多种肿瘤标志物在胰腺癌中的诊断价值及相关性研究

目的：：探讨血清肿瘤标志物联合检测对胰腺癌的诊断价值及相关性。方法：选取2013年1月至2016年5月我院胰腺癌患者146例,非胰腺癌患者128例和健康体检者124例,放射免疫分析仪检测各组血清 CA19-9、CA242、CA50、CA125、CEA及TSGF水平,并进行各组间比较。绘制受试工作特征曲线( ROC)分析各肿瘤标志物在胰腺癌患者中的诊断价值,线性相关分析各肿瘤标志物的相关性。应用多元Logistic回归模型分析胰腺癌的独立危险因素。结果：胰腺癌组血清CA19-9、CA242、CA50、CA125、CEA及TSGF水平明显高于对照组和非胰腺癌组,差异有统计学意义( P<0.05或P<0.01)。Ⅳ期和Ⅲ期患者血清CA19-9、CA242、CA50、CA125及 TSGF 水平明显高于Ⅰ期和Ⅱ期( P<0.01),且Ⅳ期患者血清 CA19-9、CA242、CA125及CEA水平明显高于Ⅲ期( P<0.01)。胰腺癌组血清CA19-9、CA242、CA50、CA125、CEA及TSGF的阳性率明显高于对照组和非胰腺癌组( P<0.01)。 ROC曲线显示,血清CA19-9的AUC高于其他单项指标,其佳临界值、灵敏度和特异度分别为114.5 U/ml、81.2%和79.3%。6项联合检测的诊断效能均优于各单项检测,其灵敏度和特异度分别为92.4%和76.5%。相关性分析显示,血清CA19-9与CA242、CA50及CA125均呈正相关( r=0.703,P=0.005；r=0.572,P=0.024；r=0.439,P=0.036)。多元Logistic回归分析显示,吸烟、不正确的饮食习惯、糖尿病史、胆系疾病史及CA19-9、CA242、CEA进入回归模型,其OR值及95%CI分别为1.717(0.736~2.359)、2.865(2.217~3.685)、2.614(2.186~3.127)、3.527(2.842~4.377)、4.214(3.570~4.962)、2.315(2.114~2.539)、1.876(1.175~2.852)。结论：血清肿瘤标志物联合检测有助于提高早期胰腺癌诊断的准确性,吸烟、不正确的饮食习惯、糖尿病史、胆系疾病史及高水平的CA19-9、CA242、CEA是胰腺癌的独立危险因素。

类风湿性关节炎患者嗜碱性粒细胞活化机制研究

目的：：探讨类风湿性关节炎患者外周血嗜碱性粒细胞的活化情况及其机制。方法：流式检测正常人对照组和RA患者组外周嗜碱性粒细胞活化标记物CD203c的表达及IL-4阳性的比例；用电化学发光法检测血清IgE水平；负选正常人嗜碱性粒细胞,以anti-IgE刺激为阳性对照,置含或不含IgE的微环境中,流式检测CD203c的表达及IL-4阳性的比例。结果：较正常人对照组,RA患者嗜碱性粒细胞高表达CD203c和IL-4(均P<0.05)；RA患者血清IgE水平显著高于正常人对照组(P<0.05)；RA患者血清和其血清中纯化的IgE可使负选的正常人来源的嗜碱性粒细胞活化,上调CD203c表达及IL-4阳性比例。结论：RA患者嗜碱性粒活化与发病相关,且主要由IgE介导,靶向嗜碱性粒细胞及其活化通路有望为RA的防治提供新的策略。

HIV感染者T细胞NKG2 C/NKG2 A表达及与疾病进展关系研究

目的：研究HIV 慢性感染者和HARRT 治疗者T 细胞NKG2C/ NKG2A 受体的表达变化,探讨其与疾病进展的关系。方法：选取HIV 慢性感染者、接受HAART 治疗的HIV 感染者以及健康人的外周血细胞,通过荧光抗体染色,利用流式细胞仪检测T 细胞上表达的NKG2C/ NKG2A 受体。结果： HIV 慢性感染者NKG2C+ T 细胞,NKG2A+ T 细胞和NKG2C+ NKG2A- T 细胞百分比明显高于健康对照组(P =0.025、P =0.032、P =0.029),HARRT 治疗组则明显低于HIV 慢性感染者(P =0.033、P =0.037、P =0.018),恢复到正常水平,与健康对照组相比无统计学差异。HIV 慢性感染者外周血CD4+ T 淋巴细胞绝对数和表达NKG2A、NKG2C+ NKG2A+和NKG2C- NKG2A+的T 细胞呈负相关(r =-0.697,P<0.0001；r =-0.463,P =0.015；r =-0.693,P<0.0001),HIV 慢性感染者外周血T 细胞上表达的NKG2C 与NKG2A 的比值与CD4+ T 淋巴细胞绝对数呈正相关(r =0.476,P =0.012)。结论：HIV 感染者T 细胞表面NKG2C 和NKG2A 的表达研究具有重要意义,为HIV 感染的临床预后评估提供科学依据。

