双错配碱基ARMS结合RE法快速检测FGFR3基因的突变超热点

目的 建立快速简便、特异灵敏的鉴定FGFR3基因c.1138 G＞A突变超热点的基因诊断方法,为软骨发育不全(ACH)的产前基因诊断或植入前遗传学诊断(PGD)创造条件. 方法 针对突变率高达95%以上的FGFR3基因的突变热点c.1138 G＞A,设计双错配碱基的ARMS特异引物,对已经临床确诊的先证者家系及正常对照和非c.1138 G＞A突变的患者对照,分别用普通引物和特异引物进行PCR扩增和直接鉴定,然后对扩增产物进行DNA序列分析及SfcI酶切鉴定. 结果 用普通引物扩增,对照组和先证者均扩增阳性.SfcI酶切后,对照组仍为一条513 bp的带,而患者切出205bp、308bp和513 bp三条带;而用ARMS特异引物扩增,则先证者扩增阳性,而对照组扩增阴性,阳性者酶切后产生27bp和418 bp两条带.这一切都与预期的结果完全吻合. 结论 该法快速、特异、准确性高,结合DNA序列分析和酶切鉴定(RE),可用于ACH高危胎儿的快速产前诊断.

不同临床类型慢性乙肝患者乙肝病毒基因型检测

目的 探讨本院慢性乙型肝炎患者乙肝病毒基因型分布特征及与临床类型的关系. 方法 利用线性探针分析法进行乙肝病毒基因分型. 结果 52例慢性乙肝患者检出乙肝病毒基因型B型24例(46.2%),C型26例(50%),A、B混合型2例(3.8%),B、C两型均以男性多见,两型间性别比例差异无统计学意义(x2=0.65,P＞0.05);在慢性肝炎轻度、中度、重度、肝硬化及肝癌中,B和C基因型的分布差异无统计学意义(P＞0.05);A、B混合型2例分别为慢性乙型肝炎轻度和慢性乙型肝炎中度.C型HBeAg阳性率高于B型,差异有统计学意义(P＜0.05),HBV DNA载量两组间差异无统计学意义(P＞0.05). 结论 本组慢性乙肝患者的乙肝病毒基因型以B、C为主要亚型,且C型稍多,C型HBeAg阳性率高于B型.

孕妇外周血浆中高甲基化RASSF-1A基因水平与自然流产的关系研究

目的 通过检测孕早期发生先兆流产孕妇血浆中高甲基化RASSF-1A水平,并随访早期妊娠结局,评估利用孕妇血浆中高甲基化RASSF-1A预测孕早期出现先兆流产的孕妇发牛自然流产的临床价值. 方法 该研究是一项前瞻性研究,终共有孕早期(6～11.6周)孕妇1767名,根据妊娠结局分为三组:自然流产组(A组)、先兆流产但妊娠结局正常组(B组)、正常对照组(C组).高甲基化RASSF-1A基因用来代表胎儿DNA,应用实时定量PCR方法检测上述各实验组孕妇血浆胎儿DNA的含量. 结果 正常孕妇在孕早期血浆中的高甲基化RASSF-1A水平随着孕周的增长而增高;自然流产组孕妇血浆高甲基化RASSF-1A的中位数倍值是正常对照组的4.64倍,有统计学差异(P＜0.01),而在有先兆流产但妊娠结局正常组与正常对照组之间无统计学差异(P＞0.05);若用高甲基化RASSF-1A的4.92 MoMs来预测自然流产,灵敏度为98.2%,假阳性率为1.8%,特异度为91.2%. 结论 对于发生先兆流产的孕妇,尤其在孕早期,孕妇血浆中的甲基化RASSF-1具有预测自然流产的临床价值,有望成为临床上预测有先兆流产症状的孕妇孕早期发生自然流产新的生物学指标.

