接改造的pYES2.0表达载体.并用醋酸锂转化的方法转化酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae CGMCC 2846中,研究了SPT15和TAF25的定向进化对酿酒酵母产S-腺苷甲硫氨酸(S-adenosylmethionine,SAM)的影响.经过筛选分别获得了重组酿酒酵母菌株spt15-81和taf25-36.对其发酵性状分别进行了初步研究,在28℃、200 r/min条件下,250 mL摇瓶(50 mL O-medium)发酵48 h时,SAM的产量分别比对照菌株提高了2.0倍和1.8倍.由此表明,SPT15和TAF25是对酿酒酵母进行代谢工程改造的重要转录因子
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初发2型糖尿病患者的HOMA-β特点及其影响因素
探讨我院60例初发2型糖尿病患者的不同血糖状态下的胰岛功能特点及其影响因素.对初发2型糖尿病患者治疗前进行馒头餐糖耐量试验和胰岛素释放试验,选取部分血糖控制好后的患者再次复查空腹血糖和胰岛素,并计算用于评价个体的胰岛β细胞功能的指标HOMA-β,分析其相关影响因素;将患者分成糖化血红蛋白(HbA1c)＜10％组和HbA1c≥10％组,了解两组之间的胰岛功能差异.HbA1c≥10％组的患者的HOMA-β、空腹胰岛素( FINS)和2h胰岛素(2hINS)值低于HbA1C＜10％组;相关分析提示HOMA-β与空腹血糖(FBG)和HbA1 c呈负相关,与FINS和2hINS呈正相关;以HOMA-β为因变量,以其他变量为自变量的多元逐步回归分析显示HOMA-β与FBG和HbA1c呈负相关,与FINS呈正相关.部分血糖控制后患者的HOMA-β明显较治疗前好转,与高糖毒性有关.初发2型糖尿病患者的HOMA-β值受损,并与FBG、2hPBG、FINS、2hINS、HbA1c相关;治疗后HOMA-β好转表明高糖毒性存在,提示胰岛素释放试验宜在血糖控制后进行,以避免假象.
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幽门螺杆菌多表位肽在毕赤酵母中的分泌表达
构建分泌表达幽门螺杆菌多表位肽CTB-UE的毕赤酵母.以原核表达载体pET-22b-CTB-UE为模板,通过PCR扩增得到融合His-tag的ctb-ue基因序列,将其插入酵母表达载体pPIC9K,得到重组表达载体pPIC9K-CTB-UE.重组表达载体pPIC9K-CTB-UE经内切酶SalⅠ线性化后,电击转化进毕赤酵母GS115,通过组氨酸缺陷性MD平板筛选重组菌株,G418抗性筛选多拷贝转化子,阳性转化子经PCR鉴定,摇瓶发酵表达,取上清经过超滤浓缩,Ni-NTP亲和层析纯化,透析脱盐,SDS-PAGE检测,Western blot验证.结果获得了整合有ctb-ue基因的毕赤酵母,诱导后分泌表达的CTB-UE蛋白能够与His-tag抗体发生特异性反应.成功构建了分泌型毕赤酵母GS115 (pPIC9K-CTB-UE),能分泌表达幽门螺杆菌多表位肽CTB-UE.
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降糖多肽CW7213的合成制备研究
CW7213是胰高血糖素样肽-1(GLP-1)类似物,具有多种生理功能:能够降低患者体重,更平稳地控制血糖水平,不会产生低血糖.该文主要对CW7213合成方法进行研究:以Fmoc-Gly-WANG树脂为起始原料,以HBTU、TBTU/HOBt为缩合剂,对长肽的合成方法和活性较低氨基酸的缩合方法进行优化.采用制备型反相高效液相色谱仪优化了CW7213的纯化方法.采用HPLC对产品进行了纯度分析,采用MS测定了其分子量.得到的CW7213纯度高达98.8％,总收率为21.3％.该方法简单易行,所得产品纯度和收率较高,能够满足CW7213药效学和毒理研究的需要.
