携带人肝细胞生长因子基因重组腺病毒的构建与制备

构建一种携带人肝细胞生长因子基因的重组腺病毒(Ad-HGF),并对其进行扩增、纯化与质量检测.首先构建携带人肝细胞生长因子基因的穿梭质粒pXCJL-CMV/pA-HGF,然后用LipofectAMIN介导该质粒和含有E1、E3区及包装信号区缺失的复制缺陷型5型腺病毒基因组的质粒GT4050共转染293细胞,采用细胞内质粒DNA同源重组法构建重组腺病毒(Ad-HGF).并以噬斑分析法筛选单克隆重组腺病毒,PCR法鉴定阳性重组腺病毒,氯化铯密度梯度离心法纯化病毒,紫外分光光度仪测定病毒颗粒数及纯度,快速CPE分析、噬斑分析法测定病毒感染滴度(pfu/ml).采用敏感细胞病变法检测有复制能力的腺病毒.结果成功构建了重组腺病毒Ad-HGF,制备的病毒纯度好、滴度高,其效价比小于1:100,并且未检测到有复制能力的腺病毒存在.研究构建制备的重组腺病毒Ad-HGF具有潜在的实际应用价值.

蜂胶抗肿瘤活性成分的研究

采用溶媒萃取法和硅胶柱层析法从蜂胶中获得了两种具有抗肿瘤活性的组分PPL-CC和PPL-SE,体外抗肿瘤细胞人肝癌细胞(HepG2)和人口腔癌细胞(KB)试验表明,浓度为50μg/ml的PPl-CC和PPL-SE对HepG2细胞的抑制率分别达87.4%和35.1%,IC50分别为17.5 μg/ml和1 151.2μg/ml;对KB细胞的抑制率分别为84.9%和59.8%,IC50分别为21.0 μg/m1和33.6μg/ml.结果表明,蜂胶可作为抗肿瘤活性物质的天然来源.

肺炎球菌外膜蛋白A的分离纯化及免疫原性

培养肺炎球菌FY06,采用表面活性剂从菌泥抽提外膜蛋白,依次用硫酸铵盐析法和DEAE-纤维素离子交换法对肺炎球菌外膜蛋白进行分离和纯化.免疫原性实验表明:所制备的外膜蛋白A具有优良的免疫原性,对5种血清型肺炎球菌均有较广泛的交叉免疫效果,可作为新一代的肺炎球菌疫苗成分.

我国境内几种红豆杉的RAPD分析和染色体鉴定

用随机扩增多态性方法对6个红豆杉品种进行了基因组DNA多态性分析,从64条引物中共筛选出9个引物,获得RAPD谱带96条,其中多态条带(PPB)比率接近44.8%.D=0.60时,可将供试材料分为2类:第一类是西藏红豆杉,第二类包括其它5种红豆杉;D=0.50时,可将供试材料分为3类:第一类是西藏红豆杉,第二类是曼地亚红豆杉,第三类包括其它4种红豆杉;D=0.44时,进一步细分了其它4种红豆杉间的遗传差异,将东北红豆杉与其它3种区分开来.聚类分析结果表明:6个不同的红豆杉种间,中国红豆杉与南方红豆杉的亲缘关系近,西藏红豆杉与曼地亚红豆杉的亲缘关系远.几种红豆杉在染色体数目上并无差异.

壳聚糖固定谷氨酸脱羧酶的研究

以壳聚糖为载体,戊二醛为交联剂,制备固定化谷氨酸脱羧酶(GDC),研究固定化反应中pH值、戊二醛浓度、给酶量以及交联反应搅拌时间对固定化GDC活力的影响以及GDC固定化酶和自由酶的酶学特性.实验结果表明:壳聚糖固定化GDC的适pH4.4,适温度55℃,与自由酶相比,具有较好的热稳定性、贮存稳定性及可操作性;在米胚芽生产制备γ-氨基丁酸中具有实用价值.

牛肝酯酶催化紫杉醇侧链手性合成的研究

采用牛肝酯酶拆分紫杉醇侧链合成中生成的对映异构体化合物的新方法.牛肝酯酶催化拆分顺-3-乙酰氧基-4-苯基氮杂环丁酮,得到(S)-(-)-醇和标的产物(R)-(+)-乙酸酯.所得(R)-(+)-乙酸酯反应产率≥97%,光学纯度≥99.6%.结论:牛肝酯酶可以作为手性合成的催化剂.

