肝癌患者血液RASSF1A基因甲基化的检测及其临床意义

目的:探讨原发性肝细胞癌(HCC)患者血清中RASSF1A甲基化状况及RASSF1A甲基化作为一种新的肿瘤分子标志物在HCC早期无创性诊断中的意义和价值.方法:应用甲基化特异性PCR(MSP)技术检测35例HCC患者血清和10例健康对照血清中RASSF1A启动子区甲基化状况.结果:35例HCC患者血清中RASSF1A启动子区甲基化阳性率为40%, 10份健康对照血清中未出现RASSF1A基因甲基化. RASSF1A基因甲基化与HCC患者性别、伴肝硬化、乙肝表面抗原、甲胎蛋白、肿瘤大小、有无包膜、有无门静脉癌栓及病理分级等临床病理参数无关.结论:RASSF1A基因甲基化在HCC的发生中起重要作用, RASSF1A基因甲基化可能是HCC新的肿瘤分子标志物.

心得安对食管曲张静脉套扎后再出血的影响

目的:观察心得安对食管曲张静脉套扎后再出血的影响.方法:7 8 例门脉高压性食管静脉曲张(esophageal varices, EV)患者, 分成单独套扎组(39例, 作为对照组)和心得安组(39例, 套扎后给予心得安, 10 mg, 3次/d, po). 比较两组套扎后12 mo内再出血率, 同时12 mo后复查胃镜,比较两组患者门脉高压性胃病及胃底曲张静脉发生率.结果:套扎12 mo后再出血率心得安组明显低于对照组(38.70% vs 54.54%, P<0.05). 心得安组门脉高压性胃病发生率、胃底静脉发生率,食管静脉再发率均明显低于对照组(32.25% vs57.57%, 25.80% vs 42.42%, 29.03% vs 39.39%,均P<0.05).结论:心得安可降低食管曲张静脉套扎后再出血, 其原因是心得安能够降低套扎后的门脉高压性胃病和食管、胃底静脉曲张的发生.

IL-21受体在溃疡性结肠炎中的表达及对促炎症细胞因子分泌的诱导作用

目的:探讨IL-21对UC患者外周血和肠黏膜固有层组织内淋巴细胞的免疫病理调节.方法:收集28例UC患者和22例健康成人外周血标本和肠黏膜活检标本, 分离外周血单个核淋巴细胞(PBMC)和肠黏膜固有层单个核淋巴细胞(LPMC), 利用流式细胞仪检测IL-21R在CD4+、CD8+ T细胞、B细胞和NK细胞表面表达. 培养PBMC和LPMC, 使用IL-21和抗CD3单抗体外刺激, 48 h后收集上清液,使用ELISA检测促炎症细胞因子(TNF-α、IFN-γ、IL-2)分泌, 分析IL-21在疾病发展过程中的免疫病理作用.结果:UC患者外周血和肠黏膜固有层组织内CD4+、CD8+ T细胞、CD20+ B细胞和CD56+NK细胞表达IL-21R水平比健康者显著升高(PBMC:8.42±2.14 vs 3.46±0.54, 10.35±2.17vs 5.28±2.2, 7.27±1.15 vs 2.35±0.41, 12.55±3.12 vs 5.45±1.06; LPMC:22.44±3.46 vs6.26±1.15, 24.48±4.57 vs 6.87±1.02, 16.24±3.10 vs 5.56±1.44, 23.54±4.12 vs 8.45±1.68, 均P<0.05). 体外培养PBMC或LPMC, 使用IL-21刺激, 发现IL-21可显著诱导UC患者的PBMC和LPMC激活, 并分泌高水平的TNF-α和IFN-γ(346±72 vs 120±27, 3048±426 vs1182±242; 625±113 vs 154±35, 3827±418vs 1520±304, 均P<0.05).结论:IL-21R参与肠黏膜炎症损伤, 阻断IL-21生物学效应可能治疗UC的发生.

