ETS2在乳腺癌细胞中调控CXCR4转录的机制研究

背景与目的：肿瘤转移是乳腺癌患者死亡的主要原因。趋化因子受体CXCR4与乳腺癌转移密切相关。本研究探讨转录因子ETS2(人红血细胞增多症病毒致癌基因同源体2)对人乳腺癌细胞中趋化因子受体CXCR4表达的影响，以及ETS2调控CXCR4转录的分子机制。方法：在MCF-7和MDA-MB-231人乳腺癌细胞株中，本研究通过瞬时转染技术，以及RNAi技术，检测过表达ETS2或抑制ETS2的表达。然后分别应用RT-PCR以及ELISA检测CXCR4 mRNA的表达和蛋白水平，荧光酶素报告基因实验检测启动子活性，ChIP实验检测结合到CXCR4启动子上的ETS2的量。并且对CXCR4启动子上的2个ETS结合位点进行突变，通过荧光报告基因实验，检测突变对CXCR4启动子活性的影响。结果：转染了ETS2过表达质粒的MDA-MB-231和MCF-7人乳腺癌细胞中，CXCR4的表达在mRNA和蛋白水平都升高；报告基因实验结果提示，ETS2通过激活CXCR4启动子的活性提高CXCR4的表达；通过ChIP实验发现，在转染了ETS2表达质粒的MDA-MB-231和MCF-7人乳腺癌细胞中，结合到CXCR4启动子上的ETS2的蛋白量増高，提示ETS2通过直接结合到CXCR4启动子上，从而提高CXCR4启动子的活性；利用RNA干扰技术，抑制ETS2的表达，可以显著减弱CXCR4启动子的活性，降低CXCR4的表达和结合到CXCR4启动子上的ETS2的量；荧光酶素报告基因的结果显示，任意一个位点的突变都降低了CXCR4启动子的活性，2个位点的同时突变使CXCR4启动子的活性进一步降低。结论：在人乳腺癌细胞株MCF-7和MDA-MB-231细胞中，ETS2通过直接结合到CXCR4启动子上的2个结合位点(-540到-535和-240到-235)，活化CXCR4启动子活性，从而对CXCR4发挥转录调控的作用。

乳腺癌细针穿刺活检的临床应用价值

背景与目的：随着乳腺癌术前诊疗手段的发展，细针穿刺似乎不再受临床医生的青睐。细针穿刺作为乳腺癌的术前诊断方法之一，其安全及有效性存在争议。本研究探讨30年来我院乳腺癌细针穿刺与复发、转移的关系。方法：统计我院1975-2006年1260例乳腺癌患者的临床资料，根据是否术前细针穿刺分组，比较2组间临床基本特点、复发转移率、无瘤生存率。结果：细针穿刺阳性率为61.4%，其中Ⅳ期患者阳性率高，达100%；细针穿刺组中以Ⅱ期和Ⅲ期患者居多，均为45.2%；细针穿刺组和非细针穿刺组的局部复发率(7.0% vs 6.4%)、复发转移率(13.2% vs 14.0%)、5年无瘤生存率(82.0% vs 81.0%)及10年无瘤生存率(51.0%vs 64.0%)差异均无统计学意义。结论：细针穿刺具有易操作、阳性率高、对复发及生存无影响等优点，因此对乳腺癌患者的术前诊断仍有较高的临床应用价值。

