淋病奈瑟菌外膜蛋白PorB基因的克隆及原核表达

目的:构建淋病奈瑟菌外膜蛋白PorB的融合表达载体,并在原核系统中表达,获得基因重组蛋白,为进一步研究淋病奈瑟菌外膜蛋白的致病作用和免疫保护性提供基础. 方法:根据PorB已知序列设计一对引物,用PCR方法从淋病奈瑟菌标准菌株NG 29403基因组DNA中扩增出PorB基因,与原核表达质粒pGEX-4T-1构建重组子pGEX-4T-PorB,并将重组质粒转化大肠埃希菌BL21( DE3)感受态细胞.重组子经酶切、PCR鉴定和核酸序列分析正确后,异丙基硫代半乳糖苷(IPrG)诱导重组蛋白的表达,用SDS-PAGE及Western印迹进行鉴定. 结果:限制性核酸内切酶酶切鉴定、PCR和核酸序列分析表明,扩增出了淋病奈瑟菌外膜蛋白1047 bp的PorB基因,成功构建了重组质粒pGEX-4T-PorB,经SDS-PAGE及Western印迹分析显示重组质粒pGEX-4T-PorB在大肠埃希菌中得到了高效融合表达. 结论:成功构建pGEX-4T-PorB原核表达载体,并在原核系统中得到了高效表达.

中老龄雄性大鼠雄激素减低与代谢关系及发病机制的研究

目的:研究中老龄雄性大鼠雄激素减低与代谢的关系,雄激素减低发生的机制,尤其是睾丸间质细胞数量、形态及分泌功能的变化. 方法:分别取9月龄(中青龄)和12、15、18、21月龄(中老龄)雄性SD大鼠每月龄组6只,静脉血检测大鼠代谢指标的变化,包括高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、血糖(Glu)、胰岛素(INS)、胰高血糖素(IRG)、瘦素(LP)含量；检测大鼠血清激素的改变,包括总睾酮(tT)、黄体生成素(LH)、卵泡刺激素(FSH)；通过组织切片观察大鼠睾丸间质细胞形态学变化；使用人绒毛膜促性腺激素(hCG)、毛喉素(Forskolin)刺激体外培养的大鼠睾丸间质细胞,比较培养液中睾酮(T)浓度；采用脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)法检测大鼠睾丸间质细胞凋亡率；分离称重内脏脂肪,计算内脏脂肪/体重比及Lee's指数. 结果:中老龄大鼠的血清tT[ (1.26±0.65) ng/ml]比中青龄大鼠[(3.24±0.38)ng/ml]显著降低(P＜0.01)；中老龄大鼠睾酮分泌指数(TSI)[(0.07 ±0.05) ng/mIU]比中青龄大鼠[(0.21±0.01) ng/mIU]显著降低(P＜0.01)；不同年龄大鼠睾丸间质细胞形态有较显著差异；体外培养的中老龄大鼠睾丸间质细胞在24、48、72 h内T分泌量均显著低于中青龄大鼠(P＜0.05)；中老龄大鼠睾丸间质细胞TUNEL阳性率[(17.36±1.31)%]比中青龄大鼠[(7.02±1.05)%]显著升高(P＜0.01)；中老龄组和中青龄组大鼠IRG、HDL、LDL、TG、TC及内脏脂肪含量有显著性差异(P＜0.05). 结论:中老龄大鼠血清tT浓度显著低于中青龄大鼠,代谢指标随血清tT降低发生规律改变；中老龄大鼠雄激素减低可能与睾丸间质细胞分泌功能衰退、间质细胞数量减少及垂体功能衰退有关.

