Ki-67和PCNA表达与乳腺癌及乳腺癌化疗敏感性的关系

目的：探讨分析乳腺癌组织中核增殖相关抗原（Ki-67）及增殖细胞核抗原（PCNA）表达变化与乳腺癌的关系及其对乳腺癌化疗敏感性的关系，为临床乳腺癌的有效化疗提供理论依据。方法：实验对象取自于近年来我院收治的、经临床检查确诊为乳腺癌患者84例，利用免疫组化方法分别测量其乳腺癌组织中的Ki-67及PCNA的含量，比较不同Ki-67及PCNA表达水平的患者接受化疗疗效的差异。结果：Ki-67阳性例数为52例，PCNA阳性例数为62例。 Ki-67阳性率与患者淋巴结转移及肿瘤分型分期呈正相关，差异有统计学意义，P＜0.05。而PCNA阳性率与肿瘤淋巴结转移成正相关，P＜0.05，与肿瘤临床分型分期无关，P＞0.05。 Ki-67＋总有效率为80.8％明显高于Ki-67-的56.2％，P＜0.05。 PCNA-有效率为72.7％明显高于PCNA＋的45.2％，P＜0.05。结论：Ki-67及PCNA表达与乳腺癌临床资料及其化疗敏感性密切相关，可以作为预测化疗疗效的指标。

推拿治疗对急性软组织损伤家兔血清神经递质表达影响的研究

急性软组织损伤是临床上的常见病和多发病，中医推拿疗法是治疗该病的主要疗法，具有操作简便、疗效确切等优势。本研究通过观察推拿疗法对急性软组织损伤家兔血清中5-羟色胺（5-HT）、多巴胺（ DA）、去甲肾上腺素（ NE）和β-内啡肽（β-EP）表达水平的影响，旨在分析推拿治疗急性软组织损伤疼痛的作用机制，促进推拿疗法在急性软组织损伤治疗中的应用。

Ⅰ型IFN体外增强人γδT 细胞对骨肉瘤的杀伤作用

目的：探讨Ⅰ型干扰素（ IFN）对人来源γδT细胞杀伤骨肉瘤作用的影响。方法：取健康人和骨肉瘤患者外周血来源的单个核细胞，分别使用唑来膦酸（ Zol）、Zol和Ⅰ型IFN体外刺激扩增，流式细胞技术检测γδT细胞的纯度，计算扩增倍数。以Zol刺激体外扩增的γδT细胞为对照组，Zol联合Ⅰ型IFN刺激体外扩增的γδT细胞为实验组， LDH法检测不同方法扩增的γδT细胞的细胞毒活性， ELISA法检测γδT细胞分泌的IFN-γ。结果：Zol、Zol联合Ⅰ型IFN均可高度选择性扩增健康人和骨肉瘤患者外周血单核细胞中的γδT细胞，扩增后γδT细胞具有杀伤骨肉瘤细胞的能力。Ⅰ型IFN预处理γδT细胞后可显著增强γδT细胞的杀伤活性。结论：Ⅰ型IFN能够促进人γδT细胞的抗骨肉瘤作用。

载脂蛋白E基因启动子区多态性分布在新疆哈汉民族冠心病患者之间差异性研究

目的：研究新疆地区哈、汉民族冠心病患者载脂蛋白E 基因启动子区rs405509（ G-T ）、rs449647（ A-T ）、rs7259620（ G-A）位点多态性的分布在两民族之间是否存在差异。方法：纳入病例201例，利用酚-氯仿法抽提提取DNA，再将PCR产物进行纯化。 SNaPshot多重单碱基延伸反应纯化后得到的延伸产物在ABI3130XL基因分析仪上进行测序。结果：新疆地区哈萨克族与汉族患者中载脂蛋白E基因启动子区rs449647（A-T）位点基因型及等位基因在两民族之间差别具有统计学意义（P＜0.05），rs405509（G-T）位点及rs7259620（G-A）位点基因型及等位基因在两民族之间差异均无统计学意义（P＞0.05）。结论：载脂蛋白E启动子区rs449647（ A-T）位点基因型及等位基因多态性分布在新疆地区哈、汉冠心病病人中有统计学差异，其余两个位点多态性在哈、汉民族间的分布无统计学差异。

SLE患者血清对骨髓间充质干细胞衰老的作用及机制研究

目的：探讨系统性红斑狼疮（ SLE）患者血清对间充质干细胞（ MSC）衰老的作用及机制。方法：收集性别、年龄匹配6例健康对照者及6例SLE患者血清，灭活补体后-80℃保存备用；分离培养3例健康对照及3例SLE患者骨髓MSC，传代至第3～4代备用；以含10％SLE或对照血清的DMEM/F12模拟机体全身血液微环境，培养不同来源骨髓MSC；SA-β-gal染色并计数阳性细胞比例；Real time PCR法检测MSC p53、p21基因水平；Western blot法分别检测p53、p21蛋白及核蛋白NF-κB（p65）表达水平；CCK8测细胞增殖。结果：SLE患者血清增加健康人骨髓MSC的β-半乳糖苷酶阳性比例[（26.6±2.1）％vs （11.8±1.9）％，P＜0.05]，对SLE患者骨髓MSC的促进作用更为显著[（58.8±2.8）％ vs.（31.2±2.2）％，P＜0.05]；SLE患者血清可同时上调健康对照及SLE患者骨髓MSC的p53及p21水平；SLE患者血清既能够抑制健康骨髓MSC增殖[（0.7±0.1） vs （1.1±0.1），P＜0.01]，又能抑制SLE患者骨髓MSC增殖能力[（0.5±0.2） vs （0.8±0.3），P＜0.05]。此外，SLE患者血清还可显著上调两种来源骨髓MSC核内NF-κB（ p65）的蛋白水平。结论：SLE患者血清能够促进骨髓MSC衰老，该过程可能与其胞内NF-κB信号通路的活化有关。

