抗流感病毒药物宿主靶点的研究进展

现有针对病毒靶点药物的广泛使用加速了耐药株的出现,促进了对抗流感药物宿主靶点的研究与探索.流感病毒复制需要宿主细胞因子和细胞信号通路的参与,因此干扰病毒与细胞之间的相互作用可以抑制流感病毒的复制;同时流感病毒感染初期会引起宿主的天然免疫应答,诱导调节宿主的天然免疫机制可以防御流感感染;另外,为了抑制流感感染后期引发的过度炎症反应,需要具有抗炎作用的药物来抑制流感引起的免疫失调和组织损伤.因此,针对流感病毒宿主靶点的药物研发,为流感的防治带来新的希望.

SIRT1在糖尿病肾病防治中的作用

随着糖尿病肾病发病率日益升高,寻找治疗糖尿病肾病的新靶点已成为世界范围内的研究热点.SIRT1即沉默信息调节因子,为去乙酰化酶家族成员之一,参与细胞衰老、代谢、凋亡等生理和病理过程.近十年研究表明,SIRT1可以通过促进高糖环境下肾脏细胞能量稳态重建、调节糖尿病肾病发病过程中的氧化应激状态,抵抗肾脏细胞凋亡,抑制肾脏炎症反应,改善肾脏纤维化等作用,阻止糖尿病肾病发生和发展,成为糖尿病肾病防治潜在的新靶点.

可活化细胞穿膜肽在肿瘤治疗领域的应用

细胞穿膜肽(CPP)是具有穿透多种细胞膜功能的小分子多肽,能携带生物活性大分子物质进入细胞.由于CPP缺乏组织选择性和靶向性,限制了其在肿瘤治疗领域的应用.可活化细胞穿膜肽(ACPP)的出现给CPP的应用带来了曙光.本文重点介绍基于肿瘤微环境与正常组织之间的差异以及利用外源性物理刺激设计而成的ACPP在抗肿瘤药物靶向递送方面的应用.

RNA-Seq与道地药材研究

RNA-Seq是一种新崛起的转录组学研究方法,利用新一代测序技术能够更为准确、快速地为人们提供更多的生物体转录信息,已广泛应用于多种生物领域.道地药材以质优、疗效好的优势历来被各医家所推崇,其道地性形成的根本是其基因型在特定时空表达的产物.因此通过转录组测序来解析其生物合成机制,已成为当前药用植物次生代谢研究的热点.本文主要介绍了RNA-Seq技术及其优势,并就其在道地药材形成机制研究方面的应用进行了讨论,为今后该技术的研究与应用提供参考.

影响毕赤酵母高效表达重组蛋白的主要因素及其研究进展

毕赤酵母是现代分子生物学研究中重要的重组蛋白表达系统之一.该系统具有表达水平高、遗传稳定性好、可分泌表达、易于高密度发酵和成本低廉等优点.影响重组蛋白在毕赤酵母中高效表达的主要因素有基因拷贝数、密码子偏爱性、启动子、分子伴侣、信号肽、糖基化修饰和发酵工艺等.本文对影响毕赤酵母高效表达的主要因素及其研究进展进行综述,为进一步提高重组蛋白在毕赤酵母中的表达水平提供借鉴.

抗TNF-α/抗ED-B双特异抗体的构建与功能分析

为了赋予TNF-α抗体对炎症组织的特异性,构建了抗TNF-α/抗纤维连接蛋白额外域B(ED-B)的基因工程双特异抗体BsDb.BsDb在大肠杆菌中获得了高效表达,表达产物经鉴定、纯化和复性制备后,进行了生物学活性和药动学分析.BsDb可同时结合重组人TNF-α和ED-B,并中和TNF-α生理作用.在胶原诱导的小鼠关节炎模型中,BsDb快速从血浆和正常组织清除,但能选择性的积累和保留于炎症关节.说明BsDb具有炎症组织的特异性和正常组织的低毒性,在类风湿关节炎和其他自身免疫性疾病的治疗上具有较大潜力,为其临床前期研究奠定了基础.