肝细胞癌组织中高尔基体糖蛋白73和分泌型聚集素的表达及其相关性分析

背景与目的：肝细胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC)是一种具有高度侵袭、转移性的常见恶性肿瘤，预后极差。因此，研究肝癌侵袭的机制，寻找有效的干预靶点显得尤为重要。一些研究提示分泌型聚集素(secreted Clusterin，sCLU)和高尔基体糖蛋白73(Golgi glycoprotein 73，GP73)在肿瘤发生、发展及侵袭、转移过程中起重要作用，且两者具有结构和功能上的相似性。本研究旨在探讨GP73和sCLU在HCC中的表达及其与临床病理特征和预后之间的关系。方法：收集新疆医科大学第一附属医院75例HCC患者癌组织及癌旁正常肝组织标本，采用免疫组化(EnVision二步法)检测HCC组织中GP73、sCLU的表达水平；并与癌旁正常肝组织相比较；Spearman等级相关分析GP73和sCLU在肝癌中表达的关系；研究GP73和sCLU表达水平与HCC临床病理特征及预后的关系。结果：GP73和sCLU在HCC中阳性表达率分别为72%和88%，癌旁正常肝组织的阳性表达率均为4%。GP73在HCC和正常肝组织中阳性表达差异有统计学意义(χ2=73.60，P<0.05)。sCLU在HCC和正常肝组织中阳性表达差异有统计学意义(χ2=207.94，P<0.05)；Spearman等级相关分析提示，HCC组织中，GP73和sCLU蛋白表达呈正相关(r=0.405，P<0.05)；GP73和sCLU在HCC中表达水平与肿瘤的Edmondson病理分级、TNM分期及血管侵犯相关(P<0.05)，而与患者的性别、年龄、HBsAg、合并肝硬化、AFP值、门静脉癌栓、肿瘤数目无相关性(P>0.05)；GP73表达与患者生存期有关，而sCLU表达与患者生存期无关。结论：GP73和sCLU在肝癌中有较高的阳性率，且GP73和sCLU表达呈正相关，GP73和sCLU可能与HCC的侵袭性等生物行为密切相关，检测其表达将有助于评价患者预后。

Ezrin蛋白在宫颈癌中表达的临床意义及其与PCNA、MMP-2、MMP-9、HPV E6蛋白的关系

背景与目的：大量研究表明，Ezrin蛋白在很多肿瘤组织中都有异常表达，参与细胞的多种生物学行为，如细胞黏附、迁移、生存等，在肿瘤的发生、发展过程中扮演重要的角色。本研究旨在分析Ezrin蛋白在正常宫颈组织和宫颈癌组织中的表达差异及与临床病理因素、PCNA、MMP-2、MMP-9、HPV E6蛋白之间的相互关系。方法：收集2002年1月-2006年12月在复旦大学附属妇产科医院妇科诊断为宫颈癌的30例患者的组织标本，并进行回顾性研究。同时收集正常宫颈组织来自子宫肌瘤且经病理证实无任何宫颈病变的10例组织标本作为对照。应用免疫组织化学方法检测宫颈癌组织和正常宫颈组织中Ezrin、PCNA、MMP-2、MMP-9、HPV E6蛋白表达，并分析Ezrin表达与PCNA、MMP-2、MMP-9、HPV E6蛋白表达的关系。结果：Ezrin蛋白在宫颈癌组织中表达呈中强阳性，且主要弥散分布在细胞质和细胞膜处，而正常宫颈组织Ezrin蛋白表达呈弱阳性，且主要分布在细胞膜处，差异有统计学意义(P<0.05)。Ezrin蛋白在宫颈组织中的表达与MMP-2、MMP-9和HPV E6蛋白在宫颈组织中的表达呈正相关，与PCNA表达无关。Ezrin蛋白表达与年龄、肿瘤大小、病理类型、组织分化程度、临床分期等关系差异无统计学意义(P>0.05)。结论：Ezrin在宫颈癌组织中高表达，可能参与宫颈癌侵袭转移。

胸段食管鳞癌颈部淋巴结转移特点及其临床意义

背景与目的：食管癌颈部淋巴结转移率较高，但少有专门报道。本研究分析胸段食管鳞癌颈部淋巴结转移特点，探讨其临床意义。方法：选择1993年1月-2003年12月在福建省肿瘤医院行胸段食管鳞癌三野淋巴结清扫根治术患者1131例，对术后病理证实颈部淋巴结转移患者376例的具体情况进行分析。结果：全组颈部淋巴结转移率为33.2%，其中胸上、中及下段的颈部淋巴结转移率分别为43.7%、33.0%和16.0%。单因素分析显示，颈部淋巴结转移率与肿瘤部位、病理分化程度、病变X线长度、pT分期以及淋巴结转移个数有关(P<0.05)，但多因素回归分析显示，颈部淋巴结转移率只与肿瘤部位、pT分期及淋巴结转移个数有关(P<0.05)。颈段食管旁淋巴结转移多见，其次是锁骨上淋巴结转移，颈深淋巴结及咽后淋巴结转移少见；胸上、中及下段的颈部淋巴结转移数占该段淋巴结总转移数的比率分别为57.7%、32.0%和10.0%，差异有统计学意义(P<0.05)；各段食管癌右颈部淋巴结转移多于左颈部。结论：影响胸段食管鳞癌颈部淋巴结转移独立因素是肿瘤部位、pT分期及淋巴结转移数；颈段食管旁淋巴结转移多见，其次是锁骨上淋巴结转移，颈深淋巴结及咽后淋巴结转移少见。

