多肽调控因子AcSDKP的生物学活性及构效关系研究进展

AcSDKP是从胎牛骨髓中提取的一种以细胞生长抑制作用为主的多功能生理调控因子,不仅具有抑制造血干细胞生长的生物学功能,对淋巴细胞、肝细胞、肾间质成纤维细胞及心肌成纤维细胞等多种细胞均有增殖抑制作用.同时还能介导血管的生成,对生殖系统也有明显刺激作用,可促进精子生成.本文就AcSDKP的多种生物学活性及新研究进展作一综述.

基于基因芯片技术探讨脑缺血病理分子基础及其药物作用机制的研究进展

基因组学是随分子生物学发展应运而生的一门重要学科,是从整体水平对基因组高通量、高集成、高平行性、微型化和自动化的综合分析.脑卒中是危害人类健康的重要脑血管疾病之一.应用基因芯片技术对脑卒中进行研究,不仅可在基因水平上揭示疾病的本质,还有助于全面探讨脑卒中的病理分子机制,发现药物治疗靶点,开发治疗新药.本文以基因芯片技术运用于实验性脑缺血的体内研究成果为重点,并结合本实验室的工作探讨脑缺血病理分子基础及其药物作用机制的研究进展.

三七皂苷中人参皂苷Rg1与Rb1口服吸收及其体内药代动力学的研究和比较

分别考察三七总皂苷(PNS)在大鼠灌胃和静脉给药后的人参皂苷Rg1(Rg1)、人参皂苷Rb1(Rb1)的胆汁排泄;采用平衡透析法测定药物的血浆蛋白结合率;并结合药代动力学的实验结果,研究和比较Rg1与Rb1的口服吸收及其体内药代动力学性质.结果表明,静脉给药后10 h,Rg1及Rb1胆汁排泄累积量分别为给药剂量的(61.48±18.30)%和(3.94±1.49)%;灌胃给药后12 h,Rg1及Rb1胆汁排泄累积量分别为给药剂量的(0.91±0.51)%和(0.055±0.02)%.Rg1及Rb1的血浆蛋白结合率分别为6.56%～12.74%和80.11%～89.69%.Rg1的胃、肠和肝的通过率(FS,FI和FH)分别为49.85%,13.05%和50.56%;Rb1分别为25.82%,4.18%和65.77%.因此,肠壁吸收差是Rg1和Rb1生物利用度低的主要原因.Rg1具有较高的胆汁排泄和较低的血浆蛋白结合率,Rb1的胆汁排泄较低,而血浆蛋白结合率较高.Rb1的肠黏膜透过性和体内消除速度都低于Rg1,但前者的平均滞留时间(MRT)和血药浓度曲线下面积(AUC)均大于后者.

α1-酸性糖蛋白基因多态性对去甲替林游离药物浓度的影响

为研究在人体内ORM1基因多态性对去甲替林游离药物浓度的影响, 首先采用测序对ORM1进行基因型分析.挑选出ORM1*F1/*F1, ORM1*F1/*S, ORM1*S/*S个体各6人, 进行临床试验.试验当日早上空腹口服去甲替林25 mg, 分别于0, 1, 2, 3, 4, 6, 8, 12, 24, 32, 48, 72, 96和168 h采外周静脉血5 mL, 运用HPLC-MS/MS分别测定血清中去甲替林总药物浓度、10-OH-去甲替林药物浓度及超滤液中去甲替林游离药物浓度,分析不同基因型间去甲替林各药代动力学参数的差异.结果表明不同基因型个体间总去甲替林和10-OH-去甲替林各药代动力学参数,差别无统计学意义.而对于ORM1*F1/*F1基因型个体,血浆中游离药物总量约为ORM1*F1/*S和ORM1*S/*S的2倍, 差别有统计学意义(P＜0.05＝.去甲替林平均血浆蛋白结合率约为(94.81±1.91)%.在服药后2, 3, 4, 6, 8和12 h, ORM1*F1/*F1基因型个体血浆蛋白结合率均低于其余两种基因型个体, 在Tmax(4 h)左右, 差异更为显著(P＜0.05＝.ORM1不同基因型对去甲替林血浆蛋白结合率和游离药物浓度均存在影响,表现为ORM1*S/*S基因型个体结合药物的能力强于其他两种基因型个体,从而导致血清中去甲替林游离血药浓度较低.