非激动剂PPARγ配体的筛选方法建立和应用

建立体外活性评价方法考察化合物对过氧化物酶体增殖物激活受体γ (peroxisome proliferator-activated receptor γ,PPARγ)转录激活活性和结合活性.首先通过质粒构建,分别建立PPARγ反应原件(PPARγ response element,PPRE)介导报告基因表达的转录激活筛选方法以及PPARγ配体结合区(ligand binding domain,LBD) 与酵母转录激活因子Gal4组成的嵌合受体在细胞水平的结合活性筛选方法.并采用基于时间分辨-荧光共振能量转移(time resolved-fluorescence resonance energy transfer,TR-FRET)技术的PPARγ竞争性结合检测方法,考察化合物或药物对PPARγ的亲和力.采用以上3种不同的体外活性评价方法,评价不同PPARγ配体的效能和作用特点,并发现了一个新的苯磺酰胺衍生化合物,ZLJ01,具有类似于已知PPARγ激动剂的结合活性及亲和力,但无PPRE介导的转录激活活性.初步体外降糖活性检测发现,ZLJ01可促进肝细胞胰岛素依赖的葡萄糖摄取.综上所述,结合转录激活活性和亲和力的评价方法,可用于筛选非激动剂PPARγ配体,以发现新型PPARγ调节剂.

基于模型的荟萃分析比较非布索坦与别嘌醇在痛风患者中的血尿酸下降应答率的影响

采用基于模型的荟萃分析方法,以患者血尿酸降至6 mg·dL-1以下的应答率作为临床终点,对别嘌醇和非布索坦两种药物的药效进行比较.共计22项临床研究、43个剂量组、6 365名痛风患者被纳入本项研究.通过模型的建立,分别探讨了别嘌醇和非布索坦的应答率随时间、剂量的变化规律,以及血尿酸水平、别嘌醇非应答者对应答率的影响.结果表明,使用别嘌醇治疗的平均大应答率为50.8％.非布索坦药效良好,给药后药效迅速达稳,模型拟合得到非布索坦的ED50值为34.3 mg.患者基础血尿酸水平与别嘌醇应答率呈负相关,而非布索坦的ED50随患者基础血尿酸水平的增加而增大.别嘌醇单独用药治疗效果不足患者,其平均大应答率约为别嘌醇应答者的1/2.

采用生理药动学模型预测抗肿瘤新药法米替尼在人体中的药动学

建立并优化法米替尼的大鼠和猴的生理药动学模型,并且在该模型的基础上进行了种属外推至人,预测法米替尼在人体中的药动学和组织分布.根据文献和本实验室此前的实验结果以及ACD/ADME suite和SimCYP软件预测法米替尼的理化性质,采用GastroPlus软件的PBPK模块建立并优化法米替尼的大鼠和猴的生理药动学模型,并且进行种属外推至人,预测法米替尼在人体中的药动学和组织分布.优化好的大鼠和猴的生理药动学模型可以很好地预测大鼠和猴的药动学,大鼠和猴的AUC0-∞实测值与计算值的比值分别为1.00和0.97.种属外推至人的AUC0-∞的实测值与预测值的比值分别为1.63(大鼠→人)和1.57(猴→人).法米替尼的大鼠和猴的生理药动学模型成功建立,并且在此基础上进行种属外推至人,能够很好地预测人体内的药动学行为,为今后的进一步研究药物-药物相互作用提供参考.

小叶臭黄皮中12个苯环衍生物

对小叶臭黄皮(Clausena excavata)根、茎和叶部位进行了化学成分研究,经过一系列正相和反相色谱柱和高效液相色谱等现代分离技术,分离得到12个苯环衍生物(1～12),并通过MS、NMR、IR等波谱学方法对这些化合物进行结构鉴定,其中(2'R)-4-(2',3'-dihydroxy-3'-methyl-butanoxy)-phenethanol (1)为一个新化合物,化合物3和4为两个新天然产物,化合物5～8、10～12均为首次从该植物中分离得到.测定了化合物1对A549、HeLa和BGC-823的细胞毒活性及其对Candida albicans、Staphylococcus aureus的抑菌活性,结果显示化合物1没有细胞毒和抑菌活性.