ADMA/NOS/NO/cGMP通路系统在子痫前期患者母胎界面的表达及意义

目的：：探讨ADMA/NOS/NO/cGMP通路系统在子痫前期患者母胎界面的表达及意义。方法：分别选取重度子痫前期、轻度子痫前期、妊娠期高血压患者各20例,另选同期行剖宫产的单胎初产健康妊娠妇女20例作为对照。检测并比较各组胎盘组织NO和cGMP水平、总NOS活性,免疫组化SP法检测胎盘组织eNOS和iNOS表达。高效液相色谱法检测各组脐静脉内皮细胞( Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)内ADMA水平。结果：重度、轻度子痫前期组胎盘组织NO水平分别为(7.6±3.6)μmol/g、(11.4±4.3)μmol/g,均显著低于对照组(均P<0.05)；重度、轻度子痫前期组胎盘组织cGMP水平分别为(3.26±0.31)pmol/g、(4.53±0.42)pmol/g,均显著低于对照组(均P<0.05),且4组胎盘组织cGMP水平与NO水平呈正相关关系(r=0.672)；重度、轻度子痫前期组胎盘组织总NOS活性分别为(10.4±3.0)、(14.8±1.6)U/mg蛋白质,显著低于对照组(均P<0.05),4组胎盘组织总NOS活性与NO水平呈正相关关系(r=0.785)；重度、轻度子痫前期组胎盘组织eNOS表达显著低于对照组(均P<0.05),重度子痫前期组iNOS表达显著高于对照组(P<0.05)；重度子痫前期、轻度子痫前期及妊娠期高血压3组HUVECs内ADMA水平均显著高于对照组(均P<0.05),且4组患者HUVECs内ADMA水平与胎盘组织NO水平呈负相关关系(r=-0.582)。结论：ADMA/NOS/NO/cGMP通路系统可能在子痫前期的发病中起重要作用。

甲磺酸阿帕替尼联合多靶点抗原肽自体免疫细胞治疗骨与软组织肉瘤的临床实践（小样本报道）

目的：：评价抗血管生成靶向药物甲磺酸阿帕替尼联合多靶点抗原肽自体免疫细胞技术( Multiple antigens specific cell therapy,MASCTTM )治疗肉瘤的临床有效性和安全性。方法：收集6例经手术、放化疗治疗失败或拒绝手术、放化疗治疗的肉瘤患者,且治疗结束至少1个月以上。其中4例患者至少接受3周期MASCTTM治疗,并在第1天给予阿帕替尼500 mg,po,qd,口服至疾病进展,评价近期疗效和无进展生存时间( PFS)。其中2例单独使用甲磺酸阿帕替尼的患者为对照。检测患者的细胞免疫功能、外周血循环肿瘤细胞数( CTCs),并对患者进行生活质量测评,3周期MASCT TM治疗结束后1个月进行ELISPOT检测,治疗全程中记录患者的不良反应。结果：4例联合治疗患者均完成3周期治疗,其中1例患者治疗2周期后出现Ⅳ度手足综合征,改阿帕替尼为250 mg,po,qd后可耐受。治疗后1例患者为CR,3例为PR；4例患者的淋巴细胞免疫功能均有改善,CTCs数量明显减少,生活质量均较治疗前明显改善,未见有严重不良反应。 ELISPOT检测提示患者对其中大部分的抗原肽有特异性响应(≥10/15种),4例患者PFS分别为7、6、9、4个月；2例单独使用阿帕替尼的患者1例SD,1例PD,PFS分别为1、2个月。结论：应用阿帕替尼联合MASCTTM技术对骨与软组织肉瘤患者安全、有效,具有良好的应用前景。