胆囊占位病变中P53和K-ras的表达及其临床意义

目的:研究P53和K-ras蛋白在胆囊良性占位病变和胆囊癌组织中的表达及差异, 探讨其临床意义.方法:应用免疫组织化学方法检测20例胆固醇息肉、22例胆囊腺瘤、25例胆囊癌(含有5例重度非典型增生原位癌)组织中P53和K-ras蛋白的表达, 进行统计学分析.结果:胆囊良性病变的黏膜组织中存在P53和K-ras的异常表达, 其中, 胆囊腺瘤患者的阳性表达显著高于胆囊胆固醇息肉患者(72.7% vs35.0%, P = 0.014; 90% vs 75.0%, P = 0.167); 胆固醇性息肉患者的P53和K-ras表达较低. 配对比较的P53和K-ras表达结果无差异, 两者可能在胆囊癌的发生过程中有协同性作用.结论:胆固醇性息肉、胆囊腺瘤、胆囊癌患者的病变组织中P53和K-ras蛋白的表达有显著性差异, 表达阳性率呈现上升趋势.

植物药洪天肝康防治肝硬化的作用机制

目的:探讨植物药洪天肝康防治肝硬化的作用机制.方法:采用200 mL/L CCl4腹腔注射制备小鼠肝硬化模型(模型组), 于模型制备的同时, 给予洪天肝康灌服(预防组). 造模150 d后添加洪天肝康灌服(治疗组). 取各组的肝、脾组织, 采用HE染色观察肝硬化程度及肝、脾组织的形态学变化; 免疫组织化学方法标记TGF-β1、IFN-γ、IgG和CD3, 并用图像分析仪进行定量分析.结果:模型组小鼠的肝脏及脾脏TGF-β1的表达较对照组明显增高, 预防组及治疗组肝脏与脾脏中TGF-β1的表达均较模型组减少( F =80.155, 120.850; 均P<0.05); IFN-γ和IgG在肝脏及脾脏的表达以治疗组为明显, 预防组次之, 模型组极少出现( F = 53.584, 118.240,85.075, 105.566, 均P<0.05); 预防组及治疗组CD3在肝脏及脾脏的表达明显增高, 与模型组相比有统计学意义( F = 42.969, 69.775, 均P<0.05).结论:植物药洪天肝康对肝硬化模型小鼠机体进行动态平衡的整体调节后, 可增强机体的免疫防御功能, 从有效控制肝纤维化产生的角度, 有效地防治肝硬化.

蓝玉簪颗粒对大鼠肝纤维化的治疗作用

目的:探讨蓝玉簪颗粒对实验性二甲基亚硝胺(dimethylnitrosamine, DMN)诱导的SD大鼠肝纤维化模型的治疗作用机制.方法:SD♀大鼠45只随机分为正常组, 模型组,蓝玉簪颗粒高、中、低治疗组, γ-干扰素阳性对照组. 除正常组外, 其余各组大鼠均给予10 mg/kg的剂量腹腔注射DMN, 隔天注射1次,连续30 d. 第31天, 检测各组大鼠血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、白蛋白(ALB)含量; 肝组织匀浆中a-平滑肌肌动蛋白(a-SMA)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)的含量. 应用HE染色观察各组大鼠肝组织病理学变化.结果:模型组大鼠血清中ALT、AST明显升高,ALB明显降低; 肝组织匀浆中a-SMA明显增加、MMP-2降低, 与正常组比较有显著性差异(182.042±0.658 vs 60.879±0.987; 145.612±4.66 vs 74.824±9.004; 16.078±0.633 vs28.971±0.443; 161.667±26.766 vs 80.167±10.135; 5.994±1.360 vs 8.270±0.289, 均P<0.05); 蓝玉簪颗粒治疗组与模型组比较, 血清ALT、AST降低, ALB增加; a-SMA降低,肝组织中MMP-2水平升高(87.856±8.526,106.69±0.987, 136.11±0.329 vs 182.042±0.658; 94.208±2.017, 107.602±20.014,118.847±5.486 vs 145.612±4.66; 23.412±0.775, 19.653±0.775, 18.635±0.221 vs 16.078±0.633; 109.958±3.607, 117.833±6.600,119.833±6.167 vs 161.667±26.766; 11.610±0.523, 10.367±0.714 vs 5.994±1.360, 均P<0.05), 小剂量组与模型组MMP-2水平比较,差异无统计学意义. HE染色观察肝组织纤维化分级和积分明显改善.结论:蓝玉簪颗粒可减轻肝脏炎症, 保护肝脏功能, 减轻或抑制DMN诱导的肝纤维化的形成.

