中华小儿外科杂志
Chinese Journal of Pediatric Surgery 중화소아외과잡지
- 主管单位： 中国科学技术协会
- 主办单位： 中华医学会
- 影响因子： 0.85
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 0253-3006
- 国内刊号： 42-1158/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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单纯外侧穿针和交叉穿针治疗儿童肱骨髁上骨折的疗效及并发症的Meta分析
目的 采用系统评价的方法比较经皮单纯外侧克氏针固定与内外侧交叉克氏针固定治疗儿童肱骨髁上骨折的疗效及并发症.方法 计算机检索Cochrane图书馆、PubMed、Embase数据库,收集经皮闭合复位单纯外侧克氏针固定与内外侧交叉克氏针固定治疗儿童肱骨髁上骨折的随机对照试验,并采用RevMan 5.1软件对结果进行Meta分析.结果 共纳入7个随机对照试验,521例患儿.Meta分析结果显示内外侧交叉克氏针固定的医源性尺神经损伤的几率高于单纯外侧克氏针固定(RR=0.30,95％ CI 0.10～0.89,P=0.03).两种固定方式在放射学结果、Flynn肘关节功能结果和手术并发症等方面的差异均无统计学意义.结论 单纯外侧克氏针固定与内外侧交叉克氏针固定治疗儿童肱骨髁上骨折的总体疗效相当,但是单纯外侧克氏针固定明显减少了患儿尺神经损伤的几率.
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儿童巨膀胱-小结肠-肠蠕动不良综合征的外科诊疗
目的 总结儿童巨膀胱-小结肠-肠蠕动不良综合征的诊治体会.方法 回顾性分析2012年6月至2014年6月首都医科大学附属北京儿童医院普外科收治的6例巨膀胱-小结肠-肠蠕动不良综合征患儿的临床资料,对其临床表现、影像学检查、诊治经过和预后情况进行分析.结果 6例患儿发病年龄均在1岁以内,表现为腹胀、便秘、呕吐症状,且无明显诱因及完全缓解方法.6例患儿均于胎龄24～28周可见胎儿腹腔内有一巨大囊性肿物(考虑膀胱),但羊水量不随膀胱内积水增多而减少.术前考虑为先天性巨结肠3例,术中发现乙状结肠及其远端直肠呈现明显的痉挛状态,肠壁苍白,近端结肠扩张、管壁增厚、水肿明显,弹性差,但肠管病理活检提示肠壁肌纤维增生变性,可见少量或正常的黏膜下及肌间神经节细胞.另3例因考虑消化道梗阻而行剖腹探查手术,术中证实1例为肠旋转不良,行Ladd's术,余者未见明确肠管反折、成角、粘连、纤维索带等因素导致的肠管梗阻,但肠管充气扩张,大量积液,肠管壁薄,减压后肠管呈现无应力状态,考虑为功能性肠梗阻,遂行回肠造瘘手术.术后均予以静脉营养支持治疗,以及红霉素、多潘立酮、新斯的明、中药中1种或多种药物联合治疗,患儿腹胀、便秘等症状未能得到完全缓解.术后1个月、3个月、6个月、1年、2年及3年随访结果提示,3例患儿仍存活,其中1例合并重度营养不良及多器官功能衰竭;另3例已死亡.结论 巨膀胱-小结肠-肠蠕动不良综合征为一种临床易误诊误治的罕见疾病.常常误诊为肠梗阻或先天性巨结肠.本病患儿需要静脉营养维持治疗,但预后极差.目前认为唯一根治手段为肠移植.