IL-22在类风湿关节炎中的表达及临床意义

目的：探讨RA 患者IL-22的表达水平并分析其临床意义。方法：流式细胞术检测RA 患者(50例)、OA 患者(15例)、健康对照组(15例)外周血及RA 关节滑液Th22细胞所占比例,ELISA 法检测血清及RA 关节滑液中IL-22水平。检测RA 患者疾病活动性、临床指标、骨破坏情况,分析其与IL-22水平相关性。两组间比较用t 检验,相关性分析采用Pearson 直线相关分析法,多组样本比较用Kruskal-Wallis H 检验。结果：RA 患者外周血中Th22细胞比例高于OA 组(t =2.290,P =0.021)及健康对照组(t =2.524,P =0.015)；RA 患者血清IL-22水平高于OA 患者(t =2.560,P =0.014)及健康对照组(t =2.768,P =0.009)。RF 阳性RA 血清IL-22水平高于RF 阴性RA(t =2.322,P =0.035)。抗CCP 抗体阳性RA 血清IL-22水平高于抗CCP 抗体阴性RA(t =2.504,P =0.015)。RA 血清IL-22水平与ESR、RF、DAS28评分呈正相关关系(r 分别为0.312、0.314、0.332,P<0.05)。RA 患者血清IL-22水平随骨侵蚀的加重呈递增趋势,X 线不同分期之间差异有统计学意义(H =9.14,χ20.05(3)=7.81,H>χ20.05(3),P <0.05)。有关节积液RA 患者血清IL-22水平高于无关节积液RA 患者(t =2.587,P =0.012),关节滑液IL-22水平高于血清(t =2.668,P =0.011),与关节滑液Th22细胞比例无相关性(r =0.287,P =0.065)。结论：RA 患者血清及关节滑液IL-22水平增高,与疾病活动性及骨破坏相关,可成为病情评估与骨破坏的指标。IL-22可能为 RA 治疗的新靶点。

肠道菌群与B细胞发育的相互调节作用

动物肠道是一个栖息着大量菌群、开放的生态系统，这些肠道菌群与宿主之间建立了稳定的互利共生关系，维持肠道内的动态平衡。黏膜免疫学的发展揭示了在正常生理状态下肠道菌群可以促进宿主免疫系统的发育。由于B淋巴细胞在免疫系统的建立及维持肠道菌群内平衡中具有重要作用，因此本文将就生命早期B细胞的发育，免疫球蛋白的产生和肠道菌群之间的相互影响进行综述。

免疫细胞靶向治疗结肠癌肿瘤干细胞

结直肠癌( Colorectal cancer,CRC)发病率列我国第三位。随着我国人民生活水平的不断提高和饮食习惯的改变,发病率也呈现出逐年上升的趋势,结直肠癌5年生存率只有50%[1,2]。研究发现结直肠癌肿瘤干细胞在结直肠癌的发生、复发和转移中发挥着重要作用。结直肠癌肿瘤干细胞( Colorectal cancer stem cells,CCSCs)是结直肠癌肿瘤组织中数量很少的一部分细胞,但是这类细胞具有很强的致瘤性和化疗抵抗性,是结直肠癌复发和转移的源头。研究发现这类细胞能进行自我更新和分化成新的肿瘤,在放化疗后能进入休眠状态,当微环境发生改变时,开始增殖并转移到其他地方形成转移灶[3]。免疫细胞治疗作为新的治疗技术,通过免疫细胞靶向治疗结直肠癌肿瘤干细胞可能是从根本上根治结直肠癌的手段。本文就近年来结直肠癌肿瘤干细胞分离、纯化、表面标记,以及各种针对肿瘤干细胞免疫细胞治疗的研究进展作一综述。

联合T、B细胞表位设计多肽疫苗的研究进展

从Adam等[1]发现针对口蹄疫病毒的多肽疫苗，到Lerner[2]建立多肽疫苗合成的方法，再到联合T、B细胞表位多肽疫苗设计的出现，新型疫苗的研制快速发展。联合T、B细胞多肽表位是指将已证实或预测得到具有免疫原性的T、B细胞多肽表位通过生物、化学方法连接，或同时串联通用CD4+T细胞表位以增强T、B细胞表位的免疫原性，从而形成的人工合成多肽表位。由于单一表位免疫原性弱，而联合T、B细胞多肽表位可同时诱导体液免疫及细胞免疫应答，因此成为目前多肽疫苗研究的热点。国内外应用联合多肽表位设计疫苗在抗感染及抗肿瘤等方面已有诸多报道，本文将对联合多肽表位的选择、连接方式、疫苗的设计以及在疾病模型中的研究和应用等方面的进展进行全面综述。