内质网应激对2型糖尿病小鼠脂肪肝发生的影响

目的:探讨内质网应激(ERS)在2型糖尿病(T2DM)小鼠脂肪肝发生中的作用机制.方法:应用实时定量RT-PCR技术检测T2DM与非糖尿病小鼠肝脏ERS和脂代谢相关基因表达差异, 并进行血生化指标及肝脏形态学检测.结果:与同龄非T2DM小鼠相比T2DM小鼠表现为:(1)胰岛素抵抗、空腹血糖升高(30.76±4.52 vs 12.80±2.13, 14.73±2.74v s 4.61±1.12). (2)肝脏TG和F FA水平明显升高( P<0.01); 脂肪肝病变明显. (3)肝脏GRP78、XBP1、CHOP、EDEM1、GSK3β、apoB100、SREBP1c、ACCα及FAS的mRNA水平均显著上调( P<0.05). (4)血清TG、TC、LDL-C、FFA、ALT及AST显著升高( P<0.01).血清apoB100水平先升高, 后下降( P<0.05).结论:ERS参与调节肝脏脂质及apoB100的合成与代谢过程, 在T2DM小鼠脂肪肝发生过程中起着重要作用.

急性坏死性胰腺炎肠黏膜氧化应激损伤和HIF-1α的表达

目的:探讨急性坏死性胰腺炎(ANP)时肠黏膜屏障的氧化应激损伤和HIF-1α的表达, 及其与黏膜损伤的关系.方法:♂Wistar大鼠随机分为3组, A组(ANP组, n = 18), 诱导ANP模型; B组(DMSO组, n =18), 诱导ANP前, 使用二甲基亚砜(DMSO)预处理组; C组(con组, n = 10)假手术组. A和C组术前30 min皮下注射生理盐水(0.2 mL/kg体质量), B组动物术前30 min皮下注射同等剂量的DMSO(0.2 mL/kg体质量), 并且实验前30 min每只动物饲入60 mg/100 g体质量的FITC-右旋糖酐. 动物分别在手术后0, 6, 24 h点心脏取血后处死, 分别取胰头和末端回肠3-5 cm. 观察胰腺和肠黏膜组织形态学改变, 测定肠黏膜组织中DAO、SOD、GSH、MPO、MDA含量, Western-blot测定肠黏膜中HIF-1α的表达,并检测血清中二氨氧化酶(DAO)活性及FITC浓度.结果:ANP时大鼠肠黏膜屏障功能严重破坏,肠道通透性明显增加. ANP组6 h时黏膜中DAO的活性已经明显下降(0.43±0.07 U/L vs0.91±0.11 U/L, P<0.05), DMSO处理后DAO活性下降受抑. 而血清中测定DAO活性正好相反. ANP组6 h黏膜组织中SOD、GSH活性就已有明显下降, 12 h为明显(SOD:12.12±2.24 U/mg vs 25.12±3.86 U/mg; GSH:160.75±24.25 mg/g vs 412.45±45.60 mg/g, 均P<0.01), 而MPO活性及MDA浓度明显升高(MPO:1.32±0.18 U/mg vs 0.63±0.11 U/mg;MDA:2.85±0.21 nmol/mg vs 1.34±0.12nmol/mg, 均P<0.01), 观察期限内一直处在较高水平. DMSO预处理组动物肠黏膜通透性有所改善, 但仍然高于正常( P<0.05). 使用DMSO后, 氧化应激反应及其产物有所减弱, 但仍然高于正常( P<0.05). ANP时HIF-1α表达明显增加, 而DMSO的使用可使HIF-1α高表达下调.结论:ANP时肠黏膜屏障结构和功能存在严重破坏; 氧化应激损伤是肠黏膜屏障损伤的一个重要因素, 而清除氧自由基能一定程度上减轻肠黏膜屏障损伤并能维护其功能; HIF-1α参与ANP肠黏膜屏障的修复和维持, 清除氧自由基减轻肠黏膜损伤可以调节HIF-1α表达.