短棒状杆菌菌体细胞与细胞代谢产物生物学活性的比较

欲提高短棒状杆菌制剂的临床应用效果,为该产品进一步精制奠定基础,进行了短棒状杆菌有效成份的研究.在适宜的培养基中,以厌氧法培养短棒状杆菌,分别收获菌体及培养上清,做生物学活性检测.结果显示,菌体细胞内脾激活和抑瘤试验生物学活性显著,细胞代谢产物无生物学活性.实验证实,短棒状杆菌的有效成份在菌体细胞内,与细胞代谢产物无关.

黄芪甲苷合成差异基因克隆和鉴定

黄芪甲苷(AstragalosideⅣ,ASI)是黄芪中的有效成分之一,具有抗炎,改善心肌,脑缺血,促淋巴细胞繁殖,促抗体生成等作用.但由于其在黄芪中含量低,以及缺乏必要的化学合成中间体,限制了其临床药用,通过基因工程方法提高其表达量将有助于其应用.本文应用了差减杂交方法(SSH)结合斑点杂交,从黄芪甲苷合成差异株系中分离鉴定了19个黄芪甲苷合成差异基因片断,其中7个具有同源序列,同源性约80%以上,而另外12个未发现同源序列,推测可能是新基因片断或者是全长cDNA的3'末端序列.

重组人血管抑素(rhAGN)包涵体变性与复性初探

在优化的培养条件下,进行rhAGN 5.L罐发酵,菌体干重由原摇瓶发酵的3.02 g/L增加到8.06 g/L,表达量依然稳定在35%;对所产生的包涵体进行溶解变性研究,确定较佳变性缓冲液组成为8 mo1/L尿素,50 mmol/LTris-HCl,20mmol/LDTT,pH值8.0;凝胶过滤色谱复性效果相对较好,蛋白浓度4.28μg/ml(IC50)时对HEMC细胞的抑制活性达50.1%.

薄荷诱导株系田间农艺性状鉴定及其挥发油含量测定

在组织培养条件下用秋水仙碱诱变剂和60Co-γ射线辐照诱导获得了16个薄荷(Mentha haplocalyx Briq.)的变异株系,对各株系进行了农艺性状的鉴定,同时测定了各株系的挥发油含量,并采用毛细管气相色谱法测定了挥发油中薄荷醇的含量.结果表明:在供试的16个薄荷株系中有8个株系的单株产量高于对照株系,有10个株系挥发油含量高于对照株系,有12个株系挥发油中的薄荷醇含量高于对照株系.这一结果为今后进一步选育出产量高,且挥发油含量高,品质好的优良薄荷品种奠定了基础.

动植物细胞培养生物反应器的研究进展

文章综合介绍了国内外细胞培养生物反应器的研究现状.在此基础上,作者提出了未来动植物细胞培养生物反应器的发展方向.

药用真菌桑黄的研究现状

文章综述了药用真菌桑黄的来源分布及其化学成分、药理作用、人工发酵培养方面的研究现状.

现代生化技术在中药有效成分提取中的应用

中药现代化是我国重点发展的新技术,中药有效成分的提取是其重要组成部分,现代生化技术使得中药有效成分的提取更高效和简便.文章综述了现代生化技术在中药有效成分提取中的应用.

非病毒载体在肿瘤基因治疗领域的研究进展

随着肿瘤基因治疗领域的研究进展,临床应用逐渐增多.载体是癌症基因治疗的主要难题.当前广泛使用的病毒载体存在的安全问题越来越受到人们的重视,已经有多种非病毒载体用于肿瘤基因治疗,如:裸DNA直接注射、阳离子脂质、阳离子聚合物.研究非病毒载体的目标是:它能像靶向的合成病毒载体那样对肿瘤组织表现出高度特异性;具有很高的转染效率;潜在的安全性问题能够被控制.

防御素的研究及应用

防御素是一组小分子阳离子抗菌活性肽,富含精氨酸和二硫键,广泛分布于动物、植物和昆虫体内.由于具有广谱抗微生物的特性,防御素在医药、食品和植物转基因工程上将发挥重要作用.文章对不同来源防御素的分子特征、抗菌机制以及应用前景进行综述.

现代技术在莪术研究中的应用

莪术在提取、药理学研究、质量控制、种属鉴定中广泛运用了分子生物学技术等现代技术,文章介绍了目前莪术的新研究技术.

文摘和文题

牛视网膜毛细血管内皮细胞的选择性分离培养方法

利用胰蛋白酶对牛视网膜内皮细胞和周皮细胞消化存在时间差的特点,进行细胞的选择性分离培养.经过3代分离、传代培养,经采用Ⅷ因子抗体,SP法进行染色并在显微镜下观察鉴定,证明可以获得纯度＞98%、并能连续传代的牛视网膜毛细血管内皮细胞.该方法是较简便易行的牛视网膜内皮细胞选择性分离培养方法.