鼻咽癌放疗患者铜绿假单胞菌感染基因型同源性

目的：探讨鼻咽癌放疗患者铜绿假单胞菌（ PA ）感染的病原菌临床分布、耐药特点及其基因型（同源）亲缘关系。方法采用 BD phoenix 100全自动微生物鉴定药敏系统和 CLSI M100-S23指南对临床分离菌进行鉴定和耐药表型分组，应用随机引物扩增多态性（ RAPD ）技术进行基因分型同源性分析。结果49株 PA 来源于43位发生不同程度医院感染的鼻咽癌放疗患者，主要分布在咽拭子（46.94％）、痰（32.65％）、口腔分泌物（10.20％）等临床感染标本，耐药表型分组分别为Ⅰ组32株、Ⅱ组7株、Ⅲ组5株、Ⅳ组5株。49份PA 样本经扩增后电泳出46个电泳图谱，分19个基因型别。在放疗二区高分布的 H 型菌株（57.14％）与在放疗四区高分布的 J 型菌株（60.00％）高度同源，耐药Ⅲ组、Ⅳ组的组内及组间型别亲缘关系不明显。不同病区鼻咽癌放疗患者之间存在基因型高度同源的 PA 感染局部流行，不同型别高耐药菌株的感染散发，部分亲缘关系密切菌株的耐药表型相似。结论应用基因分型技术检测分析病原菌同源性对医院感染监测和追踪具有重要意义。

siRNA靶向抑制铜绿假单胞菌oprM基因表达

目的：探讨siRNA能否抑制铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa， PA）主动外排系统oprM基因的表达。方法针对oprM基因序列设计合成3对siRNA片段，分别转化耐药PA ，采用抗菌素药物敏感试验筛选出能抑制PA耐药的siRNA片段及其佳转化剂量，再构建siRNA质粒表达载体，转化PA标准菌株，应用western blot技术检测OprM蛋白表达量的变化。结果筛选出一对能抑制PA耐药的siRNA片段，确定其佳转化剂量为25μL（20μm／L）／100μL PA 菌液。成功构建了靶向oprM基因的siRNA质粒表达载体。Western Blot检测结果显示，转化siRNA质粒载体的PA其OprM蛋白的表达量明显降低。结论靶向oprM基因的siRNA能够抑制PA oprM基因的表达。

基因组DNA甲基化的高效毛细管电泳定量检测

目的：建立快速准确的高效毛细管电泳（ HPCE ）定量基因组 DNA 甲基化的方法。方法以含有十二烷基磺酸钠（SDS）的碳酸氢钠溶液作为背景电解质溶液，优化运行电压、柱温，对DNA组成单元脱氧核苷酸进行分离定量。结果5种脱氧核糖核苷和5种核糖核苷在10 min 内实现基线分离。脱氧胞苷（dC）的标准曲线为Y ＝172540.15X-6.19，相关系数（R）为0.999，线性范围从2×10-3 mol／L 到2×10-1 mol／L。5-甲基脱氧胞苷（5 mdC）的标准曲线为 Y ＝170271.74X-46.19，相关系数（R）为0.995，线性范围从1×10-4 mol／L 到2×10-2 mol／L。日内相对标准偏差（RSD％）<5％，日间相对标准偏差（ RSD％）<9％。5 mdC 和 dC 的检测限均为1×10-5 mol／L。样品的甲基化程度以（5 mdC ）含量占总脱氧胞苷（5 mdC ＋ dC ）的比率表示。应用本方法分析小牛胸腺 DNA 的甲基化水平，结果为6.18％，与本研究组所得液质联用（LC-MS／MS）的定量结果（6.77％）和文献报导中应用液相色谱-紫外检测器（HPLC-UV）的检测结果（6.26％）对比，一致性好。结论本研究建立的方法分析速度快，准确性高，稳定性好，灵敏度满足微量样本的检测需求，可以用于临床甲基化诊断。

互助献血与无偿献血血清学标志物对比分析

目的：对互助献血和无偿献血的血清学指标进行分析对比，研究探讨互助献血的风险。方法2006年1月至2012年12月，对符合献血条件的1834例互助献血者以及217323例无偿献血者进行了血液采集和留取 ETDA 抗凝样本，进行 ALT、HBsAg、Anti-HCV、Anti-HIV、梅毒共5个项目的初复检。结果互助献血（8.67％）的总阳性率要高于无偿献血组（6.31％），但两组的ALT 阳性率差异无统计学意义，互助献血组的HBsAg、Anti-HCV、梅毒均高于无偿献血组。结论无偿献血群体的血清学安全指标优于互助献血组，是血源性传播疾病较低的低危人群，应该是血液供应的主要来源群体；对互助献血采取合理的干预措施后，能确保其安全指数与无偿献血等同，可作为无偿献血的有益补充。