HIV检测基因芯片的研制和应用评价

目的 研制用于HIV检测的基因芯片,并评价其在临床诊断和出入境检疫中的应用价值. 方法 针对HIV-1 gags基因相对保守区域,设计检测探针,并设计内标和对照探针,制备HIV检测微阵列基因芯片;设计引物,以1:20引物比例不对称扩增HIV基因靶标,Cy3荧光标记扩增产物,作为杂交模板.Cy3荧光标记PCR扩增产物与微阵列探针杂交反应,结果经荧光扫描,并用分型软件分析判断阳性探针和样本HIV阴阳性.采用信号放大、梯度临界值技术,增加了检测的灵敏度和特异性.采用70例临床样本实样检测与DNA测序作对照,评价试剂盒的性能和应用价值. 结果 70例样本,采用本试剂盒与DNA测序并行检测,两者符合率为98.57%. 结论 本HIV检测基因芯片试剂盒具有高通量、操作简便、低成本、准确度好等优点,应用研究表明,在临床HIV诊断检测和出入境检测方面具有很高的应用价值.

O139群霍乱弧菌荧光纳米颗粒试纸条的研制

目的 本研究旨在建立一种准确、快速、简便的O139群霍乱弧菌检测方法. 方法 以荧光纳米颗粒为标记物,采用双抗体夹心法模式制备O139群霍乱弧菌免疫层析检测试纸条.在紫外灯下观察试纸条上质控线和检测线上的荧光信号强度作为结果判定依据. 结果 用所制备的O139群霍乱弧菌荧光纳米颗粒检测试纸条对9属20种105株菌进行检测,所有20株O139群霍乱弧菌检测结果呈阳性,其余85株非O139群霍乱弧菌均呈阴性反应;用该试纸条检测人工污染的海鱼样品,灵敏性为3.5×104CFU/mL.用自制试纸条和标准法同时检测77份样品(均为水产品),两种方法的总符合率为85.7%.结论 O139群霍乱弧菌荧光纳米颗粒检测试纸条的研制成功为O139群霍乱弧菌的快速检测提供了一个极好的检测方法,便于野外检测的开展.具有广阔的应用前景.

流式细胞术检测白细胞糖皮质激素受体-α方法的建立

目的 建立流式细胞术检测糖皮质激素受体-α的方法. 方法 使用细胞破膜剂处理EDTA·2K抗凝外周静脉血,获得已被破膜的白细胞.将纯化的兔抗人GR-α多克隆抗体与之反应,再与FITC标记的羊抗兔二抗反应,比较在不同抗体反应浓度(0.0004～0.004μg/μL)、不同的反应条件(室温、37℃及4℃)下获得的阳性细胞率及荧光强度,并比较标本处理前后放置不同时间的检测结果.后作重复性试验. 结果 以一抗浓度为0.004μg/μL时荧光信号强,但一抗浓度为0.0004～0.004μg/μL获得的结果无统计学差异.一抗在室温或者37℃孵育30 min或者4℃反应6h,结果无统计学差异.标本可于4℃保存至24h处理.标本处理后好及时检测,随时间延迟荧光信号有所下降.重复性试验显示阳性细胞百分率及荧光强度的CV值分别为3.4%与9.8%. 结论 建立了稳定可靠的糖皮质激素受体-α流式细胞术检测的方法.

EB病毒相关淋巴母细胞样细胞系的建立及鉴定

目的 由于EB病毒与肿瘤的关系极为复杂且存在争议,淋巴母细胞样细胞系LCLs(lymphoblastoid cell lines)没有肿瘤形成过程中的复杂因素,从而成为了研究EBV介导的细胞永生化的佳模型.本实验旨在建立EBV原型株相关的永生化淋巴母细胞系,为后期LCLs的端粒酶活性及其体内外成瘤性的相关研究提供基础. 方法 利用体外培养B95.8细胞产生EB病毒原型株感染正常人外周血淋巴细胞培养传代得到5株EB病毒相关淋巴母细胞,并用RT-PCR对其进行了基因表达、流式细胞仪进行细胞表面标记以及核型的鉴定. 结果 淋巴母细胞样细胞系能不断传代,能表达EBV基因,具有成熟B细胞表面标记;细胞传代过程早期未发生核型改变. 结论 建立了5株永生化细胞株,分别为LCL1-5、LCL2-5、LCL3-5、LCL4-30、LCL5-30.