CT引导Hookwire定位下电视胸腔镜手术对孤立性肺小结节的诊疗价值

背景与目的：临床检查发现，孤立性肺小结节(solitary pulmonary nodule，SPN)包含了相当一部分的早期肺癌。本研究探讨CT引导Hookwire定位下胸腔镜手术对于SPN的诊疗价值。方法：从2011年7月至2013年6月，复旦大学附属肿瘤医院胸外科收治的SPN患者310例，CT引导下留置Hookwire定位针，行胸腔镜(video assisted thoracic surgery，VATS)肺楔形切除，根据术中冰冻病理结果决定进一步治疗方式。统计定位准确率、并发症发生率、VATS 肺楔形切除手术成功率、中转开胸率以及SPN病理分型等。结果：Hookwire定位成功率为100%，咯血2例需要处理，术中Hookwire脱落12例(3.87%)，VATS肺楔形切除手术成功率为99.0%，中转开胸3例。SPN术后组织学病理结果：原发性肺癌237例，良性病变73例。结论：采用CT引导Hookwire定位下VATS手术的方法治疗微小SPN，诊断准确率高、疗效可靠，并发症少，具有很好的临床推广价值。

前列腺特异抗原3慢病毒表达载体的构建与包装

背景与目的：前列腺癌抗原3(prostate cancer antigen 3，PCA3)作为一种长链非编码RNA(lncRNA)已被证实在前列腺癌中高度特异性表达，暗示其可能在前列腺癌中发挥重要作用，为深入研究，我们将完整的PCA3基因转入真核表达载体，并构建慢病毒包装系统。方法：从前列腺癌细胞株LNCaP细胞中提取总RNA，运用重叠延伸方法扩增到PCA3基因，测序正确后定向接入真核表达载体pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP，酶切鉴定并测序正确后进行慢病毒包装和滴度测定。结果：经PCR鉴定及测序，PCA3表达质粒序列与Gene Bank序列进行Blast比对分析，同源性为99.8%，PCA3慢病毒滴度测定为2×108。结论：PCA3成功插入真核表达载体并完成了慢病毒包装，为深入研究PCA3基因在前列腺细胞中的作用奠定了基础，进而为探索前列腺癌的治疗提供了新的途径。

ERα、ERβ在非吸烟非小细胞肺癌患者中的表达与生存期和性别的相关性研究

背景与目的：雌激素信号传导在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLC)中存在争议，体外实验发现，雌激素受体(estrogen receptor，ER)ERβ与肺内组织的异常增生相关，ERβ在正常组织和肺癌组织中的表达结果不同。本研究旨在探讨ERα和ERβ在非吸烟NSCLC患者中的表达与临床病理特征和生存期的关系。方法：收集有组织学病理诊断的144例非吸烟的NSCLC组织及其临床资料，免疫组化方法检测ERα和ERβ表达状况并分析与临床特点和生存期的关系。结果：ERα阳性表达率为7.6%，仅在腺癌中表达， ERα表达状态与生存期无关。ERβ表达率为52.1%，Ⅰ、Ⅱ期患者的表达显著高于Ⅲ、Ⅳ期，差异有统计学意义(P=0.020)。ERβ表达阳性和阴性的中位生存期(median survival time，MST)分别为43和38个月，差异有统计学意义(P=0.028)，ERβ表达阳性和阴性的女性MST分别为45和37个月，差异有统计学意义(P=0.033)。在腺癌中ERβ阳性和阴性表达的MST分别为46和38个月，差异有统计学意义(P=0.021)。结论：ERβ在早期非吸烟NSCLC中表达增高，是女性、腺癌生存期良好的标志。