精液分析的培训及效果评估

目的:初步探索建立新技术人员精液分析标准化培训及效果评估方法,为国内男科学实验室室内质量控制和培训提供参考. 方法:在本实验室根据《世界卫生组织人类精液检查与处理实验室手册》第5版推荐标准化精液分析方法对新技术人员进行培训,应用统计学分析的方法对精子浓度和活动率考核结果进行评价.结果:新技术人员按照本实验室建立的理论及实践培训方法培训后,分析高、中、低精子浓度样本的变异系数分别为7.72%、3.38%和4.49%；分析高、中、低精子活动率样本的变异系数分别为7.82%、8.09%和6.62%.BlandAltman分析,与熟练技术人员比较,新技术人员精子浓度检测有4.77%的点在95%的一致性界限以外,在一致性界限范围内,与熟练技术人员检测结果比较,差值的绝对值大为8×106/ml;活动率分析中7.15%个点在95%一致性界限以外,在一致性界限范围内,差值的绝对值大为10%.双因素方差分析,两技术人员精子浓度及活动率差异,差异均不显著(P＞0.05). 结论:经过培训,新技术人员精液分析结果精确度较好,与熟练技术人员比较,检测结果有较好的一致性,差异不显著.培训达到预期目标,所建立的考核及评估方法对评价培训效果切实可行.

生物反馈和电刺激联合治疗慢性前列腺炎/慢性骨盆疼痛综合征

目的:通过临床试验的方法,探讨生物反馈和电刺激联合治疗慢性前列腺炎/慢性骨盆疼痛综合征(CP/CPPS)的效果. 方法:收集湘雅医院门诊诊断为CP/CPPS符合研究标准患者140例.将患者随机分为对照组、生物反馈组、电刺激组和生物反馈加电刺激组；对照组20例,生物反馈组、电刺激组和生物反馈加电刺激组各40例.采用Laborie-Urostym生物反馈电刺激治疗仪,生物反馈组行生物反馈治疗,电刺激组行电刺激治疗,生物反馈加电刺激组行生物反馈电刺激治疗；每周5次,连续2周；对照组不予上述治疗,随诊1个月.治疗前后进行NIH-CPSI评分以及尿流率检查. 结果:生物反馈组、电刺激组和生物反馈加电刺激组治疗后NIH-CPSI疼痛与不适评分、NIH-CPSI排尿症状评分、NIH-CPSI生活质量评分、NIH-CPSI总评分、大尿流率较治疗前均有显著改善(P＜0.05)；治疗前各组积分及大尿流率比较无显著差异(P＞0.05)；治疗后上述参数生物反馈组、电刺激组比较没有显著差异(P＞0.05),生物反馈加电刺激组与生物反馈组、电刺激组比较有显著差异(P＜0.05).而对照组治疗前后的以上各组评分及大尿流率比较无显著差异(P＞0.05). 结论:生物反馈和电刺激治疗能明显改善CP/CPPS患者疼痛与不适症状,排尿症状,提高生活质量,以及提高大尿流率.生物反馈和电刺激联合治疗CP/CPPS有协同作用.

TIP术式在伴有解剖不良因素的尿道下裂Ⅰ期成形术中的应用

目的:探讨保留尿道板纵切卷管尿道成形术(TIP术)在伴有解剖不良因素的尿道下裂Ⅰ期成形术中的应用效果. 方法:回顾性分析尿道下裂TIP术式Ⅰ期成形191例,将尿道开口位置、阴茎头及尿道板发育状况、阴茎下曲程度视为易导致TIP术后并发症及影响外观的解剖不良因素,采用SPSS 10.0统计数据,对其临床效果进行相关性分析. 结果:①TIP术后并发症发生率与尿道开口位置密切相关,尿道开口越近,并发症发生率越高(X2 =24.291,P＜0.01)；②TIP术后并发症发生率与阴茎头及尿道板发育状况、阴茎下曲程度密切相关.伴有解剖不良因素的尿道下裂如小阴茎头型、尿道板发育不良型及伴有重度阴茎下曲型,采用TIP术后并发症发生率高于阴茎挺直、阴茎头及尿道板发育良好的尿道下裂(X2 =25.419,P＜0.01). 结论:TIP术式的选择应根据尿道下裂类型、阴茎头及尿道板发育状况、阴茎下曲程度并结合术者经验来应用,以期达到成功率高并外形美观的效果.