强直性脊柱炎患者外周血中 miR-17、miR-181、miR-106、miR-30和miR-495表达的分析

目的：为了探讨microRNA在强直性脊柱炎患者发病过程中的作用，我们通过检测强直性脊柱炎患者外周血液中miR-17、miR-181、miR-106、miR-30和miR-495的表达情况，从而为研究microRNA在强直性脊柱炎发病机制中的调控作用和临床诊断价值提供新的思路。方法：收集强直性脊柱炎患者及正常人的外周血液，对外周血液中单个核细胞进行分离，并提取PBMC small RNA，用特异性茎环引物反转录成cDNA，并构建成熟的miR-17、miR-181、miR-106、miR-30和miR-495的T载体，制作标准曲线，利用stem-loop法通过Real-time PCR技术，检测miR-17、miR-181、miR-106、miR-30和miR-495的表达量。结果：本实验共收集临床样本92例，其中AS患者61例，正常人31例。通过Real-time PCR检测发现，与正常人相比，在强直性脊柱炎患者外周血中表达上调的有miR-106（P＞0.05）与miR-30（P＞0.05）；表达下调的有miR-181（P＜0.05）、 miR-495（P＜0.05）和miR-17（P＞0.05），其中miR-181和miR-495有统计学意义。结论：与正常人相比在强直性脊柱炎患者外周血中miR-181和miR-495的表达量存在差异，它们可以靶向调控TLR-4，HLA-B，DVL和GSK/3β等基因，这一发现可能为强直性脊柱炎发病机制的研究提供新的思路，成为临床诊断中新的标志物。

Ki-67、P53、LAT1在食管癌及癌前病变组织中的表达及其临床意义

目的：观察Ki-67、P53、LAT1在食管鳞癌及癌前病变组织中的表达情况并探讨其临床意义。方法：采用免疫组织化学方法检测食管正常黏膜组织20例、癌前病变组织68例（轻度非典型增生21例，中度非典型增生22例，重度非典型增生25例）以及癌组织34例中Ki-67、P53及LAT1的阳性表达情况，分析三者在食管癌组织中表达的相关性。结果：食管正常黏膜组织、轻度非典型增生、中度非典型增生、重度非典型增生以及癌组织中，Ki-67阳性表达率分别为0％（0/20）、23.8％（5/21）、40.9％（9/22）、76.0％（19/25）、82.4％（28/34），P53阳性表达率分别为0％（0/20）、14.3％（3/21）、31.8％（7/22）、48.0％（12/25）、67.6％（23/34），LAT1阳性表达率分别为0％（0/20）、19.0％（4/21）、36.4％（8/22）、52.0％（13/25）、76.5％（26/34）。等级相关分析结果显示，Ki-67、P53、LAT1的阳性表达均与组织学分级显著相关（r＝0.626，0.427，0.586，P＜0.01）；Ki-67与P53、LAT1在食管癌组织中的表达呈正相关（ r＝0.428，0.596，P＜0.01）。结论：Ki-67、P53、LAT1蛋白的异常表达与食管癌的癌变过程显著相关，三者联合检测具有重要的临床意义。

中药对小鼠哮喘模型T细胞免疫调节的研究

哮喘是常见的呼吸系统疾病之一，2013年我国首次发布的全国哮喘患病及相关危险因素调查显示，中国大陆地区哮喘总患病率已达1.24％。哮喘发病机制比较复杂，临床治疗多以激素类药物、受体激动剂等化学药为主，常易引起骨质疏松、抵抗力下降、消化道溃疡、电解质紊乱等多系统的副作用。

黑色素瘤相关抗原MAGE-C2：肿瘤免疫治疗新靶点

癌睾丸抗原（ Cancer testis antigen，CTA）是一类在多种肿瘤组织表达、而在睾丸或胎盘以外的正常组织几乎不表达的抗原。 CTA其表达的独特性，被认为是一类能用于肿瘤免疫治疗的理想抗原。目前一些CTA疫苗已用于临床试验，并收到了一定的疗效，显示了良好的开发前景，如 NY-ESO-1［1］、MAGE-A3［2］等。黑色素瘤相关抗原（ Melanoma-associated antigen，MAGE ）家族中的一些成员属于CTA，如MAGE-C2，现就MAGE-C2基因结构、表达特性、免疫原性和生物学功能综述如下。