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双Y型吻合方式治疗先天性胆管扩张症并迷走胆管畸形
目的 探讨采用双Y型吻合方式治疗先天性胆管扩张症(congenital biliary dilatation, CBD)合并迷走胆管畸形的可行性.方法 回顾性分析2012年1月至2013年7月手术治疗先天性胆管扩张症合并迷走胆管畸形3例的临床资料.这3例均为女孩,年龄分别为2岁、5岁和6岁,术中发现均为右侧肝管畸形,均行双Y型吻合.病例1术中行胆囊切除、囊肿切除肝总管-空肠Roux-Y型吻合,术后出现胆瘘,再次手术中发现原吻合口愈合好,肝支右侧有一迷走胆管畸形,行迷走胆管-空肠肝支端侧吻合.病例2术中见胆总管扩张成囊状,囊内可见较多蛋白栓.肝总管外侧可见一直径约0.4cm的异常分支,上通肝脏,下连于扩张的胆总管.切除胆囊及扩张的胆总管,行肝总管空肠Roux-Y吻合后,肝总管吻合口下方2.0 cm处做0.4cm切口,行迷走肝管-空肠肝支端侧吻合.病例3术中见肝总管外侧有一迷走肝管,远端与胆囊管汇合后与胆总管相连,胆总管扩张呈囊状.手术过程与病例2相同.结果 本组3例行双Y型吻合术后7d均痊愈出院.随访3个月～2年,恢复良好,无胆瘘、胆道梗阻和逆行性感染发生.结论 采用双Y吻合方式治疗先天性胆管扩张症合并迷走胆管畸形效果可靠.
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腹膜透析和血液滤过治疗婴幼儿先天性心脏病术后并发急性肾功能损害疗效比较
目的 比较持续腹膜透析和持续血液滤过治疗在先天性心脏病手术后婴幼儿并发急性肾功能损害的治疗效果.方法 回顾性分析2012年1月到2013年12月间3岁以下,行先天性心脏病手术后并发急性肾功能损害婴幼儿95例的临床资料.其中,腹膜透析治疗患儿52例(腹膜透析 组),持续血液滤过治疗患儿43例(血液滤过治疗组).比较两组患儿手术后液体出超的时间(液体出量开始大于入量的时间)、乳酸恢复正常时间、术后呼吸机辅助时间、住ICU时间、术后住院时间和病死率.结果 两组患儿性别、年龄、体重、疾病、手术中阻断时间和体外循环时间差异没有统计学意义.腹膜透析组液体出超的时间为(22.3±4.2)h,血液滤过治疗组为(14.2±3.6)h,组间比较,差异有统计学意义(P＜0.01).腹膜透析组术后乳酸恢复到正常时间为(10.3±5.2)h,血液滤过治疗组为(6.8±3.4)h,组间比较,差异有统计学意义(P＜0.05).腹膜透析组术后呼吸机辅助时间为(22.1±5.3)h较血液滤过治疗组(15.6±4.2)h明显延长,差异有统计学意义(P＜0.01).腹膜透析组实际使用肾脏替代治疗时间为(85.4±11.7)h,血液滤过治疗组为(68.9±12.4)h,组间比较,差异有统计学意义(P＜0.05).腹膜透析组术后住ICU时间为(8.2±3.6)d,较血液滤过治疗组(5.8±2.1)d时间长,差异有统计学意义(P＜0.05).腹膜透析组术后住院时间为(16.2±4.4)d,血液滤过组为(15.2±3.2)d,差异没有统计学意义.结论 先天性心脏病手术后婴幼儿出现急性肾功能损害,使用血液滤过治疗较腹膜透析治疗效果更好,更快,更确切.
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经脐单切口腹腔镜与传统手术行小儿重复肾上肾切除术的比较
目的 通过病例分析及随访,分析比较经脐单切口腹腔镜手术和传统腹腔镜及开放手术行上肾切除术的差异.方法 回顾性分析2007年10月至2013年9月间因肾脏输尿管重复畸形就诊的87例患儿共88侧上肾切除术的临床资料.按不同手术方法分为经脐单切口腹腔镜组(37例)、传统腹腔镜组(14例)和开放手术组(37例),比较各组在手术时间、输血、术后引流情况、术后住院天数、术后发热天数、远期并发症等方面的差异.结果 各组患儿年龄、体重、性别及左右侧比例比较,差异无统计学意义.经脐单切口腹腔镜组手术时间(184.9±56.9)min,与传统腹腔镜组(170.4±35.6)min比较,差异无统计学意义;与开放手术组(124.7±38.9)min比较,差异有统计学意义(P＜0.05).经脐单切口腹腔镜组输血率为24.3％(9/37),高于开放手术组8.1％(3/37),差异有统计学意义(P＜0.05);与传统腹腔镜组14.2％(2/14)比较,差异无统计学意义.经脐单切口腹腔镜组术后负压球引流量、引流时间、术后发热天数、术后住院天数与传统腹腔镜组和开放手术组比较,差异均无统计学意义.术后早期发生手术区积液或囊肿的在经脐单切口腹腔镜组、传统腹腔镜组和开放手术组分别为4例、1例、4例,长期随访均消失.经脐单切口腹腔镜组和开放手术组各有1例出现输尿管残端感染,前者保守治疗好转,后者经手术切除残端后治愈.各组在随访期内未发现其他并发症.结论 虽然经脐单切口腹腔镜重复上肾切除术手术时间较传统手术长、输血率偏高,但切口隐蔽、美观,且围手术期并发症及长期预后和传统手术无显著差异,可作为传统开放和腹腔镜手术的替代方案.