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应用疏水层析法纯化hCG单克隆抗体
建立一种良好的纯化hCG单克隆抗体方法.将hCG单克隆抗体的实验小鼠腹水经离心、过滤预处理后,用疏水层析法进行纯化,并探讨了洗脱方式、不同上样缓冲液离子强度、洗脱体积对抗体纯度的影响.以20 mmol/mL磷酸缓冲液+1.5 mmol/L硫酸铵为上样缓冲液,15 CV的洗脱体积进行洗脱,单抗纯度为70％,回收率20％.纯化后的单克隆抗体的生物学活性没有下降.本研究建立的疏水层析法纯化hCG单克隆抗体的方法,操作简便、快速而且效果良好.
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利用重组大肠杆菌合成莽草酸的研究进展
莽草酸是芳香族氨基酸合成途径中的一种重要中间代谢产物.近年来,莽草酸作为临床上对抗禽流感的惟一有效药物达菲的合成前体而备受关注.通过改造大肠杆菌代谢通路使之能大量积累莽草酸是研究的热点之一.文章综述了莽草酸在重组大肠杆菌中生物合成的途径,并分析了莽草酸合成过程中的关键基因的改造及其对莽草酸积累的影响,后还讨论了减少莽草酸产生菌培养过程中副产物产成的若干措施.
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双精氨酸转运(Tat)系统及其在大肠杆菌分泌表达重组蛋白中的应用
常见的分泌途径(Sec途径)是细菌中蛋白分泌跨膜转运的主要途径,而双精氨酸转运(Tat)则是另外一个蛋白分泌跨膜转运系统,该系统的特征是在分泌蛋白的信号肽中含有一个高度保守的双精氨酸基序.与Sec途径相比,Tat系统的显著优点是它只分泌已正确折叠的蛋白,而未正确折叠的蛋白则不能通过该系统分泌,这样就保证了分泌产物在结构上的正确性.因此,研究利用Tat信号肽牵引重组蛋白通过Tat系统进行分泌跨膜转运在重组蛋白的表达方面具有很好的应用前景.
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基于poly(N-isopropylacrylamide)的温度敏感性胶束作为抗肿瘤药物载体的研究进展
PNIPAAm广泛应用于温敏敏感性胶束的构建中.文章总结了近年来用于肿瘤药物传递的基于PNIPAAm温敏材料的胶束的结构设计,合成方法以及应用方面的新研究进展.
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5-氟尿嘧啶及其衍生物的研究进展
尿嘧啶的氟化类似物5-FU是一种抗代谢物,它对很多实体肿瘤有较好活性.5-FU抗肿瘤活性是通过干扰DNA合成和mRNA翻译来实现的.然而,由于5-FU具有非特异性细胞毒性,故采用5-FU治疗的患者表现出多种副作用.为了改善这些缺点,研究者们对5-FU的结构展开了大量的修饰工作.文章综述了5-FU的作用机理以及药代动力学情况,介绍了5-FU的几种新型修饰衍生物.后,对提高5-FU衍生物生物利用度的研究进展进行了综述,为5-FU衍生药物的合理使用提供了理论依据.
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叶酸受体α与卵巢肿瘤
卵巢肿瘤的死亡率为妇科肿瘤之首,积极探索早期卵巢癌的筛查方法和新型治疗药物,对降低死亡率具有重要意义.叶酸受体α(FRα),对叶酸具有高度亲和性.在生理情况下,叶酸受体α仅低度表达于少数正常组织细胞,而在多种人类上皮源性肿瘤中,尤其是卵巢肿瘤中,都可以检测到高水平表达的叶酸受体α.卵巢上皮癌中有90％以上可见叶酸受体α的高表达,其在卵巢肿瘤中的表达水平可高于正常10～ 100倍.更为重要的是,叶酸受体α在早期卵巢肿瘤中有很高的阳性率.叶酸受体α为一种极具潜力的卵巢癌相关性的肿瘤抗原,可以作为卵巢肿瘤早期诊断标志物,以及卵巢肿瘤被动免疫治疗的靶点.
