葡萄球菌对克林霉素诱导耐药表型及基因型检测研究

目的 了解葡萄球菌对红霉素及克林霉素的耐药性,测定红霉素诱导克林霉素耐药状况和基因型特征.方法 收集我院2005～2007年分离到的350株葡萄球菌采用K-B法做药敏试验,对红霉素耐药、克林霉素敏感和中介葡萄球菌临床分离株做D试验检测,PCR检测细菌的ermA、ermB、ermC、msrA、msrB和linA/linA'基因.结果 350株葡萄球菌中克林霉素诱导耐药64株,D试验阳性为18.3%.基因型分别是ermA 9株、ermB 2株、erm C 48株、msrA 7株、msrB 11株、全部阴性的5株、linA/linA'64株、ermC+msrB 7株.结论 红霉素核糖体甲基化酶基因ermC是诱导耐药的主要基因,检测葡萄球菌中红霉素对克林霉素的诱导耐药性可帮助临床医生正确选用大环内酯类、林可酰胺类和链阳霉素B类抗生素.

子宫内膜异位症与肿瘤坏死因子TNFα-238G/A基因多态性的关系

目的 探讨肿瘤坏死因子TNFα-238G/A基因多态性与子宫内膜异位症的关系.方法 运用聚合酶链反应技术检测200例子宫内膜异位症及200例正常人肿瘤坏死因子TNFα-238G/A基因多态性.结果 子宫内膜异位症组TNFα-238G/A、G/G、A/A表型频率分别为:0.9300、0.070、0,对照组分别为:0.9500、0.0500、0;子宫内膜异位症组TNFα-238G、TNFα-238A基因频率分别为:0.9650、0.0350,对照组分别为:0.9750、0.0250,肿瘤坏死因子TNFα-238G/A各种基因型频率在患者组与正常对照组之间的差异无统计学意义(P>0.05).结论 肿瘤坏死因子TNFα-238G/A基因多态性与子宫内膜异位症无明显相关.

用SELDI蛋白芯片技术筛选缺血性脑卒中患者血清蛋白标志物的研究

目的 研究缺血性脑卒中患者血清蛋白质谱的变化,从而筛选特异性的蛋白标志物.方法 采用表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术和弱阳离子交换芯片(CM10)首先对训练组72例缺血性脑卒中患者和性别年龄匹配的80例正常对照者血清蛋白表达谱的差异进行分析,建立决策树分类模型后,对测试组(55例缺血性脑卒中患者和60例正常对照者)进行盲法验证.结果 在质荷比(M/Z)2 000～56000Da范围内,共检测到94个蛋白质峰,筛选出差异蛋白质峰29个,以质荷比(M/Z)分别为5 659、5 878、7 304、7 398和9 003 Da的5个差异蛋白峰,建立的决策树分类模型对缺血性脑卒中患者诊断的敏感性为95.8%(69/72),特异性为97.5%(78/80),正确诊断率为96.7%(147/152).用该模型对测试组进行双盲检测,结果显示敏感性、特异性和正确诊断率分别为94.5%(52/55)、95.0%(57/60)和94.8%(109/115).结论 应用SELDI-TOF-MS技术可以筛选出缺血性脑卒中患者相关的血清蛋白标志物,建立的决策树分类模型可能对缺血性脑卒中患者的诊断具有重要的临床价值.

17β-雌二醇抑制NF-kappa Bp65表达对CCl4诱导大鼠肝纤维化中肝细胞损伤的意义

目的 探索17β-雌二醇(E2)抑制NF-kappa Bp65的表达在四氧化碳(CCl4)诱导Wistar大鼠肝纤维化中肝细胞损伤的意义.方法 采用实时荧光定量PCR(SYBR GREEN)技术测量雌二醇治疗的肝纤维化模型大鼠肝脏组织中雌激素受体α(Erα)mRNA和NF-kappa Bp65 mRNA的表达;采用免疫组化S-P方法检测肝细胞NF-kappa Bp65和ICAM-1表达并分析与肝细胞损害的关系.结果 雌二醇治疗组的肝细胞纤维化模型大鼠ERαmRNA表达高于对照组和他莫昔芬组(P<0.05),而NF-kappa Bp65和ICAM-1表达以及ICAM-1免疫组化表达则低于对照组和他莫昔芬组(P<0.05);雌二醇治疗组的肝细胞损伤的程度也低于对照组和他莫昔芬组.结论 E2通过Erα途径抑制NF-kappa Bp65在大鼠肝细胞中的表达,从而减轻了肝细胞的损伤.

