单核巨噬细胞极化在慢性活动性乙型肝炎中的表达及意义

目的：：研究慢性活动性乙型肝炎患者单核巨噬细胞的数量与功能变化。方法：随机选择51例慢性乙型肝炎患者(其中轻中度20例,重度31例)以及正常对照13例。采用Percoll分层液分离PBMCs,以CD14标记单核细胞,流式细胞仪检测PBMCs表面分子CD80、CD86、HLA-DR、CD163的表达；ELISA检测血清细胞因子IL-10、IL-12与IL-23的水平；免疫组织化学染色检测CD68在肝脏的分布。结果：轻中度慢性乙型肝炎组、重度慢性乙型肝炎组CD80表达水平低于对照组。慢性乙型肝炎患者外周血单核细胞CD86的表达低于对照组,其中重度组与对照组比较有统计学差异( P<0.01)。慢性乙型肝炎患者HLA-DR的表达低于对照组,其中轻中度组与重度慢性乙型肝炎组间HLA-DR的表达水平差异有统计学意义(P<0.01)。此外,慢性乙型肝炎患者外周血单核细胞CD163的表达明显高于对照组( P<0.01)。慢性乙型肝炎患者肝脏汇管区CD68阳性细胞浸润增加,汇管区增大(P<0.05)。轻中度慢性乙型肝炎组、重度慢性乙型肝炎组与对照组血清IL-10表达水平之间两两比较差异显著,均具有统计学意义(P<0.01)。结论：慢性乙型肝炎患者巨噬细胞参与肝脏病变的发生,外周血中单核细胞存在M1型/M2型平衡失调,向M2型极化的现象,可能参与其慢性化发展。

乙肝病毒感染不同阶段抗原肽特异性细胞毒性 T 淋巴细胞的初步研究

目的：：为了阐明HBV感染不同阶段机体免疫功能的不同。方法：分别构建了我国高频等位基因HLA-A*0201三种常见抗原肽表位(HBVcore18-27、pol575-583、env335-343)四聚体复合物，并用这些四聚体检测HBV感染外周血单个核细胞( PBMCs)中HLA-A*0201限制性抗原特异性CD8+T细胞的频率、功能及CD127的表达。结果：在大多数自限性HBV感染者的PBMCs中抗原特异性CD8+T细胞的频率和增殖能力都高于慢性HBV感染者。在低病毒载量的免疫低复制期抗原特异性CD8+T的数量和在高病毒载量、肝脏损害免疫清除期及免疫耐受期抗原特异性CD8+T细胞频率是相似的，同病毒定量及ALT水平无显著相关性。慢性HBV感染者抗原特异性CD8+T细胞增殖能力和病毒滴度呈反比。在自限性HBV感染患者抗原特异性CD8+T细胞分泌IFN-γ的功能明显高于慢性HBV患者，在免疫耐受期基本丧失产生细胞因子的能力；HBV感染后不同免疫状态的HBsAg水平不同，免疫耐受期高，其次为免疫清除期、再活动期，低复制期的低。而且随着HBsAg水平下降，同HBV DNA的相关性也逐渐下降。慢性HBV感染者中CD8+CD127+T细胞要低于对照组及自限性感染组，特别是在HBeAg阳性的免疫耐受期及免疫清除期组患者中CD8+CD127+T细胞比例更低。结论：慢性HBV感染中抗原特异性CD8+T细胞的频率不是决定免疫应答的唯一因素，慢性乙肝患者体内记忆性的抗原特异性CD8+T细胞并未被完全清除或缺失，这为治疗性疫苗和免疫恢复治疗提供了可行性。

桥本氏甲状腺炎患者外周血中 CD4+CD45 RO+记忆性 T细胞的表达及意义

目的：：检测初诊桥本氏甲状腺炎( Hashimoto＇s thyroiditis,HT)患者外周血CD4+CD45RO+记忆性T细胞比例,探讨其在HT发病中的意义。方法：收集初诊的HT患者作为病例组(HT,n=53),另外选取年龄、性别相匹配的正常人作为对照组(HC,n=43),并根据甲状腺功能状态将HT组分为甲状腺功能正常组(HT-A,n=15)、亚临床甲减组(HT-B,n=14)和临床甲减组(HT-C,n=24)。流式细胞仪检测外周静脉血中CD4+CD45RO+记忆性T细胞比例,酶联免疫吸附法检测血清中IFN-γ、IL-17水平,化学发光法检测甲状腺功能及甲状腺特异性抗体滴度。结果：HT组外周血中CD4+CD45RO+记忆性T细胞比例、IFN-γ、IL-17、TPOAb与TgAb水平均显著高于HC组,P<0.01。双变量相关分析显示HT患者外周血CD4+CD45RO+记忆性T细胞的比例与IFN-γ、TPOAb、TgAb均呈正相关(P<0.01,P=0.015,P<0.01)。结论：CD4+CD45RO+记忆性T细胞在HT患者外周血中呈高表达,CD4+CD45RO+记忆性T细胞可能参与了HT的发病过程。

