鼠疫耶尔森菌外膜蛋白抗原性研究

目的 建立分析鼠疫耶尔森菌外膜蛋白抗原性的简便方法. 方法 采用DNAstarProtean和EMBOSS网络分析平台综合预测鼠疫耶尔森菌外膜蛋白YopE、YopH、YopT、YopJ、YopM的免疫原性,并通过蛋白质芯片技术对上述外膜蛋白的免疫原性进行验证. 结果 计算机综合预测分析显示外膜蛋白YopE抗原性好,蛋白质芯片技术进一步证实YopE具有良好的免疫原性. 结论 软件预测结合蛋白质芯片检测的方法可用于筛选病原微生物抗原性蛋白.

高分辨荧光熔解曲线法检测脊肌萎缩综合症SMNt基因7号外显子缺失

目的 探讨高分辨荧光熔解曲线分析在SMNt基因7号外显子缺失检测中的应用. 方法 用高分辨荧光熔解曲线分析方法分析脊肌萎缩综合症SMNt基因7号外显子纯合缺失、SMNc基因7号外显子纯合缺失及未见SMNt、SMNc完全缺失三种情况. 结果 高分辨荧光熔解曲线分析方法能很好地区分SMNt基因7号外显子纯合缺失、SMNc基因7号外显子纯合缺失及未见SMNt、SMNc完全缺失三种基因型,与基因测序方法所得的结果完成一致. 结论 高分辨荧光熔解曲线法可用于脊肌萎缩综合症SMNt基因7号外显子缺失检测,具有快速、准确、可靠的特点.

双重荧光定量PCR法检测正常人及系统性红斑狼疮患者白细胞介素18基因的表达

目的 建立双重荧光定量PCR方法研究人白细胞介素18基因(IL-18)的表达. 方法 分别用FAM和VIC两种不同荧光素标记IL-18基因和β-actin基因的MGB-TaqMan探针,在一个反应通道中,双重荧光RT-PCR定量测定PBMC中IL-18 mRNA的量,并进行方法学评价. 结果 比较双重荧光定量PCR与单通道荧光定量PCR,发现没有差异.系统性红斑狼疮患者PBMC中IL-18mRNA含量高于正常人,有显著统计学意义（P＜0.05）. 结论 双重荧光定量PCR技术具有敏感、特异、快速等特点,可用于人外周血IL-18mRNA的定量检测.

广州地区猴腺病毒7型血清流行病学初步调查

目的 评估广州地区猴腺病毒7型( SAdV-7)先存中和抗体阳性率情况. 方法 首先构建以B-半乳糖苷酶(LacZ)为报告基因,结合CMV启动子的猴重组腺病毒7型载体SAdV7-CMV-LacZ.然后使用化学发光法,检测209份免疫功能正常的成人的血清样本中SAdV-7中和抗体阳性率隋况. 结果 我们发现SAdV-7中和抗体的阳性率为27.8%( 58/209).SAdV-7中和抗体在低滴度时阳性率高,并且随着滴度的升高,阳性血清分布率逐渐降低.在20～40岁人群中,SAdV-7中和抗体阳性率高,在＜20岁人群中未检测到SAdV-7中和抗体. 结论 广州地区人群中针对SAdV-7的先存中和抗体阳性率低.因此,SAdV-7在基因治疗及基因疫苗的应用上是一个具有吸引力的候选载体.

BRCA1基因单核苷酸多态性与广东汉族女性散发性乳腺癌易感相关性研究

目的 探讨BR CA1基因启动子区rs799906位点和编码区rs799917位点单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)与广东汉族女性散发性乳腺癌易感性的关系. 方法 利用Sequenom MassArray(@) iPLEX GOLD系统对107例散发性乳腺癌患者及93例健康对照者的BRCA1基因两个SNP位点（rs799906,rs799917）进行检测,并对检测结果进行x2检验和非条件Logistic回归分析. 结果 rs799906位点TT、TC和CC 三种基因型在病例组和对照组的分布频率有差异(x2=8.407,P=0.018).相对TT基因型而言,TC杂合型能增加乳腺癌发生的危险性(OR=2.566；95％ CI:1.101～5.983；P＜0.05),但等位基因T和C的频率分布无显著差异（x2=2.169,P=0.141）.rs799917位点CC、CT和TT三种基因型的频率和等位基因C和T的频率在病例组和对照组的分布均无显著性差异(x2=3.994,P=0.136; x2=0.903,P=0.342). 结论 BRCA1多态性位点rs799906 TC杂合型与散发性乳腺癌发病风险有相关性；而rs799917位点多态性与散发性乳腺癌发病风险无相关性.