间日疟原虫乳酸脱氢酶GST融合表达载体的构建及表达

目的 构建间日疟原虫乳酸脱氢酶(PvLDH)融合表达载体.并表达PvLDH的GST融合蛋白.方法 将PvLDH基因片段克隆到表达载体pGEx-4T-1中,构建PvLDH/pGEX-4T-1融合表达载体,IPTG诱导表达目的基因,SDS-PAGE电泳分析表达产物,Western blot检测其抗原性.结果 成功构建了PvLDH/pGEx-4T-1融合表达系统,在大肠杆菌BL21中以包涵体形式高效表达,表达产物能与恶性疟原虫和问日疟原虫感染患者血清反应,而不与正常人血清反应.结论 间日疟原虫LDH蛋白在大肠杆菌中获得高效表达,表达产物具有良好的抗原性.

广东地区2782例妇女高危型人乳头瘤病毒感染阳性率和年龄段的关系

目的 探讨广东地区妇女高危型人乳头瘤病毒(high-risk human papilloma virus,HR-HPV)感染的阳性率和各年龄段的关系.方法 回顾性分析2007年10月到2008年11月在本院妇科门诊就诊的妇女2782例.用实时多重荧光PCR技术对13种HR-HPV进行检测,将筛查人群分为8个年龄段,分别计算阳性检出率,分析HR-HPV的阳性检出率和年龄段的关系,并以年龄段和阳性率的关系作图加以分析.结果 在2782例中共检出HR-HPV 564例阳性,阳性率为20.3%.HR-HPV的感染阳性检出率和年龄段相关,分别为36～40岁和46～50岁的两年龄段阳性检出率高.结论 广东地区妇女HR-HPV的阳性检出率和年龄段相关,且以36～40岁和46～50岁的两年龄段阳性检出率高.

骨形成蛋白4在胰腺癌组织中的表达及其临床意义初探

目的 探讨胰腺癌组织中骨形成蛋白4(BMP4)的表达及其临床意义.方法 应用免疫组化SP法检测42例胰腺癌组织、10例正常胰腺组织中BMP4的表达情况,并分析其与临床病理特征的关系.结果 胰腺癌组织中BMP4的阳性表达率明显高于正常胰腺组织(X2=13.90,P=0.01).淋巴结转移组BMP4蛋白阳性表达率高于无淋巴结转移组(X2=9.98,P=0.02).Ⅲ期组BMP4蛋白阳性表达率高于Ⅰ+Ⅱ期组(X2=5.32,P=0.02).结论 在胰腺癌组织中BMP4高表达,且与肿瘤的浸润、转移有关.BMP4可以作为判断胰腺癌浸润、转移的参考指标之一.

携带Bcl-xl基因的重组慢病毒的制备和鉴定

目的 制备携带Bcl-xl基因的莺组慢病毒,并鉴定其感染细胞有效性.方法 从本所以前构建的重组质粒pAAV-Bcl-xl获得Bcl-xl基因的编码序列,将其置换掉慢病毒质粒pSin-EF2-SOX2-Pur中的SOX2基因编码序列,从而得到重组慢病毒质粒pSin-EF2-Bcl-xl-Pur.然后利用这一质粒包装制备了携带Bcl-xl基因的重组慢病毒颗粒,用其感染细胞后用Western blot和流式检测仪分析了感染前后细胞中Bcl-xl基因的表达情况.结果 感染后细胞中Bcl-xl蛋白的表达水平显著高于感染前.结论 携带Bcl-xl基因的重组慢病毒颗粒包装成功,能高效感染细胞,为后续的遗传改造树突细胞打下了基础.

E.coli O157:H7 LAMP检测方法的建立

目的 建立检测E.coli O157:H7环介导的等温扩增方法(LAMP).方法 选取E.coli O157:H7的rfbE基因设计LAMP引物.优化建立LAMP检测体系.并用该体系和国标法对76份人工污染样品进行了检测.结果 所建立的E.coliO157:H7LAMP体系具有良好的特异性,用该体系对9属13种41株菌进行检测,结果只有E.coliO157:H7的扩增产物电泳结果为阶梯状条带,非E.coliO157:H7均未产生扩增产物,灵敏性为2.7×101 CFU/mL.样品及培养基对反应体系没有影响或影响很小.对76份样品进行了检测,E.coliO157:H7LAMP检测方法与国标法的总符合率为96.1%,2h内即可完成检测.结论 本研究建立的E.coliO157:H7的LAMP法不但解决了分子生物学检测对实验室仪器设备的高要求问题,而且检测方法简便、快捷,非常便于基层实验室和现场检测使用.