化合物EXP-2528对Ang Ⅱ诱导大鼠脑微血管内皮细胞表达E-selectin和VCAM-1的影响

本研究利用体外培养大鼠脑微血管内皮细胞(brain microvascular endothelial cells,BMEC)模型,探讨了血管紧张素(Ang)II对大鼠脑微血管内皮细胞表达E-selectin和VCAM-1的影响及其机制,并评价了新型AT1受体拮抗剂化合物EXP-2528对其的影响.采用RT-PCR和Western blotting分别检测大鼠脑微血管内皮细胞E-选择素(E-selectin)和血管细粘黏附分子-1(vascular cell adhesion molecule-1,VCAM-1)的mRNA及蛋白的表达.结果显示1×10-7 mol·L-1 Ang Ⅱ分别孵育4 h和18 h可显著促进BMEC E-selectin及VCAM-1的mRNA及蛋白的表达,应用氯沙坦和新型选择性AT1受体拮抗剂化合物EXP-2528选择性阻断AT1受体对此有明显抑制作用.同时阻断AT1受体和AT2受体也可明显抑制Ang Ⅱ诱导的E-selectin及VCAM-1表达的增加,但是与单独阻断AT1受体相比无明显差异.而选择性阻断AT2受体对Ang Ⅱ诱导的E-selectin及VCAM-1的表达无明显影响.以上实验结果提示,Ang Ⅱ可通过激动AT1受体上调BMEC E-selectin和VCAM-1的表达,参与脑血管疾病的发生发展.

γ-羟基丁酸受体在大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤中的作用

研究γ-羟基丁酸(gamma-hydroxybutyric acid,GHB)受体在大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤中的作用及其机制.选用GHB受体选择性激动剂NCS-356和特异性拮抗剂NCS-382作为工具药,采用改良的Longa法制备大鼠大脑中动脉栓塞(MCAO)模型.缺血2 h再灌注2 h后,动物进行Longa法行为功能评分;再灌注24 h后,部分动物用TTC染色法测定大鼠脑梗死体积;部分动物应用流式细胞仪测定神经细胞内游离钙离子浓度;分光光度法测定缺血侧大脑皮质中总一氧化氮合酶(tNOS)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)活性和一氧化氮(NO)含量;放射免疫法测定大鼠缺血侧大脑皮层环磷酸鸟苷(cGMP)含量.Isc/R组大鼠行为功能评分、脑梗死体积、神经细胞内游离Ca2+浓度、cGMP和NO含量、tNOS及iNOS活性均显著高于假手术组;NCS-356 160 μg·kg-1(N1)、NCS-356 320 μg·kg-1(N2)、 NCS-356 640 μg·kg-1(N3)和尼莫地平600 μg·kg-1(Nim)组的上述各指标均不同程度地低于Isc/R组,而NCS-382 640 μg·kg-1+NCS-356 640 μg·kg-1 (NCS-382+N3)组则能显著对抗N3组的作用.激动GHB受体对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤具有一定的保护作用,其作用机制可能与降低神经细胞内游离Ca2+浓度,减少NO及cGMP含量有关.