C-3噁二唑硫乙酰腙取代的氟喹诺酮类似物的合成、抗肿瘤活性及构-效关系

为寻找氟喹诺酮由抗菌活性转化为抗肿瘤活性的有效策略,基于药效团拼合原理,用噁二唑替代培氟沙星C-3位羧基,功能酰腙基为其修饰基团,设计合成了C-3噁二唑硫乙酰腙目标化合物7a～7o,目标化合物结构经元素分析、1H NMR、MS确证.采用MTT法评价了目标化合物对人肝癌Hep-3B细胞株的体外增殖抑制活性.结果表明,15个目标化合物活性均显著高于对照培氟沙星的活性,其中带吸电子取代基化合物的活性高于供电子基团化合物的活性,尤其是含羧基取代基化合物的活性与对照抗肿瘤药物阿霉素相当,表明芳环羧基修饰基的存在有利于提高抗肿瘤活性.

具有穿膜功能的嵌合型AVPI-低分子量鱼精蛋白/DNA共给药系统的抗肿瘤研究

本文旨在合成具有穿膜活性的促凋亡AVPI-低分子量鱼精蛋白嵌合多肽(AVPI-LMWP),制备安全有效的AVPI-LMWP/pTRAIL基因共给药系统,通过凋亡肽AVPI与肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体基因(pTRAIL)联合用药来发挥抗肿瘤作用.采用标准固相合成法合成嵌合型多肽AVPI-LMWP.基于静电吸附作用,AVPI-LMWP可与DNA药物形成AVPI-LMWP/pTRAIL复合物,并对其理化性质进行了表征,同时研究其细胞摄取效率和抗肿瘤增殖能力.结果表明,采用共孵育法成功制备了AVPI-LMWP/pTRAIL复合物,随着AVPI-LMWP/pTRAIL质量比的增加,复合物的平均粒径逐渐减小,zeta-电位变化较小.凝胶电泳实验结果表明,当两者质量比大于15∶1时,AVPI-LMWP能完全包裹和压缩质粒pTRAIL.体外细胞摄取实验显示,随着二者质量比的增加,细胞摄取效率有所提高.体外细胞毒性实验表明,AVPI-LMWP/pTRAIL (W∶W=20∶1)复合物抑制HeLa细胞增殖的效果显著强于pTRAIL、AVPI-LMWP及LMWP/pTARIL复合物.研究显示,AVPI-LMWP/pTRAIL基因共给药系统能将质粒高效递送到HeLa细胞内,并能有效地诱导肿瘤细胞凋亡,是具有联合治疗应用价值的多肽/基因共给药系统.

虎杖苷的降尿酸作用及其机制研究

基于DNA条形码的百合属分子鉴定

本文通过实验,并结合GenBank数据库序列,分析ITS、ITS2、psbA-trnH、matK、rbcL 5条常用条形码共978条序列在种内与种间变异、barcoding gap、系统发育树等方面对百合属植物的鉴别能力,并采用近距离法(nearest distance)和相似性搜索算法(BLAST1)评价5条序列的鉴定成功率.研究结果显示,不同条形码序列可以较好的鉴别百合属内不同物种.ITS序列鉴定成功率较高,种内种间差异显著,系统发育树可以很好地将不同物种分开.结果表明DNA条形码技术可以准确地鉴别百合属植物,ITS序列可以作为鉴别百合属不同物种的优选序列.

白木香倍半萜合酶基因AsSS4的克隆、原核表达与功能鉴定

通过RT-PCR方法从伤害处理的白木香树木质部中克隆得到沉香倍半萜合酶4(sesquiterpene synthase 4,AsSS4)基因的全长开放读码框,该基因全长读码框为1 698 bp,编码包含565个氨基酸的蛋白质.将AsSS4基因与原核表达载体pET28a相连构建重组载体pET28a-AsSS4,把重组载体转入大肠杆菌BL21 (DE3)pLysS中,用IPTG诱导重组菌,经SDS-PAGE电泳分析,获得分子质量约为64 kD的重组AsSS4蛋白.利用镍凝胶亲和色谱法获得纯度较高的AsSS4蛋白,以法尼基焦磷酸(FPP)为底物进行蛋白酶促反应,共催化产生5种倍半萜类成分:cyclohexane,1-ethenyl-1-methyl-2,4-bis(1-methylethenyl)-、β-elemene、α-guaiene、α-caryophyllene 和δ-guaiene.本研究首次证实了白木香倍半萜合酶AsSS4基因的功能,为揭示伤害诱导沉香倍半萜形成的分子机制奠定了理论基础.