类风湿性关节炎患者杀伤细胞免疫球蛋白样受体基因多态性分析

目的 分析类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者杀伤细胞免疫球蛋白样受体基因多态性,探讨其与类风湿性关节炎发病之间的关联. 方法 采用序列特异性引物聚合酶链反应(PCR-SSP)法,分析90例RA患者和200例健康对照组KIR基因. 结果 通过对RA病例组与正常对照组的9种KIR基因的分析,比较其基因频率发现:RA病例组KIR2DS4的基因频率显著低于对照组(P＜0.05),差异具有统计学意义;其余各基因频率与对照组相比,P＞0.05,差异无统计学意义. 结论 RA患者KIR2DS4基因可能与RA发病有关.

276例疑似生殖器疱疹患者单纯疱疹病毒Ⅱ型检测结果分析

目的 用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测我院皮肤性病门诊生殖器疱疹疑似患者的单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-Ⅱ)感染情况. 方法 用FQ-PCR对276例生殖器疱疹疑似患者进行检测. 结果 ①276例生殖器疱疹疑似患者检测HSV-Ⅱ阳性患者145例,阳性率为52.53%(145/276),其中男性患者阳性率59.76%(101/169),女性患者41.12%(44/107),男性患者与女性患者的发病率比较,差异具有统计学意义(P＜0.05).②三个年龄段患者即＜20岁,20～55岁, ＞55岁的阳性率分别为31.25%(5,16),62.62%(129,206),20.37%(11/54),三个年龄段患者发病率比较,差异均具有统计学意义(P＜0.05). 结论 ①生殖器疱疹疑似患者中HSV-Ⅱ感染率高,感染率有性别差异,男性发病率高于女性.②在不同的年龄发病率不同.③FQ-PCR在单纯疱疹病毒检测中具有快速,简便,灵敏度高等优点,适用于临床检测.

2616例孕中期孕妇的血清特异性标志物筛查结果分析

目的 探讨孕中期产前筛查的临床应用价值,并探讨影响其风险值的主要因素. 方法 检测2616例孕中期(14～24周)孕妇血清中的甲胎蛋白(AFP)、人绒毛膜促性腺激素β亚单位(β-HCG)和游离雌三醇(uE3)的浓度,其中AFP、β-HCG使用电化学发光法,uE3使用酶联免疫法检测;使用T21*SOFTw筛查软件评估风险.建议唐氏综合征或18-三体综合征高风险孕妇行胎儿羊水染色体核型分析,神经管缺陷高风险者接受高分辨超声检查. 结果 唐氏综合征、18-三体综合征、神经管缺陷高风险发生率分别为5.73%、0.34%、1.11%;高风险孕妇经产前诊断确诊唐氏综合征1例,神经管缺陷2例,其它染色体异常疾病3例. 结论 对孕中期孕妇进行产前筛查,是减少患染色体疾病和神经管缺陷患儿出生的有效方法;在筛查软件中应对诸多影响因素予以校正,而孕周的准确与否对筛查结果影响较大.

MYCT-1基因特异的siRNA对GES-1细胞凋亡,增殖及细胞周期的影响

目的 探讨沉默MYCT-1基因对GES-1细胞凋亡、细胞周期及细胞增殖的影响. 方法 采用siRNA转染GES-1细胞后分别应用Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测其对细胞凋亡的影响,应用PI单染流式细胞术分析对细胞周期的改变,应用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测siRNA对细胞增殖的作用. 结果 siRNA转染GES-1细胞后,与对照细胞相比,细胞凋亡率明显增高(P＜0.05);细胞增殖率降低(P＜0.05),细胞周期检测表明细胞停滞于S期(P＜0.05). 结论 MYCT-1基因维持一定的表达水平对于正常细胞生长调控是必需的,MYCT-1基因对细胞周期的调控主要体现在S期向G1期的转变过程.

