纳米药物状态对药物吸收影响的灰色关联度分析

采用灰色关联度分析方法研究了药物的表面zeta电位、形状因子和尺度等因素对药物和吞噬细胞相互作用的过程影响的关联度,并进行了机制分析.结果表明:在药物和细胞作用过程中,药物的表面zeta电位对内化过程的影响大,形状影响次之,颗粒尺度影响相对较小.

高原低氧影响药物代谢的研究进展

高原具有低氧、低压、强辐射、寒冷、干燥等环境特征,其中低氧是影响人体正常生命活动的主要因素,研究高原低氧条件下的药物代谢特征对于了解药物在高原机体的代谢和消除快慢,并指导高原地区临床合理用药具有重要意义.本文综述了高原低氧对药物代谢的影响,阐述了高原低氧条件下部分药物的代谢特征及药物代谢酶活性和表达的变化,并探讨了相关机制.

核转录因子Nrf2与肺部炎症疾病研究进展

核因子NF-E2相关因子(nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)是氧化应激反应敏感基因的重要转录因子之一,可调节依赖抗氧化反应元件(antioxidant response elements,ARE)的多种抗氧化蛋白的生成.研究显示,Nrf2-Keap1 (Kelch样ECH联合蛋白1)-ARE信号通路是细胞内重要的内源性抗氧化防御机制之一,上调该信号通路可诱导其下游调控的多种抗氧化酶及解毒酶,提高谷胱甘肽及超氧化物歧化酶等抗氧化物质的表达水平,清除自由基,维持细胞内氧化还原平衡状态,发挥内源性细胞保护作用.近年来,大气污染尤其PM2.5可能是导致呼吸道炎症发病率升高以及炎症加重的关键因素之一,Nrf2及其信号通路对气道炎症性疾病如支气管哮喘、慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)和急性肺损伤(acute lung injury,ALI)的调控,有望成为防治肺部炎症性疾病药物研究潜在性靶点.本文就Nrf2与气道炎症和氧化应激相关信号通路调控进行综述.

HIV衣壳蛋白结构及其药物小分子研究进展

HIV衣壳蛋白聚集形成富勒烯锥形体,将病毒RNA包裹其中,这个过程对于HIV病毒的感染性起着至关重要的作用,衣壳蛋白被认为是潜在的药物靶点.近年来大量的研究阐明了衣壳蛋白的空间结构,并且发现了以衣壳蛋白为靶点的多肽或者小分子药物.本文主要总结衣壳蛋白的空间结构特点,对于作用于衣壳蛋白的小分子和多肽的结合位点进行详尽分析与比较,同时也对以成熟过程中蛋白相互作用为靶点的药物发现进行了展望.

网络药理学分析揭示的常用活血化瘀中药抗炎-抗血栓作用

活血化瘀中成药多源于中医经方验方,抗血栓疗效及安全性有据可循,但其配伍规律及作用机制尚不明确.本文结合中医传承辅助系统(V2.O)、IPA (ingenuity pathway analysis)等生物信息学方法,分析活血化瘀中成药的配伍规律和抗血栓作用机制.基于中医传承辅助系统分析活血化瘀中成药配伍规律,得到配伍常用的3味中药:丹参(Salvia miltiorrhiza Bge.)、川芎(Ligusticum chuanxiong Hort.)和红花(Carthamustinctorius L.).基于IPA分析上述3味活血化瘀中药活性成分抗血栓作用机制,得到25个单体和29个血栓相关分子的作用网络关系.29个分子中有23个分子与炎症反应有关,关系密切的炎症分子为NOS2、PTGS2、IL-6、TNF和IL-1β.由此推测,含丹参、川芎和红花活血化瘀中成药抗血栓作用,主要与其抑制炎症反应有关.抑制炎症反应,尤其是抑制炎症相关分子NOS2、PTGS2、IL-6、TNF、IL-1β及相关通路,将成为阐明含丹参、川芎和红花活血化瘀中成药抗血栓作用一个新的切入点.