不同标本巨细胞病毒检测在诊断小儿人巨细胞病毒感染中的应用

目的：探讨尿液、淋巴细胞和母乳的 HCMV-DNA 检测以及血清 HCMV-IgM 检测在小儿人巨细胞病毒（HCMV）感染诊断中的意义。方法用实时荧光定量 PCR检测189例疑似HCMV感染患儿尿液、淋巴细胞和母乳的HCMV-DNA ，用化学发光法检测其血清HCMV-IgM ，并分年龄分性别对其阳性率进行分析比较。结果新生儿组母乳HCMV-DNA阳性检出率（60.3％）显著高于尿液（5.2％， P<0.001）和淋巴细胞（12.1％，P<0.001），也显著高于血清 HCMV-IgM 阳性率（3.4％，P<0.001）；婴儿组母乳（48.1％）与尿液（55.0％）HCMV-DNA 阳性率差异无统计学意义（P>0.05），但两者均显著高于淋巴细胞 HCMV-DNA 阳性率（22.1％， P<0.001）和血清 HCMV-IgM 阳性率（24.4％， P<0.001）；婴儿组的尿液 HCMV-DNA、血清 HCMV-IgM 阳性率均显著高于新生儿组（ P<0.01）；两组各指标男女阳性率差异均无统计学意义（ P>0.05）；母乳 HCMV-DNA 阳性率与尿液、淋巴细胞 HCMV-DNA 阳性率及血清 HCMV-IgM 阳性率均呈显著正相关（r ＝0.630，P ＝0.000；r ＝0.413，P ＝0.000；r ＝0.341，P ＝0.000）。结论联合尿液、淋巴细胞HCMV-DNA 和血清HCMV-IgM 检测有助于患儿HCMV 感染的辅助诊断；在无法联合检测的条件下，婴儿首选尿液 HCMV-DNA 检测可获得较高检出率；母乳 HCMV-DNA检测并正确喂养有助于预防HCMV感染。

联合应用常染色体STR、X-STR和线粒体SNP鉴别缺失双亲姐妹同胞关系

目的：对双亲缺失的姐妹进行同胞鉴定。方法采用chelex-100法提取血液DNA ，通过检测常染色体短串联重复序列（short tandem repeat， STR）位点、X 染色体STR位点和线粒体单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphism， SNP）进行基因分型，分型结果通过判别函数、ITO 法、X 染色体STR位点和线粒体SNP分析的方法进行同胞关系判定。结果39个常染色体等位基因位点的共享基因数为27个，用辨别函数判别归于无关个体；用ITO 法计算亲缘关系系数（FSI）为6.95003×10-44，判别为无关个体；12个X 染色体 STR 等位基因位点中，有3个X 染色体STR位点不匹配，排除姐妹俩来自同一父亲；线粒体SNP的检测显有3个基因座不同，两人来源于不同母系。结论通过联合利用常染色体STR、X染色体STR和线粒体SNP检测技术进行确认两人不是同胞姐妹关系。

建立一种HBV突变检测的蝎子实时荧光PCR新方法

目的：为 HBV 突变检测建立一种有效、快速、简捷的蝎子实时荧光 PCR 新方法。方法同时用蝎子实时荧光 PCR 新方法和 Sanger 测序法对比：对157例 HBV 患者的血清的 DNA 进行 HBV 基因rtN236T 突变检测，统计其符合率；通过对混有不同比例的 HBV 基因 rtN236T 突变核酸的样本进行对照检测来比较两者的灵敏度。结果在157例 HBV 患者的血清样本中，蝎子实时荧光PCR 新方法检测到 rtN236T 突变的有69例，而 Sanger 测序法检测的有68例，其符合率为98.6％；蝎子实时荧光PCR 新方法能检测出混有5％突变的样本，其灵敏度达5％，比 Sanger 测序法高。结论蝎子实时荧光 PCR 新方法能有效检测到 HBV 突变，且比 Sanger 测序法更为简单、快速、灵敏度高，适合临床应用。