免疫代谢研究进展

机体的免疫细胞是一群与免疫应答有关的细胞群体，在大多数情况下，这群细胞处于相对静息状态，但在机体遭遇感染、创伤等各类因素的干扰时，这群细胞可以迅速活化，并发挥一系列免疫效应来维持机体的相对稳态。机体的免疫应答涉及大量基因的表达和生物活性物质的生成，如细胞因子、抗体、脂质介质，这一过程中还包括细胞分化以及细胞趋化等一系列的免疫反应。细胞从相对静止到活化的转化过程中，需要生成大量营养物质和生物介质以提供细胞活化所需的能量及原料[1]。

尘螨变应原Derf 6/pET32a（+）重组质粒构建、表达、纯化及其产物血清IgE结合率

目的：：获得尘螨变应原第6组分Der f 6原核表达产物并检测其与尘螨过敏性哮喘患儿血清抗体IgE结合率。方法：酶切质粒pET28a(+)-Der f 6获得目的基因Der f 6,将其与pET32a(+)载体连接成质粒pET32a (+)-Der f 6,转化BL21细菌后,用异丙基硫代半乳糖苷( IPTG)诱导表达,用Ni+离子亲和层析柱纯化表达产物,用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳( SDS-PAGE)、免疫印迹实验( Western blot)和蛋白质串联质谱( MALDI-TOF/TOF)鉴定纯化产物。以纯化获得的产物为包被抗原建立间接ELISA法检测尘螨过敏性哮喘患儿血清抗体反应情况。结果：成功构建了原核表达质粒pET32a (+)-Der f 6,将该质粒转化E. coli BL21诱导表达,亲和层析纯化后,SDS-PAGE显示获得目的蛋白,Western blot验证其能够与载体的组氨酸标签结合,质谱鉴定其Der f 6结构一致。以此产物为包被抗原建立间接ELISA检测尘螨过敏性哮喘患儿血清,阳性率为41.3%(19/46)。结论：成功构建了原核表达质粒pET32a (+)-Der f 6,亲和纯化获得的目的蛋白具有良好的反应原性。

家蚕过敏原Profilin的表达、纯化、免疫学鉴定及其生物信息学分析

目的：：克隆表达家蚕( Bombyx mori) Profilin蛋白,鉴定其免疫原性并进行B细胞抗原表位预测和构建分子进化树。方法：从NCBI上获取家蚕Profilin蛋白的基因序列,合成该基因并构建到pet-28a表达载体上,重组质粒转化至E. coli BL21,IPTG诱导基因表达,通过亲和层析获取高纯度蛋白；用Western blot方法对重组蛋白进行过敏原性鉴定；通过DNAStar软件分析其潜在的B细胞抗原表位；应用MEGA5.05进行序列比对,并构建分子进化树。结果：成功表达出重组蛋白,且重组蛋白与家蚕过敏患者血清有一定的IgE结合。结论：成功克隆表达出具有免疫原性的Profilin蛋白,并成功预测出其B细胞抗原表位和构建出分子进化树。

雷帕霉素对高糖诱导的大鼠肾系膜细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响

目的：：评价雷帕霉素对高糖诱导的肾系膜细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响,探讨其在糖尿病肾病防治中的意义。方法：体外培养的大鼠肾小球系膜细胞株HBZY-1分为：正常对照组、高糖组、高糖加不同浓度的雷帕霉素组,应用CCK-8法观察细胞增殖的变化；流式细胞术检测各组细胞的细胞周期和凋亡情况；Real-time PCR法检测各组细胞中血管紧张素Ⅱ(ANGⅡ)、转化生长因子β1(TGF-β1)和血管内皮生长因子(VEGF)的表达水平。结果：高糖诱导下HBZY-1的增殖水平明显上升,凋亡水平下降,ANGⅡ,TGF-β1和VEGF的表达水平上升,而雷帕霉素具有明显抑制作用,且有剂量依赖性,并下调ANGⅡ,TGF-β1和VEGF的表达；对于细胞周期,高糖组的S期细胞明显高于正常组(P<0.05)；雷帕霉素干预后,S期细胞比例减少(P<0.05)。结论：雷帕霉素能够抑制高糖状态下HBZY-1的增殖,促进其凋亡及导致G1/S期阻滞,同时下调ANGⅡ, TGF-β1和VEGF的表达。