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肛门直肠畸形直肠前庭瘘患儿的盆底肌评价
目的 评价肛门直肠畸形直肠前庭瘘患儿的盆底肌形态及预后.方法 选取2013年4月至2014年4月收治的肛门直肠畸形直肠前庭瘘患儿20例,及同期非肛门直肠畸形女婴10例(对照组),年龄3～6月龄,所有患儿于入院时行腰骶椎X线平片、钡剂灌肠造影和盆底肌及脊髓的MRI检查,测量2组患儿肛门括约肌、耻骨直肠肌和提肛肌厚度,并计算直肠前庭瘘患儿骶骨率.2例患儿合并脊髓栓系,3例合并直肠及乙状结肠扩张.结果 对照组左、右侧肛门括约肌厚度分别为(1.58±0.12)mm和(1.57±0.14)mm,左、右耻骨直肠肌厚度分别为(1.47±0.13)mm和(1.45±0.09)mm,左、右提肛肌厚度分别为(1.75±0.18)mm和(1.72±0.22)mm,左、右比较,差异均无统计学意义.患儿组左、右提肛肌厚度分别为(1.53±0.37)mm和(1.53±0.29)mm,与对照组比较,差异无统计学意义.患儿组左、右侧肛门括约肌厚度分别为(1.32±0.39)mm和(1.21±0.35)mm,左、右侧耻骨直肠肌厚度分别为(1.18±0.33)mm和(1.06±0.35)mm,均较对照组变薄.Spearman秩相关分析表明,患儿组骶骨率0.69±0.15与双侧肛门括约肌(左:r=0.361,P=0.118;右:r=0.150,P=0.527)、耻骨直肠肌(左:r=-0.032,P=0.893;右:r=0.096,P=0.689)及提肛肌(左:r=-0.082,P=0.732;右:r=-0.034,P=0.852)的厚度均无相关关系.术后4例存在排便困难,其中1例合并脊髓栓系,3例合并直肠及乙状结肠扩张,其余患儿排便功能正常.结论 正常情况下双侧肛门括约肌、耻骨直肠肌和提肛肌对称分布.肛门直肠畸形直肠前庭瘘患儿提肛肌厚度与正常无明显差别,肛门括约肌和耻骨直肠肌厚度较正常薄,但并不会影响排便控制.肛门括约肌、耻骨直肠肌及提肛肌发育与骶骨发育无相关关系.
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腹腔镜诊断及治疗小儿原发性大网膜扭转一例
患儿男,9岁3个月.因"腹痛4d"入院.4d前无明显诱因下突然出现腹痛疼,以右上腹为主,阵发性,伴恶心呕吐,非喷射状,呕吐后疼痛无明显好转.体格检查:腹软,中上腹及右上腹压痛,无肌紧张或反跳痛,未触及明显包块,墨菲氏征阴性,移动性浊音阴性,肠鸣音4次/min.辅助检查:腹部超声示:右上腹肝肾隐窝处粪石样回声,高位阑尾炎待排.上腹部平扫CT:右上腹结肠肝曲外下侧脂肪内(大网膜可能)密度欠均匀,炎症性病变考虑(阑尾待排).积极术前准备,无明显手术禁忌下全身麻醉行腹腔镜探查,术中见结肠肝曲部分大网膜扭转顺时针720°,呈紫黑色,表面凹凸不平,基底部与正常大网膜分界较清,遂距扭转部位上方2～3 cm处使用4号线结扎,远端电凝钩离断,切除坏死的大网膜.术后恢复佳,术后8h后开始进食,4d治愈出院.术后随访6个月,无腹痛腹泻,大小便正常.