Devine术加游离皮片移植治疗包皮缺损型隐匿性阴茎

目的:探讨采用Devine矫形术加游离皮片移植治疗包皮缺损型隐匿性阴茎的疗效. 方法:本组7例,年龄6～15岁,平均8.6岁.其中6例为误行包皮环切术的隐匿性阴茎患儿,Ⅰ例为初次治疗患儿.采用De-vine矫形术切除无弹性肉膜层纤维使阴茎延长,发现包皮缺损2～4 cm,用切皮器于股内侧切取相应宽度的长方形中厚皮片.将游离皮片紧贴阴茎白膜包裹阴茎体缝合,包扎固定. 结果:本组手术时间70～ 120 min,平均92.5 min.术后外露阴茎较术前延长2～4 cm.随访半年,阴茎外形美观,勃起功能正常. 结论:Devine矫形术加股内侧游离皮片移植是一种治疗包皮缺损型隐匿性阴茎的好方法.

精液/精子质量与复发性流产关系的病例对照研究

目的:分析精液常规参数与复发性流产间的关系. 方法:采用1:1配对病例对照研究,比较复发性流产患者配偶与健康体检男性间的精液相关参数. 结果:相对于对照组,病例组的精液量[(1.95±1.11)mlvs(2.74±1.43)ml]、精子浓度[(48.68±20.07)×106/mlvs(59.26±25.35)×106/ml]、b级精子百分率[(12.07±3.34)%vs(16.18±6.74)%]、果糖含量[(1.73±0.64) g/L vs (2.21±0.75) g/L]、顶体酶活性[(84.34±26.69) U/mg prot vs (94.20±26.35) U/mg prot]、α-葡糖苷酶(α-GLU)[(36.28±15.98) U/mlvs (44.45±12.54)U/ml]和酸性磷酸酶(ACP)[ (68.55±35.45) U/ml vs(84.78±51.10) U/ml]的含量较低(P＜0.05),头部畸形精子百分率[(47.36±4.59)%vs (46.50±6.32)%]、尾部畸形精子百分率[(7.56±2.27)% vs(7.28±3.10)%]和弹性硬蛋白酶[( 885.64±1 272.30) ng/ml vs (661.08±764.64) ng/ml]的含量较高(P＜0.05)；判别分析结果显示,精液量、b级精子百分率、混合畸形精子百分率、果糖含量、α-GLU含量和ACP含量可用于复发性流产男性精液/精子质量的判断. 结论:常规精液/精子质量相关检测对于评价复发性流产精液因素具有一定的意义,但需要综合分析,特异性不够；精液/精子质量相对较差与复发性流产发生相关.

横向带蒂包皮皮管(Duckett术式)修补尿道下裂356例

目的:评价带蒂包皮皮管(Ducket术式)修补尿道下裂的疗效. 方法:1995年3月至2010年12月共施行带蒂包皮皮管(Duckett术式)修复尿道下裂356例,其中年龄小于14岁的患儿324例(91.0%),修补尿道长度长10 cm,短1.5 cm. 结果:发生尿道瘘共30例(8.4%),外口狭窄1例,吻合口狭窄1例,比较不同年龄段和不同时期手术并发症发生率无显著性差异(P＞0.05),总成功率91.0%. 结论:Duckett术式应是Ⅰ期治疗尿道下裂的首选方法,尤其适用于阴茎下屈需要横断并切除尿道板的患儿.

精子DNA损伤与不明原因复发性流产的关系

目的:探讨不明原因复发性流产与男方精子DNA损伤的关系. 方法:精子DNA断裂损伤检测采用精子染色质扩散试验(sperm chromatin dispersion,SCD),以DNA断裂指数(DNA fragmentation index,DFI)表示.分别测定不明原因复发性流产(试验组,56例)男方与无流产史(对照组,31例)男方精子的DFI. 结果:试验组DFI(11.0%～56.9%)高于30%的有21例(37.5%),对照组DFI(10.0% ～ 36.8%)高于30%的有8例(25.8%).复发性流产组的男方精子DFI均数比对照组精子DFI高(29.4% vs 25.5%),且差异显著(P＜0.05).结论:不明原因复发性流产可能与精子DNA损伤存在一定关系.