依达拉奉对大鼠重症急性胰腺炎的保护作用

目的:探讨依达拉奉对L-精氨酸诱导的重症急性胰腺炎(SAP)大鼠的治疗作用及机制.方法:将60只大鼠随机分为三组( n = 20). 采用大鼠腹腔内分次注射大剂量L-精氨酸(2.5g/k g×2, 间隔1 h)的方法制备SAP大鼠模型, 治疗组大鼠腹腔内注射依达拉奉注射液3 mg/kg, bid×3 d. 72 h后比较三组大鼠胰腺组织病理变化、腹水性状及量、血清淀粉酶(AMY)、TNF-α、IL-6水平和胰腺组织丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、还原型谷胱甘肽(GSH)含量及预后.结果:72 h后, 与对照组相比, SAP组出现典型的SAP病理形态改变, 腹水量较多(5.16±1.52vs 0.50±0.10, P<0.01), 且大鼠血清AMY、TNF-α、I L-6及胰腺组织M DA均显著升高(8967.5±298.4 vs 720.1±119.7; 103.98±10.56 vs 41.59±3.79; 548.57±10.45 vs 198.34±2.10; 35.6±3.8 vs 7.9±2.2, 均P<0.01), 胰腺组织抗氧化物质GSH、SOD明显降低(7.2±0.6 vs 17.1±2.1; 7300±1800 vs 28400±2700,均P<0.01); 与SAP组相比, 治疗组胰腺组织病理损害减轻, 腹水量减少(4.05±1.22 vs 5.16±1.52, P<0.05), 且组织病理评分较低( P<0.05),血清AMY、TNF-α、IL-6及胰腺组织MDA明显降低(7809.5±158.3 vs 8967.5±298.4; 79.80±14.23 vs 103.98±10.56; 467±6.64 vs 548.57±10.45; 29.1±2.6 vs 35.6±3.8, 均P<0.05), 胰腺组织GSH、SOD升高(8.7±1.3 vs 7.2±0.6;114 000±27 000 vs 7300±1800, 均P<0.05).结论:依达拉奉能清除氧自由基、提高胰腺组织抗氧化物质SOD和GSH含量, 降低促炎细胞因子水平, 可减轻胰腺组织的病理损害,并且有可能降低死亡率.

不同分子量壳寡糖对促胰岛细胞增殖、胰岛素分泌及调节餐后血糖的作用

目的:研究酶解法制备的不同分子量壳寡糖对胰岛β细胞系NIT-1的促增殖及胰岛素分泌作用, 并进一步探讨在体内壳寡糖降低链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠的餐后2 h血糖的作用.方法:通过壳聚糖酶降解壳聚糖制备得到水溶性的不同分子量的壳寡糖, 在细胞水平上,通过形态学观察、MTT比色法、放射免疫等方法研究不同分子量的壳寡糖对于胰岛β细胞系NIT-1细胞的增殖及促胰岛素分泌作用; 体内实验, 通过一般状态观察、餐后2 h血糖、尿糖、糖耐量测定研究了不同分子量壳寡糖对链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠降低餐后2 h血糖和改善葡萄糖耐量的作用.结果:不同分子量壳寡糖对于胰岛β细胞体外增殖具有明显的促进作用并可以显著促进胰岛β细胞的胰岛素分泌, 低分子量壳寡糖在体内能有效改善糖尿病大鼠的体重减轻、多饮、多食等症状, 降低餐后2 h血糖值(22.13±3.23, 21.78±3.09, 21.32±3.02, 19.73±4.12, 17.88±3.14, 16.14±3.55 vs 39.38±3.08,均P<0.01), 改善葡萄糖耐量(101.19±12.44,99.61±13.11, 96.79±9.22, 94.79±13.20,89.41±11.10, 84.08±5.93 vs 122.40±12.05,P<0.05或0.01). 各组培养2-14 d的胰岛细胞的生物学活性活跃, 对葡萄糖刺激具有良好反应, 其中MⅥ组的胰岛素刺激指数与对照组比较有显著差异(2.94 vs 2.01, P<0.05).结论:壳寡糖具有多种生物活性, 可以应用于糖尿病的治疗, 低分子量壳寡糖有较好的降血糖效果.