5-单硝酸异山梨酯对兔离体隐动脉交感嘌呤能缩血管反应的影响

采用兔离体隐动脉血管环张力实验及电场刺激诱发交感嘌呤能血管收缩实验,观察5-单硝酸异山梨酯(isosorbide-5-mononitrate,ISMN)对交感嘌呤能缩血管反应的作用,并分析其作用机制.结果表明,电场刺激(电压15 V,波宽1 ms,时程1 s)诱发兔离体隐动脉(去内皮)产生血管收缩反应.该收缩反应呈频率(2～16 Hz)依赖性,可被0.1 μmol·L-1河豚毒素(tetrodotoxin)完全抑制.α1受体阻断药哌唑嗪(1 μmol·L-1)对2～8 Hz电刺激诱发的血管收缩反应无影响.P2X1受体激动药α,β-亚甲基ATP(3 μmol·L-1)脱敏P2X1受体,同时联合应用哌唑嗪(1 μmol·L-1)完全抑制电刺激诱发的血管收缩反应.采用一个标本一个浓度给药时,ISMN(0.1 mmol·L-1)显著抑制8 Hz电刺激诱发的血管收缩反应,在0.3及1.0 mmol·L-1时ISMN显著抑制各频率电刺激诱发的血管收缩反应;1.0 mmol·L-1 ISMN对电刺激诱发的血管收缩反应的抑制率分别为46%(2 Hz)、 47%(4 Hz)、 34%(8 Hz)和22%(16 Hz).ISMN(0.3及1.0 mmol·L-1)对外源性去甲肾上腺素(0.01～100 μmol·L-1)或腺苷三磷酸(1 mmol·L-1)诱发的血管收缩反应无影响.以上结果提示,ISMN显著抑制电场刺激诱发的交感嘌呤能血管收缩反应,其作用机制可能是ISMN作用于交感神经末梢突触前膜抑制嘌呤能神经递质产生的血管收缩反应.

阿的平预防中暑的研究

本研究旨在观察预先给予阿的平对大鼠中暑模型的保护作用,同时采用体外培养的神经元热损伤模型探讨阿的平的作用机制.清醒大鼠分别灌胃给予阿的平4.5,9.0和18 mg·kg-1,1 h后进入(41.0±0.5) ℃的水循环热仓,持续观察动物直肠温度直至死亡,直肠温度和动物存活时间分析表明,预先给予阿的平能够延缓热环境中大鼠的体温快速增加,推迟动物死亡.在细胞水平,原代培养的大鼠纹状体神经元在43.0 ℃培养条件1 h造成细胞热损伤模型,阿的平处理组预先在培养上清液中加入20 μmol·L-1阿的平,1 h后接受热环境处理.采用荧光分光光度法测定细胞膜流动性,细胞裂解后采用[3H]标记花生四烯酸作为底物测定细胞内磷脂酶A2活性,采用气相色谱-质谱联用的方法测定细胞内活性脂肪酸的水平.结果表明热环境导致纹状体神经元细胞膜流动性下降,细胞内磷脂酶A2活性升高,细胞内花生四烯酸浓度升高,而阿的平稳定细胞膜、抑制细胞内磷脂酶A2活性以及减少花生四烯酸及其代谢产物的释放,可能部分解释阿的平延缓中暑和对抗热环境损伤的机制.

人参皂苷Rb1可能通过CDK5途径减轻Aβ25-35诱导的胎鼠海马神经元tau蛋白过度磷酸化

观察人参皂苷Rb1对Aβ25-35诱导的海马神经元tau蛋白过度磷酸化的影响,并探讨其对周期依赖性蛋白激酶(cyclin-dependent kinase 5,CDK5)及激动亚基p25/p35的可能作用.通过蛋白免疫印迹法和免疫细胞化学染色法检测胎鼠海马神经元tau蛋白在Thr205、Ser396和Ser404位点的磷酸化水平,及CDK5的两个亚基cdk5和p25/p35的蛋白水平.20 μmol·L-1凝聚态Aβ25-35作用于海马神经元12 h,可使海马神经元tau蛋白在Thr205、Ser396和Ser404位点的磷酸化水平增高,p25的数量增多,但并不影响cdk5亚基的表达.人参皂苷Rb1可减轻凝聚态Aβ25-35诱导的海马神经元tau蛋白的过度磷酸化,抑制p35的降解并减少海马神经元p25的生成.人参皂苷Rb1可能通过CDK5途径减轻Aβ25-35诱导的胎鼠海马神经元tau蛋白过度磷酸化.