新生儿脐血血红蛋白电泳对α-珠蛋白生成障碍性贫血基因诊断的价值

目的 研究脐血血红蛋白电泳在α-珠蛋白生成障碍性贫血及异常血红蛋白病中的诊断价值,了解东莞厚街地区新生儿α-珠蛋白生成障碍性贫血基因携带率、基因类型和异常血红蛋白种类. 方法 用脐血标本进行血红蛋白电泳,对电泳区带进行扫描定量分析,对检出Hb Bart's带的标本进行α-珠蛋白生成障碍性贫血基因诊断. 结果 2369例脐血标本共检出Hb Bart's带的标本有92例,携带率为3.88%:经基因诊断为α-珠蛋白生成障碍性贫血的有87例,其中--SEA/69例占79.3%,-α3.7/12例占13.8%,-α4.2/6例占6.9%;检出异常血红蛋白病11例占0.46%.2369例标本中母亲为α-珠蛋白生成障碍性贫血基因携带者,新生儿脐血检出Hb Bart's带的有16例. 结论 脐血血红蛋白电泳对新生儿α-珠蛋白生成障碍性贫血及异常血红蛋白病的筛查和诊断是一种简便、有效的方法.

人乳头瘤病毒(HPV)6/11、16/18型检测及结果分析的临床意义

目的 用实时荧光定量PCR法检测低危型人乳头状瘤病毒HPV(如 6/11型)和高危型人乳头状瘤病毒HPV(如16/18型),探讨其在宫颈癌防治方面的意义. 方法 采用FQ-PCR方法检测624例不同年龄组患者感染HPV6/11、HPV16/18型情况. 结果 624例标本中HPV6/11、HPV16/18检测的阳性率分别为26.3%,8.3%,低危型远高于高危型(P＜0.01). HPV6/11、HPV16/18阳性患者的年龄分布不同,年龄段的感染情况也不同,HPV6/11型感染主要集中在20～40岁,HPV16/18型感染者年龄均在41～50岁. 结论 荧光定量PCR检测低危型HPV和高危型HPV,方法简便准确,快速.

紫杉醇相关代谢酶和药物转运体基因多态性与乳腺癌化疗反应

紫杉醇是近年来治疗乳腺癌很有效、且很有研究前景的一类新型化疗药物.不过,单药用于一线治疗的有效率也仅32%～62%,不同个体对药物的敏感性和毒副作用差异很大,遗传多态性是导致该差异的蓖要决定因素.本文主要就影响紫杉醇体内代谢和分布的相关基因遗传多态性及其与乳腺癌化疗反应间的关系和意义作一简要综述.

异嗜性抗体对免疫测定干扰的研究进展

异嗜性抗体(HA)可以在免疫测定中产生干扰.它具有多特异性结合的特点,能与多种动物制备试剂中的抗体结合,可造成测定的结果呈假阳性或假阴性.本文主要分析HA对免疫测定的干扰机制、干扰的常见项目及消除HA干扰的方法.

蛋白芯片技术在肿瘤标志物中的研究进展

肿瘤尤其是恶性肿瘤严重威胁着人类的健康,肿瘤标志物的检测对恶性肿瘤的早期诊断、后期治疗有着重要的意义.但是传统单一的肿瘤标志物检测在诊断方面有其局限性,而多肿瘤标志物联合检测则更有助于肿瘤的早期诊断和后期治疗.生物芯片技术的发展为多肿瘤标志物联合检测创造了条件.

MicroRNAs在恶性肿瘤分子诊断和预后预测中的应用

微小RNA(microRNA,miRNA)是近年来发现的一类长度为18～26个核苷酸的非编码小分子RNA,它在转录后水平调控基因的表达,其表达情况与机体众多生理病理状态密切相关.目前发现,恶性肿瘤组织和血液循环中存在不同于正常机体的特征性miRNA表达谱,通过测定这些miRNA的表达变化可能可以成为恶性肿瘤早期诊断和预后预测的重要手段.本文总结了miRNA在恶性肿瘤性疾病分子诊断领域的研究进展,为疾病分子诊断学研究及临床实践提供参考.

MicroRNA及其在医学中的应用

MicroRNAs(miRNAs)是近年来发现的一种非编码的小RNA,长度仅22个核苷酸左右,普遍介导基因转录后的调节,参与调控机体各种生理进程.miRNA与疾病如肿瘤的发生发展密切相关.研究发现血液循环中也存在miRNA,循环miRNA或可作为肿瘤无创诊断的新靶标.本文就miRNA的来源、功能、与疾病的关系、检测方法及其在肿瘤诊断和治疗中的应用等方面的研究进展作一综述.

2006年度诺贝尔生理学或医学奖得主克雷格·梅洛(Craig C.Mello) 教授为《分子诊断与治疗杂志》题词