PCR-SSP法检测29种HLA-B27基因亚型

目的 采用聚合酶链反应—序列特异性引物( PCR-SSP)高分辨技术检测29种HLA-B27基因亚型. 方法 设计并合成HLA-B27亚型特异性引物35条（配对组成上下游引物组合29对）以及一对内对照引物,建立PCR-SSP方法,用于B27亚型分型.检测标本为117例HLA-B27阳性研究对象（男79名,女38名）外周血DNA. 结果 117例标本的PCR-SSP扩增均获得成功,成功构建了PCR-SSP检测反应体系.共检测出6种亚型:B*2702、B*2703、B*2704、B*2705、B*2706及B*2713,六种亚型的构成比分别为:0.85％、6.84％、64.10％、25.64％、1.71％和0.85％,其中B*2704和B*2705为中国汉族人群中主要亚型. 结论 应用该新型PCR-SSP高分辨技术进行HLA-B27基因亚型检测,能检测出较多HLA-B27亚型,且该法进行B27亚型分型分辨度高,特异性强,成本较低,适合于临床应用.

乙型肝炎病毒DNA和血清学标志物的相关分析

目的 分析乙型肝炎病毒（HBV）DNA与HBV血清标志物之间的关系. 方法 应用酶联免疫吸附测定法(ELISA)和荧光定量PCR分别检测468例乙型肝炎患者血清标志物和HBV-DNA含量. 结果 HBsAg、HBeAg、抗-HBc抗体和Pre-S1Ag阳性患者组的HBV-DNA阳性率(50.6％,x2=56.28,P＜0.001; 97.7％,x2=122.65,P＜0.001; 46.8％,x2=8.46,P＜0.01; 62.4％,x2=39.93,P＜0.001)均显著高于相应的阴性患者组；抗-HBs抗体和抗-HBe抗体阳性患者组的HBV-DNA阳性率(2.1％,x2=35.61,P＜0.001；38.0％,x2=6.34,P＜0.05)均显著低于相应的阴性患者组.血清HBsAg含量和HBV-DNA拷贝数之间存在相关性(r2=0.028,P=0.016). 结论 乙型肝炎患者血清HBV-DNA含量与HBV血清学标志物测定结果之间存在关联.

MLPA快速诊断胎儿染色体非整倍体疾病方法的研究与应用

目的 将多重探针依赖式扩增技术(multiplex ligation-dependent probe amplification,MLPA)用于检测大部分胎儿染色体非整倍体疾病（如13、18、21、X、Y等染色体非整倍体疾病）,并将结果与常规经典染色体核型分析相比较,以此来评估其应用价值. 方法 305份产前诊断标本（羊水201例,脐血70例,绒毛34例）收集做MLPA研究.用试剂盒kit P095检测从样本中提取的DNA,接着用ABI3100毛细管电泳分析仪得到结果,用分析软件RH-MLPA-Analysis分析13、18、21、X和Y染色体的异常拷贝情况.同时进行常规的核型分析,然后比较. 结果 MLPA检测在标本收后24 h内即可出结果.共检测出异常倍体21例,包括8例唐氏综合症、5例爱德华综合症、2例帕陶氏综合症、4例特纳氏综合症、1例47,XXY和1例47,XYY.临床检出率达98.36％. 结论 MLPA检测13、18、21、X、Y等染色体非整倍体疾病时,与核型分析相比较,MLPA是一种快速、高效的分析非整倍体的产前诊断方法,具有临床应用价值.