CD8＋调节性T细胞在慢性阻塞性肺疾病中的研究进展

慢性阻塞性肺病（ Chronic obstructive pulmonary disease，COPD）是一种可预防和可治疗的常见疾病，以持续存在的气流受限为特征，气流受限呈进行性发展，伴有气道和肺对有害气体或颗粒所致的慢性炎症反应增加［1］。目前有多种机制参与COPD的形成，如促炎-抗炎失衡、氧化-抗氧化失衡、蛋白酶-抗蛋白酶失衡和自主神经系统功能失衡等［2-5］，其中促炎-抗炎失衡是导致COPD迁延不愈的重要原因。这种慢性炎症累及局部和全身［6］，受累的抗原至少有三种可能来源：①微生物；②香烟烟雾成分及其衍生物；③自身抗原，包括来自细胞外基质降解产物的新生抗原［7，8］。近年越来越多的证据倾向于第三种可能：COPD患者和小鼠肺气肿模型的肺组织存在B细胞、CD4＋和CD8＋T细胞的寡克隆现象［9-11］，表明自身免疫反应可能参与了COPD的发展；另有研究显示α1-抗胰蛋白酶不仅抑制蛋白酶，而且通过阻止细胞凋亡和调节炎症反应来缓解COPD的病程进展［4］；研究人员还在稳定期COPD 患者外周血中发现异常水平的抗核抗体（ ANA ）和抗组织抗体（AT），并且AT与肺功能受损有关［12］。以上证据都支持COPD是一种自身免疫性疾病的假说。

Tim-3信号免疫调节作用研究进展

T 淋巴细胞免疫球蛋白黏蛋白（ T cell immunoglobulin mucin，TIM）是2002年Monney等［1］在研究哮喘易感基因的过程中，在小鼠第11号染色体上发现并鉴定的一个新基因家族，其在人类和鼠类均有证实，其中人类的TIM基因家族由3个成员组成即 TIM-1、TIM-3和 TIM-4，位于5号染色体5q33.2上。 TIM基因编码的蛋白均为一类具有共同基序的Ⅰ型跨膜糖蛋白，其基本结构由五种组分构成，包括一个信号肽、特征性的免疫球蛋白Ⅴ区（ IgV）结构域、黏蛋白样区、跨膜区和含有磷酸化位点的胞内尾巴区［2］。如它们的名字所示， Tim分子初被认为特异表达在T细胞表面，直接调节T细胞反应［3-5］。近来发现Tim分子在免疫细胞上广泛表达，参与调节多种 T 细胞包括调节性 T 细胞（ regulatory T cell，Treg）的分化，在免疫自稳与凋亡细胞的清除过程中发挥重要作用［5，6］。

脂质筏神经鞘磷脂在T细胞活化中的作用

机体通过正确地调节活化免疫细胞的信号传递，抵抗入侵的病原微生物。其中获得性免疫起主要作用，主体为T淋巴细胞或B淋巴细胞。细胞膜上的T细胞受体集中在免疫突触的中央，与抗原提呈细胞结合形成免疫突触［1］。1972年Nicolson 提出细胞膜液态镶嵌模型，当时这一重大发现在学界引起了轰动。随着对细胞膜研究的深入，近年，脂质组学逐渐受到了关注。1997年Simons和Ikonen提出了［由神经鞘脂质和胆固醇形成的区域叫脂质筏，它在细胞黏附和运输膜蛋白的过程中发挥重要作用］的筏模型［2］。2001年，在西班牙召开的欧洲生物科学研讨会上正式提出了“脂质筏（ Lipid Raft）”的概念。脂质筏是细胞膜上的功能微区，可以在膜中侧向流动、聚集，从而完成信号转导、物质转运等功能。脂质筏对维持T细胞稳态发挥重要作用，认清T细胞活化与脂质筏的密切关系有着重要意义。研究表明，改变脂质筏的完整性会影响T细胞的功能，引起各种疾病。神经鞘磷脂（ Sphingomyelin，SM）是脂质筏的主要构成成分，在细胞膜上跨膜信号转导中发挥重要作用。本文主要对脂质筏SM在T细胞活化中的作用进行综述。

两种商品化降钙素原定量检测试剂盒方法学比对

降钙素原（ Procalcitonin，PCT ）由位于11号染色体（11p15.4）上的Calc-I基因编码，通过选择性剪接（编码1～4外显子）生成Calc-ImRNA，转录后在甲状腺滤泡旁细胞粗面内质网翻译成降钙素原前体。裂解生成的PCT由116个氨基酸组成，相对分子质量为13000［1，2］。它在细菌或真菌感染合并严重全身系统反应或器官低灌注时显著升高，而在病毒或局灶感染时水平正常或轻度升高。这个特性使得PCT 用来鉴别系统感染和非感染性炎症或局灶感染，是具有高灵敏度、特异性的新指标。此外，PCT 还可用来判断治疗的有效性、疾病的严重程度和预后［3］。