人Cosmc胞外段蛋白在昆虫细胞Sf-9中的表达与纯化研究

目的：：利用昆虫细胞Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达人Cosmc胞外段蛋白，为体外研究Cosmc蛋白的结构和功能奠定基础，同时也为 O-连接糖基化及相关疾病的研究提供思路。方法：采用 Bac-to-Bac 系统，构建重组转移质粒pFastBac1-Cosmc extracellular domain(pFastBac1-Cosmc ED)，转化到含穿梭载体Bacmid的感受态细胞DH10Bac中，通过蓝白斑筛选和PCR鉴定，获得重组转座子rBacmid-Cosmc ED。在脂质体介导下，重组病毒感染Sf-9无血清细胞，在Sf-9中表达Cosmc 胞外段蛋白，由于Cosmc N端加有昆虫细胞信号肽HBM( Honey Bee Melittin)且不含有跨膜段，所以Cosmc胞外段蛋白表达后分泌到培养基上清中，通过SDS-PAGE和Western blot对表达产物进行检测，并通过Ni-NTA亲和层析柱对其进行纯化分析。结果：SDS-PAGE和Western blot分析显示得到一条分子量约为33 kD的特异性条带，与目的蛋白大小相符，质谱结果进一步证明所得蛋白为Cosmc胞外段蛋白。结论：Sf-9细胞中可成功表达Cosmc胞外段蛋白，为进一步研究Cosmc的结构和功能奠定基础。

糖尿病肾病患者炎症水平、免疫功能及与肾脏病变的关系

目的：：探讨糖尿病肾病( DN)患者炎症水平、免疫功能与肾脏病变的关系。方法：将124例DN患者根据24 h尿微量白蛋白排泄率( UAER)随机分为正常白蛋白尿( NA)组35例,微量白蛋白尿( MA)组45例和临床白蛋白尿( CP)组44例,另选取35例健康体检者为对照组,应用放射免疫法测定各组C反应蛋白( CRP)水平,应用酶联免疫法测定各组白细胞介素( IL)-6、细胞肿瘤坏死因子( TNF)-α及体液免疫( IgG、IgA、IgM)水平,采用流式细胞仪测定机体细胞免疫反应( CD4+ Th17、Th17/Treg 、CD4+ CD25+ Treg)。采用全自动化生化分析仪测定各种血清血肌酐( Scr)、半胱氨酸蛋白酶抑制物C( CYSC)及UAER。结果：NA组、MA组、CP组血清CRP、IL-6、TNF-α、Scr、CYSC、UAER水平显著高于对照组(P<0.05),CP组血清CRP、IL-6、TNF-α、Scr、CYSC、UAER水平显著高于NA组、MA组(P<0.05)。 NA组、MA组、CP组血清CD4+ CD25+ Treg、IgG水平显著低于对照组(P<0.05),而CP组血清CD4+ CD25+ Treg、IgG水平显著低于NA组、MA组(P<0.05)。 NA组、MA组、CP组血清IgA、IgM、Th17/Treg、CD4+Th17水平显著高于对照组( P<0.05)。经Pearson单因素分析, CRP、IL-6、TNF-α与Scr、CYSC、UAER呈正相关(P<0.05),而与Th17/Treg 、CD4+ CD25+ Treg、IgG水平呈负相关(P<0.05)。结论：DN患者存在微炎状态及免疫功能紊乱的情况,通过控制或消除促炎因素,改善DN患者免疫功能,对延缓DN患者病情发生发展有重要的意义。

主动免疫：预防蓖麻毒素、相思子毒素中毒

蓖麻毒素( Ricin toxin, RT )和相思子毒素( Abrin toxin,AT)都属于大分子植物来源的蛋白毒素,属于Ⅱ型核糖体失活蛋白( Ribosome-inactivating proteins,RIP),能够抑制细胞蛋白合成而具有极强的细胞毒性。由于来源广、毒性强等特点,二者均被认为是重要的致死性生物毒素战剂,美国疾病控制中心( CDC)定义为B级生物威胁[1]。因此,开展对RT和AT的生防疫苗的研究,对提高军队和国家应对生物战和生物恐怖的能力和水平,增强生防能力和保障国家安全,具有非常重要的军事意义和社会意义。

P D-1/P D-L1抑制剂在晚期非小细胞肺癌中的临床进展与治疗策略

肺癌是世界范围内发病率与致死率高的肿瘤[1],而非小细胞肺癌占肺癌的85%。绝大多数患者就诊时已经属于晚期,经过化疗、放疗等传统治疗后,5年生存率不超过15%。由于GVAX瘤苗、黑素瘤相关抗原-3( MAGE-A3)疫苗、BLP 疫苗、MUC-1疫苗等肿瘤疫苗在肺癌的临床研究中失败,既往认为免疫治疗对肿瘤无效,肿瘤细胞可以通过“免疫逃逸”机制而避免免疫系统的攻击。近年来肿瘤免疫治疗研究发现了一些与肿瘤免疫逃逸相关的监测点,针对这些监测点设计的免疫监测点抑制剂,如CTLA-4和PD-1/PD-L1抑制剂在临床中观察到了抗肿瘤的效果,也为治疗 NSCLC 提供了一种新的方法。