外显子测序技术在疾病研究中的应用

新一代测序技术的发展为疾病研究带来了新的机遇.在现阶段,外显子测序与全基因组测序相比,不仅费用更低,数据的阐释也更为简单.通过对疾病样本进行外显子组捕获测序,不仅能快速发现罕见遗传疾病的致病基因,也能用于研究多基因引起的常见疾病,如癌症、糖尿病、高血压等,来揭示这些疾病的遗传致病机理.外显子测序技术是当前的热点技术,极大地推动了疾病研究的进展.

Y染色体微缺失及其检测方法

全世界大约有15％的夫妇不育,其中男性不育约占50％.Y染色体长臂上的AZF缺失是导致男性不育的重要因素.AZF进一步分为AZFa、AZFb和AZFc 3个区域,不同区域的微缺失引起不同程度的精子发生障碍.因此Y染色体微缺失的检测对男性不育的诊治有很重要的指导意义.目前Y染色体微缺失常用的检测方法有多重定性PCR法、实时荧光PCR法、基因芯片法和荧光原位杂交法.

神经胶质瘤的表观遗传学机制

神经胶质瘤是颅内常见的一种恶性肿瘤,它的发生、发展与表观遗传修饰密切相关.本文着重介绍了近年来神经胶质瘤发生、发展过程中DNA甲基化异常、miRNA表达异常、组蛋白修饰异常三种主要的表观遗传修饰方式的研究进展.由于表观遗传修饰引起的改变可以通过药物逆转,本文进而探讨了基于表观遗传修饰机制的潜在药物治疗神经胶质瘤的前景.

转录因子FoxM1——癌症治疗新靶点

转录因子FoxM1是Forkhead Box转录因子家族成员之一,与细胞增殖、胚胎发育、衰老、再生和肿瘤等许多病理生理过程密切相关.目前发现,在人类大多数肿瘤中FoxM1都具有较高的表达水平.并且,FoxMl与多种致瘤信号途径相关.FoxM1在细胞中的特殊功能以及与肿瘤的密切关系,使之成为肿瘤治疗的新靶点.

肝癌转移和预后相关的miRNA

microRNA(miRNA)是近年来发现的一类长度约为20～25个核苷酸的具有转录后调节功能的非编码单链的小分子RNA.研究发现miR-21、miR-34a、miR-9、miR-151与肝癌转移密切相关,而miR-122、miR-221和miR-125等影响肝癌预后.

肺癌相关分子靶点检测方法及临床应用研究进展

分子靶点检测是分子靶向治疗的前提,临床需要根据患者的分子病理检测结果制定个体化治疗方案和合理选择药物.目前临床对肺癌患者的一些靶点基因检测为常见,其检测方法也各不同.

基于游离RNA的无创性产前诊断研究进展

孕妇血浆血清中游离RNA作为一种新的胎儿遗传言息材料给无创性产前诊断带来了新的契机.已经证实,游离胎儿RNA分子主要来源于胎盘,且稳定存在于母体血循环中,易于检测.同时,其由于无需依赖胎儿性别或父源性多态性位点而具有十分明显的应用优势.目前,已经有研究将血浆血清中游离RNA与胎儿非整倍体、宫内发育迟缓以及子痫前期等妊娠相关疾病联系起来,并且取得了十分可喜的研究成果.

诱导多潜能性干细胞的研究现状与临床应用前景

胚胎干细胞可作为细胞替代治疗中很好的供体细胞来源.但由于伦理学的原因,限制了胚胎干细胞在细胞替代治疗中的应用前景,而诱导多潜能性干细胞（induced pluripotent stem cell,iPS细胞）的出现则提供了一种替代胚胎干细胞的多潜能性细胞.因为iPS细胞的建立不需要卵细胞,也不破坏发育中的胚胎,所以iPS细胞不涉及伦理学问题.而且iPS细胞的建立相对简单,重复性好.因此,iPS细胞在细胞替代治疗和再生医学中有着广泛的应用前景.本文将回顾iPS细胞技术发展的历史,介绍现有的建立iPS细胞的不同方法和评估iPS细胞质量的手段,展望iPS细胞在细胞替代治疗上有待解决的问题和应用前景.

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