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儿童分离型肘关节脱位一例报道并文献复习
患儿女,10岁.在操场玩篮球时不慎摔伤右肘于水泥地面,伤后右肘关节高度肿胀、肘关节畸形明显,查体无明显桡神经、尺神经、正中神经及肱动脉损伤症状.伤后即刻肘关节正位X线片示右尺骨鹰嘴及冠状突骨折、上尺桡分离移位;侧位X线片示右侧肘关节后侧脱位.急诊在局麻下行右肘关节手法复位,复位后三维CT重建显示右侧肘关节脱位及上尺桡脱位纠正,尺骨冠状突复位可、移位不大,尺骨鹰嘴骨折移位大、且为关节内骨折,进行围手术期准备后行切开复位内固定术.
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经左侧胸骨旁小切口封堵主动脉瓣下室间隔缺损
室间隔缺损(ventricular septal defect,VSD)是一种常见的先天性心脏病,其中5％为主动脉瓣下型室间隔缺损[1].近年来,随着经胸骨下段正中小切口右心室穿刺封堵VSD的逐步开展[2-3],主动脉瓣下型室间隔缺损封堵的有效性及安全性也得到证实[4].我院自2011年7月至2013年5月为9例主动脉瓣下型室间隔缺损患儿实施经左胸骨旁小切口入路行右心室穿刺偏心伞封堵,取得了满意的效果,现将经验总结如下.
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神经源性膀胱功能障碍儿童抑郁状况的调查
由神经系统性病变导致的膀胱和/或尿道功能障碍,即神经源性膀胱功能障碍(neurogenic bladder dysfunction,NBD).儿童NBD的常见病因包括脊髓发育不良、脊髓先天性疾病、外伤、手术和感染等,临床主要症状为尿失禁或尿潴留、便秘或大小便失禁等,随着病情进展,可出现膀胱内压力增高,终可因肾衰竭而危及患儿生命[1].近年来,对于神经源性膀胱儿童治疗的研究较多,但对于神经源性膀胱导致的情绪障碍的相关研究较少.但在患儿的康复过程中,心理因素也发挥着重要作用.本研究通过探讨神经源性膀胱儿童抑郁障碍的现状,为使患儿更好地回归社会提供策略依据.
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加强基础与临床融合,提升小儿实验外科创新能力
小儿实验外科是小儿外科学的重要组成部分,相比狭义的"动物实验"或"基础研究"而言,具有更深的内涵和更宽的外延,是以探索小儿外科疾病的发生机制、寻找新的治疗手段、改善疾病预后为主要目标.实验外科主要包括动物实验和临床试验2个方面,其中动物实验属于比较医学的范畴,其宗旨是利用各种动物模型和细胞模型探讨健康与疾病的不同生物学特征,揭示疾病的发生机制与治疗靶点.
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第二届国际科技论文写作培训班暨第三届全国小儿实验外科与临床新技术学术研讨会会议纪要
为积极主动参与国际小儿外科专业的交流与合作,促进我国小儿外科的实验研究与临床新技术水平以及SCI论文写作水平的提高,由《中华小儿外科杂志》编辑部、中国医科大学附属盛京医院小儿外科和卫生部小儿先天畸形重点实验室共同主办的"第二届国际科技论文写作培训班暨第三届全国小儿实验外科与临床新技术学术研讨会"于2015年4月4-6日在辽宁沈阳隆重召开.中华医学会小儿外科分会主委、副主委和全体常委,《中华小儿外科杂志》主编、副主编及部分编委,小儿外科各专业学组组长、委员和来自全国各地的代表共397人参加了会议.