中药白头翁地上部分的三萜皂苷成分

为了研究白头翁地上部分的三萜皂苷成分,采用不同色谱技术对白头翁地上部分乙醇提取物的正丁醇部位进行分离纯化,并用波谱和化学方法鉴定化合物的结构.从正丁醇部位中共分离得到7个三萜皂苷类化合物,其结构分别被鉴定为2β-羟基常春藤皂苷元28-O-α-L-吡喃鼠李糖(1→4)-β-D-吡喃葡糖(1→6)-β-D-吡喃葡糖酯苷(1)、3-O-α-L-吡喃阿拉伯糖常春藤皂苷元28-O-α-L-吡喃鼠李糖(1→4)-β-D-吡喃葡糖(1→6)-β-D-吡喃葡糖酯苷(2)、3-O-α-L-吡喃鼠李糖(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖齐墩果酸28-O-α-L-吡喃鼠李糖(1→4)-β-D-吡喃葡糖(1→6)-β-D-吡喃葡糖酯苷(3)、3-O-α-L-吡喃鼠李糖(1→2)[β-D-吡喃葡糖(1→4)]-α-L-吡喃阿拉伯糖常春藤皂苷元28-O-α-L-吡喃鼠李糖(1→4)-β-D-吡喃葡糖(1→6)-β-D-吡喃葡糖酯苷(4)、3-O-α-L-吡喃鼠李糖(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖常春藤皂苷元28-O-α-L-吡喃鼠李糖(1→4)-β-D-吡喃葡糖(1→6)-β-D-吡喃葡糖酯苷(5)、常春藤皂苷元28-O-α-L-吡喃鼠李糖(1→4)-β-D-吡喃葡糖(1→6)-β-D-吡喃葡糖酯苷(6)及常春藤皂苷元3-O-α-L-吡喃鼠李糖(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖苷(7).其中化合物1为新化合物,化合物2～6为首次从该植物中分离得到.

浅裂鳞毛蕨根茎中的二氢黄酮苷类化学成分

为研究浅裂鳞毛蕨根茎中的化学成分,用Sephadex LH-20,silica gel等柱色谱方法从其水提物中分离得到化合物,并根据理化性质和波谱数据鉴定其结构.分离得到9个化合物,分别为浅裂鳞毛蕨素A(1),浅裂鳞毛蕨素B(2),浅裂鳞毛蕨素C(3),浅裂鳞毛蕨素D(4),东方荚果蕨酯A(5),东方荚果蕨酯C(6),熊果苷(7),3-甲氧基-4-羟基苯基-1-O-β-D-葡糖苷(8)和3,4-二甲基苯基-1-O-β-D-葡糖苷(9).其中化合物1～4为新化合物,其余均为首次从本植物中分得.

N-芳酰烷基环丙沙星的合成及其抗菌活性

通过在环丙沙星7位的哌嗪环上引入脂溶性基团,以寻求抗菌谱更广、疗效更强、毒副作用更小的抗菌药物.根据前药设计原理,设计合成目标化合物,并研究其生物活性.获得了10种新化合物.新化合物的结构经1H NMR,13C NMR,MS和元素分析确证.目标化合物比环丙沙星具有更好的脂溶性;体外抗菌活性研究表明,大部分目标化合物对大肠埃希氏菌和铜绿假单孢菌具有较强的抑菌活性,其中化合物3d对大肠埃希氏菌抑菌活性高于环丙沙星.