他莫昔芬联合辅酶Q10治疗特发性少弱精子症临床疗效观察

目的:探讨他莫昔芬(TMX)联合辅酶Q10(CoQ10)治疗对男性特发性少弱精子症患者精液参数的影响. 方法:选取特发性少弱精子症患者183例,随机分为TMX+ CoQ10(n=63)、TMX(n=61)及CoQ10治疗组(n=59).治疗方法为,TMX:每次10 mg,2次/d,CoQ10:每次10 mg,3次/d,连续服用3个月为1个疗程.治疗前及治疗3、6个月后对外周血清性激素水平和精子浓度、活力及形态检测分析. 结果:与治疗前相比,治疗6个月后,TMX+ CoQ10及TMX治疗组血清FSH、LH、T水平明显升高(P＜0.05),CoQ10治疗组较治疗前无明显变化(P ＞0.05)；TMX+ CoQ10及TMX治疗组精子浓度显著性提高(P＜0.05),CoQ10组有所提高但无显著差异(P＞0.05),TMX+CoQ10及CoQ10治疗组精子活力及正常形态精子百分率显著性提高(P＜0.05),TMX治疗组有所提高但无显著差异(P＞0.05). 结论:他莫昔芬联合辅酶Q10治疗特发性少弱精子症患者,可以显著改善精子浓度、活力及形态.

雄激素受体突变在前列腺癌进展中的作用

前列腺肿瘤的生长几乎完全依靠雄激素受体途径,因此对前列腺癌的治疗围绕阻断这条途径为中心来制定.但是这种治疗往往是肿瘤发展到雄激素非依赖阶段终治疗失败,在这些病例雄激素受体几乎都发生了突变,更多迹象表明肿瘤仍然继续生长发展.这种机制就是雄激素受体突变后仍然保持着其活性功能.雄激素受体突变后促进肿瘤继续发展的分子机制及其治疗策略仍缺乏统一认识,现就此作一综述.

阴茎海绵体神经重建术研究进展

阴茎海绵体神经损伤是导致勃起功能障碍(ED)的常见原因,海绵体神经重建修复有望恢复患者性功能.海绵体神经重建的方法有直接吻合、自体神经移植以及可降解生物材料的替代,目前应用于临床的只有自体腓肠神经移植.神经重建过程中,神经生长因子也起重要作用.本文就近年阴茎海绵体神经的重建方法作一综述.

胶质细胞源性神经营养因子对哺乳动物精原干细胞增殖及分化的影响

胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)是转化因子B(TGF-β)超家族的一个相关成员,在哺乳动物睾丸中由支持细胞分泌,对精原干细胞(SSCs)的增殖和分化具有非常重要的作用.体外培养SSCs时培养液中添加适量的GDNF能够促进SSCs的增殖.GDNF介导多种信号通路调节SSCs的自我更新和分化.本文就GDNF对哺乳动物精原干细胞增殖与分化的作用及其所介导的信号通路进行了综述.

在线人类孟德尔遗传数据库在医学遗传学中的应用

在线人类孟德尔遗传( OMIM)是一个关于人类基因和遗传疾病的综合性数据库.及时性、权威性、全面性和实用性是OMIM的特点,对医学遗传学工作者和学生来说,OMIM是一部权威的遗传学百科全书.本文简要介绍了该数据库的内容和使用.

ATM/H2AX与冷冻精子DNA损伤修复

精液冷冻保存是辅助生殖领域中的一项重要技术,但冷冻本身可引起精子DNA损伤,其中过量活性氧(reactive oxygen species,ROS)的生成起主要作用；而DNA损伤精子仍可以受精形成胚胎,影响生殖结局.蛋白激酶ATM(ataxia-telangiectasia mutated)是DNA损伤的信号感受器,可启动级联反应磷酸化多种蛋白分子调控DNA损伤修复和细胞周期检查点.在ATM的下游分子中,组蛋白H2AX( histone H2AX)被磷酸化激活后参与了DNA损伤精子受精后的修复,与ATM相互作用共同调控胚胎发育过程的细胞周期.ATM/H2AX参与DNA损伤修复以及细胞周期检查点信号转导,以及在氧化应激性DNA损伤修复中的潜在作用,提示其可能参与了冷冻精子氧化应激性DNA损伤的修复过程.