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神经调节素1调控斑马鱼肠神经系统发育的初步研究
目的 神经调节素1(neuregulin 1,NRG1)可能是先天性巨结肠症的易感基因,本实验选用斑马鱼为模式生物探讨NRG1在肠神经系统发育中的作用.方法 克隆斑马鱼NRG1基因,分析多物种NRG1同源性及进化程度;使用原位杂交技术检测NRG1在成年斑马鱼肠道及斑马鱼胚胎中的表达;通过显微注射吗啉代反义寡核苷酸建立斑马鱼NRG1敲低模型,使用原位杂交及免疫荧光技术对比观察斑马鱼表型、肠神经元分化及迁移情况.结果 NRG1进化较保守,斑马鱼NRG1与人类NRG1基因有较高同源性;在成年斑马鱼肠道中,NRG1主要位于黏膜层,在肌层和浆膜层均未见表达;胚胎中,NRG1自胚胎早期即开始表达,并表达于胚胎及幼体的肠道,表达谱与肠神经发育时相及位置相符;敲低NRG1后,胚胎出现孵出延迟,头部畸形,身体变短,躯体扭曲等表型;注射NRG1-MO后胚胎存活率为29.0％(196/677),较对照组87.5％(446/510)低;注射NRG1-MO后胚胎异常表型率为21.5％(40/186),较对照组5.5％(23/415)高;敲低NRG1后分化的肠神经元计数(3.33±1.53)个,较对照组(43.00±13.23)个少,而且肠神经元从头端至尾端的迁移过程受阻.结论 使用斑马鱼这一模式动物研究NRG1在肠神经发育中的作用,可以间接反映NRG1在人类先天性巨结肠症中的作用,NRG1可能参与斑马鱼肠神经系统发育过程.
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牵张应力对人骺板软骨细胞分化及凋亡的影响
目的 观察不同强度的机械牵张应力刺激对体外培养的小儿指骨骺板软骨细胞凋亡及软骨分化的影响,并探讨其相关机制.方法 体外分离培养人骺板软骨细胞,使用Ⅱ型胶原(COLII)免疫组化法及甲苯胺蓝染色进行鉴定.使用四点弯曲细胞力学加载装置分别对细胞进行不同强度的周期性牵张应力刺激(刺激强度分别为0μstrain、2 000μstrain、4 000μ strain,刺激时间6h、刺激频率0.5 Hz),Annexin V/PI双染法流式细胞仪检测细胞凋亡情况,荧光定量PCR技术检测各组细胞细胞增殖核抗原(PCNA)、凋亡相关基因(BAX、BCL-2)、软骨特征性细胞外基质(COLII、COLX)及甲状旁腺激素相关蛋白(PThrP)的mRNA表达情况.结果 Ⅱ型胶原免疫组化法可见COLII大量表达.2 000μstrain组骺板软骨细胞PCNA、COLII、COLX、PThrP mRNA相对表达量分别为1.13±0.14、9.98±0.74、9.88±1.80和5.18±0.86,在4 000 μ strain组分别为0.06±0.01、2.19±0.08、0.95±0.09和0.29±0.04,在对照组分别为1.00±0.12、6.73±0.62、1.00±0.08和1.00±0.14.2 000μ strain组COLII、COLX、PThrP mRNA相对表达量及4 000μstrain组PCNA、COLII、PThrPmRNA相对表达量,与对照组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).在4 000μstrain的周期性牵张应力刺激下,细胞早期凋亡率、晚期凋亡和总凋亡率分别为(4.60±0.81)％、(8.39±2.08)％和(12.99±1.48)％,与对照组(1.01±0.32)％、(4.30±0.71)％和(5.61±1.04)％比较,差异均有统计学意义(P＜0.01).2 000μstrain组BCb2、BAX mRNA比值为0.75±0.08,4 000μstrain组为0.39±0.11,与对照组1.00±0.23比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 小儿指骨骺板软骨细胞的分化和凋亡受机械牵张应力所调节,适当的牵张应力能有效促进其其软骨基质形成,而过大牵张应力则促进细胞凋亡,软骨相关基因表达减少,而PThrP在这一过程中可能起重要调控作用.