基于RNA干扰技术的外排转运体体外模型及评价

为建立多药耐药相关蛋白2 (MRP2)和P-糖蛋白(P-gp)的体外RNA干扰模型,应用化学合成的siRNA转染HepG2细胞,并用实时PCR和Western blot检测mRNA和蛋白的表达变化,应用MRP2和P-gp底物罗丹明和甲氨蝶呤进行功能评价确定模型是否成功.siRNA筛选结果显示,MRP2 siRNA-3或P-gp siRNA-2能够显著地抑制MRP2或P-gp的mRNA表达,抑制率分别为68％和84％;MRP2 siRNA-3或P-gp siRNA-2 (80 nmol·L-1)作用48 h能够明显地抑制MRP2或P-gp的蛋白表达,抑制率分别为62％和70％,同时不影响其他转运蛋白的表达;给予MRP2或P-gp底物甲氨蝶呤或罗丹明孵育,发现MRP2 siRNA-3或P-gp siRNA-2 (80 nmol·L-1)作用48 h能够显著增加甲氨蝶呤或罗丹明的细胞内浓度,表明其外排受到抑制.以上结果表明利用化学合成的siRNA能够显著地抑制细胞MRP2和P-gp的表达和功能,提示细胞干扰模型建立成功.

蛇毒三肽pENW的抗血小板黏附作用及其机制研究

考察蛇毒三肽(pENW)对血小板与纤维蛋白原黏附的抑制作用及其机制.采用平板法检测pENW(116.5～466.2 μmol·L-1)对血小板与纤维蛋白原黏附的抑制作用以及纤维蛋白凝块回缩的抑制作用.MTT法测定pENW对血小板活力的影响;双波长荧光分光光度计法测定血小板胞浆[Ca2+]i变化;流式细胞术测定血小板内活性氧族(ROS)含量;ELISA法测定血小板内环磷酸鸟苷(cGMP)、环磷酸腺苷(cAMP)、血栓烷A2 (TXA2)的水平;Western blot法测定pENW对血小板内Akt、ERK与p38磷酸化水平的影响.实验结果显示,pENW显著抑制血小板与纤维蛋白原的黏附及凝血酶诱导纤维蛋白凝块的回缩;pENW可升高血小板内cGMP/cAMP含量,抑制TXA2的生成及抑制血小板胞浆内[Ca2+]i升高.pENW抑制凝血酶诱导血小板内的Akt信号通路、ERK与p38信号通路的磷酸化,pENW对血小板的抑制作用与ROS无关.结果表明,pENW能够有效抑制血小板与纤维蛋白原的黏附及纤维蛋白凝块的回缩,因此pENW既可以阻止血栓形成的始动环节,又能减缓已形成血栓的固化过程.

白杨素对野百合碱诱导的肺动脉高压大鼠右心室NOX4及NF-κB表达的影响

观察白杨素(chrysin,5,7-二羟基黄酮)对野百合碱(monocrotaline,MCT)诱导的肺动脉高压(pulmonary arterial hypertension,PAH)大鼠右心室重构的影响及其机制.Sprague-Dawley大鼠适应性喂养1周,随机分为正常对照组、MCT组、MCT+chrysin (50 mg·kg-1·d-1)及MCT+chrysin(100 mg·kg-1·d-1)剂量组.MCT (60 mg·kg-1)皮下注射诱导PAH大鼠模型.连续给药4周后,右颈外静脉插管测定大鼠右心室收缩压(RVSP)、平均肺动脉压(mPAP).分离大鼠右心室(RV)、左心室+室间隔(LV+S)并称重,剥离大鼠胫骨并测量其长度,计算RV/(LV+S)及RV/胫骨长度的比值.HE染色观察右心室病理学变化,Masson染色观察右心室胶原沉积的变化.比色法测定右心室总抗氧化能力(T-AOC)和丙二醛(MDA)含量.qPCR、Western blot和(或)免疫组化检测右心室collagen Ⅰ、collagen Ⅲ、NADPH氧化酶4(NADPH oxidase 4,NOX4)、核转录因子κB (nuclear factor-kappa B,NF-κB) mRNA和蛋白表达.结果发现,白杨素连续给药4周后能明显降低MCT诱导的PAH大鼠RVSP及mPAP,减轻RV/(LV+S)及RV/胫骨长度的比值,改善右心室病理变化,降低右心室胶原的沉积及collagen Ⅰ、collagen Ⅲ的表达,提高右心室T-AOC水平,降低NOX4的表达及MDA含量,抑制NF-κ的表达.结果表明,白杨素能缓解MCT诱导的PAH大鼠右心室重构,其机制可能与其抑制NOX4介导的氧化应激损伤,进而抑制NF-κB所介导的胶原沉积有关.