基于不同载体制备黄芪甲苷人工抗原的研究

目的：比较牛血清白蛋白（ BSA）和匙孔型血蓝蛋白（ KLH）两种蛋白载体合成黄芪甲苷人工抗原的免疫原性。方法：用高碘酸钠法将黄芪甲苷（ AST）分别与蛋白载体BSA和KLH偶联成AST-BSA及AST-KLH免疫6～8周龄的BALB/c雌性小鼠，测定其血清抗体效价；以卵清白蛋白（ OVA）为载体蛋白同样以高碘酸钠法合成AST-OVA作为包被抗原。多抗血清经间接酶联免疫吸附法（ indirect enzyme-linked immunosorbent assay ，iELISA）和间接竞争酶联免疫吸附法（ indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay，icELISA）检测其抗体效价及特异性。结果：经AST-KLH免疫的多抗血清较之AST-BSA免疫的特异性要高，与AST进行竞争酶联免疫检测，其IC50值约为5μg/ml。两种人工抗原免疫所得血清抗体效价均为1∶51200左右。结论：AST-KLH具有更好的免疫原性，本次实验为进一步建立黄芪甲苷的免疫学检测方法奠定了研究基础。

pCDNA3.1-MT2A真核表达载体的构建及亚细胞定位

目的：构建pCDNA3.1-MT2A真核表达载体并观察其在293T和SMMC7721细胞株中的定位和表达情况。方法：使用基因合成法合成 MT2A 基因，在其 N 端添加 Kozak 序列及 His 标签序列，将扩增后的目的基因双酶切连接至pcDNA3.1（＋）载体的BamHⅠ和NotⅠ之间。转化DH5α大肠杆菌后，挑取阳性克隆子进行质粒抽提电泳及测序鉴定。将鉴定正确的pCDNA3.1-MT2A质粒采用脂质体法转染293T和SMMC7721细胞株，激光共聚焦显微镜观察其在真核细胞中的表达和定位情况。结果：pCDNA3.1-MT2A重组质粒经酶切电泳及DNA测序证实，目的基因MT2A的序列完全正确，真核表达载体构建成功，激光共聚焦观察发现该重组质粒表达于293T和SMMC7721细胞的胞质中。结论：成功构建pCDNA3.1-MT2A融合基因并进行真核表达，发现MT2A主要定位于293T和SMMC7721细胞的细胞质中。本研究为探讨MT2A 在肝癌细胞内的功能奠定了基础。

直接测序法与ARMS法检测甲状腺乳头状微小癌组织中BRAF基因突变的比较

目的：探讨直接测序法与蝎形探针扩增阻滞突变系统（ Scorpions amplification refractory mutation system， scorpions ARMS法）检测甲状腺乳头状微小癌组织中（ Papillary thyroid microcarcinoma，PTMC）的鼠类肉瘤滤过性毒菌致癌同源体B1（BRAF）基因突变的特异性和敏感性。方法：采用直接测序法和ARMS法同时检测56例甲状腺乳头状微小癌患者组织中BRAF基因突变情况。结果：56例患者甲状腺癌组织中，直接测序法与ARMS法所检出BRAF基因突变阳性率分别为32.1％和82.9％，敏感度分别为39.1％和100％，前者均显著低于后者（ P＜0.01）。结论：检测甲状腺乳头状微小癌组织BRAF基因突变时ARMS方法较直接测序法具有更好的敏感性，癌组织小的标本BRAF基因突变检测更适合用ARMS法。

顺磁性微粒子化学发光免疫分析法检测血清维生素B12的性能评价

目的：评估顺磁性微粒子化学发光免疫分析法（ Chemiluminescence microparticle immunoassay，CMIA）检测血清维生素B12（ Vitamin B12，VitB12）的分析性能。方法：应用美国临床和实验室标准化协会（ CLSI） EP5-A2、EP15-A2、EP7-A2、EP6-A、C28-A3c方法评价CMIA检测VitB12的精密度、正确度、抗干扰性、分析测量范围（AMR）、临床可报告范围（CRR）、生物参考区间。采用美国国家标准技术研究所（ National Institute of Standards and Technology，NIST）有证参考物质SRM 1955、美国病理学家协会（CAP）发放的室间质评物（K-C）、校准验证/线性评价物（LN5-B）评估CMIA系统检测VitB12正确度。结果：VitB12在108.84～874.43 pmol/L时，批内、批间精密度均小于厂家声明的标准。正确度验证显示测定有证参考物质NIST SRM 1955，结果符合验证要求；检测CAP室间质评物（K-C）、校准验证/线性评价物（LN5-B）显示，结果均符合CAP校准验证/线性评价误差界限所规定的标准，VitB12浓度在89～1057 pmol/L范围内通过线性验证，95％验证区间也包含其指定均值，相对偏差均小于卫生部临床检验中心室间质量评价标准（ TEa：靶值±25％）。抗干扰性评估显示在TG≤20 mmol/L、Bil≤300μmol/L、Vit C≤1.5 g/L时对VitB12检测系统（CMIA）无显著干扰。 AMR验证判断佳拟合方程为二元一次多项式，VitB12浓度在0～1107 pmol/L范围内存在线性关系。 CRR上限为110700 pmol/L，大稀释倍数为100倍。生物参考区间验证显示本研究选择的参考个体VitB12水平符合厂家试剂说明书给定参考区间，女性略高于男性，但无显著差异。结论：CMIA检测血清VitB12的各项性能指标基本满足实验室要求，其可为实验室提供可靠的VitB12结果，为实验室评价人群VitB12营养状况提供信息。