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朊病毒蛋白prion与二价铜离子相互作用的研究进展
传染性海绵状脑病是一类致死性的中枢神经系统退行性疾病,其发病机制与prion蛋白构象的错误折叠相关.Prion蛋白对二价铜离子具有极强的选择性.文章综述了二价铜离子与prpc的结合模式、结合力以及铜离子在prion蛋白错误折叠过程中可能发挥的作用.
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人类CCR5三维结构的同源模建
趋化因子受体( Chemokine receptor)是GPCR(G-protein coupled receptors)的超级家族成员,在各种免疫反应中有着重要的作用.CCR5是CC亚族趋化因子RANTES,MIP-1a,和MIP-1b的特异性受体.该文采用同源模建的方法,并通过胞外环区优化,动力学优化和能量小化的方法初步得到了一个较为合理的CCR5的结构模型.说明该文采用的模建流程方法,在跨膜蛋白的同源模建中有着重要的作用,能给实际工作带来很好的指导作用.
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计算机模拟重组人CD137L蛋白与其鼠源受体的相互作用研究
研究重组人协同刺激分子CD137配体(rhCD137L)蛋白与其鼠源受体CD137( mCD137)发生相互作用的结构基础.分别以小鼠核因子受体激活剂RANK蛋白和人CD137L的X-射线晶体结构为模板,应用Discovery Studio (DS) Modeling 2.5软件同源模建mCD137和rhCD137L的三维结构模型;进行能量优化后,采用Ramachandran图和Profiles 3D对模建结构进行合理性评估;通过ZDOCK模块进行分子对接,预测rhCD137L-mCD137的候选结合结构域.结果表明,rhCD137L中存在多个可与mCD137发生相互作用的候选结合位点,其中包括D80-A82、L84、以及参与其与人源受体CD137发生相互作用的A'B Loop环(Q98-T130)和Q230.与已知人源CD137L-CD137间的相互作用不同,rhCD137L还与mCD137形成了2个氢键.CD137L虽然可以与鼠源受体发生相互作用,但与人源受体的结合模式并不完全相同.该结果为今后深入研究CD137通路发挥协同刺激作用的信号体系以及基于该信号途径新型分子靶向药物的设计提供了理论基础.
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mHSP70分子中免疫刺激肽段与CD40对接复合物的结构模拟
微生物体内的70 ku热休克蛋白407-426片段可以有效刺激体内CD40+抗原递呈细胞如DC,单核细胞等的成熟,可有效刺激体内产生IL12和TNFα,被认为是CD40L的替代配体,因此对免疫系统有着重要的意义.同时,该片段还可以有效结合外源蛋白分子,因此又是天然的递呈抗原的载体佐剂.该文章以开发新型载体佐剂为目的,使用Discovery studio软件分析经过单片段与两次串联的该肽段结构并预测了它们与CD40分子进行对接后的复合物.经过分析其关键结合位点,阐明了该肽段与CD40分子间参与相互作用的残基,并发现经过2次串联的肽段确实可以比单片段更有效的与CD40进行相互作用.因此,实验结果可为新型肿瘤疫苗的设计提供理论依据.
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甲状旁腺素受体激动剂3D药效团模型的构建与应用
甲状旁腺素能增加人体骨密度和骨强度,是治疗骨质疏松症有效的多肽类药物之一,但至今缺乏具有相应功能的小分子药物.根据计算机辅助药物设计原理,采用Discovery Studi0 2.5软件包,以14个甲状旁腺素(PTH)受体激动剂及其突变类似物为训练集,利用活性构象限制的方法,采用HypoGen算法构建出具有活性预测功能的3D药效团模型.其中好的药效团模型含有1个阳离子基团(PI),3个疏水中心(H)和1个氢键供体(HBD).同时应用该模型成功预测出16个测试集分子的活性,经交叉验证表明该模型达到95％的置信水平,具有良好的活性预测能力.该药效团可以用于后续抗骨质疏松症小分子药物的筛选,指导相应的药物优化,同时所采用的限制构象的药效团生产方法为基于多肽的药物设计提供了一个新的思路.
| 年 | 期数 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2001 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2000 | 01 02 03 04 |
| 1999 | 02 03 04 |
