药物生物技术杂志
Chinese Journal Of Pharmaceutical Biotechnology 약물생물기술
- 主管单位： 中华人民共和国教育部
- 主办单位： 中国药科大学;中国医药科技出版社;中国药学会
- 影响因子： 0.46
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1005-8915
- 国内刊号： 32-1488/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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促血小板生成素模拟肽二联体连接肽的筛选
比较不同Linker连接的促血小板生成素模拟肽二联体(dTMP)的生物活性,筛选高生物活性dTMP的Linker设计.全基因合成4个dTMP基因,将片段克隆到pGEX-4T-1载体,构建重组表达载体pGEX-4T-1/dT-MP,筛选阳性目的克隆,转化大肠杆菌BL21(DE3),0.1 mmol/L IPTG诱导表达融合蛋白.超声细胞破碎仪破菌,Glutathione Sepharose 4 Fast Flow亲和层析获得GST-dTMP融合蛋白,凝血酶酶切,再次亲和层析除去GST标签,收集目的dTMP肽片段,双荧光素酶法检测各目的肽片段的活性.通过实验,正确构建了4个不同的pGEX-4T-1/dTMP表达载体,经表达纯化得到了GST-dTMP融合蛋白,酶切后再次亲和层析纯化,并获得了相对分子质量与理论值3 920,3 640,3 610,3 430相符的4个dTMP肽片段,它们的活性大小依次为:dTMP-Linker3＞ dTMP-Linker4＞dTMP-Linker1＞dTMP-Linker2.实验发现,不同的连接肽显著影响dTMP肽片段的生物活性,该实验成功筛选到了活性较高的连接肽Linker3.
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N-CWS-PG的分离鉴定及抑瘤实验研究
为探索红色诺卡氏菌细胞壁骨架中肽聚糖成分的抑瘤作用,通过超声波法碎红色诺卡氏菌细胞获得细胞壁,获得的细胞壁经过酶解、有机溶剂提取去除色素,得到细胞壁骨架(N-CWS),N-CWS再经去脂、酸解处理得到肽聚糖(N-CWS-PG).对实验得到的提取物进行包括溶菌酶酶解处理、氨基酸分析、蛋白质含量的测定、脂类含量的测定、总糖含量的测定、氨基己糖的测定等化学鉴定.用实验提取的N-CWS-PG进行血清体外抑瘤试验,利用CCK-8法检测抑制效果;同时研究实验提取的N-CWS-PG对实体瘤小鼠的肿瘤抑制效果.实验结果表明;溶菌酶溶解实验和氨基酸分析结果证实所获取的目标物为肽聚糖,化学成分的测定结果表明其纯度达到97.20％;与对照组比较,血清学实验表明N-CWS-PG对S180细胞24,48 h的抑制率分别为9.72％,18.01％,实体瘤的抑制率为30.0％,实验结果证实N-CWS-PG具有抑制肿瘤细胞增殖的作用.
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椭圆叶花锚遗传多样性的ISSR分析
研究不同野生居群藏药“蒂达”主要基原植物椭圆叶花锚的遗传多样性.对17个野生居群的椭圆叶花锚及其近缘种样本进行ISSR-PCR扩增,用POPGENE 1.32软件分析并计算Nei's遗传距离,用NTSYS软件分析遗传距离及相似系数,UPGMA方法聚类,构建亲缘关系系统图.从30条ISSR引物中筛选出11个用于多态性分析,11条引物共检测到97个位点,多态性位点百分率为100％.遗传相似系数变化范围0.299 4～0.991 2.聚类结果显示,来源于同一地区不同居群的椭圆叶花锚亲缘关系较近,并与其近缘种具有显著差异.本实验从分子水平为椭圆叶花锚及其近缘种药用植物的鉴定和开发提供了遗传基础.