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调控PI3K/Akt信号通路对裸鼠移植血管瘤的影响
目的 观察人血管瘤裸鼠移植模型中PI3Kp85、p-Akt表达,并进行正负调控,探讨PI3K/Akt信号通路在小儿血管瘤演变过程中的作用.方法 建立血管瘤裸鼠移植模型,生长45 d后,将移植成功标本48例,按区组随机平均分成3组.其中,对照组每个瘤体内注射生理盐水0.05 ml;正性调控组每个瘤体内注射0.5μmol/L的胰岛素样生长因子0.05 ml;负性调控组每个瘤体内注射25μmol/L的LY294002 0.05 ml.于药物注射当日(用药前)、注射后3d、1周、2周肉眼大体观察移植瘤形态变化,光镜观察移植瘤组织结构变化,同期免疫组化检测PI3Kp85、p-Akt蛋白的分布及表达情况,RT-PCR检测PI3Kp85 mRNA、p-Akt mRNA的表达情况.结果 负性调控组PI3Kp85、p-Akt阳性表达率分别为80.00％和86.67％,而对照组及正性调控组PBKp85及p-Akt阳性表达率均为100％.负性调控组PI3Kp85、p-Akt表达均较对照组降低,差异有统计学意义(P＜0.05或0.01),瘤体呈消退表现;正性调控组PI3Kp85、p-Akt表达均较对照组增高,差异有统计学意义(P＜0.05或0.01),血管瘤瘤体呈增生表现;PI3Kp85与p-Akt的表达呈正相关.结论 PI3K/Akt信号通路可能参与了裸鼠移植血管瘤增生与消退的调控;LY294002、胰岛素样生长因子可以通过干预PI3K/Akt信号通路中相应的靶点,抑制或激活PI3K/Akt信号通路来促使瘤体消退及增生.
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巨噬细胞活化在先天性巨结肠相关性小肠结肠炎发病中的作用
目的 探讨巨噬细胞活化在先天性巨结肠相关性小肠结肠炎发病中的作用.方法 饲养并繁殖SPF级Ednrb基因敲除小鼠(先天性巨结肠小鼠模型鼠).选择21日龄EdnrB-/-小鼠作为实验组(6只),相应日龄野生型小鼠作为对照组(6只).收集肠管标本,实验组小鼠结肠肠管依据形态学分为结肠狭窄、移行、扩张段,对照组小鼠肠管相应分为结肠远、中、近段.HE染色法评估各段肠管炎症损伤程度,CD68和TNF-α免疫荧光双染法评估肠管巨噬细胞活化状况,Western blot检测肠管TNF-α蛋白表达水平.结果 HE染色显示EdnrB-/-小鼠结肠扩张段肠管均有不同程度的炎性细胞浸润.免疫荧光染色显示,HD模型小鼠扩张、移行、狭窄段CD68阳性细胞百分数分别为(10.81±2.38)％、(8.33±1.78)％和(4.28±1.25)％;野生型小鼠结肠近、中、远段CD68阳性细胞百分数分别为(2.15±1.17)％、(1.89±0.98)％和(1.97±1.32)％.HD模型小鼠扩张、移行、狭窄段TNF-α阳性细胞百分数分别为(6.81±2.35)％、(5.00±1.41)％和(2.80±0.98)％;野生型小鼠结肠近、中、远段TNF-α阳性细胞数量百分数分别为(1.21±0.56)％、(0.89±0.46)％和(1.07±0.32)％.HD模型小鼠结肠扩张段肠管CD68及TNF-α阳性细胞数量明显增多,与HD模型小鼠移行段、狭窄段及野生型各段肠管相比,差异有统计学意义(P＜0.05).Western blot结果发现EdnrB-/-小鼠结肠扩张段肠管TNF-α表达水平明显升高,与移行段、狭窄段、及对照组各段肠管相比较,差异有统计学意义(P＜0.05);移行段TNF-α表达水平较扩张段降低,但与狭窄段及野生型小鼠肠管相比较仍然升高,差异有统计学意义(P＜0.05).对照组三段肠管均未见明显TNF-α表达.结论 先天性巨结肠小鼠模型中扩张段肠管组织损伤可能与肠壁巨噬细胞活化及分泌的促炎因子有关.