鸟苷酸环化酶C在大肠癌患者外周血中的表达及其临床意义

目的：探讨鸟甘酸环化酶 C （ GCC ）在大肠癌患者外周血中的表达及其临床意义。方法采用RT-PCR法对32例大肠癌患者、25例大肠良性病变患者、30例健康体检者外周血中GCC表达情况进行检测，并对大肠癌病理指标与GCC mRNA 表达阳性率之间关系进行研究。结果32例大肠癌患者中，GCC mRNA 的阳性检出率为65.63％（21／32），良性组中 GCC mRNA 的阳性检出率为20.00％（5／25），而对照组中未见 GCC mRNA 表达；三组外周血中表达阳性率差异具有统计学意义（P<0.05）。大肠癌患者 GCC mRNA 表达水平与Duke 分期、淋巴结转移和肝转移密切相关（P<0.05），与年龄、性别、肿瘤大小等无关（P>0.05）。结论 GCC mRNA 在大肠癌患者外周血中阳性表达率较高，特别是复发或转移病例，可作为大肠癌术后复发、转移的早期检测指标之一。

2013年广东省潮州市流行性感冒流行特征分析

目的：了解广东省潮州市2013年度流行性感冒流行特征及病毒流行株构成。方法采集监测哨点医院疑似流感样患者咽拭子标本，采用实时荧光 PCR（real-time RT-PCR）检测病毒核酸。结果全市流感检测哨点医院共采集标本830份，流感病毒核酸阳性为53份，阳性率为6.39％；其中新甲型 H1N1流感占49.06％（26／53）、乙型流感病毒占28.30％（15／53）、季节性流感病毒 H3亚型占22.64％（12／53），未分离到季节性流感病毒H1。4月和12月为年度病毒检测高峰。病毒感染率以5～14岁组（14.12％）高，与其它组比较存在统计学差异（P <0.05）。结论2013年度潮州市流感病毒优势株为新型甲型H1N1，全年有2个流行高峰，在4月和12月，主要发病人群为学龄前儿童和小学生。

软骨发育不全植入前遗传学诊断的方法学研究

目的：针对软骨发育不全（ACH）高危家系的 FGFR3基因的突变类型（c.1138G > A， p.G380R），建立多种快速特异、行之有效的植入前遗传学诊断（PGD）方法，为实施该 ACH 家系的 PGD创造必要的前提条件。方法在确诊该 ACH 患者特定突变类型的基础上，首先用外周血建立各种PGD方法，包括： A.直接测序法； B. ARMS法； C.酶切鉴定法；D. ARMS／RE法。然后对单个卵裂球的全基因组扩增（WGA）产物进行相应方法学的研究。后，对各种方法进行优化优选。结果 A.直接测序法：正常对照c.1138为G 纯合子，而患者为G／A 杂合峰； B. ARMS 法：正常对照扩增阴性，而患者有445 bp 的特异扩增条带。 C.酶切鉴定法：正常对照酶切后仍为513 bp，而患者酶切后产生205 bp、308 bp、513 bp三条带； D. ARMS／RE法：正常对照扩增阴性，无法做酶切鉴定。而患者有445 bp扩增产物，经SfcI酶切后可产生27 bp和418 bp两个片段。结论本研究已成功建立针对c.1138 G > A 杂合错义突变的直接测序法、ARMS 法、酶切鉴定法和ARMS／RE 法。所建立的4种方法快速、特异，但各有利弊，同时使用可相互弥补，结合STR 连锁分析可把误诊风险降到低程度。在正常情况下，可在24 h 内完成对ACH高危胚胎的PGD。

血浆D-二聚体水平与晚期非小细胞肺癌患者临床预后相关性研究

目的：探讨晚期非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）患者血浆中 D-二聚体水平与患者化疗预后的相关性。方法本研究回顾性分析了2008年1月至2010年12月我院行GP方案化疗的晚期NSCLC患者135例，分析其化疗前血浆D-二聚体含量与临床病理特征及无进展生存时间（ progression-free survival，PFS）和总生存时间（ overall survival，OS）的关系。结果Ⅳ期的 NSCLC患者血浆D-二聚体表达水平相对更高，差异有统计学意义（P<0.05）；晚期NSCLC伴血浆D-二聚体表达阳性患者的PFS（5.3个月／10.6个月，P<0.05）和OS（11.8个月／20.4个月，P<0.05）均明显缩短；多因素回归分析化疗前血浆D-二聚体表达水平是影响晚期NSCLC 患者预后的独立因素（P<0.05）。结论D-二聚体可作为晚期NSCLC患者预后判断的实验室辅助诊断指标。