大鼠创伤性脑损伤早期基因差异表达的研究

目的 研究创伤性脑损伤早期基因表达谱与正常脑组织基因表达谱的差异,以期阐明脑损伤后早期基因表达的改变规律,阐明脑损伤发生发展的分子机制,从而为临床治疗提供帮助,同时为法医损伤时间推断研究寻找标志物提供帮助.方法 以大鼠自由落体损伤模型为对象,从损伤区脑组织和假手术对照组脑组织分别提取mRNA,经反转录成cDNA后与含有4096个随机基因的基因表达谱芯片杂交,杂交后的芯片经扫描仪扫描,并用GenePix3.0软件分析结果.结果 发现有124个差异表达基因或表达序列标签(expression sequencetags,ESTs);其中有46个基因和26个EST表达下调;28个基因和24个EST表达上调;在这些表达有差异的基因中,有涉及细胞内信号传导、神经递质释放、参与炎症的蛋白、离子通道及其受体蛋白和参与炎症反应的蛋白等被发现.结论 创伤性脑损伤的发生发展涉及多个基因的改变;研究一个或少数几个基因很难解释其损伤后分子变化机制;基因芯片是研究颅脑损伤这种多基因改变、多因素作用的理想工具.

实时荧光定量PCR检测大鼠VEGF mRNA方法的建立及初步应用

目的 建立大鼠血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)实时荧光定量PCR检测方法,对健康大鼠不同组织中VEGF mRNA水平进行检测分析.方法 跨内含子设计引物和TaqMan探针,扩增片段TA克隆人pGEM-T载体,制成标准品,分析其特异性、灵敏性和重复性;提取健康大鼠不同部位组织(肺、心、肝脏、肾脏、脑、胃、肠和颌下腺)总RNA,分析其VEGFmRNA表达水平.结果 测序及电泳条带证实PCR反应的特异性.批内CV为2.0%～6.7%,批间CV值为3.5%～10.6%,r>0.99;肺组织中VEGF mRNA表达高,与其他任意组相比差异均具有统计学意义(P<0.05),其它各组织间差异无统计学意义.结论 本研究成功建立了检测大鼠VEGFmRNA的实时荧光定量PCR方法,具有高灵敏、高特异、高重复性的特点;健康大鼠不同部位组织中VEGFmRNA的表达水平分析为以后研究疾病大鼠模型表达水平奠定了基础.

MicroRNAs在肿瘤和其它疾病诊断治疗中的应用

MicroRNAs(miRNAs)是一类内源性非编码小分子RNA,通过与靶mRNA3'端非翻译区完全或不完全互补配对,引起mRNA降解或翻译抑制,发挥基因调控作用.miRNAs在细胞增殖、分化、凋亡,个体发育等多种生物学过程中都起到重要作用,其表达失调可以导致疾病的产生.本文就miRNAs在肿瘤和其它疾病的发生、诊断等方面的研究进展作简要综述.

病毒感染相关Toll样受体及其基因多态性的种族差异研究进展

Toll样受体(toll-like receptors,TLRs)是哺乳动物先天性模式识别受体,识别病原谱广泛,在人类多个系统感染性疾病中参与信号传递,激活抗感染免疫反应,在感染相关性疾病中发挥重要作用.TLRs参与了天然免疫系统对病毒的识别,在抗病毒感染中发挥重要的作用;近年来对TLRs的表达及在病毒等感染性疾病中的基因多态性、基因变异因种族而异.

内质网应激与肿瘤细胞的凋亡

内质网(endoplasmic reticulum,ER)是重要的细胞器,是蛋白质合成、折叠、组装和钙离子储存等的场所.多种生理和病理条件下,如缺氧、氧化还原状态的改变等可干扰内质网的功能,并引起未折叠蛋白在ER中堆积,产生内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS).虽然ERS可诱导细胞的生存,然而长时间过强的ERS可诱导细胞凋亡,即内质网应激反应性凋亡.

基因谱微阵列芯片技术与临床分子诊断

医学基础研究为临床分子诊断提供了新的诊断技术,这些新技术包括高密度基因芯片、高通量的平行测序技术、高度灵敏的实时荧光定量PCR技术、荧光原位杂交技术等.随着分子医学的飞速发展,尤其是全基因组基因芯片的出现,蛋白质组学、代谢组学结合生物信息学的应用将使医学呈现革命性的变化.本文就基因谱微阵列芯片技术在临床分子诊断中的应用作简要评述.

体外诊断试剂研制常用技术指标之分析性能评估

体外诊断试剂是疾病有效诊治的重要辅助手段.依据<体外诊断试剂注册管理办法>进行该类产品的注册申报,是我国食品药品监督管理局对体外诊断试剂市场准入的要求.本文对体外诊断试剂实验室评价的指标设立及其意义进行整理阐述,以利于研发设计及验证.

李明