结核杆菌Pup-蛋白酶体系统与耐药结核杆菌耐药性的相关性研究

目的：检测不同耐药的结核杆菌临床分离株原核类泛素蛋白-蛋白酶体系统（以下简称：Pup-蛋白酶体系统）相关的Pup、Dop、PafA、Mpa基因的表达水平，探讨研究结核杆菌Pup-蛋白酶体系统与新疆地区广泛流行的耐药结核杆菌临床分离株耐药性的相关性。方法：以培养对数生长期的新疆地区广泛流行的耐药结核杆菌临床分离株为研究对象，分别提取结核杆菌临床分离的药物敏感菌株、单纯耐异烟肼的结核杆菌临床分离株（ INH-MTB）、单纯耐利福平的结核杆菌临床分离株（RFP-MTB）、单纯耐链霉素的结核杆菌临床分离株（SM-MTB）、单纯耐乙胺丁醇的结核杆菌临床分离株（EB-MTB）、耐多药结核杆菌临床分离株（ MDR）等各组菌株的总RNA，经纯度鉴定后，利用SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法，检测各组结核杆菌菌株的Pup、Dop、PafA、Mpa基因的表达水平，分析各组耐药结核杆菌临床分离株Pup-蛋白酶体系统相关的Pup、Dop、PafA、Mpa基因的表达与新疆地区广泛流行的耐药结核杆菌临床分离株耐药性的相关性。结果：与药物敏感菌株相比，Pup、Mpa基因在单一耐药菌株和耐多药菌株中表达有不同程度的下调，Dop、PafA基因在单一耐药菌株和耐多药菌株中表达有不同程度的上调，差异有统计学意义（P＜0.05）。与MDR相比，Pup、Dop、Mpa基因在单一耐药菌株中表达有不同程度的上调，PafA基因在单一耐药菌株中表达有不同程度的下调，差异有统计学意义（ P＜0.05）。结论：在结核杆菌临床分离的药物敏感菌株、INH-MTB组、RFP-MTB组、SM-MTB组、EB-MTB组和MDR组中，结核杆菌Pup、Dop、PafA、Mpa基因的表达差异，与新疆地区广泛流行的耐药结核杆菌临床分离株耐药性有相关性。

脂多糖诱导小鼠腹腔巨噬细胞parkin 表达及线粒体自噬形成

目的：探讨巨噬细胞在脂多糖（ LPS）处理后parkin表达及对线粒体自噬的影响。方法：无菌分离并原代培养小鼠腹腔巨噬细胞；200 ng/ml LPS作用巨噬细胞，JC-1标记线粒体，流式细胞仪检测线粒体膜电位变化；RT-PCR 检测巨噬细胞parkin mRNA水平；Western blot 检测parkin及自噬相关蛋白LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的表达水平；激光共聚焦显微镜分别检测巨噬细胞在LPS处理前后parkin在细胞内的分布及与LC3和线粒体三者的共定位情况。结果：JC-1染色流式细胞仪检测结果显示，LPS处理后，巨噬细胞线粒体膜电位降低，并随LPS作用时间延长呈持续下降趋势；parkin mRNA在LPS处理6 h内仅有少量的增加，但parkin蛋白水平在LPS刺激6 h后增加明显；parkin在巨噬细胞定位结果表明，未受LPS处理时parkin呈弥散均匀分布，而LPS刺激后parkin呈明显的点状聚集；Western blot检测结果显示巨噬细胞在LPS刺激后，LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比例增大，表明巨噬细胞发生明显的自噬；激光共聚焦显微镜结果显示，巨噬细胞在LPS 刺激后，parkin、LC3和线粒体三者存在共定位关系。结论：巨噬细胞在LPS刺激后，parkin表达增加并介导线粒体自噬形成，参与对损伤线粒体的清除，可能在巨噬细胞参与的炎症反应中发挥一定的调控作用。

3-MA对三氧化二砷诱导Jurkat细胞凋亡作用的影响

目的：探讨自噬特异性抑制剂3-甲基腺嘌呤（3-MA）对三氧化二砷（As2O3）诱导急性T细胞白血病系Jurkat细胞系Jurkat细胞凋亡的影响及机制。方法：XTT法检测三氧化二砷（ As2 O3）对急性T细胞白血病细胞系Jurkat细胞的增殖抑制作用。电镜下观察不同浓度As2 O3作用Jurkat细胞24 h后细胞形态。免疫印迹和流式细胞术检测微管相关蛋白1轻链3B（LC-3B）蛋白的表达变化。 AnnexinV-FITC/PI双染法流式细胞术检测3-MA对AS2O3诱导急性T细胞白血病系Jurkat细胞凋亡的影响。结果：As2 O3可以抑制急性T淋巴细胞白血病细胞株Jurkat细胞的生长，这种作用呈剂量和时间依赖性。2.5、5、10μmol/L AS2 O3作用Jurkat细胞24 h后在电镜下可观察到自噬、凋亡、坏死的不同形态，并且自噬体数目不断增多。5μmol/L As2 O3处理Jurkat细胞0、24、48 h后，LC-3B的平均荧光强度相对倍数分别（3.1±0.2）倍、（4.6±0.31）倍、（34.2±4.5）倍，组间相比，差异有统计学意义（P＜0.05），与生长抑制率一样呈现时间依赖性增强；免疫印迹也显示As2O3处理24 h和48 h后，LC-3B的蛋白表达逐渐增强；相对于As2O3组（33.4±9.1）％的生长抑制率，3-甲基腺嘌呤（3-MA）联合As2O3处理细胞后，48 h的生长抑制率为（60.6±8.3）％，差异明显，而LC-3B的表达明显降低。联合应用自噬抑制剂3-MA后Jurkat细胞的凋亡率（44.96±3.60）％，与单用As2 O3组（2.94±0.26）％相比明显增加，差异有统计学意义。结论：自噬抑制剂3-MA可以增加As2 O3引起的急性T细胞白血病细胞系Jurkat细胞的凋亡细胞百分数，其作用机制与诱导凋亡及抑制自噬密切相关。