软骨发育不全植入前遗传学诊断的方法学研究

目的针对软骨发育不全（ACH)高危家系的FGFR3基因的突变类型（C.1138G > A， P.G380R)，建立多种快速特异、行之有效的植人前遗传学诊断(PGD)方法，为实施该ACH家系的PGD 创造必要的前提条件。方法在确诊该ACH患者特定突变类型的基础上，首先用外周血建立各种 PGD方法，包括：A.直接测序法；B. ARMS法；C.酶切鉴定法；D. ARMS/RE法。然后对单个卵裂球的全基因组扩增(WGA)产物进行相应方法学的研究。后，对各种方法进行优化优选。结果A.直接测序法：正常对照c.1138为G纯合子，而患者为G/A杂合峰；B. ARMS法：正常对照扩增阴性，而患者有445 bp的特异扩增条带。C.酶切鉴定法：正常对照酶切后仍为513 bp，而患者酶切后产生205 bp、308 bp、513 bp三条带；D. ARMS/RE法'正常对照扩增阴性，无法做酶切鉴定。而患者有445 bp扩增产物，经Sfcl酶切后可产生27 bp和418 bp两个片段。结论本研究已成功建立针对c.1138G>A杂合错义突变的直接测序法、ARMS法、酶切鉴定法和ARMS/RE法。所建立的4种方法快速、特异，但各有利弊，同时使用可相互弥补，结合STR连锁分析可把误诊风险降到低程度。在正常情况下，可在24 h内完成对ACH高危胚胎的PGD。

促红细胞生成素的表达调控机制及其在慢性病贫血治疗中的应用

促红细胞生成素（EPO）为165个氨基酸残基组成的糖蛋白，主要由胎肝和成人肾皮质的成纤维细胞生成。EPO的表达受到多种转录因子和表观遗传学调控。EPO与其受体结合后主要通过激活Jak2／stat5通路，进而激活 Pim、c-Myc、OncostatinM、Bcl-2、Bcl-xL、SOCS 和 D-type cyclin 等基因，在红细胞生成过程中起到抗细胞凋亡和促进细胞增殖等重要作用。使用促红细胞生成剂上调血红蛋白含量，进而改善贫血患者的能量水平和生活质量具有重要意义，但长期使用存在一些副作用。本文对EPO表达调控机制及其在贫血治疗中的应用进行论述。

MicroRNA在肿瘤EMT调控中的作用

MicroRNA（miRNA）是一类长度约19～25个核苷酸的小分子非编码RNA，通过翻译抑制或MRNA降解发挥转录后水平调控基因表达。研究表明，miRNA在上皮细胞-间充质转化（EMT）调控中发挥关键的角色。 EMT是上皮细胞通过特定程序转化为具有间质表型细胞的生物学过程，上皮细胞黏附分子如E-钙粘素等表达减少或缺失，细胞失去极性；细胞具有间充质特征，获得了较高的迁移与侵袭能力，间质特征性分子，如Twist、Snail、Slug和Vimentin 等表达增高。近年来发现，miRNA 参与调控肿瘤细胞发生EMT改变。本文着重对EMT形成过程中miRNA的作用进行扼要综述。此外，回顾分析各种肿瘤中MiRNA的角色，靶向miRNA可能会成为癌症治疗的新型策略。

超声分子影像学--恶性肿瘤诊断及治疗的新途径

目的：恶性肿瘤严重威胁人类的健康。超声分子影像学的出现，可以从一个全新的角度为恶性肿瘤的诊断与治疗提供更多的可能。新型造影剂的出现，在肿瘤早期诊断和治疗方面有其独特的优势，为肿瘤的诊断和治疗提供了新的思路和手段。本文就超声分子影像学在恶性肿瘤诊疗中的进展进行综述。

走近医学研究领域中的基因芯片技术

生物芯片是高密度固定在固相支持介质上的生物信息分子（如寡核苷酸，基因片段， cDNA 片段或多肽、蛋白质）的微阵列。基因芯片是生物芯片的一种。随着人类基因组计划的提前完成。基因芯片技术在生命科学研究领域中有着广泛的应用，其具有高通量、多样化、自动化、反应微型化等突出特点。基因芯片技术已在基因功能表达、基因调控网络、疾病病理、临床诊断、药物开发及筛选等研究方面取得重大进展。本文简要介绍基因芯片技术的基本原理和种类，论述基因芯片技术在医学领域中的应用。

2014年第6卷中文总目录

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