雌激素通过激活AKT通路产生的细胞因子增强子宫内膜癌细胞增殖能力

背景与目的：目前认为子宫内膜癌的发生可能与无拮抗的雌激素长期作用有关，但雌激素如何调节细胞增殖的作用机制尚不清楚。AKT信号转导通路是细胞生存和增殖的一个重要调节信号。本研究探讨在子宫内膜癌细胞HEC-1A中，雌二醇能否通过激活AKT通路产生细胞因子，以及其对细胞增殖能力的影响。方法：蛋白质印迹法(Western blot)技术检测雌二醇作用HEC-1A细胞后AKT活化情况，以及AKT抑制剂、ER抑制剂对AKT活化的影响。荧光定量PCR及ELISA技术检测雌二醇(E2组)作用于HEC-1A细胞30 min后；或雌激素受体抑制剂(ER组)、AKT抑制剂(AKT组)分别预处理细胞1 h后再加入雌二醇作用30 min后，细胞内血管内皮生长因子受体(VEGF)、bFGF、IL-8基因mRNA表达及细胞培养上清液中蛋白表达。细胞集落形成实验、流式细胞仪检测细胞周期的变化，CFSE法检测细胞增殖能力。结果：E2组的AKT活化比值较对照组显著升高(P=0.0062)，ER组和AKT组的AKT活性比值较E2组显著降低(P=0.0060和P=0.0064)，但不能完全抑制雌二醇作用。E2组的VEGF、bFGF、IL-8 mRNA或蛋白的表达均明显高于对照组(P均<0.01)；在ER组及AKT组中VEGF、bFGF、IL-8 mRNA或蛋白的表达均明显低于E2组(P均<0.05)；雌二醇作用HEC-1A细胞后，细胞增殖数明显增多，细胞周期加快(P均<0.01)。结论：在HEC-1A细胞，雌二醇可能通过激活AKT信号通路产生VEGF、bFGF、IL-8因子，从而增强肿瘤细胞的增殖能力。

GRP78和pERK在胃癌及非胃癌组织中的表达及临床意义

背景与目的：在胃癌的发生、发展过程中，内质网应激、细胞的修复及凋亡是重要的病理生理过程，而GRP78与pERK在其中发挥了重要的作用。研究葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated proteins 78，GRP78)和磷酸化细胞外信号调节激酶(pERK)在胃腺癌、慢性萎缩性胃炎及浅表性胃炎组织中的表达，研究它们与胃癌发生、发展的关系。方法：RT-PCR法检测各25例胃腺癌、慢性萎缩性胃炎和浅表性胃炎新鲜组织中GRP78、pERK基因表达；免疫组化法分别检测各60例胃腺癌、慢性萎缩性胃炎和浅表性胃炎组织中GRP78、pERK蛋白表达，并分析其蛋白表达与临床病理参数间的相关性。结果：RT-PCR半定量结果显示，胃癌组织中GRP78及pERK mRNA的相对表达水平(1.26±0.18、2.35±0.36)均明显高于慢性萎缩性胃炎组织(0.89±0.25、1.18±0.25)及浅表性胃炎组织(0.29±0.09、0.68±0.10)，差异有统计学意义(P＜0.01)。免疫组织化学结果显示，GRP78及pERK蛋白在胃癌组织中的表达率(78.3%、88.3%)亦均高于慢性萎缩性胃炎(46.6%、43.3%)及浅表性胃炎组织(6.7%、5.0%)，差异有统计学意义(P＜0.01)。胃癌组织中GRP78及pERK蛋白表达与胃癌分化程度、分期、淋巴结转移等有明显相关性。GRP78及pERK基因及蛋白表达水平在胃癌中均呈正相关(基因：r=0.307，P=0.000；蛋白：r=0.368， P=0.000)。单因素分析结果显示：组织学分级、浸润深度、TNM分期、淋巴结转移、GRP78高表达及pERK高表达与胃癌预后有关(P均＜0.05)。浸润全层、低分化、TNM分期晚、有淋巴结转移、GRP78高表达及pERK高表达患者生存时间短。多因素生存分析结果结果显示：GRP78高表达与GRP78低表达相比生存时间差异有统计学意义(P＜0.001)。GRP78高表达的胃癌患者生存时间短，提示GRP78是负性的预后因子。结论：GRP78和pERK在胃癌中高表达，GRP78和pERK在正常细胞向恶性细胞转化的过程中可能扮演了重要角色，检测pERK和GRP78的表达可能有助于对胃腺癌的预防、早期诊断及预后判断，同时为胃癌治疗寻找新的靶点。