蟾皮化学成分的分离与结构鉴定

蟾皮为蟾蜍科动物中华大蟾蜍Bufo bufo gargarizans Cantor的干燥皮,在我国民间多用来治疗原发性肝癌、肺癌、肠癌等,其水溶性成分制剂华蟾素注射液临床上用于消化道中晚期癌症,疗效确切,体外抗肿瘤活性筛选也表明蟾皮水提取物对结肠癌细胞HCT-8、肺癌细胞A-549生长均有明显的抑制作用.为了阐明其活性成分,对其水溶性成分进行了系统研究,采用Sephadex LH-20、硅胶柱色谱结合结晶法,从其水提物中分离得到6个化合物,分别鉴定为4-氨基-3-羟甲基-环辛酰胺骈四氢-α-呋喃酮(蟾蜍环酰胺B,I)、蟾蜍环酰胺C(II)、蟾蜍噻咛(III)、去氢蟾蜍色氨氢溴酸盐(IV)、辛二酸(V)和丁二酸(VI),其中化合物I和II为新化合物.

线性降解程序变湿法研究青霉素钾的稳定性

报道了一种新的研究湿度对固体药物稳定性影响的试验方法--线性降解程序变湿法.按照这一变湿规律进行程序变湿药物稳定性试验能大限度地使药物在高湿和低湿范围内降解程度一致,提高了试验的精密度.作者以青霉素钾为模型药物,采用线性降解程序变湿法和指数程序变温法进行试验,求得了Ea,m,A和t0.9等动力学参数.结果表明,新方法测定结果的精密度明显优于文献报道的程序变湿变温法.

依托泊苷静脉注射亚微乳的制备及其体内外评价

本文旨在制备依托泊苷静脉注射亚微乳(ESE)并考察其体内外性质.采用高压均质法制备载药亚微乳,单因素试验考察处方工艺中影响制剂质量的因素,激光散射法和超滤离心法测定其粒径、zeta电位和包封率;长期留样观察其物理稳定性,恒温加速试验-威布尔分布拟合法考察其化学稳定性;以依托泊苷溶液为参比制剂,考察其在大鼠体内药代动力学行为.测得亚微乳平均粒径(189.9±54.6)nm,zeta电位-32.6 mV,包封率91.7%.4 ℃长期留样9个月物理稳定性无显著变化,加速试验预测4 ℃有效期(T0.9)约为665 d.亚微乳和溶液在大鼠体内药代动力学曲线均符合双隔室模型,药时曲线下面积(AUC0-t)分别为(18.30±8.74)和(19.32±6.45)μg·h·mL-1.结果表明ESE避免了有机增溶剂的使用,物理化学稳定性较溶液显著提高,且未改变体内药代动力学行为.

通过体外自乳化性能及体内药代动力学评价优化葛根素自乳化制剂

本文将水不溶性药物葛根素制备成自乳化制剂.测定了葛根素在不同油相及表面活性剂的溶解度,结果表明葛根素在油酸、Tween 80中的溶解度较好,1,2-丙二醇不但能增加药物的溶解度,而且能够提高自乳化能力.以油酸为油相,Tween 80为表面活性剂,1,2-丙二醇为助表面活性剂,配制一系列混合物,通过绘制三元相图得到自乳化区,考察不同自乳化处方的自乳化性质,采用激光粒度散射仪测定乳化后粒子大小,在体外评价基础上选择较好的3个处方进行比格犬体内药动学研究,比较不同处方自乳化制剂在比格犬体内的生物利用度包括药代动力学参数Cmax, Tmax, AUC0-t.结果表明处方2和处方3的AUC0-t值[(5.201±0.511) ng·mL-1·h, (5.174±0.498) ng·mL-1·h]和Cmax值[(1.524±0.125) ng·mL-1, (1.513±0.157) ng·mL-1]显著高于处方4[(3.013±0.623) ng·mL-1·h, (0.939±0.089) ng·mL-1],通过体内研究结果获得较优处方为油酸(17.5%)、Tween 80(34.5%)、1,2-丙二醇(34.5%).自乳化释药系统提供了水不溶性药物口服给药的新途径.