MicroRNA-155通过调节CXCR4/PI3 K/AKT途径影响滋养细胞的侵袭与迁移

Objective:To investigate the effect on the CXCR4/ PI3K/ AKT pathway after the transfection of miR-155 mimics and miR-155 inhibitor combined with the research on the ability of invasion and migration of human chorionic JEG-3 trophoblast cells. Methods: Chemically synthesized miR-155 mimics and miR-155 inhibitor were transfected into JEG-3 cells. The effect on the ability of invasion and migration were analyzed by Transwell migration assay and Wound healing assay. The expression of CXCR4 mRNA was detected by Real-time PCR. The expression of CXCR4 and p-AKT protein were detected by Western blot. Results: Transfection with miR-155 mimics significantly down-regulated the expression of CXCR4 as compared with the control group(P<0.05);JEG-3 cells transfected miR-155 mimics had lower levels of migration and invasion capacity than cells in the control group(P<0.05). However, transfection with miR-155 inhibitor significantly up-regulated the expression of CXCR4 as compared with the control group(P<0.05); JEG-3 cells transfected miR-155 inhibitor had higher levels of migration and invasion capacity than cells in the control group(P <0.05). Addition,the expression of p-AKT protein of JEG-3 cells was down-regulated after transfected miR-155 mimics,and the expression of p-AKT protein of JEG-3 cells was up-regulated after transfected miR-155 inhibitor. Conclusion: miR-155 may inhibits the invasion and migration of trophoblast cells by regulating CXCR4/ PI3K/ AKT pathway contributing to the development of preeclampsia.

合成环瓜氨酸化蛋白短肽的免疫原性和致关节炎性研究

目的：：构建环瓜氨酸化蛋白短肽诱导性小鼠关节炎模型,探讨该短肽的免疫原性、致关节炎性。方法：36只DBA/1小鼠随机分为3组,于第0天、第21天分别以Ⅱ型胶原( CⅡ,CIA)、环瓜氨酸化波形蛋白短肽( CCit-Vim,CCV-IA)和偶联血蓝蛋白( KLH)的环瓜氨酸化波形蛋白短肽( CCit-Vim+KLH,CCV+K-IA)皮下注射。 ELISA检测血清抗CⅡ抗体、抗CCit-Vim抗体、抗CCP抗体及TNF-α,间接免疫荧光法( IIF)检测抗大鼠食管角蛋白抗体( AKA),对关节炎指数( AI)、足容积、踝关节病理学进行评价。结果：CCV+K-IA小鼠关节炎发病率为25%(3/12),但关节炎出现时间晚,持续时间短,发病率及关节炎程度均低于CIA；CCV-IA无关节炎发生。 CCV+K-IA产生抗CCit-Vim抗体高于CIA ( P=0.031),产生抗CCP抗体反而低于CIA(P=0.007)。 CCV+K-IA、CCV-IA产生的抗CⅡ抗体水平均低于CIA(P<0.05)。 CCV+K-IA与CIA的TNF-α高于CCV-IA (P<0.05)。 CCV+K-IA的AKA阳性率高于其余两组(50% vs CCV-IA 25%、CIA 16.67%)。 CCV-IA和CCV+K-IA踝关节病理显示轻度滑膜增生,无滑膜血管翳形成及炎性细胞浸润。结论：偶联KLH的CCit-Vim短肽不仅具有强的免疫原性,而且具有致关节炎性；与CⅡ比较,CCit-Vim+KLH能诱导出更高的AKA阳性率。

TLR2/4在 MTB Hsp16.3刺激小鼠巨噬细胞过程中表达及作用的初步探讨

目的：：在体外细胞水平,初步探讨TLR2/4在MTB Hsp16.3刺激小鼠骨髓来源巨噬细胞的表达及作用。方法：从BALB/c小鼠的胫腓骨中取骨髓细胞,与GM-CSF共培养获得骨髓来源的M0型巨噬细胞,流式检测F4/80和CD11b的表达并观察其形态；100 ng/ml MTB Hsp16.3刺激M0巨噬细胞,分别培养0、12、24、36、48、72 h,Real-time PCR检测不同时间点TLR2/4的表达水平；利用RNAi干扰技术沉默巨噬细胞表面的TLR2/4受体,MTB Hsp16.3刺激沉默TLR2/4的M0巨噬细胞,分别培养0、12、24、36、48、72 h,Real-time PCR检测不同时间点TLR2/4及Ym-1、Fizz1、IL-10、TNF-α、iNOS、TGF-β细胞因子的表达水平。结果：M0型巨噬细胞在 MTB Hsp16.3刺激后出现了较短的伪足,沉默 TLR2/4的 M0型巨噬细胞在 MTB Hsp16.3刺激后出现了较长伪足；M0巨噬细胞在MTB Hsp16.3刺激后高表达TLR2/4。 MTB Hsp16.3刺激沉默TLR2/4的M0型巨噬细胞,高表达M1型巨噬细胞相关的细胞因子IL-6、TNF-α、iNOS,低表达M2型巨噬细胞相关的细胞因子IL-10、TGF-β、Ym-1、Fizz1。结论：MTB Hsp16.3通过TLR2/4促进M0型巨噬细胞向M2型转化,抑制M1型巨噬细胞,这可能参与了MTB躲避巨噬细胞的吞噬过程。