下调miR-21表达抑制鼻咽癌CNE2细胞增殖和侵袭

背景与目的：miR-21在人类多种肿瘤中异常高表达。本研究探讨干扰miR-21表达对鼻咽癌CNE2细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法：使用脂质体将miR-21 inhibitor转染CNE2细胞，以无关序列(NC inhibitor)作为阴性对照。采用qRT-PCR技术验证miR-21 inhibitor转染的CNE2细胞中miR-21的表达水平；通过MTS法、细胞划痕、Transwell侵袭实验观察下调miR-21表达对CNE2细胞增殖、迁移和侵袭的影响。结果：转染miR-21 inhibitor的CNE2细胞中miR-21的表达明显下调，并且呈浓度依赖性。表明转染miR-21 inhibitor能有效抑制CNE2细胞中miR-21的表达。转染miR-21 inhibitor的CNE2细胞与对照细胞相比，增殖速度明显减慢，差异有统计学意义(P<0.05)。细胞划痕实验显示，下调miR-21表达抑制CNE2细胞迁移(P<0.05)。Transwell侵袭实验结果显示，下调miR-21表达抑制CNE2细胞侵袭(P<0.05)。结论：miR-21能促进鼻咽癌细胞增殖、迁移和侵袭，其可能在鼻咽癌的发生、发展中发挥重要作用。

胃癌患者外周血与胃癌组织中ERCC1基因甲基化的关系及其意义

背景与目的：胃癌的发生基于基因和表观遗传学机制，表观遗传学的改变在胃癌的发展中起到重要作用。DNA甲基化是目前研究多、为深入的一种表观遗传学表达机制。DNA甲基化是一个可逆性过程。核苷酸切除修复交叉互补基因1(excision repair cross-complementing gene 1，ERCC1)是一种DNA损伤修复基因。本研究检测胃癌患者外周血与胃癌组织中ERCC1基因启动子CpG岛甲基化状态，探讨两者的关系及其意义。方法：采用甲基化特异性PCR技术，检测30例胃癌患者外周血、胃癌组织中ERCC1基因启动子CpG岛甲基化状态。结果：胃癌组织中ERCC1基因启动子CpG岛甲基化率为76.7%(23/30)，外周血中ERCC1基因启动子CpG岛甲基化率为63.3%(19/30)，差异无统计学意义。结论：胃癌患者外周血中的ERCC1基因启动子CpG岛甲基化率与胃癌组织中相似，检测胃癌患者外周血中的ERCC1基因启动子CpG岛甲基化状态为治疗胃癌提供一个简便、快捷、可靠的途径，同时也为以ERCC1基因启动子CpG岛甲基化作为靶点治疗胃癌提供了可靠的理论依据。

MAPK信号激活抑制三阴性乳腺癌细胞的迁移和侵袭

背景与目的：三阴性乳腺癌具有高复发和转移风险，除了化疗，临床上无特定的靶向治疗。因此，研究三阴性乳腺癌复发转移机制对提高患者生存率具有重要意义，本研究旨在探讨丝裂原激活的蛋白激酶(MAPK)信号激活对三阴性乳腺癌细胞迁移和侵袭的影响。方法：首先用细胞划痕和细胞小室(Transwell)试验分析和比较肺高转移三阴性乳腺癌细胞系231-HM及其父代肺低转移细胞系231-p的体外迁移和侵袭性差异；然后用蛋白质印迹法(Western blot)检测转移相关蛋白和MAPK分子激活状态；后用MAPK抑制剂处理231-p细胞，测定MAPK抑制情况下的细胞迁移、侵袭和相关蛋白变化。结果：与231-p细胞相比，231-HM细胞迁移和侵袭性明显增强；Western blot检测发现，231-HM细胞中促细胞迁移和侵袭蛋白Caveolin-1和β-catenin升高， MAPK通路相关蛋白P38、Erk1/2和MEK的磷酸化水平明显降低；用P38/MAPK磷酸化抑制剂(SB202190)处理231-p细胞后发现，其细胞迁移和侵袭性明显增强，Caveolin-1和β-catenin表达水平上升。结论：MAPK信号激活抑制三阴性乳腺癌的迁移和侵袭。

动脉自旋标记技术的研究进展

动脉自旋标记(arterial spin labeling，ASL)作为一种非侵入性的磁共振功能成像(functional magnetic resonance imaging，fMRI)技术，利用动脉血作为内源性示踪剂，避免患者不适和潜在危险来追踪由病变引起的血流变化，从而得到组织生理学及病理学信息。现就该技术的工作原理及分类、与其他技术的比较、临床应用和未来展望作一综述。

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