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乙型副伤寒多糖蛋白结合疫苗培养工艺及脂多糖提取工艺摸索及优化
对乙型副伤寒多糖蛋白结合疫苗的细菌培养工艺及脂多糖提取工艺进行摸索及优化.根据细菌培养液pH值的变化情况,采用间歇式流加补加葡萄糖代替连续流加补加葡萄糖的方式,利用10 L和100L半自动生物反应器对乙型副伤寒沙门氏菌进行培养,同时对细菌灭活工艺改进及优化;在乙型副伤寒脂多糖提取过程中,探讨了热酚法提取脂多糖菌悬液制备方法、苯酚终浓度和苯酚水混合溶液的pH值及25％乙醇沉淀时所加入无水NaAc浓度等工艺提取条件,对脂多糖的收率、核酸含量、蛋白含量的影响.结果:采用间歇式流加葡萄糖代替连续流加的方式,对乙型副伤寒沙门氏菌进行培养,时间可缩短3～4h,菌体收量高;改变细菌灭活时间lh为6h的方法,可以降低脂多糖的核酸含量到l4％;采用研磨菌体制备菌悬液、乙型副伤寒脂多糖热酚法使用的苯酚浓度从90％提高到95％、菌悬液和苯酚混合溶液的pH值控制在6.8,25％乙醇沉淀时加入无水NaAc终浓度为0.28 mol/L,脂多糖收率能够达到6.17％,核酸含量可控制在12％以下,蛋白含量可控制在1.2％以下.建立了稳定的乙型副伤寒多糖结合疫苗细菌培养及脂多糖提取工艺.
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环孢素A抑制大鼠腹主动脉球囊损伤后内膜增生
观察环孢素A防止血管内膜增生作用与单核细胞趋化蛋白-1(Monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)水平的关系.雄性SD大鼠36只,随机分为假手术组(n=12)、手术组(n=12)、干预组(n=12).术后30 d取实验材料,血管组织作HE染色;荧光定量PCR技术检测损伤血管壁钙调神经磷酸酶(Calcineurin,CaN)、活化T细胞核因子3(Nuclear factor of activated T cell,NFATc3)、MCP-1在mRNA水平上的表达变化;ELISA法测定血浆MCP-1在蛋白水平上的表达变化.假手术组内膜无增生,手术组血管壁内膜明显增生,干预组内膜亦出现增生,但内膜增生、内膜/中膜厚度与手术组相比较明显减轻(P＜0.05).干预组与手术组相比较,血管壁组织CaN、NFATc3、MCP-1 mRNA表达明显减少(P＜0.05).血浆MCP-1水平干预组与手术组相比明显降低(P＜0.05).环孢素A通过抑制CaN-NFATc信号通路减轻受损血管壁以及血浆的炎症因子MCP-1水平,从而减轻球囊损伤术后动脉内膜增生.
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突变型人源乙酰胆碱神经受体α7的构建表达纯化
为增强神经型乙酰胆碱受体(nAChR)蛋白的稳定性和表达量,以满足晶体学研究的要求.根据同源蛋白的氨基酸序列比对结果,设计了胞内5个切除位点,设计合适的引物,利用分子克隆的方法扩增出相应的改造后cDNA序列并构建到BacMam表达载体,后利用BacMam杆状病毒表达系统构建表达突变型重组杆状病毒,并转染到HEK293F哺乳动物细胞中,诱导表达重组蛋白.采用免疫印迹法小规模表达检测后,选取合适突变型进行表达,并利用MBP亲和层析和分子排阻法进行两步纯化后,通过电子显微镜负染技术检测纯化后的蛋白质量.结果显示,成功克隆并表达了乙酰胆碱神经受体α7的5种不同的胞内区域突变型,且蛋白表达量与野生型相比均有所提高,其中P5突变型表达量高.经表达纯化后,能够获得毫克级别的乙酰胆碱受体蛋白,并且电子显微镜观察的结果表明蛋白呈现出相对稳定的五聚体形貌,大小尺寸与理论相符.