靶向干扰前列腺源性ETS因子促进HT29细胞的增殖与侵袭

目的：结直肠癌是常见的消化道肿瘤之一，研究发现在结直肠组织，前列腺源性ETS因子（ Prostate-derived Ets factor，PDEF）的表达可以促进分泌性祖细胞向杯状细胞分化，因此结直肠癌的发生可能与PDEF的表达有关。本研究旨在探讨靶向干扰前列腺源性ETS因子对结直肠癌细胞株HT29增殖与侵袭的影响。方法：阳离子脂质体法将PDEF干扰质粒和空白对照空质粒瞬时转染HT29细胞，通过荧光显微镜、RT-PCR、Western blot技术测定正常对照组、空白对照组和shRNA组中PDEF mRNA和蛋白的表达情况；MTT法检测HT29细胞的增殖情况；采用Transwell迁移实验观察细胞侵袭能力。结果：干扰质粒、空质粒成功转染HT29细胞，通过荧光显微镜可以观察到绿色荧光蛋白的表达；Western blot结果可见shRNA组PDEF蛋白的表达较正常对照组和空白对照组降低；MTT法检测发现干扰PDEF基因的表达能够明显促进HT29细胞的增殖（ P＜0.05）；48 h后，shRNA组细胞侵袭能力明显强于正常对照组和空白对照组（P＜0.05）。结论：在HT29细胞中干扰PDEF的表达，可以促进细胞的增殖与侵袭。

瘦素基因-2548 A／G和瘦素受体基因Gln223 Arg位点多态性与哮喘和代谢综合征的关系

目的：研究瘦素基因-2548A/G和瘦素受体基因Gln223Arg位点多态性与哮喘和代谢综合征的关系。方法：选取82例哮喘合并代谢综合征病人（ A＋M）、114例哮喘病人（ AS）、100例代谢综合征病人（ MS）以及96例健康对照者（ NC）。根据肺功能将AS组分为轻度AS和中重度AS，采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（ PCR-RFLP）法分析所有受试者瘦素基因-2548A/G和瘦素受体基因Gln223Arg位点单核苷酸多态性及基因型，并比较不同组之间这两个基因位点和多态性之间的差异。结果：①不同组间生化指标有差异（ P均＜0.05）；②瘦素基因-2548A/G位点多态性：MS、A＋M和中重度AS组与NC相比AA基因型及A等位基因频率显著升高（P均＜0.05）；③瘦素受体基因Gln223Arg位点多态性：MS与NC和AS相比AG＋AA基因型及A等位基因频率显著升高（P均＜0.05），A＋M与 AS相比A等位基因频率显著升高（P＜0.05），AS组、轻度AS组和中重度AS组与NC组相比均没有差异（P均＞0.05）。结论：瘦素基因-2548A/G多态性与哮喘和代谢综合征都有一定的相关性，其A等位基因可能是代谢综合征的致病基因，而且与哮喘严重程度相关；瘦素受体基因Gln223Arg A等位基因可能是代谢综合征的致病基因，却与哮喘无关。

硫酸脑苷酯活化Ⅱ型NKT细胞对哮喘小鼠气道炎症的影响

目的：观察硫酸脑苷酯活化Ⅱ型NKT细胞对哮喘小鼠气道炎症的影响。方法：32只BALB/c小鼠随机分为对照组、哮喘组、硫酸脑苷酯治疗组和过继转移组，每组8只。对照组和哮喘组分别采用PBS和卵清白蛋白（ OVA）致敏和激发，硫酸脑苷酯治疗组和过继转移组采用OVA致敏，分别在激发前给予硫酸脑苷酯腹腔注射和硫酸脑苷酯活化的Ⅱ型NKT细胞尾静脉注射。分别采用HE和PAS染色检测肺组织学和气道杯状细胞；姬姆萨染色检测支气管肺泡灌洗液（ BALF）各细胞分类计数；ELISA法检测血清OVA特异性IgE和BALF中IL-4、IL-5水平；流式细胞仪检测肺Ⅱ型NKT细胞、IL-4＋和IFN-γ＋Ⅱ型NKT细胞的数量。结果：硫酸脑苷酯治疗组和过继转移组小鼠肺组织炎性细胞和气道基底膜杯状细胞减少。硫酸脑苷酯治疗组和过继转移组小鼠BALF中嗜酸细胞百分比、血清OVA特异性IgE和BALF中IL-4、IL-5水平明显低于哮喘组（均P＜0.05）。硫酸脑苷酯治疗组小鼠肺IL-4＋和IFN-γ＋Ⅱ型NKT细胞的数量明显高于哮喘组（均P＜0.01）。结论：硫酸脑苷酯可能通过活化Ⅱ型NKT细胞抑制哮喘小鼠气道炎症。