成纤维细胞生长因子21对胰岛素抵抗缓解作用机制的研究

本文考察了成纤维细胞生长因子21 (FGF21)对胰岛素抵抗小鼠模型的治疗作用及其机制.采用高热量脂肪饮食联合小剂量链脲佐菌素建立2型糖尿病小鼠模型,随机分成2型糖尿病组与FGF21治疗高、低剂量组及胰岛素治疗组,并与正常对照组比较.测定5组间小鼠血清葡萄糖、胰岛素、脂质产物及血清和肝脏组织炎症因子水平的变化.结果显示,2型糖尿病组血糖、胰岛素、游离脂肪酸(FFAs)、甘油三酯及炎症因子平均水平较正常对照组显著增高(P＜0.01),与胰岛素组比较无显著性差异.FGF21治疗组血糖、胰岛素、血脂及炎症因子平均水平较2型糖尿病组及胰岛素组显著降低(P＜0.01),与对照组无差异.口服葡萄糖耐量试验(OGTT)及胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)结果显示,经FGF21治疗4周后胰岛素抵抗亦明显得到改善,且呈现剂量依赖性.因此本研究揭示了FGF21可以改善2型糖尿病小鼠的胰岛素抵抗水平,可能与其参与调控炎症因子水平有关.

静脉注射丹酚酸A在恒河猴体内的药代动力学研究

丹酚酸A (salvianolic acid A,Sal A)是从丹参根中分离得到的具有多种药理活性的化合物.本文建立的恒河猴血浆中丹酚酸A的LC-MS测定方法可用于研究丹酚酸A在恒河猴体内的药代动力学特性,并考察了同时测定猴血浆中丹酚酸A、B和C的可行性.恒河猴静脉注射丹酚酸A 2.5、5和10 mg·kg-1后,2 min时的血药浓度(C2min)分别为(28.343±6.426)、(45.679±12.301)和(113.293±24.360) mg·L-1.药时曲线下面积(AUC0—)分别为(3.316±0.871)、(5.754±2.150)和(13.761±2.825)μg·L-1·h.本研究为丹酚酸A的临床前及临床研究提供了数据支持,也为丹酚酸A、B和C在猴或人体内的测定提供了参考.

虚拟筛选技术辅助SERT抑制剂高通量筛选模型的建立及应用

为提高化合物筛选效率、发现更多5-羟色胺转运体(serotonin transporter,SERT)抑制剂,本研究选择与中枢神经系统5-羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)能神经元具有极高相似性、能分泌5-HT、表达腺苷受体A3(A3AR)的RBL-2H3细胞,采用荧光底物ASP+进行SERT再摄取抑制率检测,建立生物筛选SERT抑制剂的模型.在大规模的化合物库中,基于配体的虚拟筛选技术,采用贝叶斯分类方法与分子指纹相似度检索筛选出待筛化合物;进一步结合生物筛选方法进行验证,找到具有SERT抑制活性的全新结构化合物.研究表明ASP+检测方法有效降低环境生物危害性、检测效率高,而将生物筛选和虚拟筛选两者有机结合明显提高了筛选的效率.

新型5-HT/NE再摄取双重抑制剂的设计、合成及其初步的药理学评价

本文基于已有的先导结构,结合前期已建立的药效团模型,利用骨架迁越的策略设计并合成两类全新结构类型的异吲哚啉类化合物,通过1H NMR、HR-MS对化合物结构进行了确证,完成了初步的药理活性评价.结果显示,这些化合物均有不同程度的5-HT再摄取抑制活性和NE再摄取抑制活性,其中化合物1-3显示出较强的5-HT再摄取抑制活性和NE再摄取抑制活性,并且在整体动物抗抑郁药效学实验中表现出明确的抗抑郁效果,以及较低的毒副作用,值得进一步研究.