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老鼠簕治疗中毒性肝纤维化机制研究
通过动物实验分析老鼠簕对于中毒性肝纤维化治疗的效果及作用机制;选择48只健康雄性Wistar大鼠,通过皮下注射四氯化碳制作中毒性肝纤维化模型,经随机数字表法,分为观察组24只,对照组24只,观察组大鼠给予老鼠簕乙醇浸膏溶液治疗,对照组大鼠给予等容量生理盐水,观察两组大鼠一般生化指标、肝纤维化指标、氧化指标及肝脏病理学评分情况;观察组大鼠治疗后TP、ALB、SOD同对照组大鼠比较,明显较高(P＜0.05);观察组大鼠治疗后ALT、AST、LN、HA及MDA同对照组大鼠比较,明显较低(P＜0.05);观察组大鼠治疗4w后肝脏病理学评分同对照组大鼠比较,均明显较低(P＜0.05);老鼠簕应用于中毒性肝纤维化治疗时,可有效改善血清指标,减轻症状,其主要作用机制同抗脂质过氧化损伤有关.
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浙贝母鳞茎总RNA提取方法研究及质量评价
筛选出适合提取浙贝母鳞茎总RNA的方法,为浙贝母功能基因分析奠定良好的基础.采用TRIzon法、TIANGEN DP432、OMEGA R6827和全式金ER501等4种试剂盒法提取浙贝母鳞茎总RNA,并通过分光光度计、琼脂糖凝胶电泳、RT-PCR及qPCR法对这4种方法提取的总RNA的质量进行评价.4种方法均能提取出总RNA,其中TRIzon法提取的总RNA杂质含量较高;以其为模版进行RT-PCR分析时均可得到清晰的单一目的条带;基因表达分析显示,HMGR基因表达量OMEGA R6827＞ TRIzon法＞TIANGEN DP432＞全式金ER501,说明OMEGA R6827试剂盒提取的总RNA较为完整,降解程度低.TIANGEN DP432、OMEGA R6827和全式金ER501均适宜于提取浙贝母鳞茎总RNA,且适用于RT-PCR实验,但进行基因表达分析时,OMEGA R6827试剂盒较为合适.
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迟缓爱德华氏菌ETA1-L-GAPDH融合蛋白在大肠杆菌中的表达
迟缓爱德华氏菌是水产养殖中危害性极大的一种致病菌,该菌的两种外膜蛋白GAPDH和ETA1被证明可以独立产生免疫原性,具有开发成疫苗的潜力.文章将这两个蛋白融合表达以期增强疫苗的保护作用.采用PCR方法扩增出融合有gapdh基因和eta1基因的融合基因 rh,将该目的基因与表达载体pET-30a(+)连接,转入大肠杆菌BL21 (DE3)菌株中表达融合蛋白,采用SDS-PAGE检测融合蛋白的表达,并用镍柱和葡聚糖凝胶Sephadex G-100对融合蛋白进行了纯化,后通过Western-blot对纯化的融合蛋白进行了验证.结果表明融合蛋白主要以包涵体形式表达,在破碎后的菌体沉淀中该蛋白含量高达73.6％,经过纯化后的融合蛋白纯度高达90％,并通过Western-blot得到了验证.上述结果表明表达载体构建成功,目的蛋白在大肠杆菌中大量表达.
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珍珠提取物的美白功效研究
利用B16黑色素瘤细胞生长实验研究珍珠提取物对黑色素分泌的影响,为珍珠提取物在美白领域提供理论依据.提取以珍珠多肽为主的珍珠提取物,将其添加到培养有B16黑色瘤细胞培养液中,检测其对细胞生长、黑色素生成以及对酪氨酸酶活性影响等的3方面指标,研究珍珠提取物美白护肤的功效.在影响细胞存活率实验中,40 mg/L浓度的珍珠提取物作用下,细胞存活率达(88.83 ±2.69)％,与10 mg/L浓度的熊果苷作用相当,且高于10 mg/L浓度果酸作用下的细胞存活率.在抑制黑色素方面,珍珠提取物较熊果苷能更显著抑制酪氨酸酶活性,珍珠提取物半抑制量为80 mg/L.珍珠提取物具有较高的安全性,能够在保持细胞生长的前提下抑制黑色素的生长.