结缔组织病相关间质性肺病的诊治进展

间质性肺病( Interstitial lung disease ,ILD)是一组以不同程度肺泡炎及肺纤维化为基本病理改变的异质性非肿瘤和肺部感染性疾病的总称,按有无病因可分为特发性间质性肺病和继发性间质性肺病。继发性间质性肺病可继发于多种疾病、某些药物及石棉、粉尘、射线等。其中结缔组织病是继发性间质性肺病的重要病因之一。结缔组织病( Connective tissue disease,CTD)是以一类以血管和结缔组织的慢性炎症为病理基础而引起全身各器官损害的自身免疫性疾病。由于肺含有丰富的胶原、血管等结缔组织并具有免疫调节、代谢、内分泌等功能,因而成为CTD常累及的靶器官。结缔组织相关间质性肺病( Connective tissue disease-associated interstitial lung disease,CTD-ILD )发生率报道差异较大,约在19%~34%[1,2]。 CTD 中特发性炎性肌病(Idiopathic inflammatory myopathies,IIM)、系统性硬化症( Systemic sclerosis, SSc )、类风湿性关节炎( Rheumatoid arthritis, RA )、干燥综合征( Sjogren＇s syndrome,SS)、系统性红斑狼疮( Systemic lupus ery-thematosus,SLE)合并ILD较多见。

TRPV1抗炎保护功能的研究新进展

瞬时感受器电位香草酸受体( Transient receptor potential vanilloid,TRPV1)属于瞬时受体电位(TRP)超家族重要成员之一,是一类主要位于细胞膜上的重要的非选择性阳离子通道,在 TRPV 亚族中, TRPV1与炎性疼痛的形成关系为密切[1]。研究表明,TRPV1是感觉神经介导某些伤害性刺激的分子整合器,与炎性疼痛的产生关系密切,多种神经炎症介质和内源性介质( SP、PG及NGF等)均可直接或间接激活TRPV1[2]。 TRPV1被激活后,会使胞外钙离子内流,从而兴奋感觉神经元,释放兴奋性氨基酸和多种神经肽,引发相关生物学效应。大量研究显示 TRPV1激活对抗炎功能具有重要作用[3]。

环磷酰胺免疫抑制机制及在动物模型上的应用

近年来,环境污染、生态失衡等引发的人与动物免疫抑制性疾病逐年上升。为进一步研究此类疾病,免疫抑制模型的建立显得尤为重要。环磷酰胺( Cyclophosphamide,CTX)是制备动物免疫抑制模型中应用广泛的药物,它早可追溯到第一次世界大战,耶鲁大学Louis Goodman 和Alfred Gilman 教授解剖战死于生化武器的士兵时发现芥子气有杀死淋巴组织的效果,由此揭开免疫抑制剂的序幕。1935年人工合成毒性较低但作用与芥子气相似的氮芥( Nitrogen mustard),试验证明其对淋巴肉瘤和白血病有疗效,但副作用大；随后以氮芥为基础,合成众多的免疫抑制剂,其中CTX能通过杀伤免疫细胞而影响免疫的各阶段而得以广泛的应用[1]。

肠道微生物群对宿主免疫系统发育和功能的调节

动物肠道共生着一个庞大而复杂的微生物群，主要是细菌，也包含真菌、酵母菌、病毒和古细菌，这些微生物群构成一个微生态系统，在维持肠道稳态方面发挥着重要的作用。而免疫系统必须不断监测胃肠道病原体的存在。肠道微生物群调节免疫系统保持互利关系，但维持体内平衡的机制尚未完全了解。细胞和分子水平的新研究进展，揭示出微生物群及代谢物针对不同的细胞类型(包括肠上皮细胞、单核吞噬细胞、先天淋巴样细胞、B和T淋巴细胞)影响宿主免疫功能。为此，本文综述了肠道微生物群对肠道健康与疾病的影响，肠道微生物群促进宿主免疫系统的发育及调节机体免疫系统功能。

巨自噬及分子伴侣介导自噬在类风湿关节炎中的相互作用及其联系

1自噬的概述
　　自噬又称为“自我吞噬”( Self-eating ),是进化保守的细胞内溶酶体分解代谢过程,在细胞的生存、变异、发育及维持内环境稳态中发挥着必不可少的作用。细胞降解细胞质成分并回收利用营养素,同时自噬也参与固有免疫,与淋巴细胞的发育、形成和增殖有关[1]。研究发现自噬与自身免疫性疾病、肿瘤、代谢异常、氧化应激等病理过程密切相关。根据细胞内物质转运到溶酶体的方式不同,在哺乳动物细胞中分为三类：巨自噬( Macro-autophagy)、微自噬( Microautophgy)、分子伴侣介导自噬( Chaperone-mediated autophagy, CMA )。细胞可通过不同的自噬途径清除错误折叠、受损的蛋白质,为细胞的再循环提供必需原料。尽管不同的自噬途径有其独特的性状并可在特定状况下被激活,但近期研究表明,不同的自噬途径之间相互联系、互为补充[2]。