高领类尖柳珊瑚中的倍半萜成分

从中国南海高领类尖柳珊瑚(Muriceides collaris Nutting)中分离得到了7个愈创木烷型倍半萜:1个新化合物6-formyl-5-isopropyl-3-hydroxymethyl-7-methyl-1 H-indene (1)、1个新天然产物5-isopropyl-3,7-dimethyl-1H-indene-1-one (2)及5个已知化合物:guaiazulene (3)、4-formyl-7-isopropyl-10-methylazulene (4)、sesquiterpeneketolactone (5)、alismoxide (6)和guaia-1 (5),6-diene (7).化合物的结构通过现代波谱技术[MS、IR、1H NMR、13CNMR(DEPT)、HMQC、HMBC、NOESY]及与文献对照得到了确证.

布地奈德缓释干粉吸入剂的制备及乳糖用量的影响

采用高压匀质联合喷雾干燥法制备载有布地奈德的壳聚糖微粒并考察其体外释放行为,用涡旋混合器使之与乳糖混合,以药物回收率和含量均匀度为指标考察混合速度与混合时间的影响,以药物回收率、含量均匀度、粉末流动性和体外沉积分布为指标考察乳糖用量的影响.制得微粒具有一定的体外缓释效果,可吸入组分百分比为46.0％,但流动性较差,加入10倍乳糖进行混合后,药物回收率高达96.5％,药物含量的相对标准偏差为2.5％,流动性较好,可吸入组分百分比提高至59.6％.结果表明,采用涡旋混合器可制备回收率及含量均匀度均较高的布地奈德缓释干粉吸入剂,处方具有较好的流动性,适于肺部吸入.

聚(2-乙基-2-噁唑啉)-胆固醇氯甲酸酯修饰盐酸阿霉素脂质体的制备及评价

本文评价了两亲性pH敏感聚合物聚(2-乙基-2-噁唑啉)-胆固醇氯甲酸酯[poly(2-ethyl-2-oxazoline)cholesteryl methyl carbonate,PEOZ-CHMC]的缓冲能力.采用硫酸铵梯度法制备盐酸阿霉素脂质体(doxorubicin hydrochloride liposomes,DOX-L),后插入法制备PEOZ-CHMC和聚乙二醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(polyethylene glycol-distearoyl phosphatidyl ethanolamine,PEG-DSPE)修饰的盐酸阿霉素脂质体(PEOZ-DOX-L和PEG-DOX-L),对盐酸阿霉素脂质体的理化性质、体外释放、细胞抑制作用和细胞内定位情况进行评价.结果显示,PEOZ-CHMC对微酸环境有一定的缓冲能力.利用葡聚糖凝胶微柱离心法测定脂质体的包封率为(97.3±1.4)％,动态光散射法测定脂质体的粒径在120 nm左右,经PEG-DSPE和PEOZ-CHMC修饰后脂质体的包封率和粒径均无明显改变.Zeta电位分析仪结果显示3种脂质体表面电荷均为负值.通过透析实验考察制剂的体外释药行为,结果表明,在pH 7.4的释放介质中,PEOZ-DOX-L释放较为缓慢,而在pH 5.0时,PEOZ-DOX-L快速释药,显示出良好的pH敏感性.激光共聚焦实验表明核内体的微酸环境可以促进脂质体发生核内体逃逸,直接释放盐酸阿霉素进入细胞核,而DOX-L和PEG-DOX-L均无此作用.细胞抑制作用结果显示,PEOZ-DOX-L对细胞的抑制作用随pH降低而增强,但pH的降低对PEG-DOX-L和DOX-L的细胞抑制作用没有影响.因此PEOZ-CHMC构建的pH敏感脂质体能克服PEG链抑制脂质体的细胞摄取和妨碍pH敏感脂质体的核内体逃逸问题.