胃泌素释放肽受体在肿瘤治疗中的研究进展

哺乳动物的胃泌素释放肽(gastrin-releasingpeptide receptor, GRP)在许多肿瘤中是一个自分泌生长因子, 他涉及许多人类恶性肿瘤的发病机制和进展, 在许多人类肿瘤中他的受体(GRPR)也是高表达的, 这使得GRPR成为一个实验和临床治疗的新分子靶点. 这里GRPRs可以作为细胞毒素、免疫毒素或者有放射活性化合物的有效传递体. 而且, 通过反义寡核苷酸、RNA干扰和GRPR拮抗物来封闭胃泌素释放肽信号通路后, 结果都呈现出满意的抗肿瘤活性.

P38丝裂原活化蛋白激酶信号通路与肝星状细胞

丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated proteinkinase, MAPK)是生物体内重要的信号转导系统之一, 是一类丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶, 在细胞的生长、发育、分化等方面发挥重要作用,P38丝裂原活化蛋白激酶(P38 MAPK)是其中的一个亚类. 肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)是肝纤维化形成过程中主要的效应细胞, 本文主要讨论P38 MAPK信号通路及其在肝星状细胞中发挥的作用.

门脉高压性胃病的研究进展

门脉高压性胃病(portal hypertension gastopathy, PHG)是指门脉高压症伴发的胃黏膜病变, 主要发生于肝硬化门脉高压症, 其临床主要表现为消化系出血症, 是上消化道出血的重要原因之一, 严重时危急生命. 近年来关于门脉高压性胃病的发病机制, 内镜下和影像学诊断、治疗发展较快. 本文就近年来门脉高压性胃病的研究作一综述.

外源性一氧化碳对小肠缺血再灌注大鼠多形核中性粒细胞聚集及血浆TNF-α、IL-10的影响

目的:通过检测小肠缺血再灌注(I IR)大鼠不同组织内多形核中性粒细胞(PMN)聚集及血浆肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-10(IL-10)浓度的变化, 探讨外源性CO对IIR所致多器官损伤防治作用的机制.方法:♂Wistar大鼠64只, 随机分为8组, 给予不同实验方法处理. 实验结束时取不同组织光镜下计数PMN聚集情况, 取动脉血放免法检测血浆TNF-α和IL-10浓度.结果:肠、肺和肝组织中PMN数目在各组存在差异(66±6 vs 60±4, 55±3, 49±4, 42±4, 37±3, 30±2, 26±2; 52±5 vs 43±5, 42±4, 34±2, 32±2, 25±2, 23±2, 18±2; 35±3 vs 30±3, 26±1, 23±2, 20±1, 19±1, 16±1, 均P<0.05); 肾组织中各组PMN数目无明显差异. 各组血浆TNF-α、IL-10存在明显差异(3.15±0.05 vs 2.37±0.14, 2.07±0.07, 1.89±0.07, 1.69±0.09, 1.53±0.06, 1.31±0.06, 1.15±0.04; 138.9±11.37, 118.75±7.69, 100.55±4.86, 83.12±5.13, 61.41±6.88, 40.56±2.85vs 23.55±4.94, 23.55±4.9415 vs 36±2.37, 均P<0.05).结论:外源性CO对IIR所致器官损伤的防治作用可能是通过抑制IIR过程中PMN在组织中的聚集, 抑制TNF-α产生和促进IL-10释放实现的.