《中国免疫学杂志》征稿、征订启事

托样受体3（TLR-3）信号通路介导的病毒免疫逃逸

天然免疫是机体抵御病毒入侵的首道防线,对病原快速有效地识别是激发天然免疫的前提。动物的天然免疫依赖一类能够识别微生物特定组分的模式识别受体( Pattern recognition receptors, PRRs )。其中,托样受体3(Toll like receptor-3,TLR3)通过识别病毒感染时产生的 dsRNA,启动下游的信号转导,上调Ⅰ型干扰素α和β( Interferon α/β, IFNα/β)的表达,Ⅰ型干扰素能够诱导细胞产生抗病毒蛋白( Antivirus protein,AVP),同时也有助于激发机体的适应性免疫[1]。

人DcR3表达载体的构建及验证

目的：：构建人DcR3表达载体并验证其在体外细胞表达情况。方法：从人血液组织中扩增出DcR3中长度915 bp的CDS区，将其克隆到带有红色荧光的真核表达载体pEF1a-IRES-DsRed-Express2上，用FuGene HD转染法转染到肝星状细胞(LX-2)中，用RT-PCR以及Western blot检测其mRNA表达量和蛋白表达量。结果：通过RT-PCR和Western blot检测显示转染DcR3表达载体质粒的肝星状细胞中DcR3的转录和翻译水平均显著性提高。结论：成功构建出人DcR3表达载体并在LX-2细胞中高效表达。

鼠抗人S100 A9天然蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

目的：：探索以白细胞为免疫原的鼠抗人白细胞天然蛋白单克隆抗体( monoclonal antibodies,mAbs)制备与克隆筛选鉴定方法,制备鼠抗人S100A9天然蛋白单克隆抗体,并鉴定抗体性质。方法：用健康人外周血白细胞免疫小鼠,利用B淋巴细胞杂交瘤技术制备mAbs,通过免疫细胞化学法对杂交瘤细胞进行非特异性阳性筛选,有限稀释法进行亚克隆,应用免疫沉淀-质谱法进行mAb特异性鉴定,通过Western blot进行细胞株筛选,小鼠体内诱生腹水法制备单抗,亲和层析法纯化, ELISA间接法测定效价及亲和力,Western blot进行特异性鉴定及交叉反应性分析,免疫组化染色人乳腺癌石蜡切片。结果：获得免疫细胞化学检测阳性多克隆细胞35孔,分泌鼠抗人S100A9蛋白单克隆抗体细胞株11株,优选1株制备腹水并纯化鉴定抗体,抗体效价为1∶3.18×105,亚类为IgG1,轻链为kappa链,抗体纯度达95%以上,亲和力常数3.54×108 L/mol,与S100A8的交叉反应率为0.12%,与S100A12和S100A13几乎无交叉反应,组化染色识别人乳腺癌组织中的S100A9蛋白。结论：成功制备鼠抗人S100A9天然蛋白单克隆抗体,该单抗具有高效价、较高亲和力和高特异性,能为其应用于免疫组化检测S100A9蛋白的表达提供依据。

力达霉素诱导人宫颈癌Caski细胞发生免疫原性细胞凋亡

目的：：探讨抗肿瘤药物力达霉素能否抑制人宫颈癌Caski细胞增殖并且诱导Caski细胞发生免疫原性细胞凋亡。方法：MTT比色法检测Caski细胞增殖；Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测Caski细胞凋亡。 Western blot 分析细胞中Bax和Bcl-2的表达；免疫荧光流式细胞术检测细胞凋亡后细胞膜上钙网蛋白的表达。结果：力达霉素抑制Caski细胞的增殖，具有时间和剂量依赖性；5μg/L的力达霉素作用Caski细胞48 h后，肿瘤细胞凋亡率为11.5%；Bax表达量显著增加，而Bcl-2含量明显减少(P<0.05)；细胞膜表面钙网蛋白表达高达67.2%，显著高于对照组的2.31%。结论：力达霉素能够有效抑制人宫颈癌Caski细胞增殖，其作用机制与线粒体途径诱导细胞凋亡相关，同时促使钙网蛋白转移到Caski细胞膜表面表达，可能具有诱导肿瘤细胞发生免疫原性细胞凋亡的能力。