男性生殖器部位皮肤病216例分析

生殖器部位是男性皮肤病的好发部位,近年来随着性传播疾病( STD)的逐年增多和男性对健康水平认识的提高,就诊的生殖器部位皮肤病患者呈上升趋势,并且疾病的组成也发生了很大的变化.自2007年10月起,笔者对该类疾病进行了临床观察,现将结果报告如下.

阴囊坏疽的早期诊断和治疗(附7例报告)

阴囊坏疽是一种少见而严重的急性阴囊感染坏死性疾病.1995年6月至2006年8月我院共收治7例,现报告如下.

自制多脏器保存液对低温大鼠睾丸氧自由基表达的影响

男性外阴损伤、坠落伤或骑跨伤是导致睾丸损伤的常见原因,往往造成精索断裂,需要自体移植.在睾丸移植过程中,低温保存和缺血可导致睾丸产生氧自由基而损伤睾丸组织.SOD结果见表1.

隐丹参酮对Akt2基因缺失雄性小鼠生殖及代谢影响的研究

目的:检测蛋白激酶B2(Akt2)基因缺失对睾丸生殖功能的影响,探讨隐丹参酮对Akt2基因缺失雄性小鼠生殖功能的调控及其分子机制. 方法:①雄性Akt2-/-纯合子小鼠29只,Akt2+/+野生型小鼠15只.将Akt2+/+小鼠随机分为2组:A(Akt2+/+,基础组,n=7)、B(Akt2+/+,刺激组,n=8)；Akt2-/-小鼠随机分为4组:C(Akt2-/-,基础组,n=7)、D(Akt2-/-,刺激组,n=8)、E(Akt2-/-,溶剂组,n=7)、F(Akt2-/-,隐丹参酮组,n=7)；②B组、D组行人绒毛膜促性腺激素(hCG)兴奋试验,5 IU/20 g,A组、C组予等体积的生理盐水,刺激4h后取材；F组给予中药隐丹参酮治疗,600 mg/kg每日2次灌胃,连续8周,E组予等体积的溶剂,A、B、C、D组测随机血糖,E及F组治疗前后分别行口服葡萄糖耐量实验(OGTT)2 g/kg体重.③称取各组体重和双侧睾丸重量,测血清睾酮(T)水平,RT-PCR法检测各组睾丸甾体激素合成酶及糖代谢相关基因表达水平. 结果:①随机血糖测定发现C、D组小鼠血糖显著高于A、B组小鼠[(10.38±1.42),(10.96±1.81) mmol/L　vs(7.92±0.63),(8.32±0.44) mmol/L,P＜0.05],OGTT实验发现,治疗前后E组和F组0、30、60及120 min血糖值均无显著差别(P＞0.05)；②体重各组之间无显著差别(P＞0.05),C、D组睾丸重量显著高于A、B组[(0.17±0.01),(0.17±0.01)gvs(0.15±0.02),(0.15±0.01)g,P＜0.05],E、F组睾丸重量无显著差别.血清T水平C组显著高于A组[(9.08±1.59) nmol/L vs(6.42±0.95)nmol/L,P＜0.05],F组显著低于E组[(5.94±0.49) nmol/L vs (8.18±1.44) nmol/L,P＜0.05]；③RT-PCR检测,基础状态下C组小鼠睾丸组织中Cyp11、Cyp17、3β-HSD、Star、Gsk3β 、Erk-1、MCM.2 mRNA的表达水平显著高于A组小鼠(P＜0.05)；hCG刺激后B组和D组Cyp11、Cyp17、3β-HSD、Star mRNA的表达都显著增强,但两组间无显著差别(P＞0.05)；F组睾丸组织中Cyp11、Cyp17、3β-HSD、Star、Gs k3β、Erk-1、MCM2 mRNA的表达水平较E组明显下降(P＜0.05). 结论:Akt2基因缺失可以影响雄性小鼠糖代谢及睾丸功能,出现糖代谢异常及雄激素分泌异常,其分子机制为糖代谢关键分子表达增高及雄激素合成关键酶表达升高,中药隐丹参酮可以降低雄激素水平,其作用机制为降调节雄激素合成关键酶的表达水平.

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