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姜黄素pH敏感脂质体的制备及其理化性质评价
以磷脂酰乙醇胺(PE)、胆固醇(CHOL)、琥珀酸胆固醇单酯(CHEMS)为载体材料,采用薄膜分散法制备载姜黄素pH敏感脂质体(Cur-PSL),通过正交实验筛选出优处方.对所制得脂质体在不同pH值环境下的理化性质如粒径分布、Zeta电位、外观形态及体外释放进行了研究.结果表明制备的Cur-PSL EE％为(92.6±2.1)％,DL％为(2.77±0.06)％,平均粒径为102.4 nm,Zeta电位为-32.8 mV,且该制剂具备显著的缓释性和pH敏感性.
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中药制剂常用辅料对神经氨酸酶活性的影响
为探讨中药制剂过程常用辅料对神经氨酸酶(Neuraminidase,NA)活性的影响,避免中药制剂对抗病毒物质药效的干扰,为生产工艺中各种辅料的使用提供借鉴依据.分别将各种受试物对NA进行干预,研究各类物质对NA活性的影响.各类辅料对神经氨酸酶活性作用不同,其中,乙酸、聚山梨酯-20、二甲基亚砜和聚乙二醇-4000对NA活性具有较强抑制作用,IC50均小于5％;Trition-X-100和乙酸乙酯较以上物质抑制作用弱,IC50分别为26.7％,30.7％;乙醇与正丁醇的抑制作用较弱,难以计算其IC50值,而聚乙二醇-6000则呈现出对NA活性一定的激活作用等.不同制剂辅料对NA活性影响不同,在抗流感药物的生产工艺中应高度重视各类辅料的合理应用,严格规范用量,设计合理工艺,尽量减少各类辅料在药物应用和再研究过程中对药效的干扰.
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盐酸去亚甲基小檗碱含量测定的HPLC分析方法建立及应用
该研究建立了盐酸去亚甲基小檗碱含量测定的HPLC分析方法.采用Agilent ZORBAX SB-C18(4.6 mm× 150 mm,5μm)色谱柱,以50 mmol/L磷酸二氢钾缓冲液(磷酸调节pH值至3.0)为流动相A,乙腈为流动相B,进行梯度洗脱,体积流量l mL/min;检测波长349 nm;柱温30℃.结果表明,盐酸去亚甲基小檗碱供试品溶液在2～ 200 μg/mL范围内浓度和峰面积成良好的线性关系,相关系数R为0.999 6,日内和日间精密度的RSD(％)均小于2％;平均回收率为101.6％,RSD(％)为1.0％.重复性和稳定性的RSD(％)分别为1.2％和0.8％.3批盐酸去亚甲基小檗碱原料药中盐酸去亚甲基小檗碱含量为97.8％,98.4％,98.2％.HPLC法测定盐酸去亚甲基小檗碱的含量具有较好的专属性和灵敏度,准确度高,且操作简便,重复性好.该方法可用于盐酸去亚甲基小檗碱的含量分析和质量控制.
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传统药用酵素
酵素“酶(Enzyme)”的旧称,是生物体内的催化剂.但目前流行的酵素一词实际上包含了酶及其产酶微生物和相关调节因子以及相互作用因子,如激活剂及抑制剂、协同及反馈调控因子等,可称之为广义的酵素(Ferments).我国有利用天然药材的传统习俗,无疑包含有酵素药材,如麦芽、鸡内金、神曲、淡豆豉等.根据来源不同,传统酵素药可分为天然酶制剂类酵素药和传统菌制剂类酵素药.面对现代酶制剂、菌剂、因子等新型酵素药品的冲击,以及我国社会生态经济的发展,传统药用酵素正面临功效扩展、工艺改造、质量安全标准提高等多方面的挑战.