Smad7基因质粒转染骨髓间充质干细胞在体外对肝星状细胞 TGF-β1信号传导的影响

目的：：探讨Smad7基因质粒转染骨髓间充质干细胞( Smad7-EGFP-BMSCs)在体外抑制肝纤维化的机制。方法：分离、纯化大鼠BMSCs并经Smad7基因腺病毒质粒( Ad-Smad7-EGFP)转染建立Smad7-EGFP-BMSCs。实验将大鼠肝星状细胞HSC-T6分为A组、B组、C组和D组,分别与Smad7-EGFP-BMSCs、BMSCs、Smad7质粒及PBS进行共同培养72 h,采用ELISA测定培养液中Smad7和TGF-β1的表达,采用Western印迹法和RT-PCR法测定细胞Smad7、TGF-β1、Col Ⅰ、α-SMA蛋白和mRNA的表达,采用流式细胞术测定细胞凋亡情况。结果：(1)ELISA结果显示,B组、C组和D组培养液TGF-β1蛋白水平较A组显著降低(P<0.01),而Smad7蛋白水平较A组显著升高(P<0.01)；D组TGF-β1蛋白水平较B组和C组显著降低(P<0.01),而Smad7蛋白水平较B组和C组显著升高(P<0.01)；(2)Western印迹法和PCR结果显示,B组、C组和D组TGF-β1、ColⅠ和α-SMA蛋白和mRNA表达水平较A组显著降低(P<0.01),而Smad7蛋白和mRNA表达水平较A组显著升高(P<0.01)；D组TGF-β1、ColⅠ、α-SMA蛋白和mRNA表达水平较B组和C组显著降低(P<0.01),而Smad7蛋白和mRNA表达水平较B组和C组显著升高(P<0.01)；(3)流式细胞仪检测结果显示,B组、C组和D组HSC-T6细胞凋亡率较A组显著升高(P<0.01),而D组细胞凋亡率较B组和C组显著升高(P<0.01)。结论：Smad7基因质粒转染骨髓间充质干细胞可通过作用肝星状细胞TGF-β1信号转导通路以及促进星状细胞凋亡而具有抗肝纤维化的作用。

鸡B-FA分子中结合Ii链功能片段特性的研究

目的：：研究鸡Ii链结合的B-FA分子的功能片段及其特征。方法：将克隆的B-FA基因片段(α1α2、sα1α2和α3TC)分别插入原核或真核表达质粒,然后分别转染或与Ii共转染工程菌E. coli(BL-21)或293T细胞,经过诱导表达、亲和层析纯化和SDS-PAGE鉴定后,分别用Pull-down法观察B-FA片段与Ii结合与在细胞内的共定位特征。结果：首先,构建了3个重组原核表达质粒和4个重组真核表达质粒。原核表达的B-FA片段经亲和层析纯化可获得单一蛋白分子。其次,用Pull-down从共转染工程菌表达的蛋白分子中分别检测到Ii/B-FA-α1α2和Ii/B-FA-sα1α2,而未能检测到Ii与α3TC的结合物,而免疫印迹结果也表明该两片段是结合Ii链形成复合物的功能片段。后,在真核表达的293T中,B-FA-α1α2具有同B-FA相同的细胞定位特性。结论：鸡B-FA-α1α2片段是结合Ii的功能片段,并保持了B-FA的细胞定位的作用。本研究结果首次提供了B-FA分子与Ii的互相作用的实验依据。

吉西他滨对人非小细胞肺癌HCC827活性和凋亡的影响

目的：：研究吉西他滨对人非小细胞肺癌HCC827细胞活性以及凋亡的影响,以及与Bcl-2表达的关系。方法：采用cell counting kit-8法、细胞核Hochest33258染色法、流式细胞仪Annexin V-FITC/PI 双染法等多种方法,体外研究吉西他滨对人非小细胞肺癌HCC827的活性、凋亡和细胞周期的影响；采用Western blot法,观察药物作用后细胞中Bcl-2蛋白表达的变化。结果：吉西他滨(0.1~1000 ng/ml)对人非小细胞肺癌HCC827活性具有抑制作用,并有促凋亡效应。此外,可以将细胞阻滞在S期。在吉西他滨诱导的细胞凋亡过程中,凋亡因子Bcl-2蛋白的表达下调。结论：吉西他滨可以抑制人非小细胞肺癌HCC827细胞的增殖,并诱导细胞凋亡,S期周期阻滞,其诱导的凋亡可能是其杀死肿瘤细胞的主要机制之一,此外,凋亡与相关基因Bcl-2蛋白的表达具有一定关系。

人脐带血干细胞移植对2型糖尿病家兔血清学的影响

目的：：观察人脐带血干细胞( Human umbilical cord blood stem cells,HUCBSC)移植后2型糖尿病家兔血糖、胰岛素及二肽基肽酶Ⅳ( Dipeptidyl peptidase-Ⅳ,DPP-Ⅳ/CD26)的变化。方法：18只家兔随机分成正常对照组(6只,C组)和糖尿病造模组(12只),造模组制备2型糖尿病模型,其中6只经兔耳缘静脉输注给予免疫学表型为CD45+、CD34-的HUCBSC移植( A组),6只同法输注等量的PBS液作为对照( B组)。以上三组家兔均喂养观察4周,每天监测家兔血糖,每周测血胰岛素及DPP-Ⅳ/CD26的水平。结果：HUCBSC阳性标志物CD45表达率达100%,阴性标志物CD34表达率为3.5%。与非移植组相比,HUCBSC移植组家兔血糖和DPP-Ⅳ/CD26逐渐下降,胰岛素水平逐渐上升,差异均有统计学意义( P<0.01)。结论：HUCBSC呈圆形或椭圆形贴壁生长,免疫学表型为CD45+、CD34-。 HUCBSC移植可以明显降低家兔血糖、增加胰岛素分泌量、降低血DPP-Ⅳ/CD26的水平,从而为临床糖尿病及其并发症的治疗提供新的理论依据。