脂肪酸受体GPR120与葡萄糖转运蛋白4的关系

目的：研究在3T3-L1细胞中G蛋白偶联受体120（GPR120）与葡萄糖转运蛋白4（GLUT4）的关系。方法：诱导3T3-L1细胞分化，RT-PCR检测GRP120 mRNA表达，油红O染色检测细胞内脂肪；采用siRNA技术下调3T3-L1细胞中GPR120的表达，软脂酸孵育3T3-L1细胞24 h后，用real-time PCR和Western blot方法检测3T3-L1细胞中GLUT4的表达水平的变化。结果：诱导3T3-L1细胞分化过程中GPR120 mRNA表达升高（P＜0.05），干扰GPR120表达导致3T3-L1细胞诱导产生的脂滴体积和数量明显减小。另外，干扰GPR120表达导致GLUT4 mRNA和蛋白表达水平下降（ P＜0.05）。结论：GPR120影响了胰岛素信号通路中GLUT4表达水平，推测其参与了胰岛素抵抗的发生。

甲状腺乳头状微小癌中survivin、galectin-3、TPO蛋白表达与BRAFV600E基因突变关系的研究

目的：检测甲状腺乳头状微小癌（PTMC）及其癌旁良性组织中细胞凋亡抑制因子存活素（survivin）、半乳糖凝集素-3（Gal-3）和甲状腺髓过氧化物酶（TPO）蛋白表达差异以及PTMC中鼠类肉瘤滤过性毒菌致癌同源体B1（BRAF）基因的突变，探讨survivin、Gal-3和TPO蛋白与BRAFV600E基因突变的关系。方法：采用免疫组织化学方法检测56例PTMC组织及其癌旁良性组织中survivin、Gal-3和TPO蛋白的表达情况；对聚合酶链式反应（ PCR）扩增产物直接测序，分析BRAFV600E基因突变情况；survivin、Gal-3和TPO蛋白表达阳性率与 BRAF 基因突变率关系分析采用χ2检验方法。结果：PTMC 癌组织中， survivin和Gal-3强阳性表达，而TPO不表达；癌旁良性组织中，survivin和Gal-3表达缺失，TPO正常表达；survivin、Gal-3和TPO在癌组织和其癌旁良性组织间的表达率比较差异均有统计学意义（均P＜0.001）；BRAFV600E基因在PTMC中有32.1％（18/56）突变；BRAFV600E基因突变率和3种蛋白在PTMC组织中的表达率与淋巴结转移有关联（ P＝0.009，P＝0.025，P＝0.007，P＝0.008），而与患者年龄和性别无关联（均P＞0.05）；BRAFV600E基因突变与survivin、Gal-3、TPO蛋白表达均无关联（均P＞0.05）。结论：PTMC癌组织中，survivin和Gal-3表达升高、TPO表达降低和BRAFV600E基因突变可能在PTMC发生发展中起重要作用，survivin、Gal-3、TPO蛋白表达与BRAFV600E基因突变的检测，可为PTMC 病情的判定、预后的转归提供有价值的信息。

姜黄素对佐剂性关节炎大鼠滑膜OPG和RANKL蛋白表达的影响

目的：通过观察姜黄素对佐剂性关节炎（ Adjuvant arthritis， AA ）模型大鼠滑膜病理、滑膜骨保护素（ Osteoprotegerin，OPG）、核因子κB受体活化因子配体（ Receptor activator for nuclear factor-κB ligand，RANKL）表达的影响，探讨其防治类风湿关节炎（ Rheumatoid arthritis，RA）可能作用机制。方法：雄性SD大鼠以弗氏完全佐剂造模，分为模型组与姜黄素组，另有正常组，d 28处死所有大鼠行滑膜常规病理HE染色，并用Western blot法来检测滑膜RANKL、OPG蛋白的表达。结果：模型组大鼠滑膜炎性细胞浸润、纤维细胞及滑膜细胞的增生较正常组均明显增加（P＜0.01），而姜黄素组的大鼠滑膜组织病理较模型组显著改善（ P＜0.01）；姜黄素组大鼠的滑膜RANKL表达显著低于模型组，滑膜OPG表达显著高于模型组， RANKL/OPG比值显著低于模型组（ P＜0.01）。结论：姜黄素不仅改善AA大鼠关节滑膜病理学损伤，还可调节滑膜RANKL/OPG的比值。因此姜黄素可能通过调节OPG/RANKL系统来发挥对AA大鼠的治疗作用。