SUMO特异性蛋白酶1对hPXR调控P-gp基因表达的影响

药用真菌猪苓4种小GTPase基因的克隆和表达分析

利用RACE-PCR技术首次从药用真菌猪苓中分离得到猪苓菌核的4个小GTPase基因.这4个基因分别命名为PuRhoA1、PuRhoA2、Puypt1及PuRas,PuRhoA1全长698 bp,编码区共585 bp,编码194个氨基酸,推测分子量为21.75kD,理论等电点为6.44;PuRhoA2全长837 bp,其中编码区长585 bp,可编码194个氨基酸,计算其分子量为21.75kD,理论等电点为6.33;Puypt1为一条896 bp的cDNA,编码区为615 bp,可编码204个氨基酸,经计算分子量为22.556kD,理论等电点为5.75.PuRas的cDNA全长为803 bp,其中编码区长639 bp,编码212个氨基酸,推测分子量为23.821kD,理论等电点为5.2.PuRhoA1具有法尼酰转移酶催化位点(FT-CaaX)和香叶烯基转移酶催化位点(GGT1-CaaX),而PuRhoA2仅具有香叶烯基转移酶催化位点(GGT1-CaaX);Puypt1具有小GTPase家族中Rab1-Ypt1的完整保守结构域;PuRas具有法尼酰转移酶催化位点(FT-CaaX).系统进化树结果显示猪苓的4个小GTPase都隶属于担子菌类群.实时荧光定量PCR分析结果表明在菌核形成初期Puypt1、PuRas、PuRhoA1在菌核中表达量显著高于菌丝,而PuRhoA2在菌核中的表达量显著低于菌丝,说明这4个小GTPase基因可能参与了猪苓菌核的形态发生.

头孢地尼有关物质定量结构-色谱保留模型的建立

本项研究通过计算已知杂质结构的分子描述符,经筛选后与色谱保留行为数据关联建模,建立特定色谱系统条件下头孢地尼有关物质定量结构-色谱保留(QSRR)模型,并以其他杂质结构与色谱行为进行验证.以F AFRBWF、Blbn_J、SsCH3、SssCH2、SsNH2、SssNH、SssS、SHdCH2、EEM_AFc、EEM_AFpl、EEM_XFp1和Pi_MaxQ 12个分子描述符构建头孢地尼有关物质QSRR模型,18个有关物质的预测与实测结果总体R2=0.983 6,大相对保留时间差值为0.154,相对保留时间大误差为10.17％.结果表明,头孢地尼有关物质QSRR模型可用于本品中有关物质分析方法评价与新杂质的色谱行为预测,为评价药品质控方法的有效性提供了新的思路.

定量亲和色谱-质谱研究美洛昔康与β-环糊精的相互作用

药物与环糊精的结合速率常数、解离速率常数是药物从给药系统中解离、吸收的基本动力学常数,但现有研究多集中于结合平衡常数K.本文基于定量亲和色谱技术(quantitative high-performance affinity chromatography),发展了测定药物-环糊精超分子表观解离速率常数(koff,app)的定量亲和色谱-质谱方法.采用质谱检测器,经色谱峰拟合获得不同流速下药物和不保留物质尿嘧啶在β-环糊精柱上的保留时间与半峰宽,计算药物与不保留物质尿嘧啶的塔板高度(HR与HM,c);根据药物和不保留物质尿嘧啶的扩散系数差异与静态流动相传质阻抗,计算获得理论不保留物质的塔板高度HM,T.以(HR-HM,T)对uk/(1 +k)2进行线性回归,根据斜率计算得到多流速条件下美洛昔康和对照药物(对乙酰氨基酚)的koff,aPP分别为0.13±0.00和4.83±0.10 s-1.根据美洛昔康的结合平衡常数K(12.53 L·mol-1),计算得到表观结合速率常数Kon,app为1.63 L·mol-1·s-1.本法简便快速、重复性好,为评价药物与β-环糊精相互作用动力学提供了新的方法.

化学合成的复杂天然改构药物艾日布林

1 源自海绵的软海绵素B1985年Uemura等从日本稀缺的海绵Halichondria okadai中分离出一种聚醚大环内脂,是只含C、H和O的天然产物,命名为软海绵素B(1,halichondrin B) (Uemura D,Takahashi K,Yamamoto T,et al.JAm Chem Soc,1985,107:4796-4798),生物实验表明1对小鼠体内外癌细胞具有强效抑制作用(Hirata Y,Uemura D.Pure Appl Chem,1986,58:701-710).后来发现在常见的海绵如Axinella、Phakellia和Lissodendoryx 科中也含有软海绵素B,缓解了深入研究抗癌机制所需的样品源.