良恶性乳腺肿瘤外周血基因差异表达研究

目的：：利用基因表达谱数据，探讨良恶性乳腺肿瘤患者外周血基因表达变化。方法：从GEO数据库中获取良性和恶性乳腺肿瘤患者外周血单个核细胞(PBMCs)表达谱。 GEO2R在线工具筛选差异表达基因， DAVID工具富集基因功能和通路。 STRING数据库构建差异表达基因蛋白产物相互作用的网络，筛选核心基因。结果：良恶性乳腺肿瘤分别筛选到563和237个差异基因，乳腺癌差异基因涉及白细胞激活、血管生成等生物学过程以及白细胞跨内皮迁移信号通路。 IL8、RHOB、ITGB1等为关键基因。结论：良恶性乳腺肿瘤患者外周血基因表达模式存在明显差异，为将外周血作为替代材料应用于乳腺肿瘤的诊断及监测研究开辟了新思路。

胸腺在EAE小鼠不同临床时期变化的研究

目的：：探讨胸腺在EAE小鼠不同临床时期的变化。方法：记录小鼠EAE模型诱导后第0、10、15、20天的胸腺指数和胸腺细胞数；应用流式细胞术观察胸腺细胞的凋亡比例和脾脏CD4+CD44+T细胞的比例；应用PCR和电泳技术观察凋亡因子p53和Bcl-2的含量变化。结果：EAE小鼠在第0、10、15天胸腺指数和胸腺细胞数相应地逐渐减少；第10、15天胸腺细胞凋亡率升高，第10天高；CD4+CD44+T细胞比例在第10、15天升高，第10天高；EAE诱导第10天胸腺细胞p53含量升高，而Bcl-2含量降低。结论：EAE小鼠诱导后第15天胸腺萎缩严重，第10天凋亡率高，并且与基因p53和Bcl-2调控有关；EAE小鼠胸腺变化与小鼠发病关系密切，并且胸腺又先于临床症状恢复。

miR-150基因缺失对小鼠繁殖和血液学指标的影响

目的：：探讨miR-150基因缺失对小鼠繁殖和血液学指标的影响。方法：采用miR-150ko小鼠，观察该小鼠的窝产仔数和离乳率及生长曲线，测定其生殖指标；以全自动血球计数仪和自动生化分析仪测定2月龄miR-150ko小鼠和正常对照C57BL/6J小鼠血液细胞学和血清生化参数。结果：miR-150ko小鼠窝产仔数与离乳率与C57BL/6J正常对照小鼠相比均显著下降；miR-150ko小鼠外周血白细胞计数、中间细胞数、中性粒细胞数、中间细胞百分比、中性粒细胞百分比与C57BL/6J小鼠相比显著升高；而血小板计数、淋巴细胞百分比显著下降；miR-150ko小鼠的血清葡萄糖、总胆固醇水平较正常对照小鼠显著增高。结论：miR-150基因缺失可影响到小鼠的繁殖功能，并对某些血液细胞学指标及血糖、胆固醇水平产生影响。

升陷汤治疗实验性自身免疫性重症肌无力大鼠免疫机制研究

目的：：探讨升陷汤治疗实验性自身免疫性重症肌无力( EAMG)大鼠的免疫机制。方法：采用人工合成鼠源乙酰胆碱受体α亚基97-116肽段加完全弗氏佐剂免疫Lewis大鼠构建EAMG,经评估确定建模成功25只。将这25只大鼠随机分为模型对照组,阳性药物组(强的松组),升陷汤低、中、高剂量组。观察该方对模型大鼠临床评分、体重、低频重复电刺激( RNS,5 Hz)衰减率、血清中乙酰胆碱抗体( AChR Ab)含量及TGF-β、IFN-γ、IL-2、IL-4和IL-17水平的影响。结果：造模后各组较佐剂对照组RNS衰减率明显增大(P<0.01或P<0.05),且均超过10%,体重进行性下降,并出现典型肌无力样症状,证明造模成功。给药治疗后,升陷汤低、中、高剂量组大鼠RNS衰减率均显著降低(P<0.01),体重下降均减缓,症状好转。与模型对照组相比,升陷汤低、中、高剂量组血清AChR Ab含量均降低(P<0.05),TGF-β水平均升高,IFN-γ、IL-2、IL-4和IL-17水平均降低(P<0.01或P<0.05)。结论：升陷汤可使RNS衰减好转,改善EAMG大鼠体重持续下降趋势,并使体重增加趋势升高,其机制可能是上调TGF-β水平,下调IFN-γ、IL-2、IL-4和IL-17的水平,抑制B细胞产生AChR Ab,降低血清AChR Ab含量,减少对NMJ处AChR的损害,从而起到治疗EAMG的作用。