溃疡性结肠炎大鼠结肠黏膜CINC-1及其受体CXCR2的表达及意义

目的:探讨溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)大鼠结肠黏膜中性粒细胞趋化因子-1(CINC-1)及其受体CXCR2的表达及意义.方法:♂SD大鼠36只完全随机分为正常组、模型1组、模型2组, 共3组, 每组12只. 用2, 4,6三硝基苯璜酸100 mg/kg灌肠建立大鼠溃疡性结肠炎模型, 7 d后处死模型1组动物, 14 d后处死模型2组动物. 运用RT-PCR法、免疫组化染色法分别检测各组大鼠CINC-1及CXCR2mRNA及其蛋白的表达.结果:CXCR2主要表达在中性粒细胞及肠上皮细胞膜表面. UC活动期CINC-1及CXCR2mRNA及其蛋白表达明显呈上升趋势, 与炎症相关. 与正常组相比, 模型1组、2组CINC-1mRNA及蛋白表达有显著差异(1.77±0.52,1.82±0.24 vs 0.29±0.10; 0.30±0.01, 0.31±0.04 vs 0.18±0.02, 均P<0.05); CXCR2 mRNA及蛋白表达也有显著差异(1.66±0.10, 2.49±0.29 vs 0.55±0.13; 0.20±0.03, 0.23±0.02 vs0.16±0.01, 均P<0.05).结论:CINC-1及其受体CXCR2表达水平与UC炎症正相关, CINC-1可能通过CXCR2介导中性粒细胞浸润, 造成结肠炎症及组织损伤.

西藏拉萨地区乙型肝炎病毒基因型分布及与肝病的关系

目的:研究西藏拉萨地区HBV基因型的分布特点及基因型与临床肝病的相关性.方法:采用基因芯片技术对92例乙肝病毒感染者进行HBV基因分型, 并分析其流行病学、DNA含量、肝功能以及性别和民族之间的关系.结果:73例HBV DNA阳性者不同基因型在不同民族间存在统计学差异(χ2 = 7.179, P<0.05).HBV DNA阳性标本中, e抗原阳性者32例, 不同基因型DNA含量之间无统计学差异, 但民族之间e抗原阳性率存在统计学差异(χ2 =8.423, P<0.05), B、C型较多的存在于汉族中,而D型多存在藏族中. 不同酶类之间D基因型均高于C、B型, 仅在蛋白类之间存在统计学差异, D、C型ALB较B型低、而GLB较B型高.CHB、LC更多存在D、C基因型( F = 3.832,P<0.05).结论:拉萨地区HBV各基因型DNA载量无差异, 肝功酶类与病情变化无明显关系、蛋白类变化较显著, C、D基因型患者较B基因型易发生肝病进展.

应用SELDI-TOF-MS技术初步建立结直肠癌分类树模型

目的:分析结直肠癌期患者血清蛋白质组变化, 初步建立结直肠癌期分类树模型.方法:将335例血清样本(其中结直肠癌患者169例, 健康人166例)随机分为训练组和测试组, 将血清样本加至IMAC30-Cu2+蛋白芯片,利用SELDI-TOF-MS得到血清蛋白质谱, 利用Biomarker Wizard软件进行蛋白峰值鉴定和聚类. 利用Biomarker Pattern以训练组建立由1个差异蛋白组成的结直肠癌期分类树模型, 以测试组进行独立样本的双盲验证. 另外, 应用电化学发光免疫测定法检测测试组血清样本CEA.结果:软件识别了59个质峰, 其中由质荷比为5765的蛋白构成的分类树模型可以有效鉴别结直肠癌患者与正常人, 灵敏度和特异度分别是98.81%及100.00%, 经双盲验证其灵敏度,特异度及阳性预测值分别是97.65%, 98.80%及98.81%. CEA的灵敏度及特异度低于SELDI分类树模型( P<0.05).结论:SELDI-TOF-MS检测得到的血清蛋白质组分类树模型可以准确的鉴别结直肠癌患者与正常人, 对结直肠癌的筛查有重要的意义.

胰十二指肠切除术中的过"三关"

行胰十二指肠切除术时有三个主要探查步骤, 直接决定病变的可切除性及手术难度. 本文在参照文献的基础上结合临床经验论述胰十二指肠切除术过程中的探查步骤及主要注意事项, 指出临床医生可以围绕胰头外、下、上区域序贯行彻底探查将有助于规范胰十二指肠切除术.

原发性胆汁性肝硬化并结节病1例

原发性胆汁性肝硬化并结节病在临床相当罕见. 本文报道1例中年女性患者, 因皮肤巩膜黄染1年余, 进行性加重6 mo入院. 入院后给予保肝退黄降酶等治疗, 经查体、血尿便常规以及免疫全套等检查, 确诊为原发性胆汁性肝硬化, 并且经淋巴结活检诊断为淋巴结结节病.

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