Effect of ciprofloxacin and chloramphenicol on humoral immune response elicited by bovine albumin encapsulated in niosomes

The aim is to evaluate the effect of ciprofloxacin and chloramphenicol on anti-BSA antibody production triggered by bovine albumin encapsulated in non-ionic surfactant vesicle, niosomes. Reverse phase evaporation method was adopted to entrap the antigen in colloidal carrier composed of Span 80 and Span 85 followed by simultaneous characterization for particle size, entrapment efficiency and in vitro release. The protein content was determined by Bradford method using UV Visible Spectrophotometer at 595 nm. Humoral immune response was measured in terms of systemic IgG antibody titre by ELISA method. Experimental data indicated that 7∶3 molar ratio of Span 80 and cholesterol based niosomal formulation possessed maximum (39.8±2.9)% of soluble protein.Ciprofloxacin markedly (P＜0.05) decreased the antibody titre. In contrast, chloramphenicol did not reduce the antibody titre significantly in comparison to control group (P＞0.05). It is necessary to explore the effect of a vaccine antigen when a candidate is medicated with a therapeutic agent, which might help in programming a new drug management and vaccination programme.

高效液相色谱-质谱/质谱联用法测定人血浆中莫沙必利

建立测定人血浆中莫沙必利的高效液相色谱-质谱/质谱联用法.取血浆样品经液-液萃取后,以乙腈为有机相,0.3%甲酸水溶液为水相,采用梯度洗脱的方式,用C18柱分离,通过电喷雾离子化,以多反应监测(MRM)方式进行正离子检测.莫沙必利线性范围为0.17～68.00 ng·mL-1,定量下限为0.17 ng·mL-1,每个样品测试时间仅2.8 min,日内、日间精密度(RSD)均小于13%,准确度(RE)在±6.3%范围内.应用此法研究了20名志愿者单剂量口服枸橼酸莫沙必利片后的药代动力学特点.该方法、灵敏、准确、快速,适用于莫沙必利的药代动力学及生物等效性研究.

高灵敏度LC-MS/MS法测定犬血浆中的坦洛新

犬口服盐酸坦洛新控释片后血浆药物浓度Cmax小于10 ng·mL-1,需建立测定犬血浆中坦洛新的高灵敏度液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS).血浆样品加入内标苯海拉明,用正己烷-二氯甲烷(2∶ 1)萃取后,反相C18色谱柱分离,以甲醇-乙腈-甲酸铵(30∶ 40∶ 30,v/v/v)为流动相,流速为0.4 mL·min-1.选用大气压化学离子化源(APCI)三重四极杆串联质谱仪,以选择反应监测方式进行检测,用于定量分析的离子反应分别为m/z 409→228(坦洛新)和m/z 256→167(苯海拉明).坦洛新线性范围为0.02～50 ng·mL-1,定量下限为0.02 ng·mL-1.批内、批间精密度(RSD)均小于9.72%,准确度(RE)在-2.61%～8.82%.本方法灵敏度高,专属性强,用于犬口服盐酸坦洛新控释片后的药代动力学研究.

蛇床子药材的高效液相色谱指纹图谱

采用液相色谱-质谱联用技术对蛇床子药材的活性成分进行定性分析,建立评价其质量的指纹图谱分析方法.采用Shimadzu C18色谱柱,以乙腈-0.1%醋酸水溶液为流动相梯度洗脱,流速为1.0 mL·min-1,检测波长为245 nm和322 nm,测定了35批不同来源的蛇床子药材的HPLC-UV指纹图谱以及其中4批代表性药材的HPLC-DAD-MS图谱.根据指纹图谱相似度分析结果,将蛇床子药材分为4类;利用HPLC-DAD-MS技术分析了4类药材化学组成上的异同,分别在4类药材中指认了8个,7个,4个和2个香豆素类成分.提示本方法可用于蛇床子药材的指纹图谱测定,并可为其质量评价提供可靠依据.

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