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小鼠跨胎盘RNA干扰EphB2基因在先天畸形中的实验研究
目的 应用跨胎盘RNA干扰技术抑制胚胎鼠EphB2基因,探索研究易感基因在先天性畸形中的作用.方法 构建先天性肛门直肠畸形(anorectal malformation,ARM)相关易感基因EphB2下调质粒SiEphB2,设计3个不同位点SiEphB2,通过鼠尾静脉向孕鼠注射SiEphB2质粒,空载体及Ringer's液.孕鼠在孕9.5d注射,48 h后取出胚胎,应用实时定量PCR及Western blotting 检测EphB2基因在子代鼠的mRNA和蛋白质表达水平.并观察新生鼠的肛门直肠发育情况.结果 在mRNA水平,发现SiEphB2载体注射组(SiEphB2组)EphB2基因表达比较空载体注射组(Vector组)及释液注射组(Ringer's组)明显降低.Ringer's组均值为0.99±0.06,Vector组为0.87±0.07;SiEphB2组中,SiEphB2-1组均值为0.27±0.03,SiEphB2-2组为0.34±0.04,SiEphB2-3组为0.42±0.02.SiEphB2组胚胎EphB2基因较Ringer's组和Vector组分别下调(65.3±6.6)％和(60.6±8.6)％,差异有统计学意义(P＜0.05).在蛋白质水平,Ringer's组为1.00±0.05,Vector组为0.93±0.09;SiEphB2组中,SiEphB2-1组为0.20±0.03;SiEphB2-2组为0.33±0.02;SiEphB2-3组为0.39±0.02.SiEphB2组胚胎EphB2基因较Ringer's组和Vector组分别下调(69.3±7.8)％和(66.9±9.6)％,差异有统计学意义(P＜0.05).大体观察SiEphB2组胎鼠可见肛门及鼠尾发育,矢状位切片HE染色未见ARM发生.结论 胚胎鼠早期跨胎盘RNA干扰是研究基因功能现实可行的研究方法,跨胎盘SiEphB2可下调子代鼠基因.
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产前应用维生素A对先天性膈疝大鼠模型胎肺晚期发育及Hoxa5表达的影响
目的 产前应用维生素A(VitA)对除草醚(Nitrofen)诱导的先天性膈疝(congenital diaphragmatic hernia,CDH)大鼠模型中胎肺晚期发育及胎肺中Hoxa5表达的影响,探讨VitA改善CDH肺发育不良的可能作用机制.方法 12只孕鼠按随机数字表法随机分为Nitrofen诱导CDH肺发育不良组(CDH组),于大鼠孕第9.5天经胃管注入溶于1 ml橄榄油的Nitrofen 100 mg/只;对照组,于孕第9.5天仅注入橄榄油1 ml/只;维生素A产前干预组(CDH+ VitA组),于孕第9.5天注入Ni-trofen 100 mg/只后,再于孕第10.5天经胃管注入VitA 15 000 IU/只.各组均于孕21.5天行剖腹产,取胎肺样本;组织学检查方法分析各组胎肺的发育情况,实时荧光定量PCR(QPCR)、免疫蛋白印迹(Western blot,WB)方法检测各组胎肺中Hoxa5表达水平的变化.结果 CDH组膈疝发生率为50.0％ (24/48),CDH+ VitA组膈疝发生率明显下降为28.3％ (13/46),差异有统计学意义(P＜0.05).组织学分析结果显示,CDH组、对照组、CDH+ VitA组的平均肺泡面积分别为(332.83±72.19)μm2、(1 443.37±285.94) μm2和(907.07±54.78) μm2,平均肺泡间隔厚度分别为(9.72±2.18)μm、(6.17±1.54) μm和(7.26±1.52) μm,肺血管数/HP分别为(3.68±1.03)个、(7.20±0.91)个和(6.24±0.88)个,管腔面积占血管总面积比分别(15.76±4.87)％、(38.74±4.94)％和(30.18±7.03)％.与CDH组比较,CDH+ VitA组胎肺的平均肺泡面积增大、平均肺泡间隔厚度减小、肺血管数/HP增加、管腔增大,且差异均有统计学意义(均P＜0.05),肺发育不良明显改善.以对照组胎肺样本作为参照,CDH组、CDH+ VitA组的Hoxa5 mRNA相对表达量分别为1.76±0.23、0.92±0.16;Hoxa5蛋白相对表达量分别为2.95±0.12、1.36±0.07.CDH+ VitA组胎肺的Hoxa5表达水平较CDH组明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 产前应用VitA可明显改善CDH模型胎肺发育不良,并下调胎肺中Hoxa5的表达水平,推测调控Hoxa5的表达可能是VitA改善CDH肺发育不良的作用机制之一.