冬虫夏草菌丝体提取物通过抑制炎性因子及Treg细胞功能缓解肺纤维化

目的：：观察冬虫夏草菌丝体( Hirsutella sinensis mycelium,HSM)提取物对盲肠穿孔结扎( CLP)小鼠的炎症反应和肺纤维化程度的影响。方法：建立CLP诱导脓毒症5 d和10 d小鼠模型,分别分为假术组(sham,n=5)、模型组(CLP,n=11)、治疗组(HSM,n=11)。冬虫夏草菌丝体组在术前2 h和术后给予HSM提取物200 mg/(kg·d)(低于人体用量0.27 g/kg),假术组和模型组给予等量的生理盐水。利用Q-PCR检测了肺组织中炎性因子TNF-α和IL-1β及纤维化因子TGF-β1、TIMP1和MMP9的表达；利用流式细胞术分析了小鼠外周血和脾脏中Th1细胞以及脾脏组织中Treg细胞的数量；另外,还对肺组织切片进行了HE染色以及α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和纤连蛋白( fibronection)免疫组化染色。结果：模型组外周血和脾脏中Th1细胞以及脾脏组织中Treg细胞的数量较假术组显著降低,而HSM提取物治疗能上调上述细胞的数量。5 d时,模型组肺组织中IL-1β及纤维化因子TGF-β1、MMP9和TIMP1表达显著上调,到第10天时有所降低但仍高于sham组,而治疗组上述因子表达明显降低；各组肺组织TNF-α表达无显著差异；HE染色显示模型组肺部炎性样变明显,到第10天时炎性样变比5 d时减轻,而治疗组均有改善；免疫组化显示与假术组比,模型组肺内间质α-SMA和fibronection表达明显增多,而治疗组肺内间质表达低于模型组。结论：HSM提取物具有抑制炎症、平衡免疫及缓解肺纤维化的功能。

表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）对免疫性肝损伤的保护作用及其机制研究

目的：：探讨表没食子儿茶素没食子酸酯( EGCG)对雷公藤甲素( TP)诱导的免疫性肝损伤的保护性作用及其作用机制。方法：雌性C57BL/6小鼠随机分为4组,即正常对照组、EGCG对照组、TP组、EGCG治疗组。以赖氏法检测血清中ALT水平,以分光光度法检测肝匀浆中丙二醛( MDA)、超氧化物歧化酶( SOD)和还原型谷胱甘肽( GSH)的变化情况,以HE染色观测小鼠肝脏组织形态学变化,以ELISA方法检测肝脏中白细胞介素( IL)-17和IL-6的表达水平,以Western blot方法检测肝脏中Toll样受体4(TLR4)的表达情况。结果：TP组小鼠血清转氨酶水平明显高于正常对照组(P<0.005),EGCG对照组与正常对照组比较无变化(P>0.05),而EGCG治疗组小鼠血清转氨酶水平与TP组相比下降明显(P<0.005)。 TP组小鼠肝脏病理切片示较多肝细胞坏死和中性粒细胞浸润,EGCG对照组和正常对照组小鼠肝脏形态学基本正常,EGCG治疗组示肝细胞炎症坏死程度较TP组有大幅减轻。 TP组小鼠肝脏中MDA、IL-17及IL-6水平明显高于正常对照组( P<0.005),而SOD和GSH水平明显低于正常对照组(SOD,P<0.05；GSH,P<0.005),EGCG对照组与正常对照组比较无变化(P>0.05),EGCG治疗组小鼠肝脏中MDA、IL-17及IL-6水平均下降明显( P<0.005),而SOD和GSH水平均增高,与TP组比较有显著性差异(SOD,P<0.05；GSH,P<0.005)。 TP组肝脏TLR4蛋白表达水平高于正常对照组,EGCG对照组与正常对照组比较无变化(P>0.05),而EGCG治疗组TLR4水平显著降低。结论：EGCG对TP所致小鼠肝损伤有明显的保护作用,可能与其抗氧化作用及对炎症因子的调节有关。

异土木香内酯通过介导ROS产生及线粒体损伤诱导人宫颈癌Hela细胞凋亡

目的：：探讨异土木香内酯通过介导ROS产生及线粒体损伤诱导人宫颈癌Hela细胞凋亡机制。方法：不同终浓度异土木香内酯体外诱导Hela细胞24 h及加入抑制剂NAC作为实验组,以正常细胞作为对照组, MTT测定细胞活性；Hoechst 33258染色观察Hela细胞凋亡细胞核变化；流式细胞仪检测细胞凋亡及周期和ROS产生变化和MMP水平；Western blot方法测定细胞色素C蛋白、Bcl-2、Bax和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase-3)蛋白表达水平。结果：异土木香内酯以浓度依赖性抑制Hela细胞生长；20μmol/L和40μmol/L终浓度异土木香内酯处理Hela细胞24 h后,细胞核出现典型的核固缩及核碎裂凋亡形态,细胞凋亡率增加,可抑制细胞生长于S期,细胞内均可诱导ROS的产生。 ROS抑制剂NAC可以明显阻断异土木香内酯对Hela细胞生长的抑制作用,降低细胞凋亡率；20μmol/L和40μmol/L终浓度异土木香内酯处理Hela细胞24 h后,Bax蛋白表达水平明显增加而Bcl-2蛋白表达水平明显降低,同时Caspase-3蛋白也被活化,出现cleaved Caspase蛋白,线粒体内细胞色素C蛋白释放增加。结论：异土木香内酯在体外可通过介导ROS产生及线粒体损伤来抑制人宫颈癌Hela细胞生长且诱导其凋亡,且伴随Bax蛋白表达上调、Bcl-2蛋白表达下调及Caspase-3活化相关变化。