附子中胺醇型二萜生物碱的鉴定及其强心活性研究

为确定附子中的强心有效成分,本文对附子中的胺醇型二萜生物碱进行了系统研究.采用超高效液相色谱与电喷雾质谱联用技术分离了附子中的41种成分,通过与对照品的保留时间和质谱数据进行对比鉴定了13种胺醇型二萜生物碱,分别是北乌宁、中乌宁、多根乌头碱、异塔拉定、乌头原碱、8-甲氧基中乌宁、次乌宁、附子灵、3-去氧乌头原碱、尼奥灵、8-甲氧基次乌宁、塔拉萨敏、查斯曼宁.同时,测定了7批不同产地和炮制方法的附子,样品中所含化学成分的种类相似但含量差异较大.此外,利用离体蛙心灌流实验对这13种胺醇型二萜生物碱进行了强心活性实验,结果显示6种成分具有强心作用.实验结果表明胺醇型二萜生物碱是附子中的强心活性成分,本研究对附子中胺醇型二萜生物碱及强心作用的研究具有重要的参考意义.

川乌与白芍配伍对CYP450酶活性影响及其代谢指纹的研究

利用UPLC-MS/MS的多反应监控(MRM)技术,结合多探针底物方法,评价川乌-白芍配伍对肝脏主要药物代谢酶CYP 1A2、CYP 2C、CYP 2E1、CYP 2D、CYP 3A的活性影响.结果表明:与川乌单煎液相比,白芍与川乌不同配比溶液均能降低川乌对CYP3A、CYP2D、CYP2C及CYP1A2的抑制作用,而对CYP2E1基本无影响.制川乌组分-白芍配伍溶液的CYP代谢指纹图谱分析结果表明,与川乌单煎液相比,共煎液经CYP代谢后双酯型生物碱的丰度明显降低,而单酯型生物碱的丰度明显增加.表明白芍与川乌共用,能使川乌中的双酯型毒性生物碱加快降解,生成抗炎活性较好的单酯型生物碱,起到减毒增效的作用.

UPLC-MS/MS法同时测定三叶青中10种黄酮类成分

建立超高效液相色谱串联三重四级杆质谱法(UPLC-MS/MS)同时测定三叶青中10种黄酮类成分(原花青素B1、儿茶素、原花青素B2、芦丁、异槲皮苷、山柰酚-3-O-芸香糖苷、紫云英苷、槲皮苷、槲皮素和山柰酚)的含量.采用UPLC-MS/MS法及负离子多反应监测(MRM)模式进行含量测定.色谱条件:色谱柱为Waters CORTECS C18 (2.1 mm×100 mm,1.6 μm),流动相为乙腈(A)-0.1％甲酸水(B),梯度洗脱,流速0.25mL·min-1,柱温45℃.在所设定的色谱条件下,手性异构体原花青素B1和B2达到基线分离.定量分析的三叶青中10种黄酮类成分在考察的浓度范围内呈良好的线性关系(r＞ 0.996 6);回收率和RSD分别在95.44％～110.40％和2.37％～8.69％内.本研究所建立的同时测定三叶青中10种黄酮类成分的UPLC-MS/MS定量分析方法简便、快捷、准确,可为综合评价三叶青的质量提供参考.

基于配体和概念验证研发的孟鲁司特

1 抗炎靶标白三烯D4受体早在1938年生理学家就发现动物致敏后体内产生不稳定的化学物质,称作慢反应物质,1960年Brockelhurst进一步证明这是免疫组织在受到抗原攻击产生的特殊物质,可引起平滑肌(如气道和十二指肠)的缓慢收缩,称之为过敏性慢反应物质(SRS-A)(Brocklehurst WE,et al.J Physiol,1960,151:416-435).随着分离方法(如HPLC)和结构鉴定技术的进步,1979年瑞典Samuelsson等证明了SRS-A主要是由3种物质组成:白三烯C4、D4和E4 (LTC4、LTD4、LTE4),分别是由谷胱甘肽、胱甘二肽和半胱氨酸经硫醚键相连的20碳四烯酸,白三烯可引起平滑肌强烈收缩,增加肺泡的通透性,增加黏膜上皮细胞的分泌等,导致哮喘和过敏性疾病.