原头蚴体外刺激巨噬细胞高表达PPARα/γ并调节其极化

目的：：探讨原头蚴与RAW264.7共培养后PPARα/γ的表达水平以及对巨噬细胞极化的作用。方法：原头蚴与RAW264.7共培养12、24、36、48、72 h取细胞。用qRT-PCR的方法检测RAW264.7细胞PPARα/γ的表达水平,用qRT-PCR的方法检测巨噬细胞M1型相关因子TNF-α、MCP-1、IL-1β和M2型相关因子Arg-1、TGF-β、Fizz-1的水平,ELISA的方法检测Arg-1和MR的表达量。结果：RAW264.7细胞PPARα/γ的表达水平和M2型相关因子Arg-1、TGF-β、Fizz-1和MR均逐渐升高,72 h表达高(P<0.05)；巨噬细胞M1型相关因子TNF-α、MCP-1、IL-1β先升高后降低(P<0.05),Arg-1和MR的蛋白水平也逐渐增高。结论：原头蚴与RAW264.7共培养后PPARα/γ的表达逐渐升高,可能促进巨噬细胞由M1型向M2型极化,从而在虫体免疫逃逸中发挥一定作用。

结核分枝杆菌Rv3245蛋白抗原免疫学特性的研究

目的：：研究结核分枝杆菌Rv3425蛋白免疫学特性,评估其诊断应用价值及在结核致病性中的作用。方法：将Rv3425基因克隆至pET28a载体中,诱导表达Rv3425融合蛋白并进行纯化；利用ELISA、Western blot分析其抗原性与特异性；流式检测该抗原对巨噬细胞凋亡的影响。结果：获得了可溶性原核表达融合蛋白Rv3425,Rv3425蛋白能刺激灭活结核分枝杆菌免疫小鼠脾细胞产生高水平的特异性IFN-γ、纯化的Rv3425蛋白能与结核感染小鼠血清特异性结合,其特异性血清抗体IgG及IgM在结核病人中的水平明显高于健康人,发现该蛋白能诱导巨噬细胞的凋亡。结论：本研究发现结核分枝杆菌Rv3425蛋白具有较强的抗原性且能促进巨噬细胞的凋亡,这些发现对于结核病的诊断及致病机制的研究具有重要价值。

扁蒴藤素对支气管哮喘患儿Th17/Treg失衡的影响及意义

目的：：探讨扁蒴藤素对支气管哮喘患儿Th17/Treg体外培养细胞的影响及意义,从而探讨免疫因素在支气管哮喘治疗中的机理。方法：提取支气管哮喘患儿外周血单个核细胞,并在体外给予扁蒴藤素干预,流式细胞术检测Th17及Treg比例,ELISA方法检测细胞培养上清液中IL-17及TGF-β含量变化,实时定量PCR检测RORγT及Foxp3含量。结果：扁蒴藤素干预组与对照组相比,CD4+IL-17+T细胞(即Th17细胞)表达量显著降低,CD4+CD25+Foxp3+T细胞(即Treg细胞)表达量显著升高,各组均存在统计学意义(P<0.05)；与对照组相比,IL-17含量显著降低,TGF-β含量显著升高,各组均存在统计学意义(P<0.05)；与对照组相比,RORγT含量显著降低,Foxp3含量显著升高,各组均存在统计学意义(P<0.05)。结论：扁蒴藤素干预可较大程度缓解体外培养Th17/Treg细胞失衡,提示该药物可能通过影响免疫平衡来调节哮喘的发生发展,为扁蒴藤素在临床治疗哮喘的应用提供了理论支持。