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应用SELDI-TOF-MS技术筛选输尿管部分梗阻大鼠血清生物学标志物的初步研究
目的 应用表面增强激光解析电离-飞行时间质谱(surface enhanced laser desorption/ionization-time offlight-mass spectrometry,SELDI-TOF-MS)技术,检测正常大鼠和输尿管部分梗阻(partial unilateral ureteral obstruction,PUUO)肾小管上皮细胞转化前后的大鼠血清,筛选出一组特异性标志物,为先天性肾积水及梗阻性肾病选择适宜的手术及治疗时机提供依据.方法 PUUO组大鼠(n=48)随机数字表法分为梗阻12h、1d、2d、3d、5d、7d等6个时间段组,每组8只;空白对照组(n=30).制作PUUO模型,于不同时间点分别处死大鼠,分别取双侧肾脏制作石蜡切片、腹主动脉穿刺获取血清,-80℃保存.应用免疫荧光双标方法确定动物模型中肾小管上皮细胞发生上皮间质转化的时间点,选取动物模型肾小管上皮细胞转化前后收集的血清标本,利用SELDI-TOF-MS技术筛选出大鼠血清中肾小管上皮细胞间质转化前后的标志物.结果 大鼠PUUO术后3d即有肾小管上皮细胞表达成纤维细胞标志物,发生细胞表型转化,即发生上皮间质转化,随梗阻时间延长,肾脏中发生转化的肾小管上皮细胞逐渐增多.发现PUUO大鼠血清中有27种蛋白质标记物,其中10种蛋白质高表达,17种蛋白质低表达.结论 大鼠PUUO模型的手术侧肾脏可用于研究肾间质纤维化.大鼠肾间质纤维化过程中肾小管上皮细胞存在上皮间质转化现象.应用SELDI-TOF-MS技术筛查出PUUO前后大鼠血清的差异蛋白峰可能是PUUO大鼠血清的特异性蛋白质标志物.
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NeurexinⅡ基因在不同胎龄大鼠胚胎肠神经系统的表达及意义
目的 观察不同胎龄大鼠胚胎肠神经系统(enteric nervous system,ENS)中Neurexin Ⅱ基因的表达,探讨NeurexinⅡ基因与ENS发育的时间相关性及与肠神经元发育异常性疾病的可能关系.方法 清洁级健康Wistar大鼠用随机数字表法随机分组后,单独交配受孕.麻醉后处死孕龄16 d、18 d和20 d孕鼠及出生第1天乳鼠,手术取胚胎第16天(E16组)、18天(E18组)、20天(E20组)和出生第1天(Ep0组)大鼠近回盲部约1.0 cm结肠样本,E16组、E18组、E20组、Ep0组样本数量分别为78、82、69和60个.运用免疫组织化学染色、Western-blotting及qRT-PCR实验方法检测各标本NeurexinⅡ基因在蛋白和mRNA水平的表达.结果 免疫组织化学染色结果显示Neurexin Ⅱα蛋白主要表达于结肠肌间神经丛,在黏膜下神经丛亦有少量表达,其表达量自胚胎第16天至出生第1天,随胚胎逐渐发育表达逐渐增加.Western-blotting结果显示NeurexinⅡα蛋白相对含量在E16、E18、E20和Ep0组分别为0.054±0.009、0.106±0.020、0.215±0.013和0.280±0.030,相对表达量随胚胎发育逐渐增加,组间差异比较与两两比较,差异均有统计学意义(P＜0.05),与免疫组化结果趋势一致.qRT-PCR结果显示NeurexinⅡ基因在mRNA水平E16、E18、E20和Ep0组中相对表达分别为0.390±0.029、0.552±0.054、0.748±0.065和1.000±0.000,与蛋白水平表达趋势一致,组间差异比较与两两比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 NeurexinⅡ基因与ENS发育具有时间相关性;若其在ENS发育过程中的某一时间点出现异常,可能导致肠神经元发育异常性疾病的发生.