芍药苷对牛Ⅱ型胶原诱导的小鼠关节炎模型T细胞作用机制研究

目的：探讨芍药苷（ Paeoniflorin）对牛Ⅱ型胶原诱导的小鼠关节炎模型（ Collagen-induced arthritis，CIA） T细胞作用机制。方法：采用牛Ⅱ型胶原诱导DBA/1J小鼠建立CIA模型，二次免疫时随机分为两组，一组用芍药苷治疗，另一组用磷酸盐缓冲液治疗作为对照，每天进行临床评分；发病高峰期处死小鼠， HE染色法观察关节病理学变化；3 H-甲基胸腺嘧啶（3 H-TdR）掺入法检测小鼠脾脏细胞和CD4＋T细胞增殖反应；流式细胞技术检测T细胞亚群比例；酶联免疫吸附试验（ ELISA）检测小鼠脾脏细胞培养上清中炎性因子分泌情况。结果：芍药苷治疗组小鼠临床评分显著低于对照组（ P＜0.05）；治疗组CD3抗体和CD28抗体刺激的脾脏细胞和CD4＋T细胞增殖能力明显减弱（ P＜0.05），治疗组CII刺激的脾脏细胞和CII特异性CD4＋T细胞增殖能力明显减弱（P＜0.01）；治疗组Th1和Th17细胞亚群比例低于对照组（P＜0.01）；治疗组脾脏细胞培养上清中IFN-γ和IL-17含量低于对照组（ P＜0.05）。结论：芍药苷可能通过抑制致病性T细胞增殖，降低Th1和Th17细胞亚群比例，减少炎性细胞因子分泌，从而缓解CIA病情。

嗜水气单胞菌灭活疫苗对银鲫的免疫效果研究

目的：利用本实验室制备的嗜水气单胞菌灭活疫苗免疫银鲫，研究疫苗的免疫保护效果。方法：将银鲫随机分为3组：注射组、浸泡组和对照组进行试验，二次免疫后，分别对银鲫组织和血液样品进行组织病理学、血液免疫学研究以及免疫保护率的测定。结果：血液指标检测显示，注射组、浸泡组各项血液指标发生显著改变，银鲫各项免疫指标显著提高；组织病理学显示，攻毒后，对照组的肝、肾、脾等重要组织已发生病变，而注射组和浸泡组无明显的变化；注射组、浸泡组和对照组的免疫保护率分别为90％、60％、0％。结论：嗜水气单胞菌灭活疫苗对银鲫的细菌性出血病具有显著的保护作用。

HLA-A*0201／CAP-1四聚体在结直肠癌研究中的应用

目的：应用HLA-A*0201/CAP-1四聚体，分析HLA-A*0201＋CEA＋结直肠癌患者的外周血及癌旁肠系膜引流淋巴结的特异性CTLs的数量。方法：分离健康人（18例）PBMC和结直肠癌（23例）患者PBMC以及癌旁肠系膜引流淋巴结的淋巴细胞，应用流式细胞术，以HLA-A*0201/CAP-1和HLA-A*0201/FLUmp四聚体检测CAP-1和FLUmp特异性CTLs的频率。结果：在25例HLA-A*0201＋个体中，结直肠癌组和正常组外周血单个核细胞中HLA-A*0201/FLU四聚体＋CD8＋细胞的频率分别为（0.671±0.421）％和（0.564±0.408）％，两组之间无显著差异（P＝0.525）。结直肠癌组和正常组外周血单个核细胞中HLA-A*0201/CAP-1四聚体＋CD8＋细胞的频率分别为（2.409±2.385）％和（0.020±0.021）％，两组之间有显著差异（ P＝0.008）。结论：HLA-A*0201＋结直肠癌患者HLA-A*0201/CAP-1四聚体＋CD8＋细胞的频率升高，说明CEA特异性CTLs在结直肠癌患者的免疫监视功能中具有重要的作用。对存在针对肿瘤抗原的特异性CTLs却无法阻止肿瘤进展的具体机制需要更加深入的研究。

医学硕士研究生免疫学实验教学模式的探讨

免疫学基本实验技术操作是研究生免疫学教学的重要组成部分。随着免疫学实验方法、技术成为现代生命科学研究的重要工具，国内许多高等医学院校纷纷开设了免疫学实验课。我校目前开设了针对本科生、硕士研究生及八年制学生的免疫学实验课，其内容略有不同。通过对前几年硕士研究生免疫学实验课教学进行总结，对比研究生的培养目标，我们发现免疫学实验教学中存在各个实验内容相对独立，没有连续性；学生兴趣不足、缺乏探索性创新的空间；教学效果不佳等问题。针对这些问题，近两年我们对硕士研究生的免疫学实验教学模式进行了新的探索，从提出一个简单基础的免疫学研究项目（实验目的）开始，以几个免疫学实验技术方法作为研究方案，通过对实验结果进行分析、讨论，得出结论，从而完成该项目。这一环环相扣、融会贯通的新教学模式，取得了良好的教学效果。本文将就这一针对医学硕士研究生的免疫学实验课新的教学模式进行介绍。

从医学免疫学PBL授课效果探索教育改革的途径

上世纪六十年代，加拿大的麦克玛斯特大学医学院试行一种新的教学模式，被称为以问题为基础的学习（Problem-based leaning，PBL）。它是指在医学教学中，以病人问题为基础，以学生为中心进行小组讨论式的教学模式。在该过程中，学生围绕问题进行思考、推理和分析，教师只起到导向作用［1］。

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