补阳还五汤对EAE小鼠免疫调节的作用

目的：：探讨补阳还五汤对实验性自身免疫性脑脊髓炎的抗炎治疗效果和免疫调节机制。方法：雌性C57BL/6小鼠采用MOG35-55多肽诱导建立EAE模型后，随机分为生理盐水组、补阳还五汤组，每组13只。造模的第3天给药，生理盐水组给予生理盐水25 ml/kg灌胃，补阳还五汤组给予补阳还五汤生药量50 g/kg灌胃，共治疗25 d。每天记录临床症状评分和体重变化。 HE染色检测脊髓组织炎细胞浸润，髓鞘染色观察髓鞘脱失情况，免疫荧光技术检测脾脏ROCKⅡ表达。流式细胞术检测脾脏CD4+T细胞亚群变化。 Western blot法检测脊髓TLR4、Myd88、NF-κB、COX-2、ROCKⅡ和脑ROCKⅡ的表达。结果：与生理盐水组比较，补阳还五汤治疗后明显降低EAE小鼠神经功能评分( P<0.001)，抑制中枢神经系统炎细胞浸润( P<0.05)，减轻髓鞘脱失(P<0.05)，增加CD25+(P<0.05)、IL-10+(P<0.05)、TGF-β+(P<0.01)、IFN-γ+(P<0.05)CD4+T细胞的比例；抑制外周和中枢ROCKⅡ的表达(P<0.05)；减少脊髓TLR4、Myd88、NF-κB、COX-2的表达(P<0.05)。结论：补阳还五汤可以通过抑制ROCKⅡ/TLR4/ NF-κB炎性通路和调节外周T细胞亚群比例发挥其抗炎和免疫调节作用。

CEA迷你基因串联体疫苗的体内抗肿瘤活性观察

目的：：观察已构建的含有 CEA625-667基因单倍体疫苗 pcDNA-CEA625-667及三串联体的 DNA 疫苗 pcDNA-triCEA625-667对荷瘤小鼠体内肿瘤的抑制情况及小鼠存活时间的改变。方法：建立小鼠肝细胞癌实验动物模型,应用单倍体疫苗pcDNA-CEA625-667及三串联体DNA疫苗pcDNA-triCEA625-667免疫小鼠,以生理盐水为对照组,观察各实验组小鼠皮下肿瘤生长情况,记录皮下肿瘤生长曲线,观察疫苗对荷瘤小鼠肿瘤生长速度的影响以及疫苗对荷瘤小鼠生存时间的影响。结果：与生理盐水对照组相比,两种疫苗均能明显抑制 CEA 阳性荷瘤小鼠的肿瘤体积以及生长速度( P<0.01),其中, pcDNA-triCEA625-667疫苗组的抑制作用明显优于pcDNA-CEA625-667疫苗组( P<0.01),而二者均不能抑制CEA阴性荷瘤小鼠的肿瘤生长。 pcDNA-CEA625-667疫苗组平均生存时间为(48.50±6.73)d,与生理盐水对照组(39.00±6.64)d相比有显著差异(P<0.01)；pcDNA-triCEA625-667疫苗组生存时间(48.50±6.73)d明显高于生理盐水对照组和pcDNA-CEA625-667疫苗组(P<0.01)。两组疫苗均不能延长CEA阴性荷瘤小鼠的生存时间。结论：无论是单倍体还是三串联体的DNA疫苗,均能够明显抑制CEA阳性荷瘤小鼠的肿瘤生长速度(P<0.01)及明显延长其生存时间(P<0.01),而对CEA阴性荷瘤小鼠则无治疗作用。

c-Myc调控PIK3 R3抑制黑色素瘤B16-F10细胞的迁移和侵袭

目的：：探讨c-Myc调控PIK3R3对黑色素瘤B16-F10细胞的迁移和侵袭的影响。方法：运用免疫组化检测PIK3R3在正常皮肤组织和黑色素瘤组织的表达；检测慢病毒(LV3-c-Myc和LV3-PIK3R3)对c-Myc和PIK3R3基因的沉默效率；使用EdU增殖实验检测沉默c-Myc和PIK3R3后黑色素瘤细胞株B16-F10的增殖情况；Transwell侵袭实验检测c-Myc和PIK3R3的表达对黑色素瘤细胞B16-F10的侵袭能力的影响；划痕实验检测c-Myc和PIK3R3的表达对黑色素瘤细胞B16-F10迁移能力的影响；qPCR检测沉默c-Myc和PIK3R3后miR-199a的表达；qPCR检测转染miR-199a mimics和miR-199a inhibitor后c-Myc和PIK3R3的表达；双荧光素酶报告基因系统检测miR-199a对c-Myc和PIK3R3转录活性的影响。结果：和正常皮肤组织比较,PIK3R3在黑色素瘤组织中表达明显增加；沉默c-Myc和PIK3R3基因后,黑色素瘤细胞株B16-F10的增殖、侵袭和转移能力明显降低；沉默c-Myc和PIK3R3基因后,miR-199a表达上调；转染miR-199a mimics后,c-Myc和PIK3R3表达降低；转染miR-199a inhibitor后,c-Myc和PIK3R3表达上调；双荧光素酶报告基因系统检测结果显示,miR-199a可以直接调控c-Myc和PIK3R3的转录活性。结论：c-Myc可以通过miR-199a调控PIK3R3的表达,从而促进黑色素瘤细胞的增殖、侵袭和迁移能力。