Foxp3对肺癌细胞增殖及成瘤的影响

目的：：研究转录因子Foxp3在肺癌细胞中的高表达对肺癌细胞增殖及成瘤的影响。方法：利用脂质体转染法建立稳定高表达 Foxp3的 NCIH-hFoxp3肺癌细胞株。 MTT法观测 NCIH-hFoxp3及对照细胞的增殖。 ELISA 法检测 NCIH-hFoxp3及对照细胞IL-8、IL-10的分泌。建立移植瘤小鼠模型,观察成瘤情况。结果：成功建立高表达Foxp3的NCIH-hFoxp3肺癌细胞株；与阴性对照相比,NCIH-hFoxp3细胞增殖减慢,但成瘤能力强。 NCIH-hFoxp3细胞培养上清IL-8表达量减低,IL-10表达量升高。结论：高表达Foxp3的肺癌细胞可能通过表达细胞因子改变局部生长的微环境,逃逸免疫监视,而促进肿瘤细胞的成瘤和发展。

IL-17 A协同GM-CSF和LPS促进骨髓细胞衍生树突状细胞的分化和成熟研究

目的：：探讨IL-17A对小鼠骨髓细胞衍生树突状细胞分化和成熟的影响。方法：分离小鼠骨髓细胞,加入含GM-CSF(20 ng/ml)RPMI1640完全培基培养8 d,诱导小鼠骨髓单个核细胞向DC分化,加入LPS(1μg/ml)继续培养36 h,进一步诱导DC成熟,同时在骨髓细胞衍生诱导DC分化及成熟的不同阶段加入不同浓度的rmIL-17A(10、100 ng/ml),采用流式细胞术检测DC表面共刺激分子的表达,ELISA方法检测DC培养上清中IL-12p40和IL-10水平。结果：rmIL-17A可促进GM-CSF诱导骨髓细胞衍生DC表面共刺激分子CD40、CD80、CD86和MHCⅡ的表达,且具有剂量依赖性,其中以高浓度rmIL-17A刺激组的CD40及 MHCⅡ表达增加显著；在LPS诱导DC成熟阶段加入rmIL-17A,骨髓细胞衍生DC共刺激分子CD40、CD80、CD86和MHCⅡ的表达均明显增加,并且随着rmIL-17A浓度的增加,CD86和MHCⅡ的表达水平也随之增高；同时与未加rmIL-17A的对照组相比,低浓度 rmIL-17A 组 LPS 刺激骨髓细胞衍生 DC 分泌 IL-12p40和 IL-10水平均显著增加( P<0.001),高浓度rmIL-17A组IL-12p40水平显著增高(P<0.001),但IL-10水平没有变化。结论：IL-17A可促进GM-CSF诱导的骨髓细胞衍生DC前体细胞表型发展,并能协同LPS诱导骨髓衍生DC的分化和成熟。

基于网络平台的“翻转课堂”教学模式在《医学免疫学》实验课上的应用

医学免疫学是研究人体免疫系统的结构和功能及其功能异常所导致疾病的一门基础医学学科，涉及基础医学、临床医学和生物学等多学科，具有进展更新较快、实践性较强等特点。对于学生来说，该门课程内容繁杂、琐细、抽象、英文缩写符号繁多，因此学习时常感到枯燥无味、难懂、难记、难应用。但是由于其在医学生课程中的重要性，被学生形象的比喻为“医学生头疼”的基础医学学科之一，所以如何让医学生在“轻轻松松”的过程中学好医学免疫学，是每一位医学免疫学教学工作者一直努力追求达到的境界。翻转课堂是指学生在课前完成知识的学习，而课堂变成了老师与学生之间和学生与学生之间互动的场所，包括答疑解惑、知识的运用等，从而达到更好的教学效果，具有方便学生更加合理安排学习时间、增加课堂互动、让教师更了解学生及实现学生个性化学习等众多优势。近两年“翻转课堂”的兴起[1]，使得每一位教育工作者都跃跃欲试，试图在自己的授课过程中，引入“翻转课堂”教学模式，从而提高教学质量，但是，没有任何基础的“翻转课堂”在实际的教学过程中并不能发挥很好的作用。我科室在医学免疫学省级精品资源共享课和免疫学学习交流QQ群的基础上，在医学免疫学实验课上适时引入“翻转课堂”教学模式，使得教学质量得到了很大提高。

免疫学研究生创新培养探索

提高自主创新能力、培育创新型人才是实现创新驱动发展、实现“两个一百年”建设目标的关键。研究生教育改革是国家培育各类创新型青年人才、推动国家科技源头创新的关键环节之一，也是国家中长期高等教育改革的重要目标[1]。

《中国免疫学杂志》被国际著名检索机构收录通知