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基于血凝素的禽流感通用疫苗的研究进展
A型流感病毒感染由于具有高发病率和致死率的特点,已经成为全球关注的公共健康问题.目前,接种疫苗是预防流感发生与传播的有效的手段.但目前上市的疫苗具有种特异性,需每年更新,且流感病毒亚型众多,不同血清型毒株间缺乏交叉保护性,所以开发研究具有交叉保护性的广谱疫苗意义重大.血凝素(HA)是现有流感疫苗的主要有效成分,也是诱生保护性抗体的主要抗原,因此成为广谱通用疫苗的热门研究靶点.文章就基于HA的通用禽流感疫苗的研究进展作一简单综述.
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紫草素诱导细胞凋亡及凋亡信号途径新研究进展
细胞凋亡(Apoptosis),又称为程序性细胞死亡(Programmed cell death),是指为维持内环境稳定,由基因控制的细胞自主的有序的死亡.细胞凋亡主要通过内质网(Endoplasmic reticulum,ER)、线粒体(Mitochondria)和死亡受体(Death Receptor)3种途径所介导.紫草素(Shikonin)具有多种生理活性,其中抗癌研究是目前研究的重点和热点,紫草素抗癌的机制与3种细胞凋亡信号途径密切相关.文章试图结合紫草素诱导细胞凋亡及细胞凋亡信号途径作一个全面综合性的概述.
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Phi29DNA聚合酶新应用研究进展
phi29 DNA聚合酶来源于枯草芽孢杆菌噬菌体phi29,具有连续合成和链置换性质,且具有高保真性.它是DNA扩增包括滚环扩增和多重置换扩增的理想工具.文章从phi29 DNA聚合酶的来源和结构与功能、近期对于phi29 DNA聚合酶的应用研究人手,综述了phi29 DNA聚合酶的结构与功能的关系及其用于核酸测序,病毒检测,miRNA检测方面的应用前景.
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基于P2Y1受体药物研究进展
P2Y1作为第一个被克隆出来的P2Y受体,由于其分布广泛,在参与对抗炎症、促进血管舒张、阻断动脉粥样硬化,促进神经元和神经纤维细胞生长等生理调节方面,发挥了决定性的作用.所以,P2Y1作为治疗血栓性疾病和神经性疾病的靶点,越来越受到人们的重视,逐渐成为高通量筛选药物的新靶标.文章介绍了P2Y1受体的结构、作用机理及其在人体代谢过程中所代表的角色,通过对当前国内外基于P2Y1受体研发的各种化合物进行归纳、比较、评价,包括中草药中可能通过该受体发挥作用的药物或有效成分,找到了它们各自的优势和缺点,科学的分析未来P2Y1受体药物发展可能的趋势,包括活性修饰、结构改造等,为将来抗血栓药物的研发提供一点思路和见解.
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源于氨基酸的生物材料的进展
氨基酸衍生的高分子是重要的生物材料,具有易合成、可降解和毒性低等优点.文章综述了它们的合成、生物相容性以及介绍近年来在药物输送和组织工程领域的应用.
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葫芦二烯醇及其生物合成的研究进展
葫芦二烯醇是从葫芦科多种植物中分离得到的葫芦烷型四环三萜化合物,药理活性研究表明葫芦二烯醇具有显著的抗炎、抗肿瘤作用,而且还是葫芦素类化合物生物合成的关键中间体.文章综述了葫芦二烯醇在植物中的分布、药理活性、生物合成途径、葫芦二烯醇合酶基因克隆与表达以及葫芦二烯醇分析、合成方法等研究工作,总结葫芦二烯醇研究现状并展望其开发利用前景.
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miR-199a在肿瘤中的研究进展
MicroRNAs (miRNAs)是一类内源的、长度约为20～25个核苷酸非编码单链小RNA分子,在多种生理病理过程特别是肿瘤疾病中发挥着重要的作用.越来越多的证据表明,miR-199a在人类恶性肿瘤中异常表达.文章综述了miR-199a在肿瘤中作业及miR-199a-5p/3p成熟体调控机制.
| 年 | 期数 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2001 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2000 | 01 02 03 04 |
| 1999 | 02 03 04 |