miR-132靶向调控Ezrin抑制卵巢癌细胞增殖、促进凋亡的实验研究

目的：：探讨微小核糖核酸分子( miRNA)-132在卵巢癌中生物学作用和作用靶点。方法：收集22例卵巢癌及癌旁非肿瘤组织标本,RT-PCR检测miR-132表达量；RT-PCR检测人正常卵巢上皮细胞和卵巢癌细胞系中miR-132表达量；选择miR-132表达量高或低的卵巢癌细胞株,分别转染阴性对照质粒( NC )和 miR-132 mimic质粒, RT-PCR检测转染后miR-132表达量；CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blot检测Ezrin蛋白表达。结果：卵巢癌组织中miR-132表达量显著低于癌旁非肿瘤组织,而卵巢癌细胞系中miR-132表达量显著低于正常卵巢上皮细胞,差异均有统计学意义(P<0.05)；选择卵巢癌细胞株中miR-132表达量低卵巢癌SKOV3细胞株进行基因转染,与转染阴性对照质粒相比,转染miR-132 mimic质粒后miR-132表达量显著上升,细胞增殖显著降低,细胞凋亡显著增加,差异均有统计学意义( P<0.05)；Western blot结果显示,上调miR-132表达后,卵巢癌SKOV3细胞株中Ezrin蛋白表达显著上升(P<0.05)。结论：在卵巢癌中, miR-132可能作为一种抑癌基因通过靶向调控Ezrin抑制卵巢癌细胞增殖、促进凋亡。

免疫学自主式实验技术训练模式的效果评价

免疫学是生物医学领域的基础理论课,也是一门实践性很强的综合性应用学科,与其他课程关系紧密,并形成交叉,因此发展非常迅速。其实验技术的教学不仅有助于学生对免疫学理论的理解和掌握,而且也是培养学生临床技能与科研能力的主要途径,对人才的综合素质培养具有十分重要的作用[1,2]。但是,传统的“照方抓药式”验证性实验教学忽视了学生强烈的独立意识和网络教学资源的巨大潜能,不利于学生理性思辨能力、自主工作能力、创新能力和团队精神的培养与提高。为此,我们教研室采用自主式实验技术训练模式开展免疫学实验技术训练,取得了良好的效果[3],本文对2013级生物科学、动物医学和动物药学专业的学生进行了问卷调查,并据此对免疫学自主式实验技术训练模式的实施效果进行评价。

LBL、CBL、TBL多轨教学模式在医学免疫学课程改革中的应用--以卓越医师培养为视角

医学免疫学是研究机体免疫系统的组成以及免疫应答过程的一门基础学科。随着生命科学的快速发展,医学免疫学的原理已经广泛应用于临床诊断、疾病治疗等各个方面[1]。从初16世纪中国医生首次用人痘苗预防天花,到20世纪的生物导弹,即单克隆抗体靶向治疗,再到现在21世纪的嵌合抗原受体T 细胞免疫疗法( Chimeric antigen receptor T-cell immunotherapy,CAR-T)治疗造血系统及非造血系统肿瘤,免疫学在医学发展史上已然成为耀眼的一颗明珠。因此,作为与临床联系紧密的一门基础学科,学好医学免疫学,掌握先进临床诊断及治疗技术对临床专业学生的培养,尤其是卓越医师培养其意义尤为重要。

2016年国内外免疫学研究重要进展

每当梳理免疫学年度进展的时候，我们既兴奋又感慨，兴奋地看到过去的一年中，基础免疫学理论不断完善，临床免疫学应用不断拓宽，免疫学与前沿学科的交叉融合不断深入，免疫学相关技术不断革新，在免疫学研究的各个领域都涌现出令人兴奋的新进展；感慨地看到我国免疫学研究又上了一个新台阶。这些研究为我们解开许多免疫学研究中悬而未决的重大科学问题提供了重要线索，让我们对免疫系统和免疫应答的具体机制有了更加整体、全面而清晰的了解，也帮助我们深入认识免疫相关重大疾病的具体机制，并从免疫学角度寻找有效的防控手段。本文将对2016年度国际和国内免疫学研究领域的一些重要进展进行总结梳理，疏漏之处期待各位读者的批评指正！

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